[摘要] 目的探究miR-3934-5p在胃癌患者中的表達及其與臨床病理特征和預后的關(guān)系。方法選取2019年2月～2020年2月收治的胃癌患者108例，收集全部患者的手術(shù)組織樣本，分別獲取患者的胃癌組織及癌旁正常組織，采用實時定量PCR對胃癌組織及癌旁組織中 miR-3934-5p的表達水平進行測量。對患者進行為期12～24個月的隨訪，死亡23例為死亡組，其余85例為生存組，采用單因素分析和多因素COX回歸模型對影響胃癌患者預后的因素進行分析。結(jié)果胃癌組織中miR-3934-5p的表達水平高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05）。單因素分析可見，死亡組與生存組的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、遠處轉(zhuǎn)移情況、TNM 分期及miR-3934-5p 表達水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05）;將單因素分析中有統(tǒng)計學意義的指標作為因變量帶入COX 回歸模型，結(jié)果顯示低分化、浸潤深度為T3+T4、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、TNM分期Ⅲ+IV期、miR-3934-5p表達可作為影響胃癌患者預后的獨立危險因素（Plt;0.05）。結(jié)論 miR-3934-5p 在胃癌組織中的表達水平較高，可作為影響胃癌患者短期預后的一個重要危險因素。

[關(guān)鍵詞] m iR-3934-5p;胃癌；病理特征；預后

doi：10.3969/j.issn.1674-7593.2023.02.008

Expression of MiR-3934-5p in Gastric Cancer and its Relationship with Prognosis

TangWeizhi1，ChenHao2**，ZhengDuoan1

'Department of General Surgery I，Anhui Provincial Corps Hospital of the Armed Police Force，Hefei 230041;2Department of General Surgery，the First Affiliated Hospital of University of Science and Technology of China，Anhui Provincial Hospital，Hefei 230000

**Corresponding author：Chen Hao，email：287003069@qq.com

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression of miR -3934-5p in gastric cancer and analyze its relationship with clinicopathological features and prognosis. Methods A total of 108 patients with gastric cancer treated from February 2019 to Febru- ary 2020 were selected in this study.Tissue samples were collected from patients after surgery.Theexpresion level of miR-3934-5p in tumor tissues and adjacent normal tissues was measured by qRT-PCR.The patients were followed up for 12 to 24 months. Twenty -three patients who died were assigned to death group，and 85 patients who survived were asigned to survival group.Univari- ate analysis and multivariate COX regression models were used to evaluate the prognostic factors of gastric cancer. ResultsTheex- pression level of miR-3934-5p in castric cancer tissue was higher than that in adjacent normal tissues（Plt;0.05）.Univariate anal- ysis showed that there were significant differences in the degree of differentiation，depth of invasion，lymph node metastasis，distantmetastasis，TNMstage，andmiR-3934-5pexpressionlevelbetweenthedeathgroupandsurvivalgroup（Plt;0.05）.COXregres- sionmodelshowedthatpoordifferentiation，invasiondepth（T3+T4），lymphnodemetastasis，distantmetastasis，TNMstage（Ⅲ+IV），andmiR-3934-5pexpressionlevelwereindependentriskfactorsfortheprognosisofgastriccancer（Plt;0.05）. Conclu- sion MiR-3934-5p is highly expresed in gastrice cancer tissue，which may be an important risk factor ffecting short -term progno- sis of gastric cancer.

[Keywords]MiR-3934 -5p;Gastriccancer;Pathologicalfeatures;Prognosis

胃癌作為臨床上一類發(fā)病率較高的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，發(fā)病機制較為復雜，多發(fā)生于50歲以上的人群，早期臨床癥狀較為隱匿，一旦確診即為晚期，這也導致了相當一部分患者在確診時即錯過了疾病的最佳治療時期1。尤其是人口老齡化的發(fā)展，老年人口的基數(shù)不斷增加，癌癥的早發(fā)現(xiàn)早治療是提高人口生存質(zhì)量的最優(yōu)方案。隨著醫(yī)學研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)miRNA與沉默腫瘤細胞的生長具有密切的相關(guān)性，參與腫瘤細胞內(nèi)各類重要細胞生物程序間的調(diào)控，同時也間接性地發(fā)揮著癌基因或者抑癌基因的功能2。miR-3934-5p作為近期發(fā)現(xiàn)的一種與胃癌等惡性腫瘤疾病具有密切相關(guān)性的內(nèi)源性miRNA， 經(jīng)過證實發(fā)現(xiàn) miR-3934-5p在諸多生物學功能當中發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用，但目前尚未有明確的研究可證實miR-3934-5p與胃癌患者疾病發(fā)生發(fā)展具有密切的關(guān)系[3]。本研究就 miR-3934-5p在胃癌患者中的表達及其與預后的關(guān)系進行分析，旨在為胃癌的治療及預后問題提供可靠的依據(jù)。

1對象與方法

1.1研究對象

選取2019年2月～2020年2月收治的胃癌患者108例，收集全部患者的手術(shù)組織樣本，分別從中獲取患者的胃癌組織以及癌旁正常組織，本研究經(jīng)醫(yī)學倫理會審核批準。納入標準：①在本院行臨床癥狀及體征、影像學以及病理學檢查后確診；②年齡60～80歲；③進入研究前未接受其他方法治療；④當前生命體征平穩(wěn)；⑤具有完整的臨床資料；⑥自愿簽署知情同意書。排除標準：①合并其他類型的惡性腫瘤；②合并其他重要臟器功能障礙及損傷；③合并免疫系統(tǒng)功能紊亂者；④意識不清晰，無法自主回答問題。進行為期12～24個月的隨訪，平均隨訪時間（15.54±2.14）個月，隨訪期間死亡23例為死亡組，其余85例為生存組。

1.2方法

1.2.1主儀器及試劑超微量分光光度計、熒光定量PCR儀、冷凍型微量離心機、Trizol試劑、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、熒光定量 PCR試劑盒以及相關(guān)引物。

1.2.2qRT-PCR 檢測方法全部組織樣本在切除后均冷凍在液氮當中，保存在-80℃環(huán)境中。按照試劑盒操作說明書，采用Trizol試劑從胃癌組織以及癌旁正常組織當中提取總RNA。按照Service- bio @RT First Strand cDNA Synthesis Kit 說明將提取的總 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。設(shè)置逆轉(zhuǎn)錄的條件為65℃（5 min）、42℃（60min）、70℃（5min）。

在操作時將 cDNA 作為模板進行PCR 擴增，引物由上海生工生物工程股份有限公司所提供。U6作內(nèi)參，采用PCR試劑盒檢測miR-3934-5p的表達水平。取劑量為0.2 mL的 PCR管，制作如下反應(yīng)體系：2* qRT -PCRMix 7.5μL、濃度2.5μmol/L 的基因引物1.5μL、反轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物為2.0μL，ddH204.0μL 。反應(yīng)條件設(shè)置：在95℃環(huán)境中完成預變形10 min， 并進行1個循環(huán)，隨后在95℃環(huán)境中反應(yīng)15 s，60℃環(huán)境中反應(yīng)60 s， 共進行40個循環(huán)41。全部樣本均采取的是3個反應(yīng)復孔，并采取2-AA@法計算miR-3934-5p在胃癌組織及癌旁組織中的表達量?。

1.2.3臨床病理特征指標收集收集患者的年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度、是否出現(xiàn)了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、是否出現(xiàn)了遠處轉(zhuǎn)移、是否出現(xiàn)了脈管侵犯、 TNM分期、miR-3934-5p表達水平等。

1.3統(tǒng)計學方法

采用SPSS23.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料組間比較采用x2檢驗；正態(tài)分布計量資料以x±s 表示，組間比較采取t檢驗；采用COX 回歸模型對胃癌患者的預后影響因素進行分析；以 Plt;0.0為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1miR-3934 -5p在胃癌組織及癌旁組織中的表達情況

胃癌組織中 miR-3934-5p的表達水平為5.12±0.36，癌旁正常組織中miR-3934-5p的表達水平為2.02±0.22，胃癌組織中miR-3934 -5p 的表達水平高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學意義（t=127.834，Plt;0.05）。

2.2影響胃癌患者預后的單因素分析

單因素分析可見，死亡組與生存組的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、遠處轉(zhuǎn)移情況、 TNM分期及miR-3934-5p表達水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05），見表1。

2.3胃癌預后的影響因素分析

將分化程度（高、中分化=0，低分化=1）、浸潤深度（T1+T2=0，T3+T4=1）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（否=0，有=1）、遠處轉(zhuǎn)移（否=0，有=1）、 TNM分期（I+Ⅱ期=0 ， Ⅲ+IV期=1）、miR-3934-5p（原值帶入）作為自變量進行COX 回歸分析。結(jié)果可見，低分化、浸潤深度為T3+T4、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、TNM 分期Ⅲ、IV期、 miR-3934-5p可作為影響胃癌患者預后的獨立危險因素（Plt;0.05），見表2。

3討論

近年來，隨著誘發(fā)因素的不斷增多，在我國范圍內(nèi)老年胃癌的發(fā)病率呈現(xiàn)出了不斷升高的趨勢，盡管當前現(xiàn)代醫(yī)學診療技術(shù)得以提升，胃癌的生存期有了一定程度的延長，但對于胃癌患者而言仍然具有著較高的死亡率。因此，為胃癌的發(fā)生發(fā)展機制進行深度分析，對其進行早期干預，提高胃癌療效，改善生活質(zhì)量，延長生存期具有重要的臨床意義7。

miRNA 在近年來的研究中被發(fā)現(xiàn)廣泛存在于動植物基因當中，為一類含有22～28個核苷酸的非編碼小分子單鏈RNA， 在整個基因組中占2%左右，臨床資料顯示，miRNA 通過與靶 mRNA 的3'UTR 堿基相結(jié)合，對靶 mRNA 的降解或者抑制翻譯產(chǎn)生了促進效果，從而實現(xiàn)對靶基因表達的調(diào)控作用，影響著細胞的增殖、分化以及凋亡過程8]。目前已經(jīng)有研究報道，第1種與miRNA 調(diào)節(jié)具有密切相關(guān)性的疾病為慢性淋巴細胞白血病，此后在接下來的研究中也證實，miRNA 能夠通過與靶miRNA 特異性堿基相互配對而引起 mRNA 出現(xiàn)降解或?qū)ζ浞g產(chǎn)生抑制效果，從而參與腫瘤的增殖、分化以及轉(zhuǎn)移的發(fā)展9-10]。另外，也有研究報道指出，miRNA 本身具有的功能一旦出現(xiàn)異常也會導致癌癥的發(fā)生發(fā)展，還會對腫瘤靶基因的表達產(chǎn)生抑制作用，這可能是導致癌癥發(fā)生發(fā)展的一類重要機制1-121。在一般情況下，致癌miRNA可在惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)出較高的表達水平，這也導致了腫瘤的發(fā)生發(fā)展，而抑癌miRNA若出現(xiàn)沉默狀態(tài)或者丟失表達也會在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到重要的作用[13-14]

miR-3934-5p作為近期發(fā)現(xiàn)的一種與胃癌等惡性腫瘤疾病具有密切相關(guān)性的內(nèi)源性miRNA， 經(jīng)過證實發(fā)現(xiàn) miR-3934-5p在諸多生物學功能當中發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用，其作用機制在于通過結(jié)合相應(yīng)的3'UTR 來對相應(yīng)的mRNA 的翻譯產(chǎn)生抑制作用，由此保證在轉(zhuǎn)錄水平上對基因的表達產(chǎn)生相應(yīng)的作用，從而對細胞周期造成影響，導致細胞增殖能力的改變15-161。有資料顯示，miR-3934 -5p 若呈現(xiàn)出較低的表達水平則會對TP53INPI的表達產(chǎn)生較強的調(diào)節(jié)作用，從而對神經(jīng)母細胞瘤細胞的活力產(chǎn)生抑制效果并誘導細胞凋亡L17-18]。在其他有關(guān)研究中也證實，miR-3934-5p與非小細胞肺癌等腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有密切的相關(guān)性[19]。有研究報道，miR-3934-5p在哮喘患者可表現(xiàn)出較低的表達水平，隨著病情的加重，miR-3934-5p 表達水平也開始降低1201。在本研究中，癌組織中 miR-3934-5p的表達水平高于癌旁正常組織，且 COX 回歸模型顯示miR-3934-5p可作為影響胃癌患者短期預后的高危影響因素，分析可見高表達的miR-3934-5p對胃癌患者的預后造成了影響，可能預示著胃癌細胞此時具有更強的侵襲以及轉(zhuǎn)移能力，進而在腫瘤的進展過程中發(fā)揮著抑癌或者促癌等作用，此時患者的預后表現(xiàn)也普遍較差。

綜上所述，胃癌組織中miR-3934-5p表達水平較高，可作為影響老年胃癌患者短期預后的一個重要危險因素。在接下來的研究中可進一步地擴大樣本量，增加觀察指標，由此深入探討miR- 3934-5p 與胃癌患者疾病進展的關(guān)系。

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（2022-08-29收稿）