賀春萍， 樊蘭艷， 吳賀， 梁艷瓊， 吳偉懷， 李銳， 鄭服叢

（1.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部熱帶作物有害生物綜合治理重點實驗室，海南省熱帶農(nóng)業(yè)有害生物監(jiān)測與控制重點實驗室，海南省熱帶作物病蟲害生物防治工程技術(shù)研究中心，?？?571101； 2.海南大學(xué)植物保護學(xué)院，海口 570228； 3.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院，昆明 650201）

天然橡膠是全球重要的戰(zhàn)略物資，與煤炭、石油和鋼鐵并稱四大工業(yè)原料，橡膠產(chǎn)業(yè)因遭受病害會造成1/4的總產(chǎn)量損失[1]。橡膠樹白粉病和炭疽?。ㄋ追Q“兩病”）是影響橡膠干膠產(chǎn)量的主要病害，其為害橡膠樹葉片、樹梢和花序，造成膠樹落葉、落花和落果，樹梢干枯，以致推遲開割時間，使膠乳減產(chǎn)。目前，“兩病”主要采用化學(xué)防治，但存在藥劑種類少、防治方法單一、易引起抗藥性等缺陷，且橡膠樹屬高大喬木，其用藥量大、防治成本高和易造成生態(tài)環(huán)境污染等問題已經(jīng)引起廣泛關(guān)注。探究生物防治技術(shù)是環(huán)保、經(jīng)濟、安全的防控措施之一。

枯草芽孢桿菌能產(chǎn)生脂肽類、胞外蛋白、聚酮化合物、抗菌多肽等多種類型抗菌物質(zhì)，這些抗菌物質(zhì)在防治植物病害中起著重要作用[2]。其中非核糖體途徑合成的脂肽類物質(zhì)是其產(chǎn)生的主要抑菌活性物質(zhì)之一，是生物農(nóng)藥和生物菌肥研發(fā)和利用的重要資源[3-4]，主要包括表面活性素（surfactins）、伊枯草菌素（iturins）和豐原素（fengycins）3大家族，不同家族的脂肽類化合物抑菌特性有所差異[5-6]。表面活性素能有效抑制病毒、支原體和細(xì)菌活性，對細(xì)菌的群集運動和生物膜形成起重要作用[7-9]，但對病原真菌沒有顯著抑菌活性[6,10]。伊枯草菌素具很強的抑真菌活性，但抑制細(xì)菌和病毒的能力有限[6,10]。豐原素則對絲狀真菌具有很強的抑菌活性[7]。

目前，利用枯草芽孢桿菌防治植物病害已成為研究熱點，但對橡膠樹病害進行生防研究還停留在拮抗菌篩選、鑒定、生物學(xué)特性及抑菌物質(zhì)分析等方面[11-13]。黃有航等[11]從橡膠樹根際分離出的細(xì)菌菌株S43對橡膠樹白粉病有較強拮抗作用，經(jīng)鑒定為枯草芽孢桿菌，在橡膠樹葉片上能較好定殖；時濤等[12]從橡膠樹中分離出47份內(nèi)生細(xì)菌，其中2株對橡膠樹棒孢霉葉斑病病菌具有拮抗作用，經(jīng)鑒定為枯草芽孢桿菌；孫亮等[14]研究發(fā)現(xiàn)，從植物根際分離的枯草芽孢桿菌HAB-1對橡膠樹炭疽病菌和棒孢霉葉斑病病菌具有較強的抑菌活性，并觀測了7種培養(yǎng)基質(zhì)上HAB-1的抑菌形態(tài)及抑菌活性；趙璐璐等[15]發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌Czk1對橡膠樹多種根病病原和炭疽病菌具有強拮抗作用，Czk1持續(xù)接種20代仍具有很強的抑菌活性。

本課題組從橡膠樹根部分離獲得枯草芽孢桿菌Czk1[16]，采用酸沉淀法從菌株發(fā)酵液中提取抑菌物質(zhì)，通過Sephadex G25柱層析、MALDI-TOPMS分析和脂肽抗生素基因檢測發(fā)現(xiàn)Czk1活性粗提物中含有Surfactin 、Fengycin和Iturin等脂肽抗生素[17-18]，其分泌的揮發(fā)性物質(zhì)亦能有效抑制植物病原真菌的生長[19-20]。基于上述研究，通過對前期篩選出的對多種熱帶作物病害病原具有良好抑菌活性的B.subtilisCzk1不同質(zhì)量濃度脂肽物質(zhì)對橡膠樹炭疽病菌的抑菌活性及“兩病”抑制效果進行研究，旨在明確脂肽物質(zhì)對橡膠樹炭疽病和白粉病的抑制效果，以期為橡膠樹炭疽病和白粉病生物防控技術(shù)開發(fā)提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試菌株 生防枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）Czk1、橡膠樹炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）RC178、橡膠樹白粉病菌（Oidium heveae）由中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護研究所熱帶特色經(jīng)濟作物病害研究組分離和保存。

1.1.2 供試橡膠品種 種植的橡膠種苗品種為‘熱研7-33-97’。

1.1.3 供試培養(yǎng)基 LB種子培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g，酵母浸出粉5 g，NaCl 10 g，蒸餾水1 000 mL，瓊脂15 g，pH 7.2，121 ℃滅菌15 min。

發(fā)酵液培養(yǎng)基YPG：10 g·L-1酵母浸出粉，20 g·L-1胰蛋白胨，20 g·L-1葡萄糖，pH 7.0，121 ℃滅菌15 min。

1.1.4 供試試劑及藥品 甲醇、氯仿、濃鹽酸、吐溫20等均為分析純試劑；15%三唑酮可濕性粉劑購自江蘇建農(nóng)農(nóng)藥化工有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 Czk1脂肽類物質(zhì)的提取 在LB平皿中活化Czk1，挑取單菌落接入LB液體種子培養(yǎng)基中，于28 ℃、180 r·min-1培養(yǎng)24 h，以7%(體積分?jǐn)?shù))接種量轉(zhuǎn)接入100 mL發(fā)酵液培養(yǎng)基YPG中，28 ℃、180 r·min-1下振蕩培養(yǎng)3 d。于4 ℃、10 000 r·min-1的條件下將發(fā)酵液離心10 min后收集上清液，然后用滅菌的0.22 μm 微孔濾膜過濾，獲得無菌培養(yǎng)濾液。用6.0 mol·L-1鹽酸調(diào)節(jié)無菌培養(yǎng)濾液pH至4.0，4 ℃冰箱過夜沉淀。然后于4 ℃、10 000 r·min-1離心10 min，收集沉淀物，將沉淀物冷凍干燥后用甲醇萃取2次，合并萃取液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)有機溶劑，真空冷凍干燥，得到脂肽類粗提物于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 Czk1脂肽類物質(zhì)對橡膠樹炭疽病菌的最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）的測定 脂肽類提取物溶于甲醇，并分別配制成40、60、80、100 mg·L-1系列質(zhì)量濃度脂肽液[21]，采用杯碟法分別測定其抑菌活性。具體方法為：用無菌水從已產(chǎn)孢的橡膠樹炭疽病菌平板上用滅菌涂布棒輕刮（沖洗）孢子，將孢子含量配制成1×108CFU·mL-1；然后用移液槍吸取100 μL孢子液均勻涂布于PDA平板，于平皿中心2.5 cm處呈對角線放置杯碟，向杯碟中分別加入100 μL的無菌水（CK）、甲醇和不同質(zhì)量濃度的脂肽液。每處理3次重復(fù)，28 ℃倒置培養(yǎng)。待菌絲長出，測量各處理抑菌圈直徑（mm），并觀察抑菌圈周圍菌絲的生長狀況。

1.2.3 Czk1脂肽類物質(zhì)對橡膠樹炭疽病菌孢子萌發(fā)的抑制作用測定 將脂肽類提取物配制成0.1 mg·mL-1母液，分別稀釋成10、20、40、60 mg·L-1的脂肽類提取液。用2%葡萄糖（質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)）水溶液從平皿中洗下橡膠樹炭疽病菌分生孢子，顯微鏡下調(diào)節(jié)每視野約100個分生孢子。吸取不同質(zhì)量濃度脂肽類提取液各20 μL，涂布于玻片上，有機溶劑揮發(fā)后玻片表面形成藥膜，再吸取20 μL橡膠樹炭疽病菌孢子懸浮液于藥膜上，以甲醇和清水（CK1）為對照。每處理3次重復(fù)，28 ℃培養(yǎng)。待對照組病菌孢子萌發(fā)率大于80%（10～12 h）時，記錄孢子萌發(fā)數(shù)，并計算孢子萌發(fā)抑制率。孢子的芽管長度大于孢子的短半徑視為萌發(fā)。

1.2.4 Czk1脂肽類抗菌物質(zhì)對橡膠樹炭疽病的防治評價方法 田間取橡膠樹淡綠葉期的葉片，將其表面清洗干凈，用針刺傷葉表面組織；按照1.2.2的方法制備1×108CFU·mL-1的RC178孢子懸浮液。設(shè)置6個處理：①噴施10 mg·L-1脂肽提取物后接種RC178；②噴施100 mg·L-1脂肽提取物后接種RC178；③噴施1 000 mg·L-1脂肽提取物后接種RC178；④噴施清水的對照（CK2）；⑤接種RC178；⑥噴施甲醇后接種RC178。每葉片在主脈兩側(cè)刺傷8個點，重復(fù)3次，用紗布保濕葉片并置于托盤中，28 ℃培養(yǎng)3～4 d，調(diào)查葉片發(fā)病情況，計算發(fā)病率，并用十字交叉法測量病斑大小。

以離體葉片接種試驗中獲得的最佳防效質(zhì)量濃度脂肽提取物進行盆栽防效評價。按照1.2.2的方法制備1×108CFU·mL-1的RC178孢子懸浮液。選取長勢一致健康的‘熱研7-33-97’橡膠樹盆栽幼苗，采用噴霧法在橡膠苗淡綠葉期分別噴施上述最佳防效的脂肽提取物、甲醇、清水，然后分別接種RC178，以不接種病原菌的清水為對照（CK3）。每個處理3株幼苗，每株選取9張葉片，每張葉片刺傷1～2個點。3～4 d后調(diào)查發(fā)病情況。

1.2.5 Czk1脂肽類抗菌物質(zhì)對橡膠樹白粉病防治效果的評價 選取長勢一致健康的‘熱研7-33-97’橡膠樹盆栽苗。制備質(zhì)量濃度為1 000 mg·L-1的脂肽類提取物，15%三唑酮可濕性粉劑稀釋1 500倍液。用毛筆刷下保存于橡膠植株葉片上的橡膠樹白粉病菌分生孢子，用0.05%吐溫20的水溶液配制含量為1×108CFU·mL-1的孢子懸浮液。待橡膠苗古銅葉期時設(shè)置7個處理：①脂肽類提取物處理24 h后接種白粉病菌；②接種白粉病菌24 h后脂肽類提取物處理；③三唑酮處理24 h后接種白粉病菌；④接種白粉病菌24 h后三唑酮處理；⑤清水處理作為陰性對照（CK4）；⑥噴甲醇24 h后接種白粉病菌孢子懸浮液；⑦只接種白粉病菌。每處理3株橡膠苗，重復(fù)3次。放置于24 ℃、相對濕度80%條件下，10～15 d后參照許文耀[22]的方法調(diào)查病情，并計算其病情指數(shù)和防治效果。

1.3 數(shù)據(jù)處理

利用Microsoft Excel 2007、SAS 8.02軟件進行統(tǒng)計和分析，應(yīng)用Duncan新復(fù)極差法進行差異顯著性檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 Czk1脂肽類物質(zhì)最小抑菌濃度

Czk1脂肽類物質(zhì)對橡膠樹炭疽病菌的抑菌活性結(jié)果（圖1A）表明，隨著牛津杯中Czk1脂肽類物質(zhì)質(zhì)量濃度的逐漸升高，對橡膠樹炭疽病菌的抑菌活性逐漸增強，牛津杯周圍形成的抑菌圈直徑也逐漸增大。當(dāng)Czk1脂肽類粗提物質(zhì)量濃度為40 mg·L-1時，牛津杯周圍未見明顯的抑菌圈，抑菌圈直徑僅有2.50 mm；而當(dāng)質(zhì)量濃度大于40 mg·L-1時，可以觀察到牛津杯周圍有明顯的抑菌圈存在，因此確定Czk1的最小抑菌質(zhì)量濃度為40 mg·L-1（圖1A）。Czk1脂肽類物質(zhì)質(zhì)量濃度為60、80和100 mg·L-1時抑菌圈直徑分別為4.20、6.30和7.30 mm。

圖1 枯草芽孢桿菌Czk1脂肽類粗提物對橡膠樹炭疽病菌菌絲生長的影響Fig.1 Lipopeptide produced by Bacillus subtilis Czk1 inhibit growth of C.gloeosporioides

挑取對照組菌絲和脂肽粗提物處理組抑菌圈周圍菌絲在光學(xué)顯微鏡下觀察，對照組的橡膠樹炭疽病菌菌絲形態(tài)正常，表面光滑（圖1B）；而脂肽粗提物處理組抑菌圈周圍炭疽病菌菌絲頂端呈念珠狀，畸形、膨大，出現(xiàn)了菌絲斷裂現(xiàn)象（圖1C）。這可能是由于脂肽類抗菌物質(zhì)造成Czk1細(xì)胞膜通透性的改變而導(dǎo)致了原生質(zhì)泄露，致使菌絲畸形膨大、斷裂。

2.2 Czk1脂肽類物質(zhì)對C.gloeosporioides孢子萌發(fā)的抑制

不同質(zhì)量濃度的Czk1脂肽類粗提物對橡膠樹炭疽病菌C.gloeosporioides孢子萌發(fā)的抑制結(jié)果（表1）表明，經(jīng)過Czk1脂肽粗提物處理后，橡膠樹炭疽病菌的分生孢子萌發(fā)率均顯著低于清水對照組CK1（P＜0.05），隨著質(zhì)量濃度的增大，對孢子萌發(fā)的抑制率也逐漸增大，而甲醇對照處理對孢子萌發(fā)無抑制作用。利用10、20、40和60 mg·L-1脂肽粗提物處理C.gloeosporioides孢子懸浮液12 h，孢子萌發(fā)率分別為30.47%、25.32%、22.23%和20.43%，抑制率分別為57.30%、64.51%、68.84%和71.37%，清水和甲醇對照處理12 hC.gloeosporioides萌發(fā)率達70.00%以上，二者無顯著差異。用100 mg·L-1的脂肽粗提物處理橡膠樹炭疽病菌孢子液12 h，能夠完全抑制孢子萌發(fā)，并且造成分生孢子頂端畸形膨大（圖2）。根據(jù)抑制率換算機率值和質(zhì)量濃度對數(shù)，求出毒力回歸方程：Y=0.481 5X+6.163 6，相關(guān)系數(shù)R2為0.986 6，求得Czk1脂肽類粗提物抑制橡膠樹炭疽病菌孢子萌發(fā)EC50值為3.80 mg·L-1。

表1 枯草芽孢桿菌Czk1脂肽粗提物對橡膠樹炭疽病菌孢子萌發(fā)的影響Table 1 Effect of Bacillus subtilis Czk1 lipopeptide on spore germination of Colletotrichum gloeosporioides

圖2 枯草芽孢桿菌Czk1脂肽粗提物對橡膠樹炭疽病菌分生孢子萌發(fā)的影響Fig.2 Lipopeptide produced by B.subtilis Czk1 influence spore germination of C.gloeosporioides

2.3 脂肽類抗菌物質(zhì)對橡膠樹炭疽病的抑制效果

由表2可看出，噴施Czk1脂肽粗提物對橡膠樹炭疽病有較好的抑制作用，降低了橡膠樹炭疽病的發(fā)病率。用1 000 mg·L-1脂肽粗提物處理后再接種橡膠樹炭疽病菌RC178對橡膠樹炭疽病菌的抑制作用最佳，發(fā)病率和病斑均較小，其平均發(fā)病率為46.70%，平均病斑大小為0.80 cm×0.71 cm，而接種RC178平均發(fā)病率高達96.60%，平均病斑大小為1.65 cm×1.40 cm，脂肽粗提物處理后炭疽病發(fā)病率降低了49.90%，抑制效果顯著（P＜0.05）。隨著脂肽粗提物質(zhì)量濃度降低，對橡膠樹炭疽病的抑制作用也隨之降低，當(dāng)脂肽粗提物質(zhì)量濃度為10 mg·L-1時幾乎無抑制效果，發(fā)病率高達90.00%，平均病斑大小為1.33 cm×1.08 cm，表明脂肽粗提物接種含量越高其發(fā)病率越低，抑制效果越好。甲醇對橡膠樹炭疽病菌的侵染無明顯抑制作用。

表2 枯草芽孢桿菌Czk1脂肽粗提物對橡膠樹炭疽病的抑制效果Table 2 Inhibitory effect of Bacillus subtilis Czk1 lipopeptide on anthracnose of rubber tree in laboratory

盆栽試驗結(jié)果如表3所示，先噴施1 000 mg·L-1脂肽粗提物再接種橡膠樹炭疽病菌RC178，平均發(fā)病率為51.80%，僅是在針刺位置形成小病斑，病斑大小為0.59 cm×0.49 cm，病斑未向外擴展，能有效抑制橡膠樹炭疽病的發(fā)生和蔓延（圖3），而接種RC178平均發(fā)病率高達95.20%，平均病斑大小為0.87 cm×0.75 cm，脂肽粗提物處理后炭疽病發(fā)病率降低了43.40%，抑制效果顯著（P＜0.01）。同時發(fā)現(xiàn)先噴施脂肽類抗菌物質(zhì)，當(dāng)溶劑蒸發(fā)后，在橡膠樹葉面形成光亮的膜狀物，并且脂肽物質(zhì)量濃度越高，膜狀物也越明顯。Surfactin能在植物根部形成生物膜保護植物的根部免受病原菌侵入[23]，因而推測這層膜狀物為Czk1脂肽所形成的保護膜。

表3 枯草芽孢桿菌Czk1脂肽粗提物對橡膠樹炭疽病室內(nèi)盆栽防效評價Table 3 Control effect of Bacillus subtilis Czk1 lipopeptide on rubber tree anthracnose in indoor pot culture

圖3 枯草芽孢桿菌Czk1脂肽粗提物對橡膠樹炭疽病的抑制效果Fig.3 Inhibitory effect of B.subtilis Czk1 lipopeptide on anthracnose of rubber tree

2.4 脂肽類抗菌物質(zhì)對橡膠樹白粉病的防治效果

從表4可以看出，噴施1 000 mg·L-1Czk1脂肽粗提物時對橡膠樹白粉病有較好的抑制作用，降低了橡膠樹白粉病的病情指數(shù)。所有處理中，先噴施三唑酮24 h后再接種橡膠樹白粉病菌的處理效果最為明顯，其防效為52.30%，病情指數(shù)比白粉病菌處理降低了37.40；其次為先噴1 000 mg·L-1Czk1脂肽粗提物24 h后噴孢子懸浮液，防效為45.60%，病情指數(shù)比白粉病菌處理降低了32.60；接種孢子懸浮液24 h后再噴施三唑酮、接種孢子懸浮液24 h后再噴施脂肽物的防效分別為35.90%和30.20%，病情指數(shù)分別降低了25.70和21.60。除噴施三唑酮24 h后噴孢子懸浮液與噴孢子懸浮液24 h后噴施脂肽物病情指數(shù)有顯著差異外（P＜0.05），其余3個處理間的病情指數(shù)無顯著差異，甲醇對橡膠樹白粉病無明顯抑制作用。先噴施三唑酮或者脂肽粗提物，可能在葉片上先占據(jù)了一定的空間位點，因此在一定程度上能有效抑制橡膠樹白粉病的擴展蔓延。

表4 枯草芽孢桿菌Czk1脂肽粗提物對橡膠樹白粉病的抑制效果Table 4 Inhibitory effect of Bacillus subtilis Czk1 lipopeptide on powdery mildew of rubber tree

3 討論

白粉病和炭疽病是我國橡膠植膠區(qū)發(fā)生最為嚴(yán)重和最為普遍的葉部病害，是制約橡膠產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的主要生物因素，目前雖然采用化學(xué)藥劑可對病害進行控制，但因橡膠樹樹體高大導(dǎo)致施藥器械缺乏、化學(xué)藥劑利用率低、易造成生態(tài)環(huán)境污染等諸多問題，生物防治是環(huán)保、經(jīng)濟、安全的防控措施之一。近期，本研究組從橡膠樹根部分離到枯草芽孢桿菌Czk1菌株，對橡膠樹炭疽病菌具有強抑菌活性，并且能夠誘導(dǎo)橡膠植株產(chǎn)生系統(tǒng)抗性[24]，由此表明，Czk1菌株具有作為橡膠樹炭疽病生防菌的良好潛力。

微生物代謝產(chǎn)物具有抑菌活性是生防資源利用的前提條件。芽孢桿菌以產(chǎn)生抑菌蛋白和脂肽類抗生素等抗菌物質(zhì)的拮抗作用為重要的防病機理，已成為生防領(lǐng)域研究的熱點[25-26]。陳莉等[27]研究發(fā)現(xiàn)，短短芽孢桿菌A57無細(xì)胞濾液對棉花立枯病菌、枯萎病菌和黃萎病菌的拮抗機理是通過產(chǎn)生拮抗物質(zhì)造成病菌菌絲體斷裂、扭曲和畸形，抑制分生孢子的萌發(fā)并造成孢子畸形。候美玲等[28]研究發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌YY1菌株所產(chǎn)生的蛋白粗提取液使玉米大斑病菌菌絲由絲狀畸變?yōu)榇闋?，且完全抑制分生孢子萌發(fā)并導(dǎo)致原生質(zhì)體裂解。張濤等[29]研究發(fā)現(xiàn)，4株拮抗細(xì)菌能夠破壞棉花黃萎病菌細(xì)胞形態(tài)、導(dǎo)致其細(xì)胞膜破裂并降低其毒蛋白含量，誘導(dǎo)棉株體內(nèi)防御酶活性，提高棉花的抗病能力。王寶等[30]報道，解淀粉芽孢桿菌BEB33產(chǎn)生的脂肽類粗提物可導(dǎo)致香蕉枯萎病菌菌絲細(xì)胞膨大、細(xì)胞膜穿孔、鐮刀菌酸產(chǎn)量降低70%，并對香蕉枯萎病有明顯防效。本研究中，從橡膠樹根分離的B.subtilisCzk1脂肽類粗提物可導(dǎo)致橡膠樹炭疽病菌菌絲頂端變?yōu)槟钪闋罨闻虼?、出現(xiàn)大量斷裂，并抑制炭疽病菌分生孢子萌發(fā)，造成孢子頂端畸形，與陳莉等[27]、候美玲等[28]、張濤等[29]、王寶等[30]的研究結(jié)果相似，上述研究結(jié)果表明，芽孢桿菌產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)影響了病原菌正常生長以發(fā)揮抗菌作用。

王雅[31]研究發(fā)現(xiàn)，B.subtilisBv10脂肽化合物伊枯草菌素iturin A2、iturin A4對芝麻白絹病菌EC50分別為36.78 和43.03 mg·mL-1。楊麗莉等[32]研究發(fā)現(xiàn)，B.subtilisfmbJ產(chǎn)生的脂肽對嗜水氣單孢菌的最低抑菌質(zhì)量濃度為20 μg·mL-1，郝捷等[21]報道的B.vallismortis脂肽粗提物抑制木霉菌的最低質(zhì)量濃度為20 mg·L-1。本研究中，Czk1脂肽類粗提物質(zhì)量濃度為10 mg·L-1時抑制橡膠樹炭疽病菌孢子萌發(fā)的EC50為3.8 mg·L-1，B.subtilisCzk1脂肽對橡膠樹炭疽病菌最低抑菌質(zhì)量濃度為40 mg·L-1，這一結(jié)果較楊麗莉等[32]、郝捷等[21]的最低抑菌質(zhì)量濃度高，可能是不同微生物產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)不同，供試靶標(biāo)病原菌不一致，以及與試驗所用枯草芽孢桿菌發(fā)酵提取物為混合物有關(guān)。

利用微生物代謝產(chǎn)物可有效防治植物病害。羅楚平等[33]研究發(fā)現(xiàn)，B.subtilisBs916脂肽質(zhì)量濃度為500 μg·mL-1時，對水稻紋枯病防效為70.8%。高振峰等[34]報道，貝萊斯芽孢桿菌ZSY-1脂肽質(zhì)量濃度200 μg·mL-1時可有效降低番茄早疫病發(fā)病率。李明通等[35]發(fā)現(xiàn)，側(cè)孢短芽孢桿菌fmb70脂肽質(zhì)量濃度為26和52 μg·mL-1時，生姜根腐病發(fā)病率分別下降了40.0%和56.7%，病情指數(shù)分別下降了41.0和58.9。陳梅春等[36]報道，芽孢桿菌FJAT-2349脂肽質(zhì)量濃度為50 mg·mL-1時，對枇杷炭疽病防效為72.7%。本研究中，B.subtilisCzk1脂肽粗提物質(zhì)量濃度1 000 mg·L-1時可使橡膠樹炭疽病發(fā)病率降低49.90%，白粉病病情指數(shù)降低32.60，對橡膠樹白粉病的防治效果為45.60%。Czk1脂肽物質(zhì)具有有效降低橡膠樹炭疽病和白粉病發(fā)病率、抑制病菌生長并延緩病情擴展的生防潛能。本研究僅是在室內(nèi)及盆栽試驗條件下評價Czk1對橡膠樹炭疽病和白粉病的抑制作用，其田間防效還有待驗證；菌株抑菌物質(zhì)的成分、參試用量及穩(wěn)定性等還需深入研究。