淮亞紅，劉妍*，郭艷峰，唐光華

（1.中山火炬職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣東 中山 528436；2.中山市強(qiáng)晟水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，廣東 中山 528467）

海鱸（Lateolabrax japonicus）屬花鱸科（Lateolabracidae）花鱸屬（Lateolabrax），學(xué)名中國(guó)花鱸，是我國(guó)海水魚(yú)中產(chǎn)量第一的魚(yú)類(lèi)，位居珠江流域四大名魚(yú)之首[1]。白蕉海鱸養(yǎng)殖起源于珠海市斗門(mén)區(qū)白蕉鎮(zhèn)，當(dāng)?shù)叵痰}度保持在0.1%～0.5%[2]，養(yǎng)殖出的海鱸魚(yú)體表皮光亮，背部青色，腹部白色，背肥肚圓，通體肉厚，肉質(zhì)美味嫩滑，深受消費(fèi)者青睞。白蕉海鱸魚(yú)主要采用傳統(tǒng)的池塘高密養(yǎng)殖模式[3-4]，容易導(dǎo)致水體環(huán)境惡化和致病菌增加[5]，在很大程度上增加了白蕉海鱸患病的風(fēng)險(xiǎn)。

水產(chǎn)品的藥物殘留日益受到消費(fèi)者關(guān)注，為了降低藥物殘留，不易產(chǎn)生抗藥性和毒副作用的中藥制劑，越來(lái)越受到水產(chǎn)養(yǎng)殖者的青睞[6]。三黃散作為國(guó)標(biāo)范圍內(nèi)的水產(chǎn)用藥，是由大黃、黃芩、黃柏和大青葉4 味藥材，經(jīng)粉碎制成，具有清熱解毒效果，其中大黃對(duì)嗜水氣單胞菌抗菌效果最佳[7]。在白蕉海鱸實(shí)際喂養(yǎng)過(guò)程中，三黃散的藥效與投喂階段關(guān)系密切。發(fā)病初期投喂三黃散效果最佳；發(fā)病嚴(yán)重后再投喂，則三黃散功效欠佳，需配合抗生素等藥物。現(xiàn)開(kāi)展飼料中三黃散不同添加量，對(duì)白蕉海鱸營(yíng)養(yǎng)成分和非特異性免疫力的影響試驗(yàn)，擬為三黃散的精細(xì)化使用及其他中藥制劑的科學(xué)投喂,提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 時(shí)間與地點(diǎn)

2020 年1 月—2022 年12 月。試驗(yàn)地點(diǎn)位于中山市坦洲鎮(zhèn)海鱸養(yǎng)殖基地。

1.2 材料

選擇健康的白蕉海鱸120 尾，體質(zhì)量600～700 g。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

中藥制劑三黃散（獸藥字16274 號(hào)），規(guī)格250 g/袋。設(shè)置3 個(gè)試驗(yàn)組（A、B、C），分別在基礎(chǔ)飼料中添加1.0%（A）、1.2%（B）、1.6%（C）三黃散。以不添加三黃散的基礎(chǔ)飼料組為空白對(duì)照組（D），試驗(yàn)組和對(duì)照組各設(shè)3 個(gè)平行，每個(gè)平行為10 尾魚(yú)。

1.4 儀器

TA.newplus 質(zhì)構(gòu)儀（上海瑞玢智能科技有限公司）；SYSMEXKX-1 全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（日本Sysmex 公司）；GCMS-QP2020[島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司]；L-8900 氨基酸分析儀[日立分析儀器（上海）有限公司]；Agilent 1260Ⅱ（安捷倫科技公司）。

1.5 試驗(yàn)方法

1.5.1 魚(yú)肉樣品的處理

參照李樂(lè)[8]的方法取得樣品。將樣品放進(jìn)密封袋，并置于-20℃的冰箱中保存。檢測(cè)時(shí)，需自然解凍，測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)，所有分析均取3 個(gè)平行樣，每個(gè)平行10 條。

1.5.2 脾臟體指數(shù)

參照劉青等[9]的方法，取脾臟并稱(chēng)其質(zhì)量。脾臟體指數(shù)=（脾臟質(zhì)量/體質(zhì)量）×100%。

1.5.3 肝臟體指數(shù)

檢測(cè)方法與脾臟體指數(shù)檢測(cè)方法相同。肝臟體指數(shù)=（肝臟質(zhì)量/體質(zhì)量）×100%。

1.5.4 血液的采集與檢測(cè)

血液采集方法根據(jù)文獻(xiàn)[10-12]。全血細(xì)胞指標(biāo)：白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、淋巴細(xì)胞百分比（LYM）、紅細(xì)胞（RBC）、中性粒細(xì)胞百分比（NEU）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量（MCH）、平均紅細(xì)胞體積（MCV）、紅細(xì)胞比容（HCT）、血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞體積分布寬度（RDW），采用血液檢測(cè)儀完成檢測(cè)。血清指標(biāo)主要檢測(cè)天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）。

1.5.5 白細(xì)胞吞噬能力測(cè)定

用1 mL 無(wú)菌注射器，于試驗(yàn)魚(yú)的心臟采血，置于抗凝血液采集管中。取100 μL 的抗凝血于玻片上，加入10 μL 墨汁涂均勻后，在37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h，于10×物鏡顯微鏡下，觀察并統(tǒng)計(jì)白細(xì)胞的吞噬數(shù)量，計(jì)算吞噬率百分比。白細(xì)胞吞噬百分比（%）=（100 個(gè)白細(xì)胞中參與的白細(xì)胞數(shù)/100）×100%。

1.5.6 營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)的檢測(cè)

蛋白質(zhì)的檢測(cè)參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定》（GB 5009.5—2016）第一法；脂肪的檢測(cè)參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中脂肪的測(cè)定》（GB 5009.6—2016）第一法；碳水化合物的檢測(cè)參照《食品營(yíng)養(yǎng)成分基本術(shù)語(yǔ)》（GB/Z 21922—2008）；水分的檢測(cè)參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中水分的測(cè)定》（GB 5009.3—2016）第一法；灰分的檢測(cè)參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中灰分的測(cè)定》（GB 5009.4—2016）第一法。

1.5.7 質(zhì)構(gòu)的測(cè)定方法

根據(jù)文獻(xiàn)[13]方法，測(cè)定魚(yú)肉的硬度、黏著性、彈性、凝聚性、咀嚼性。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

數(shù)據(jù)處理采用SPSS 27.0 軟件的單因素方差分析（One-Way ANOVA），用LSD 多重比較法進(jìn)行組間差異顯著性檢驗(yàn)，結(jié)果以（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 全血細(xì)胞指標(biāo)和血清指標(biāo)

魚(yú)類(lèi)全血細(xì)胞指標(biāo)可以反映魚(yú)體的健康狀況以及生存環(huán)境[14]。添加不同比例三黃散喂養(yǎng)白蕉海鱸的全血指標(biāo)見(jiàn)表1。

表1 添加不同比例三黃散喂養(yǎng)白蕉海鱸的全血指標(biāo)

由表1 可見(jiàn)，白蕉海鱸全血中白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞數(shù)量及紅細(xì)胞比容、平均紅細(xì)胞體積隨著三黃散添加比例的增加而減少。平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞體積分布寬度及血小板計(jì)數(shù)隨著三黃散添加比例的增加而上升。

天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）以心肌含量最豐富，其次是肝臟。當(dāng)肝細(xì)胞出現(xiàn)壞死時(shí)，AST 從肝細(xì)胞中釋放出來(lái)導(dǎo)致血清中AST 增高。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）同樣也存在于肝細(xì)胞漿內(nèi)，肝細(xì)胞被破壞可導(dǎo)致血清ALT 增高。血清指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果顯示（表2），D 組的白蕉海鱸，血清中AST 含量（174.73±54.32）U/L 與A 組的AST 含量沒(méi)有差異（P＞0.05），當(dāng)三黃散添加量增加至1.2%和1.6%時(shí)，血清中AST含量顯著降低（P＜0.05）。喂養(yǎng)三黃散，可顯著降低血清中的ALT 含量（P＜0.05），表明三黃散有利于提高魚(yú)肝臟的健康。

表2 不同比例三黃散喂養(yǎng)白蕉海鱸的血清指標(biāo)① U/L

2.2 非特異性免疫指標(biāo)

脾臟是重要的淋巴器官，可合成免疫物質(zhì)，且能有效清除血液中的病菌及死細(xì)胞[15]。肝臟是魚(yú)體中大部分酶進(jìn)行代謝活動(dòng)的主要場(chǎng)所，承擔(dān)著重要的生物轉(zhuǎn)化作用[16-18]。脾臟體指數(shù)、肝臟體指數(shù)都是魚(yú)類(lèi)非特異性免疫功能的重要指標(biāo)之一。

D 組白蕉海鱸與A、B、C 組的白蕉海鱸在脾臟體指數(shù)和肝臟體指數(shù)上無(wú)差異（P＞0.05）,該結(jié)果與禹方曉等[14]的研究結(jié)果一致，表明三黃散飼喂對(duì)白蕉海鱸魚(yú)無(wú)害。在白細(xì)胞吞噬百分比（PP）方面，D 組與A 組白蕉海鱸的PP 值無(wú)差異（P＞0.05），隨著飼料中三黃散添加量的增加，B 組和C 組的白蕉海鱸PP 值顯著高于D 組（P＜0.05），表明在基礎(chǔ)飼料中添加一定比例的三黃散，可有效提高白蕉海鱸白細(xì)胞的吞噬活性。隨著B(niǎo) 組和C 組白蕉海鱸體質(zhì)量的增加，魚(yú)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收均得到提高（表3）。

表3 添加不同比例三黃散喂養(yǎng)白蕉海鱸的非特異性免疫功能指標(biāo)①

2.3 營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)和質(zhì)構(gòu)指標(biāo)

添加不同比例三黃散喂養(yǎng)白蕉海鱸每100 g 魚(yú)肉主要營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)見(jiàn)表4。

表4 添加不同比例三黃散喂養(yǎng)白蕉海鱸每100 g 魚(yú)肉的營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)①

由表4 可見(jiàn)，D 組的白蕉海鱸魚(yú)肉能量為（380.67±7.09）kJ、蛋白質(zhì)含量為（17.70±0.56）g、脂肪含量（1.43±0.06）g，B 組和C 組的三黃散喂養(yǎng)2 個(gè)月后，白蕉海鱸魚(yú)肉的能量、蛋白質(zhì)含量和脂肪含量均顯著增加（P＜0.05）。D 組碳水化合物的含量則由（1.57±0.25）g 降低至1.43～1.10 g。D 組鈉含量為（26.917±0.780）mg，添加三黃散喂養(yǎng)后，升高至28.21～31.73 mg，其中C 組三黃散喂養(yǎng)的白蕉海鱸魚(yú)肉鈉含量最高（31.73±1.10）mg?？傊珺 組和C 組的三黃散喂養(yǎng)對(duì)魚(yú)肉的營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)有顯著影響，其中能量、蛋白質(zhì)含量、脂肪含量隨著三黃散添加比例的增加而增加，碳水化合物隨著三黃散添加比例增加，含量降低；鈉的含量隨著三黃散添加比例增加升高；水分含量隨著三黃散添加比例增加而降低。B 組和C 組的三黃散喂養(yǎng)，對(duì)魚(yú)肉的灰分指標(biāo)影響差異不顯著。

魚(yú)肉硬度是人體組織的觸覺(jué)，主要源于大量存在于魚(yú)肉肌纖維間隙結(jié)締組織中膠原蛋白含量，是魚(yú)肉保持形狀的內(nèi)部結(jié)合力，膠原蛋白含量低的肉質(zhì)硬度相對(duì)低。魚(yú)肉硬度還表現(xiàn)為人在咀嚼試樣組織時(shí)的質(zhì)感[19]。彈性指有外力作用時(shí)，試樣變形情況及外力移除后試樣恢復(fù)原來(lái)的性能[19]。黏聚性是魚(yú)肉抵抗受損并緊密連接使其保持完整的性質(zhì)。不同比例三黃散喂養(yǎng)白蕉海鱸魚(yú)肉的質(zhì)構(gòu)指標(biāo)見(jiàn)表5。

表5 不同比例三黃散喂養(yǎng)白蕉海鱸魚(yú)肉的質(zhì)構(gòu)指標(biāo)①

隨著三黃散添加量的增加，魚(yú)肉的硬度和脆度逐漸增加。與D 組相比，C 組魚(yú)肉的硬度和脆度增加最為明顯（P＜0.05）。三黃散喂養(yǎng)對(duì)魚(yú)肉彈性和黏聚性影響不顯著（P＞0.05）。C 組的魚(yú)肉中咀嚼性顯著增加（P＜0.05）。B 組和C 組的魚(yú)肉回復(fù)性顯著高于D 組和A 組（P＜0.05）?？傊煌砑颖壤S散飼喂，均對(duì)魚(yú)肉彈性和黏聚性無(wú)影響，C 組對(duì)魚(yú)肉硬度和脆度有顯著影響，B 組和C 組對(duì)魚(yú)肉回復(fù)性有顯著影響。

3 討論

白細(xì)胞能夠通過(guò)胞吞將侵入細(xì)胞內(nèi)的異物進(jìn)行吞噬，是衡量魚(yú)類(lèi)非特異性免疫功能的重要指標(biāo)之一[11-20]。林旋等[11]用黃芪多糖飼料添加劑喂養(yǎng)羅非魚(yú)40 d，可不同程度地提高羅非魚(yú)血漿中白細(xì)胞的吞噬百分比和吞噬指數(shù)，且胞吞噬能力與投喂的黃芪多糖有密切相關(guān)。邢玉娟等[21]在草魚(yú)的基礎(chǔ)飼料中添加了黃芪、甘草、板藍(lán)根、大青葉等組成的復(fù)合中草藥，結(jié)果顯示添加復(fù)合中草藥提高了草魚(yú)白細(xì)胞的吞噬能力。本試驗(yàn)中，B 組和C 組的三黃散添加量，均有效提高了白蕉海鱸的白細(xì)胞吞噬能力，且血清中天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）含量低于D 組，表明三黃散對(duì)肝臟的保護(hù)作用明顯。

同時(shí)，三黃散可促進(jìn)白蕉海鱸魚(yú)體質(zhì)量的增加，提高蛋白質(zhì)含量、肉質(zhì)硬度、脆度和回復(fù)性，繼而提高白蕉海鱸的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、口感和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本試驗(yàn)再次驗(yàn)證了中草藥制劑對(duì)提高魚(yú)機(jī)體非特異免疫的效果，為白蕉海鱸精細(xì)化喂養(yǎng)和三黃散的投喂提供了理論依據(jù)。