劉惠娟 歐陽里知 李芊 彭涵 劉紅華 葛君蕓 羅堅(jiān) 常小榮 劉邁蘭 汪厚蓮

〔摘要〕 目的 觀察隔藥餅灸對高脂血癥兔肝組織Wnt1、β-卷曲蛋白（β-catenin）、散亂蛋白-1（dishevelled-1，dvl-1） 、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c（sterol regulatory element-binding protein1c， SREBP1c）的mRNA表達(dá)量的影響，探討隔藥餅灸調(diào)脂的作用機(jī)制。方法 將48只新西蘭兔隨機(jī)分為正常組、模型組、隔藥餅灸組和阿托伐他汀組，每組12只。正常組采用普通飼料喂養(yǎng)，其余各組采用高脂飼養(yǎng)法喂養(yǎng)8周，待造模成功后，除正常組、模型組外，隔藥餅灸組選取兩組穴位交替施灸（Ⅰ組穴位為巨闕、天樞、豐隆;Ⅱ組穴位為心俞、肝俞、脾俞），阿托伐他汀組將阿托伐他汀鈣片碾成粉末后拌入第一口飼料喂食，每日1次，連續(xù)8周。測定各組兔血清總膽固醇（total cholesterol， TC）、甘油三酯（glycerin trilaurate， TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol， LDL-C）含量，RT-PCR法測定各組兔Wnt1、β-catenin、dvl-1、SREBP1c的mRNA表達(dá)量，油紅O染色觀察肝組織脂質(zhì)沉積情況。結(jié)果 （1）血脂結(jié)果：與正常組相比，模型組血清TC、TG、LDL-C上升（P<0.001）;與模型組相比，隔藥餅灸組和阿托伐他汀組TC、TG、LDL-C下降（P<0.01，P<0.001）;隔藥餅灸組與阿托伐他汀組相比，TC、TG、LDL-C差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。（2）RT-PCR結(jié)果：與正常組相比，模型組肝組織Wnt1、β-catenin、dvl-1、SREBP1c的mRNA表達(dá)量上升（P<0.001）;與模型組相比，隔藥餅灸組和阿托伐他汀組肝組織Wnt1、β-catenin、dvl-1、SREBP1c的mRNA表達(dá)量均下降（P<0.01，P<0.001）;隔藥餅灸組與阿托伐他汀組肝組織Wnt1、β-catenin、dvl-1、SREBP1c的mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。（3）脂質(zhì)沉積結(jié)果：與正常組相比，模型組、隔藥餅灸組、阿托伐他汀組脂質(zhì)沉積均有增加，模型組增加更明顯;與模型組相比，隔藥餅灸組、阿托伐他汀組脂質(zhì)沉積明顯減少;隔藥餅灸組與阿托伐他汀組無明顯差異。結(jié)論 隔藥餅灸可能通過抑制Wnt/β-catenin通路，下調(diào)高脂血癥兔SREBP1c含量，發(fā)揮調(diào)脂作用。

〔關(guān)鍵詞〕 隔藥餅灸;高脂血癥;血脂;Wnt1;β-卷曲蛋白;散亂蛋白-1;固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c

〔中圖分類號〕R245? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ? 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2023.06.022

〔Abstract〕 Objective To observe the effects of medicinal cake-separated moxibustion on Wnt1， β-catenin， dishevelled-1 （dvl-1）， and sterol regulatory element-binding protein1c （SREBP1c） in liver tissue of hyperlipidemia rabbits and to explore the mechanism of action of? medicinal cake-separated moxibustion on lipid regulating. Methods A total of 48 New Zealand rabbits were randomly divided into normal group， model group， medicinal cake-separated moxibustion group， and atorvastatin group， with 12 rabbits in each group. The normal group was fed with normal diet， while the other groups were fed with high-fat diet for 8 weeks. After successful modeling， except normal group and model group， two groups of acupoints in medicinal cake-separated moxibustion group were selected for alternating moxibustion [group Ⅰ： 'Juque' （RN14）， 'Tianshu' （ST25）， and 'Fenglong' （ST40）; group Ⅱ： ‘Xinshu' （BL15）， 'Ganshu' （BL18）， and 'Pishu' （BL20）]; in atorvastatin group， atorvastatin calcium tablets were ground into powder and mixed into the first feed， once a day for 8 consecutive weeks in both groups. The content of total cholesterol （TC）， glycerin trilaurate （TG）， and low density lipoprotein cholesterol （LDL-C） in serum of rabbits in each group were determined. The mRNA expression levels of Wnt1， β-catenin， dvl-1 and SREBP1c were determined by RT-PCR. Lipid deposition in liver tissue was observed by oil red "O" staining. Results （1） Lipid results： Compared with normal group， serum TC， TG， and LDL-C in model group increased （P<0.001）; compared with model group， TC， TG， and LDL-C in medicinal cake-separated moxibustion group and atorvastatin group decreased （P<0.01， P<0.001）; compared with atorvastatin group， there was no significant statistical difference in TC， TG， and LDL-C in medicinal cake-separated moxibustion group （P>0.05）. （2） RT-PCR results： Compared with normal group， mRNA expression levels of Wnt1， β-catenin， dvl-1， and SREBP1c in liver tissue in model group increased （P<0.001）; compared with model group， mRNA expression levels of Wnt1， β-catenin， dvl-1， and SREBP1c in liver tissue in both medicinal cake-separated moxibustion group and atorvastatin group decreased （P<0.01，P<0.001）. There was no significant statistical difference in mRNA expression levels of Wnt1， β-catenin， dvl-1， and SREBP1c in liver tissue between medicinal cake-separated moxibustion group and atorvastatin group （P>0.05）. （3） Lipid deposition results： Compared with normal group， lipid deposition in model group， medicinal cake-separated moxibustion group， and atorvastatin group increased， with more significant increase in model group; compared with model group， lipid deposition in medicinal cake-separated moxibustion group and atorvastatin group reduced significantly， and there was no significant difference between medicinal cake-separated moxibustion group and atorvastatin group. Conclusion By inhibting Wnt/β-catenin pathway， medicinal cake-separated moxibustion can down-regulate the content of SREBP1c and play the role of lipid regulation.

〔Keywords〕 medicinal cake-separated moxibustion; hyperlipidemia; blood lipid; Wnt1; β-catenin; dishevelled-1; sterol regulatory element-binding protein1c

高脂血癥是指體內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂，使體內(nèi)一種或多種脂質(zhì)水平高于正常，包括高總膽固醇（total cholesterol， TC）血癥、高甘油三酯（glycerin trilaurate， TG）血癥，伴或不伴高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol， HDL-C）降低和（或）低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol， LDL-C）升高[1-2]。高脂血癥是動脈粥樣硬化性心血管疾?。╝therosclerotic cardiovascular disease， ASCVD）重要的危險因素，有效控制高脂血癥對防控ASCVD具有重要意義[1]。

肝臟是膽固醇與甘油三酯合成的重要場所，體內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂，膽固醇及TG在肝臟中大量積累，肝臟出現(xiàn)脂質(zhì)沉積，進(jìn)一步加速高脂血癥進(jìn)程[2-3]。Wnt/β-卷曲蛋白（β-catenin）通過調(diào)控細(xì)胞增殖、分化和遺傳穩(wěn)定性，以及維持成體前體細(xì)胞處于多能性狀態(tài)，控制生命早期的幾個發(fā)育過程和成熟組織的動態(tài)平衡，包括肝膽發(fā)育、成熟、分區(qū)[4-7]?，F(xiàn)有研究表明，Wnt/β-catenin通路在肝臟發(fā)育、穩(wěn)態(tài)及代謝過程中起關(guān)鍵作用，并且與高脂血癥的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，參與膽固醇合成、肝臟脂肪生成與累積等高脂血癥形成的多個環(huán)節(jié)[5-6，8-10]，是參與高脂血癥進(jìn)程的重要機(jī)制之一[10-11]。課題組前期研究表明，隔藥餅灸具有良好的調(diào)脂作用[12-15]。故本實(shí)驗(yàn)在前期研究結(jié)果上，以高脂血癥兔為研究對象，以隔藥餅灸為干預(yù)方式，探討隔藥餅灸能否通過調(diào)控Wnt/β-catenin通路，從而調(diào)節(jié)高脂血癥的進(jìn)程。

1 材料與方法

1.1? 實(shí)驗(yàn)動物與分組

雄性3月齡新西蘭純種兔48只，體質(zhì)量1.5～2.5 kg，實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證編號：SCXK（湘）2020-0005，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供，每只分籠圈養(yǎng)于動物中心實(shí)驗(yàn)室（清潔級）。飼養(yǎng)溫度20～25 ℃，濕度50%～70%，自由進(jìn)食及飲水。 適應(yīng)性喂養(yǎng)1周以后，將48只新西蘭兔進(jìn)行分組，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組、模型組、隔藥餅灸組和阿托伐他汀組，每組12只。實(shí)驗(yàn)過程中對動物的各種處理均遵照《關(guān)于善待動物的指導(dǎo)性意見》的有關(guān)規(guī)定。

1.2? 主要儀器與試劑

1.2.1? 主要儀器? 高速低溫離心機(jī)（型號：D3024R，美國SCILOGBX公司）;低速離心機(jī)（型號：S1010E，美國SCILOGBX公司）;GloMax酶標(biāo)儀（型號：GM3030，美國Promega公司）;pH計（型號：PHS-3G，上海儀電科學(xué)儀器有限公司）;電子天平（型號：HLD-10002，杭州友恒稱重設(shè)備有限公司）;電熱恒溫槽（型號：DK-8D，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司）;基因擴(kuò)增儀（型號：ETC811，蘇州東勝興業(yè)科學(xué)儀器有限公司）;超微量分光光度計（型號：NanoVue Plus，美國NannoVue公司）;移液槍（型號：10～1000 μL，德國Eppendorf公司）;超凈工作臺（型號：SW-CJ-1FD，蘇州凈化設(shè)備廠）;全自動生化儀（型號：Chemray 120，深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司）。

1.2.2? 主要試劑與藥物? 聚氰基丙烯酸正丁酯（butyleyanoacrylate， BCA）試劑盒（貨號：QB214754，美國Thermo Scientific公司）;RIPA裂解液（貨號：R0010，北京索萊寶科技有限公司）;30%丙烯酰胺（貨號：BL513B，Biosharp公司）;十二烷基硫酸（貨號：S8010，北京索萊寶科技有限公司）;甘氨酸（貨號：G8200，北京索萊寶科技有限公司）;磷酸酶抑制劑（貨號：04906837001，瑞士Roche公司）;甲醇（貨號：XK13-011，國藥集團(tuán)）;乙醇（貨號：10009218，國藥集團(tuán)）;RNA提取試劑盒（貨號：RN03，艾德萊生物技術(shù)有限公司）;逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（貨號：FSQ-101，日本TOYOBO公司）;DNA聚合酶（貨號：AP231， TransStart）。

1.3? 模型制備

參照文獻(xiàn)[15]復(fù)制高脂血癥模型，高脂飼料具體配方為：1%膽固醇、10%蛋黃粉、5%豬油、84%基礎(chǔ)飼料。每兔總食量為120 g，單籠飼養(yǎng)。模型組、隔藥餅灸組、阿托伐他汀組為模型制備組。8周后，兔耳中動脈取血，當(dāng)模型制備組TC值高于正常組TC值3倍以上，且TG和LDL-C與正常組比較升高（P<0.05），則判斷模型成立[15]。

1.4? 治療方法

造模結(jié)束后，正常組新西蘭兔繼續(xù)予以正常飲食喂養(yǎng)，模型組、隔藥餅灸組、阿托伐他汀組繼續(xù)予以高脂飲食喂養(yǎng)。隔藥餅灸組給予隔藥餅灸干預(yù)，阿托伐他汀組予以阿托伐他汀鈣片干預(yù)，均每天1次，1周干預(yù)6天休息1天，連續(xù)干預(yù)8周。

1.4.1? 隔藥餅灸組? 模型制備完成后，固定新西蘭兔于兔臺，量取穴位后，使用寵物電推剪將穴位處毛發(fā)剔除，將中藥大黃、澤瀉、山楂、丹參、郁金各等分粉碎為沫，并以醋調(diào)勻，制成直徑為1 cm、厚度為3 mm的降脂藥餅，放于穴位處，將艾炷放在藥餅上施灸，燃完后易壯再灸，每穴4壯，每天1次，Ⅰ組、Ⅱ組穴位交替施灸，持續(xù)時間為8周。參考余曙光、徐斌主編的《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》（人民衛(wèi)生出版社，2016年第2版）及擬人比照法制定進(jìn)行新西蘭兔穴位定位，Ⅰ組穴位為巨闕、天樞、豐隆，Ⅱ組穴位為心俞、肝俞、脾俞。

1.4.2? 阿托伐他汀組? 模型制備完成后，將阿托伐他汀鈣片磨成細(xì)粉（1.96 mg·kg-1·d-1），拌入阿托伐他汀組第一口飼料，待其食完后再補(bǔ)充普通飼料，連續(xù)喂養(yǎng)8周。

1.4.3? 其他? 正常組、模型組、阿托伐他汀組在同等條件下捆綁固定，但不予隔藥餅灸治療。

1.5? 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)及檢測方法

1.5.1? 血脂檢測? 造模結(jié)束后行耳中動脈采血，治療結(jié)束后行腹主動脈采血，普通采血管靜置2 h后3000 r/min（半徑4 cm）離心15 min，按試劑盒說明書檢測兔血清TC、LDL-C、TG含量。使用Rayto-Chemray120全自動生化儀檢測兔血清血脂含量，并在檢測前進(jìn)行儀器調(diào)試、參數(shù)設(shè)置、定標(biāo)、質(zhì)控等操作。

1.5.2? RT-PCR法檢測肝組織Wnt1、β-catenin、散亂蛋白-1（dishevelled-1， dvl-1）、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c（sterol regulatory element-binding protein1c， SREBP1c）的mRNA表達(dá)量? 治療結(jié)束后，所有新西蘭兔均進(jìn)行麻醉，取肝組織約100 mg，加液氮研磨;用1 mL Trizol室溫裂解5 min，4 ℃、1 2000 r/min（半徑8 cm）離心10 min;取上清液，每1 mL裂解液加0.2 mL氯仿，震蕩15 s，室溫孵育3 min，于4 ℃、1 2000 r/min（半徑8 cm）離心10 min，樣品分3層，取最上層，記錄水相體積;加水相體積一半的乙醇，混勻轉(zhuǎn)移到吸附柱，1 2000 r/min（半徑8 cm）離心45 s;加500 μL去蛋白液1 2000 r/min（半徑8 cm）離心45 s，加500 μL漂洗液洗兩次，1 2000 r/min（半徑8 cm）離心45 s;用100 μL水洗脫RNA，微量酶標(biāo)儀測定RNA濃度，進(jìn)行RNA逆轉(zhuǎn)錄，RT-PCR上機(jī)檢測。β-actin為內(nèi)參基因，參考Genbank核苷酸序列資料，mRNA檢測的探針情況見表1。

1.5.3? 油紅O染色觀察肝組織脂質(zhì)沉積? （1）切片：4 ℃解凍樣本，用手術(shù)刀修剪目標(biāo)組織，切片用包埋劑包埋，將包埋臺固定在切片機(jī)上，先對組織表面進(jìn)行粗切，待組織面修切平整后開始切片，切片厚度5～8 μm，在切取的組織切片上放置一塊干凈的載玻片。切片做好標(biāo)記后，-20 ℃保存。（2）實(shí)驗(yàn)步驟：冰凍切片干燥30 min后，用4%中性甲醛固定液在4 ℃條件下固定10 min。蒸餾水沖洗，60%異丙醇浸泡，用油紅O染色10 min（加蓋避光）。60%異丙醇將間質(zhì)分化清晰，蒸餾水洗滌。蘇木精染色3～5 min，用蒸餾水沖洗3 min，用甘油明膠密封，最后使用顯微鏡觀察染色結(jié)果。

1.6? 統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料符合正態(tài)分布者，以“x±s”表示，多組間比較采用One-Way ANOVA法，進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊時兩兩比較選擇LSD法，方差不齊時選擇Games-Howell法。計量資料不滿足正態(tài)分布時，以“M（IQR）”表示，多組間選擇非參數(shù)秩和檢驗(yàn)—K個獨(dú)立樣本Kruskal Wallis檢驗(yàn)，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義時，行多重比較。均以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

RT-PCR圖片采用ImageJ軟件進(jìn)行灰度分析，數(shù)據(jù)結(jié)果與相應(yīng)的內(nèi)參進(jìn)行對比，通過均一化處理（每組數(shù)據(jù)都與相對應(yīng)對照組相比）進(jìn)行數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化;通路指標(biāo)統(tǒng)計學(xué)方法為多組One-way ANOVA法。均以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1? 一般情況

實(shí)驗(yàn)期間，正常組精神狀態(tài)良好，動作靈敏，毛色光澤，大小便狀況無明顯變化;模型組體質(zhì)量增長較快，動作遲緩，目光遲鈍，毛色黯淡。各治療組精神狀態(tài)尚可，反應(yīng)一般。造模期間，正常組因腹瀉死亡1只，隔藥餅灸組因抽血骨折感染死亡1只，阿托伐他汀組因腹瀉死亡2只;干預(yù)期間，模型組因腹瀉、體表脂肪瘤潰破各死亡1只，隔藥餅灸組捆縛固定引發(fā)感染死亡2只。

2.2? 模型評價

造模8周后，與正常組比較，模型組、隔藥餅灸組、阿托伐他汀組血清TC、TG、LDL-C含量均明顯升高（P<0.001，P<0.01），TC含量高于正常組3倍以上，TG、LDL-C水平升高（P<0.01），提示模型制備成功。造模各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。詳見表2。

2.3? 各組兔血脂結(jié)果比較

與正常組比較，模型組TC、TG、LDL-C含量均明顯上升（P<0.001）;隔藥餅灸組、阿托伐他汀組TC、LDL-C含量均上升（P<0.01，P<0.001），TG含量變化差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。與模型組相比，隔藥餅灸組、阿托伐他汀組TC、TG、LDL-C含量下降（P<0.05，P<0.01，P<0.001）。隔藥餅灸組與阿托伐他汀組血清TC、TG、LDL-C含量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。詳見表3。

2.4? 各組兔肝組織Wnt1、β-catenin、dvl-1、SREBP1c的mRNA表達(dá)量比較

與正常組比較，模型組肝組織Wnt1、β-catenin、dvl-1、SREBPlc的mRNA表達(dá)量上升（P<0.001）;與模型組比較，隔藥餅灸組、阿托伐他汀組上述指標(biāo)表達(dá)量明顯下降（P<0.01，P<0.001）;與隔藥餅灸組比較，阿托伐他汀組上述指標(biāo)表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。詳見表4、圖1。

2.5? 各組兔肝組織脂質(zhì)沉積

脂質(zhì)沉積結(jié)果如圖2所示，與正常組相比，模型組、隔藥餅灸組、阿托伐他汀組脂質(zhì)沉積均有增加，模型組增加更明顯;與模型組相比，隔藥餅灸組、阿托伐他汀組脂質(zhì)沉積明顯減少;隔藥餅灸組與阿托伐他汀組無明顯差異。

3 討論

中醫(yī)學(xué)并無“高脂血癥”的記載，將其歸屬于中醫(yī)“膏脂”“痰濁”“血濁”“脂濁”等范疇，并認(rèn)為膏脂源于水谷，屬于津液，存于血中，與血互為化生[16-17]。高脂血癥的中醫(yī)發(fā)病機(jī)制主要為“本虛標(biāo)實(shí)”，以氣、血、陰、陽虧虛為本，以痰濁、血瘀為標(biāo);其病理因素主要為痰、瘀、虛，致病臟腑主要涉及肝、脾、腎[18-20]。隔藥餅灸是一種將艾灸與藥物相結(jié)合的間接艾灸療法。艾灸具有溫通溫補(bǔ)的效應(yīng)，通可通經(jīng)活絡(luò)、活血化瘀、破血化痰，補(bǔ)可溫陽補(bǔ)虛、益氣固脫、升陽舉陷[21]。藥餅所選擇藥物為丹參、山楂、澤瀉、郁金、大黃，諸藥配伍可起到活血化瘀、化濁降脂之效。施灸穴位為心俞、巨闕、脾俞、肝俞、豐隆，俞募配穴與辨證選穴相結(jié)合，共奏活血祛瘀、健脾化痰之效。隔藥餅灸協(xié)同艾灸、藥物、穴位三者效應(yīng)，針對高脂血癥的病因病機(jī)，發(fā)揮補(bǔ)虛、化痰、祛瘀的作用，補(bǔ)虛瀉實(shí)、標(biāo)本兼治，從而發(fā)揮降血脂的效應(yīng)。

血脂實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)隔藥餅灸干預(yù)后，與模型組相比，隔藥餅灸組TC、TG、LDL-C均有明顯下降，說明隔藥餅灸能明顯改善高脂血癥兔的血脂水平;與阿托伐他汀組相比，隔藥餅灸組的血脂水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明隔藥餅灸的降脂效應(yīng)與阿托伐他汀相當(dāng)，但同正常組相比，血脂水平仍均有差異，其結(jié)果可能與實(shí)驗(yàn)造模后血脂水平上升程度大，隔藥餅灸干預(yù)時間有限，尚未達(dá)到降脂的最佳效應(yīng)有關(guān)。

Wnt信號通路參與脂質(zhì)生成的過程，并與高脂血癥有緊密聯(lián)系[22-23]。Wnt1蛋白是Wnt/β-catenin通路的重要活化蛋白，與卷曲蛋白及相關(guān)受體蛋白結(jié)合成復(fù)合體，通過激活dvl-1，抑制破壞復(fù)合物的磷酸化，減少其對β-catenin的磷酸化及降解，使β-catenin含量增加，與相關(guān)受體結(jié)合，從而激活Wnt/β-catenin信號通路[24-25]。β-catenin是經(jīng)典Wnt通路中的核心因子，介導(dǎo)Wnt信號從細(xì)胞膜至細(xì)胞質(zhì)進(jìn)核的傳遞[26]，dvl-1的主要作用是抑制β-catenin的降解，從而促進(jìn)Wnt信號通路的激活，它可能存在細(xì)胞核內(nèi)、細(xì)胞質(zhì)或者細(xì)胞膜上，是Wnt信號通路的一個重要環(huán)節(jié)[6，23]。

有研究表明，Wnt/β-catenin 通過特異性蛋白1（specificity protein 1， Sp1）-胰島素樣生長因子1（insulin-like growth factor 1， IGF1）通路，調(diào)節(jié)哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin， mTOR）通路的營養(yǎng)-敏感機(jī)械目標(biāo)，導(dǎo)致SREBP1c表達(dá)增加，從而使脂肪生成途徑增強(qiáng)[25-28]。SREBP1c是脂質(zhì)代謝的重要調(diào)控因子，對于維持脂代謝穩(wěn)態(tài)有重要意義，尤其在肝臟和脂肪組織中，它能調(diào)控脂肪酸、TG和TC的合成，參與LDL-C代謝相關(guān)基因表達(dá)，上調(diào)脂肪合成基因表達(dá)，可明顯增加游離脂肪酸、TC及LDL的合成[29-32]。據(jù)報道，轉(zhuǎn)人源nSREBP1c轉(zhuǎn)基因小鼠的肝重及TG含量均顯著升高[6，31]。

Wnt/β-catenin信號通路及相關(guān)指標(biāo)結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組Wnt1、β-catenin、dvl-1、SREBP1c 的mRNA表達(dá)明顯升高。與模型組相比，隔藥餅灸組、阿托伐他汀組Wnt1、β-catenin、dvl-1、SREBP1c 的mRNA表達(dá)明顯下降。經(jīng)高脂飲食造模后，高脂血癥模型肝組織Wnt1 mRNA表達(dá)升高，從而激活下游的dvl蛋白，減少β-catenin的磷酸化，使β-catenin表達(dá)增加，此時Wnt/β-catenin信號通路處于激活狀態(tài)，上調(diào)其下游SREBP1c蛋白的表達(dá)，使脂肪生成途徑增強(qiáng)，血脂水平上升[22-23，33-34]，故Wnt/β-catenin通路在脂肪細(xì)胞生成中具有重要作用[35-36]。治療后Wnt/β-catenin信號通路處于抑制狀態(tài)，SREBP1c蛋白表達(dá)降低，肝組織脂質(zhì)沉積減少，從而起到調(diào)脂作用[35，37-38]。阿托伐他汀鈣片可以通過抑制Wnt/β-catenin信號通路，從而改善大鼠非酒精性脂肪性肝病的肝臟損傷程度[38]。人參皂苷Rg1也可通過抑制Wnt/β-catenin信號通路，抑制高脂膳食誘導(dǎo)的小鼠非酒精性脂肪性肝病肝纖維化的進(jìn)程[28]。本研究顯示，隔藥餅灸組Wnt1、β-catenin、dvl-1、SREBP1c的mRNA表達(dá)量與阿托伐他汀組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明隔藥餅灸與阿托伐他汀鈣片對Wnt/β-catenin信號通路的抑制作用大致相同，這也許是二者發(fā)揮調(diào)脂作用的共同機(jī)制之一。本研究初步檢測了Wnt1、β-catenin、dvl-1、SREBP1c的mRNA表達(dá)量，將在接下來的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行蛋白含量檢測，為研究隔藥餅灸對Wnt/β-catenin信號通路的影響提供更強(qiáng)有力的證據(jù)。

綜上所述，隔藥餅灸與阿托伐他汀鈣片可能通過抑制Wnt/β-catenin信號通路，下調(diào)SREBP1c的mRNA表達(dá)，減少脂質(zhì)合成，發(fā)揮調(diào)脂作用。包括阿托伐他汀鈣片在內(nèi)的他汀類藥物是目前使用范圍最為廣泛的降脂藥物，其降脂效果明顯，但是他汀類降血脂藥物有橫紋肌溶解、血轉(zhuǎn)氨酶和肌酸激酶水平升高、胃腸道癥狀等毒副作用[39]。隔藥餅灸是結(jié)合艾灸效應(yīng)、中藥功能、穴位作用的一種安全有效、簡單易行的中醫(yī)外治法，其降脂效應(yīng)與阿托伐他汀鈣片相當(dāng)，操作簡便且毒副作用少，值得臨床應(yīng)用與推廣。

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