張國新，楊 帆，張志新，張婉琪，張曉曉，玉努斯·阿不都，馬春江，*

（ 1． 哈密市動物疫病預防控制中心，新疆 哈密 839000 ； 2． 伊州區(qū)動物疫病預防控制中心，新疆 哈密 839000 ）

非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）引起家豬、野豬感染的一種急性、熱性和高度致死性傳染病[1]，也是全球當前威脅養(yǎng)豬業(yè)最重要的動物疫病之一。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其規(guī)定為必須報告的一種傳染性動物疾病[2]，我國將其列為一類動物傳染病。截至目前，非洲豬瘟仍缺乏商業(yè)疫苗和有效藥物，嚴重威脅養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展[3]。ASFV 傳播途徑主要有接觸傳播、軟蜱叮咬或經食物傳播等[4]，家豬、野豬、疣豬等宿主動物對ASFV 易感，但癥狀只在家豬和野豬中顯現(xiàn)，病程較短，病死率接近90%～100%[5]。ASFV 為非洲豬瘟病毒科非洲豬瘟病毒屬的雙鏈DNA 病毒，是迄今為止蜱傳病毒中唯一已知的DNA 蟲媒病毒[6]。自1921 年非洲豬瘟疫情首次在肯尼亞發(fā)現(xiàn)以來，ASFV 已從非洲蔓延到歐洲、亞洲、北美洲、南美洲等60 多個國家和地區(qū)[5]，且仍呈流行擴大趨勢[7-8]。截至2020 年12 月底，中國已有31 個省（市、自治區(qū)）發(fā)生了173 起非洲豬瘟疫情，累計死亡和撲殺生豬約101.1萬頭，不僅給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大損失，還嚴重威脅我國豬肉生產和糧食安全[9]。

近年來，非洲豬瘟在新疆烏魯木齊、哈密等地陸續(xù)發(fā)生，嚴重威脅當?shù)厣i養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。為進一步了解哈密市非洲豬瘟疫情發(fā)生后，疫點、疫區(qū)、流行病學關聯(lián)區(qū)域、受威脅區(qū)及其他區(qū)域ASFV 的污染程度，本研究對哈密市非洲豬瘟疫情發(fā)生后的不同風險區(qū)域的風險因素進行病原學監(jiān)測和分析，為今后非洲豬瘟疫情防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品采集和區(qū)域監(jiān)測

2022 年2 月哈密市伊州區(qū)發(fā)生非洲豬瘟疫情期間在全市范圍內開展全覆蓋監(jiān)測，參照農業(yè)農村部印發(fā)《非洲豬瘟疫情應急實施方案（第五版）》的通知劃分各區(qū)域，監(jiān)測范圍覆蓋疫點、疫區(qū)、受威脅區(qū)、流行病學關聯(lián)區(qū)域及其他區(qū)域的生豬養(yǎng)殖場戶、屠宰場、商超肉鋪、運輸車輛等各風險區(qū)域，在哈密市31個生豬養(yǎng)殖場戶和2個生豬屠宰場共采集樣品3 398份。

1.2 儀器與試劑

實時熒光定量PCR儀購自美國ABI公司；組織研磨儀購自法國BertinTechnologies公司；核酸提取儀及核酸提取試劑盒購自西安天隆公司；非洲豬瘟熒光PCR試劑盒購自洛陽萊普生信息科技有限公司。

1.3 檢測方法

本試驗依據(jù)《非洲豬瘟診斷技術》（GB/T 18648—2020），采用實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）法進行檢測。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)采用Graph Pad Prism軟件進行統(tǒng)計學分析。P＜0.05 表示差異顯著，P＜0.01 表示差異極顯著，P＞0.05 表示差異不顯著。

2 結果與分析

2.1 不同風險區(qū)域非洲豬瘟病原學檢測結果（見表1）

表1 不同風險區(qū)域非洲豬瘟病原學檢測結果Tab.1 Results of aetiological detection of African swine fever in different risk areas

由表1 可知，在哈密市不同風險區(qū)域的3 398 份樣品中，ASFV核酸陽性樣品65份，陽性率為1.91%。其中疫點檢測樣品167份，50份為病毒核酸陽性，陽性率為29.94%；流行病學關聯(lián)區(qū)域檢測175份，10份為ASFV核酸陽性，陽性率為5.71%；疫區(qū)檢測樣品289份，5份為病毒核酸陽性，陽性率為1.73%；受威脅區(qū)檢測樣品415份均為陰性；其他區(qū)域2 352份樣品均為陰性。

2.2 不同風險區(qū)域非洲豬瘟病原學檢測陽性率（見表2）

表2 不同風險區(qū)域非洲豬瘟病原學檢測陽性率Tab.2 Positive rate of aetiological detection of African swine feverin different risk regions

由表2可知，疫點ASFV陽性率最高為29.94%，極顯著高于疫區(qū)、受威脅區(qū)、流行病學關聯(lián)區(qū)域以及其他區(qū)域的陽性率（P＜0.01）；疫區(qū)ASFV 陽性率為1.73%，極顯著高于受威脅區(qū)、其他區(qū)域的陽性率（P＜0.01），顯著低于流行病學關聯(lián)區(qū)域的陽性率（P＜0.05）；受威脅區(qū)ASFV 陽性率為0，極顯著低于流行病學關聯(lián)區(qū)域的陽性率（5.71%）（P＜0.01）；流行病學關聯(lián)區(qū)域ASFV 陽性率極顯著高于其他區(qū)域的陽性率（P＜0.01）。

從疫點檢測結果來看，ASFV感染豬的抗凝血、分泌物和組織中均檢出ASFV核酸陽性，陽性率分別為100.00%、100.00%和87.50%。從疫區(qū)和流行病學關聯(lián)區(qū)域的檢測結果來看，在飼料和環(huán)境樣品中檢出ASFV 核酸陽性。結果顯示，人員、車輛、工具、環(huán)境或飼料等風險因素可能是引發(fā)非洲豬瘟疫情的主要原因之一。

3 討論

ASFV結構復雜，基因組龐大，迄今為止全球共報告了24 種ASFV 基因型，其中20 種分離自家豬，但只有5 種豬適應基因型（Ⅰ、Ⅱ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ）的病毒在各地廣泛傳播[10]?；颌裥褪莻鞑プ顝V泛的ASFV，也是唯一在非洲邊界以外不同時期傳播和確立的毒株[11]。基因Ⅷ型、Ⅸ型和Ⅹ型病毒在非洲具有很長的歷史，而基因型Ⅸ型和Ⅹ型在東非占主導地位，在中非有一定的傳播，但迄今為止沒有進一步傳播[12]。基因Ⅱ型病毒最初在莫桑比克發(fā)現(xiàn)，隨后在歐洲和亞洲廣泛傳播，現(xiàn)在已傳播到全球[13]。目前，中國以基因Ⅱ型病毒流行為主，與東歐和俄羅斯流行的病毒密切相關[14]。2021 年，中國報告了基因Ⅱ型和基因I 型ASFV的出現(xiàn)[15]。有研究指出，缺乏早期監(jiān)測系統(tǒng)、蜱蟲媒介監(jiān)測、生豬異地調運環(huán)節(jié)檢測、屠宰環(huán)節(jié)檢測以及使用不安全的豬血飼料和泔水等因素可能是該病毒在中國31個省份的迅速傳播的主要原因[16]。盡管最初ASFV表現(xiàn)出了極高的遺傳穩(wěn)定性，然而2020年有研究報告了多個ASFV變異株的出現(xiàn)，變異病毒的產生有可能導致具有新特征的ASFV毒株出現(xiàn)，可能會在未來顯著影響ASFV的流行[17]。

與其他病毒相同，ASFV的傳播也需要傳染源、傳播途徑、易感動物等3 個基本條件。軟蜱和野豬是ASFV 的主要儲存宿主和傳播媒介，家豬、野豬、疣豬等被感染病毒的蜱叮咬而感染[18]，使該病毒在蜱-野豬中長期存在且難以根除，并在一定條件下感染家豬，引起疫情暴發(fā)。通常，發(fā)病豬和帶毒豬是ASFV 的主要傳染源，病豬組織和體液中含有高滴度的病毒，可經唾液、尿液、糞便和分泌物等排出體外。接觸傳播、經食傳播和軟蜱叮咬傳播是ASFV 的主要傳播途徑[19]，易感豬可通過與發(fā)病豬經口鼻直接接觸，或接觸病豬的排泄物、血液以及被污染的圈舍、器具、車輛等發(fā)生感染，也可因被攜帶ASFV 的軟蜱叮咬或食入污染的飼料、飲水、泔水等感染。此外，由于ASFV對外界環(huán)境具有極強的抵抗力，可在血液、糞便、未熟的豬肉制品、腌肉和泔水中長期存活，在凍肉中可存活數(shù)年甚至數(shù)十年[20]，導致該病毒在自然界的長期存在，嚴重威脅野豬和家豬等易感動物。因此，要控制病毒傳播，必須做到盡早檢測，發(fā)現(xiàn)病毒源頭和傳播風險因素，及時切斷非洲豬瘟的傳播鏈。

盡管安全有效的疫苗是應對當前非洲豬瘟疫情防控的關鍵手段，但是由于ASFV基因組龐大、結構復雜、基因型多樣，導致尚無有效的藥物或商品疫苗可用[21]。目前，該病的防控主要依賴嚴格的動物檢疫、“拔牙”、凈化、撲殺和無害化處理等程序。此外，由于ASFV高度穩(wěn)定，對外界環(huán)境抵抗力較強，傳播途徑和風險因素復雜多樣，給非洲豬瘟的有效防控帶來了巨大挑戰(zhàn)。因此，全面了解ASFV傳播風險因素對于有效控制該病傳播至關重要[22]。然而不同地區(qū)豬感染ASFV 的類型和風險因素尚不清楚，不同傳播途徑的傳播風險如何也缺乏研究資料。在整個ASFV傳播過程中，主要的潛在風險因素決定了ASFV 在野豬或家豬中的區(qū)域傳播[23]。

有研究發(fā)現(xiàn)，ASFV可通過不同途徑引入并傳播，如生豬和豬肉產品貿易，跨區(qū)、跨境調運，野豬及蜱蟲媒介，使用被污染的飼料及泔水喂豬，未經有效消毒的受污染運輸車輛或從業(yè)者等均是ASFV 的傳播途徑[16,24]。ASFV 能夠在飼料中保持傳染性，豬可通過食用受污染的飼料傳播。Niederwerder 等[25]研究發(fā)現(xiàn)，ASFV DNA 在幾乎所有的飼料中均有很高的穩(wěn)定性，其傳染性在豆粕中最穩(wěn)定，在4.44 ℃下至少能夠保持112 d，提示飼料中ASFV傳播的風險不容忽視。豬血作為一種重要的蛋白質來源，常作為豬和其他動物的添加飼料。有研究通過qPCR 檢測及ASFV的全基因組測序發(fā)現(xiàn)遼寧省、河北省部分公司生產的豬血飼料被ASFV污染，且ASFV基因組與我國豬攜帶的ASFV樣本的基因組相同[26]，提示豬血飼料可能是ASFV 傳播的一個重要來源。本研究對不同風險因素進行分析發(fā)現(xiàn)，除感染豬的血液及組織傳播風險最高外，攜帶病毒的人員和車輛的傳播風險較高，其次是受污染的飼料。

4 結論

本研究結果表明，通過對不同風險區(qū)風險因素的定時監(jiān)測與分析，可為預防和控制非洲豬瘟疫情流行提供切實有效的建議。生豬、飼料、豬肉產品以及運輸環(huán)節(jié)均可能是導致ASFV 傳播的重要因素。因此，有必要加強對傳染源和風險因素的定時監(jiān)測，包括對野豬和蜱蟲媒介的監(jiān)測，對養(yǎng)殖場、轉運車輛、易感動物的監(jiān)測，對水源、飼料等風險因素的監(jiān)測。應嚴禁疫點、疫區(qū)及流行病學關聯(lián)區(qū)域生豬及生豬產品的調運，加強其他區(qū)域的市場調運環(huán)節(jié)和屠宰環(huán)節(jié)的檢疫監(jiān)管力度，嚴禁養(yǎng)殖場（戶）使用有污染風險的飼料（豬源性蛋白飼料、泔水等）喂豬，以有效降低非洲豬瘟疫情的傳播風險。