李陽，汪昭楚，王菁，黃鴻鈴，趙晨孜，劉純香，石榮*

（1.福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院，福建 福州 350004；2.陳民藩國醫(yī)大師傳承工作室，福建 福州 350004）

由于肛門特殊的生理功能和解剖位置，肛腸手術多采用開放性創(chuàng)面，術后愈合時間較長；加之排便刺激及腸道菌群的影響，術后創(chuàng)面易出現(xiàn)感染、水腫、滲出增多等情況，從而增加患者的痛苦和住院時間。紫白膏是國醫(yī)大師陳民藩教授創(chuàng)立的肛腸科制劑，團隊前期研究表明紫白膏可下調NF-κB mRNA、1L-6的表達，有效促進創(chuàng)面愈合［1-3］。本研究采用動物實驗，通過模擬大鼠肛周術后皮膚創(chuàng)面模型，觀察大鼠背部皮膚創(chuàng)面組織在紫白膏作用下，其白細胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平的變化，探討紫白膏在創(chuàng)面愈合過程的作用機制。

1 材 料

1.1 實驗動物 清潔級雄性SD大鼠90只，8周齡，體質量（250±25 g），由杭州醫(yī)學院動物實驗室提供，生產許可證號為SCXK（浙）2019-0002，大鼠于動物實驗室檢疫間適應性喂養(yǎng)3 d，使用許可證號為SYXK（閩）2022-0002。本實驗嚴格按照動物實驗規(guī)范進行（動物倫理批號：FJABR2022052001）。

1.2 實驗藥物與主要試劑 紫白膏（福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院院內制劑，由大黃、紫草、白及、煅石膏、冰片組成，批號：220209）；0.9%氯化鈉注射液（福州海王福藥制藥公司，批號：200218A24）；75%乙醇消毒液（山東利爾康公司，批號：210901）；水合氯醛（上海阿拉丁生化科技公司，批號：K913111）；醫(yī)用紗布塊（南昌意爾康公司，批號：20220316）；大青葉抑菌液（河南杰東藥業(yè)公司，批號：19061301）；莫匹羅星軟膏（中美史克公司，批號：PD38）；凡士林（浙江振德醫(yī)療公司，批號：202210231A），混合痔患者術后新鮮糞便。大鼠IL-1β ELISA檢測試劑盒（江蘇酶免實業(yè)有限公司，批號：MM-0047R1）、大鼠TNF-α ELISA檢測試劑盒（江蘇酶免實業(yè)有限公司，批號：MM-0181R1）。

1.3 主要實驗儀器 酶標儀、化學發(fā)光成像系統(tǒng)（美國伯樂公司）。

2 方 法

2.1 實驗方法

2.1.1 肛周創(chuàng)面造模及評價 參照文獻［3］對大鼠進行肛周創(chuàng)面造模。選用腹腔注射麻醉，每只大鼠使用3.5 mL/kg的10%水合氯醛。局部備皮，常規(guī)消毒后，以大鼠背部為圓心，直徑約為2 cm，做一圓形切口，以先皮膚全層，后皮下淺筋膜直至肌層的順序剪開，創(chuàng)面充分止血后以油紗、敷料、膠帶固定?？瞻捉M每次換藥前不滴加糞液，僅用生理鹽水紗條濕敷。其余各干預組每次換藥前0.5 h均在創(chuàng)面上滴加糞液1 mL（混合痔患者術后的新鮮糞便10 g，加生理鹽水5 mL，混勻，離心，取上清液，現(xiàn)配現(xiàn)用），大鼠創(chuàng)面見紅腫隆起，超過創(chuàng)緣水平面，并伴有炎癥滲出即為造模成功。

2.1.2 動物分組及給藥 90只清潔級SD大鼠適應性喂養(yǎng)3 d，按隨機數字表法分為空白組、模型組、凡士林組、紫白膏組、大青葉組和莫匹羅星軟膏組，每組15只。除空白組外，各組大鼠均予模擬肛周術后皮膚創(chuàng)面造模。創(chuàng)面常規(guī)清創(chuàng)后，空白組、模型組均予生理鹽水紗條濕敷，凡士林組、紫白膏組、大青葉組及莫匹羅星軟膏組分別予對應藥物干預，使用棉簽蘸取少量藥物完整、均勻地涂覆創(chuàng)面，層厚約1 mm。各組干預后予清潔敷料覆蓋，外用膠布固定。每日以相同的方法換藥1次。

2.1.3 創(chuàng)面組織標本采集 各組分別于治療后第3、7、14 d腹腔注射10%水合氯醛進行麻醉，以背部皮膚創(chuàng)面為中心沿創(chuàng)緣剪取組織標本，分類標記后于-80 ℃環(huán)境凍存，備EILSA檢測。

2.2 大鼠創(chuàng)面愈合情況觀察 觀察治療后第3、7、14 d創(chuàng)面愈合率及創(chuàng)面愈合面積。采用心電圖網格紙（1小格1 mm）測量創(chuàng)面面積大小，并計算創(chuàng)面愈合率。創(chuàng)面愈合率的計算公式如下：

創(chuàng)面愈合率＝（原創(chuàng)面面積－現(xiàn)創(chuàng)面面積）/原創(chuàng)面面積×100%

2.3 大鼠創(chuàng)面組織的IL-1β、TNF-α含量測定 采用ELISA法分別檢測大鼠肛周模型創(chuàng)面組織的IL-1β、TNF-α含量，大致步驟如下：沖洗、剪碎及研磨組織后得到5 000 g勻漿液，予離心后取上清液備檢測。標準品孔各加不同濃度的標準品50 μL；樣本孔中加入待測樣本50 μL；空白孔不加。標準品孔和樣本孔中加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100 μL，用封板膜封住反應孔，恒溫箱溫育60 min。棄液，重復洗板5次。加入反應底物A、B，37 ℃避光孵育15 min。加入終止液50 μL，15 min內于450 nm波長處測定各孔的OD值。

2.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 26.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料符合正態(tài)分布采用（）描述，創(chuàng)面愈合率比較采用單因素方差分析，組間比較采用非參數檢驗。P＜0.05則為差異有統(tǒng)計學意義。

3 結 果

3.1 大鼠創(chuàng)面愈合結果 5組大鼠創(chuàng)面外觀愈合情況，見圖1。5組大鼠創(chuàng)面愈合率隨著治療天數的增加而改善。實驗結果表明，與模型組相比，治療后第3、7 d各組之間創(chuàng)面愈合率差異無統(tǒng)計學意義。治療后第14 d，莫匹羅星軟膏組與模型組創(chuàng)面愈合率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；凡士林組、紫白膏組、大青葉組的創(chuàng)面愈合率與模型組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1、圖2。

表1 5組大鼠創(chuàng)面面積不同時間點比較（）mm2

表1 5組大鼠創(chuàng)面面積不同時間點比較（）mm2

注：與模型同時間點組比較，1） P＜0.05。

治療第14天54.60±5.18 48.68±6.261）43.04±5.571）46.74±8.451）52.50±11.51模型組凡士林組紫白膏組大青葉組莫匹羅星軟膏組15 15 15 15 15 314.56±3.35 312.46±4.70 313.45±3.24 309.73±4.35 313.53±3.07 270.66±11.88 269.97±14.34 267.75±12.36 264.54±15.66 268.84±5.43 198.36±11.41 202.39±12.64 201.32±4.96 193.45±14.29 197.39±15.07組別n 原始面積治療第3天治療第7天

圖1 5組大鼠不同時間點創(chuàng)面外觀比較

圖2 5組大鼠不同時間點創(chuàng)面愈合率比較

3.2 6組大鼠創(chuàng)面組織治療不同時間點IL-1β、TNF-α含量比較 見表2～表3。

表2 6組大鼠治療不同時間點創(chuàng)面組織IL-1β含量比較（） pg/mL

表2 6組大鼠治療不同時間點創(chuàng)面組織IL-1β含量比較（） pg/mL

注：與空白組比較，1） P＜0.05；與模型組比較，2） P＜0.05；與紫白膏組比較，3） P＜0.05。

第14天16.52±0.37 20.13±0.411）20.00±0.633）17.11±0.552）19.04±0.813）18.95±0.682）3）組別空白組模型組凡士林組紫白膏組大青葉組莫匹羅星軟膏組n 15 15 15 15 15 15第3天16.22±0.92 21.33±1.221）21.08±0.65 19.77±1.10 20.68±0.76 20.15±0.83第7天16.93±0.55 20.94±1.301）20.26±0.87 18.85±0.812）20.11±0.89 19.72±1.06

表3 6組大鼠治療不同時間點創(chuàng)面組織TNF-α含量比較（） pg/mL

表3 6組大鼠治療不同時間點創(chuàng)面組織TNF-α含量比較（） pg/mL

注：與空白組比較，1） P＜0.05；與模型組比較，2） P＜0.05；與凡士林組比較，3） P＜0.05。

第14天79.62±2.00 93.17±2.831）89.02±0.95 80.60±2.642）3）84.88±2.132）85.85±5.592）組別空白組模型組凡士林組紫白膏組大青葉組莫匹羅星軟膏組n 15 15 15 15 15 15第3天77.48±3.56 90.10±1.311）92.55±3.35 87.99±2.70 88.42±2.96 88.61±3.26第7天78.57±2.89 93.59±4.211）90.52±3.93 83.44±2.642）87.37±2.932）87.78±1.77

4 討 論

創(chuàng)面愈合是一個復雜的過程，從凝血開始，經壞死組織、異物和細菌的清除等一系列過程，以新生組織形成并填補傷口缺損結束，包括止血、消炎、生長、再上皮化和重構等不同階段，其中涉及多種細胞和炎性因子的參與［4-5］。LV等［6］研究發(fā)現(xiàn)，六合丹在兔創(chuàng)面愈合過程中，特異性地抑制IL-1β的表達，減少感染傷口炎癥因子的釋放，可促進感染傷口的愈合。TNF-α也是參與炎癥反應的一個重要細胞因子，在創(chuàng)面分泌物中TNF-α水平持續(xù)增高，高滲應激致細胞凋亡和壞死，細胞周期持續(xù)阻滯，促使創(chuàng)面發(fā)生炎癥反應，延緩創(chuàng)面愈合［7］。姚昶等［8］研究也表明瘡靈液載入膠原對慢性創(chuàng)面的促愈作用與TNF-α水平的下調有關。

中醫(yī)外治法在促進創(chuàng)面治療方面具有作用直接、療效好、成本低、患者易接受等優(yōu)點。紫白膏是國醫(yī)大師陳民藩教授運用“酸澀收斂”理論研制的中藥復方制劑，在臨床中廣泛應用于治療痔、瘺、裂等肛腸疾病以及術后的治療［9-10］。紫白膏以大黃、紫草為君，白及、煅石膏為臣，佐以冰片，其中大黃清熱瀉火兼以除濕祛瘀，紫草清熱解毒涼血，治療熱邪迫血溢于脈外，起祛陳化新、消腫止痛之效；石膏瀉火，熱去則血寧，輔助止血的同時又可斂瘡生肌，與白及同用能收能止，使瘡可斂、血得安，助君藥清熱瀉火生肌，加速傷口愈合；冰片能消結散腫，增強清熱瀉火之效。諸藥合用，既能清熱解毒，消腫止痛，又能涼血止血，促進創(chuàng)面愈合。

創(chuàng)面造模后受糞便菌群的影響，易加重炎癥反應，影響創(chuàng)面愈合。大青葉抑菌液為中藥提取物的復方制劑，主要針對金黃色葡萄球菌等革蘭氏陽性菌譜，是體外抑菌的常用藥物［11］，而莫匹羅星軟膏對革蘭氏陽性菌有更強的活性［12］。研究表明，肛周疾病的菌群分布既有革蘭氏陰性菌又有革蘭氏陽性菌［13］，故本研究設置肛腸科常用的大青葉抑菌液、莫匹羅星軟膏和紫白膏作為主要干預藥物，對比不同抑菌條件下的療效差異。

本研究結果表明，在治療第14天，紫白膏組、大青葉組、凡士林組的創(chuàng)面愈合率明顯高于模型組（P＜0.05），凡士林組的促進愈合作用很可能是凡士林對創(chuàng)面的保護作用，減少了創(chuàng)面的受污染程度；莫匹羅星軟膏促進愈合作用相對不明顯，可能與其特殊的陽性抗菌譜有關。ELISA實驗表明，大鼠造模后IL-1β及TNF-α的含量均明顯升高（P＜0.05），證明肛腸疾病術后，肛周環(huán)境更利于細菌的生長繁殖，從而引起更為嚴重的炎癥反應。治療第7天，與模型組比較，紫白膏組大鼠創(chuàng)面組織IL-1β含量明顯下降，紫白膏組、大青葉組大鼠創(chuàng)面組織TNF-α含量明顯下降（P＜0.05）。治療第14天，與模型組比較，紫白膏組大鼠創(chuàng)面組織的IL-1β含量明顯下降（P＜0.05），紫白膏組、大青葉組、莫匹羅星軟膏組大鼠創(chuàng)面組織的TNF-α含量明顯下降（P＜0.05）。以上結果表明，大青葉的促愈機制可能與抑菌作用下TNF-α的明顯下調有關，而紫白膏對IL-1β與TNF-α均有明顯的調控作用，且這2種炎性因子含量更低。

綜上所述，紫白膏能明顯促進大鼠創(chuàng)面愈合，減少創(chuàng)面組織IL-1β和TNF-α的水平，減輕創(chuàng)面炎性細胞浸潤。在今后的研究中，需要進一步明確紫白膏對肛周創(chuàng)面的抗炎、抑菌及促生長效應，以擴大其臨床應用。