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全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)乙醇濃度的變化對(duì)組織塊的影響及應(yīng)對(duì)措施分析

2023-08-31 02:20陳惠芹連愛瓊廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院杏林分院病理科福建廈門361022
中國(guó)醫(yī)療器械信息 2023年13期
關(guān)鍵詞:換液脫水機(jī)病理科

陳惠芹 連愛瓊 廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院杏林分院病理科 (福建 廈門 361022)

內(nèi)容提要: 目的:分析全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)乙醇濃度的變化對(duì)組織塊所產(chǎn)生的影響并根據(jù)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)分析總結(jié)應(yīng)對(duì)措施。方法:通過使用乙醇濃度計(jì)檢測(cè)櫻花全封閉脫水機(jī)每缸乙醇溶液使用前后的變化情況,分析乙醇濃度變化對(duì)組織處理效果的影響,并及時(shí)采取相應(yīng)措施。結(jié)果:全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)運(yùn)行1~4次,所有組織塊均取得了良好的脫水效果;第5次時(shí)偶爾會(huì)出現(xiàn)脫水不良,主要是因?yàn)樽訉m肌瘤組織在制片時(shí)存在一定困難,這是由于該組織容易化開所致;第6次時(shí)部分組織塊出現(xiàn)脫水不良的情況,這些組織塊大多是子宮內(nèi)膜以及少量闌尾組織等,石蠟組織在切完之后,切片中央部位發(fā)生內(nèi)陷,其他一些體積較小的組織塊都未發(fā)生明顯的異常情況。結(jié)論:因第1缸乙醇濃度低于臨界值,通過聯(lián)合監(jiān)測(cè)第2缸乙醇,并適當(dāng)調(diào)整脫水程序或更換新液,可以保證組織塊的脫水質(zhì)量。

全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)是各大醫(yī)院病理科以及科研機(jī)構(gòu)常用的處理病理組織的重要儀器,其具有較高的穩(wěn)定性,可以在較短時(shí)間內(nèi)處理大量標(biāo)本,安全性極高,這也使得其得到了相關(guān)科研人員的廣泛認(rèn)可[1]。病理切片在制作的過程中,每個(gè)環(huán)節(jié)都會(huì)影響到最終的病理切片的質(zhì)量,在切片制作過程中,對(duì)病理組織進(jìn)行脫水處理是關(guān)鍵步驟之一。這一步驟的最終處理質(zhì)量將會(huì)對(duì)后續(xù)的切片和染色質(zhì)量產(chǎn)生直接影響,進(jìn)而影響到免疫組化、原位雜交、二代測(cè)序等檢測(cè)方式的最終檢測(cè)結(jié)果,可導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差[2]。在醫(yī)院疾病診斷過程中,檢測(cè)結(jié)果會(huì)直接影響到醫(yī)生對(duì)患者病情判斷,檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確就很容易導(dǎo)致出現(xiàn)誤診漏診情況,可能延誤患者的最佳治療時(shí)機(jī),造成難以挽回的后果。病理組織脫水處理過程中,乙醇是最常用的脫水機(jī),而乙醇的濃度會(huì)直接影響到檢測(cè)結(jié)果,因此需要對(duì)乙醇濃度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),防止其出現(xiàn)過高或者過低的情況,從而對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成不利影響[3]。當(dāng)乙醇濃度出現(xiàn)異常時(shí),需要及時(shí)采取一定的應(yīng)對(duì)措施,保證組織塊在每一個(gè)換液周期內(nèi)的脫水質(zhì)量,將所用試劑的效能提升到最大,這樣有助于減少?gòu)U液排放,延長(zhǎng)全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)的使用期限。為了更加深入地研究全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)乙醇濃度的變化對(duì)組織塊造成的不同影響以及探討針對(duì)這些情況而采取的一些有效的應(yīng)對(duì)措施,本文對(duì)本院病理科2019年9月份標(biāo)本,選擇120份病理組織開展研究,研究結(jié)果具體如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

儀器型號(hào):全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)(櫻花全封閉脫水機(jī)Tissue-Tek?VIPtm 5Jr);乙醇濃度計(jì):40%~50%、50%~60%、60%~70%、70%~80%、80%~90%、90%~100%,這些乙醇濃度計(jì)的精度均為0.1%;1500mL量筒。

病理組織標(biāo)本:選擇本院病理科120例病理組織,時(shí)間為2019年9月1日~9月30日,其中闌尾組織30例,子宮內(nèi)膜組織40例,子宮肌瘤組織50例。

試劑:本次研究中所采用的試劑為10%中性緩沖甲醛溶液(本院藥劑室配制)、分析純無水乙醇、二甲苯(西隴科學(xué)股份有限公司)以及熔點(diǎn)為58~60?C的高效切片石蠟(上海華永石蠟有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 工作原理

櫻花全封閉脫水機(jī)共有16缸,各缸中放置的溶液及濃度分別如下:第1缸:10%的中性緩沖甲醛溶液;第2~7缸:乙醇溶液,并且需要按照不同濃度梯度依次放置,濃度從小到高逐漸升高;第8~10缸:二甲苯;第11~14缸:液體石蠟;第15~16缸:清洗液。除了15~16缸容量都是5.00L外,其他缸容量均在3.50~3.75L[4]。

1.2.2 脫水處理時(shí)間

第1缸和第2缸中的10%中性緩沖甲醛溶液的處理時(shí)間分別控制在90min和180min;其中第1缸中乙醇的處理時(shí)間控制在90min,第2缸則為70min,第3~6缸則是60min;三缸二甲苯的處理時(shí)間分別控制在40min、35min及30min;四缸液體石蠟的處理時(shí)間分別控制在30min、45min、45min、60min[5]。

1.2.3 試劑更換

①將第1缸甲醛溶液全部倒掉同時(shí)更換新的甲醛溶液;②將第1缸的乙醇溶液全部倒掉并清洗,晾干后加入無水乙醇并將其放置在第7缸的位置,其他乙醇缸前移一位;③將第8缸二甲苯全部倒掉,其他二甲苯缸前移一位,向第8缸中加入新的二甲苯溶液并將其放置在原先第10缸的位置;④將第11缸的石蠟全部倒掉,其他石蠟缸前移一位,向第11缸加入新的石蠟后將其放置在第14缸的位置[6]。

1.3 觀察指標(biāo)

乙醇試劑濃度的檢測(cè)的條件是環(huán)境溫度為20?C,檢測(cè)者需對(duì)檢測(cè)每缸乙醇濃度進(jìn)行檢測(cè)并將結(jié)果做好詳細(xì)記錄,在每次處理完一定數(shù)量的病理組織之后,檢測(cè)者需使用乙醇濃度計(jì)檢測(cè)每缸乙醇濃度并做好記錄。在研究結(jié)束后,對(duì)組織塊HE染色切片的質(zhì)量進(jìn)行分析研究并總結(jié)相關(guān)經(jīng)驗(yàn)[7]。

2.結(jié)果

2.1 組織塊脫水效果

通過本次研究發(fā)現(xiàn),全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)運(yùn)行1~4次后,機(jī)器中的組織塊均獲得良好的脫水效果;第5次時(shí)偶爾會(huì)出現(xiàn)脫水不良,主要是因?yàn)樽訉m肌瘤組織在制片時(shí)會(huì)出現(xiàn)化開的情況,這就導(dǎo)致制片過程存在一定的難度;第6次時(shí)部分組織塊出現(xiàn)脫水不良的情況,這些組織塊大多是子宮內(nèi)膜以及少量闌尾組織等,石蠟組織在切完之后,切片中央部位發(fā)生內(nèi)陷,其他一些體積較小的組織塊都未發(fā)生異常情況。

2.2 一個(gè)換液周期內(nèi)乙醇濃度的變化

在一個(gè)換液周期內(nèi),第1缸乙醇濃度降低速度最快,第2缸降低速度比第1缸稍慢,第3~6缸的變化量呈現(xiàn)出逐漸減小的趨勢(shì),見表1。

表1.換液前后乙醇濃度變化(±s,%)

表1.換液前后乙醇濃度變化(±s,%)

項(xiàng)目換液前換液后變化量第1缸79.6±1.3 54.6±3.4 35.2±2.3第2缸90.3±0.8 81.3±2.4 10.5±1.7第3缸94.6±0.6 92.4±1.3 3.5±0.9第4缸97.2±0.5 96.1±0.6 2.3±0.7第5缸99.2±0.2 98.4±0.4 1.6±0.5第6缸99.9±0.1 99.7±0.2 0.5±0.1

2.3 組織塊HE染色質(zhì)量

使用顯微鏡觀察HE切片,可以發(fā)現(xiàn)切片的細(xì)胞核著色清晰、細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)之間的分界對(duì)比非常明顯、染色質(zhì)量較好,切片整體效果較好,可以成為病理診斷的可靠依據(jù)。

3.討論

隨著現(xiàn)代病理技術(shù)的不斷創(chuàng)新發(fā)展,越來越多的新技術(shù)和新設(shè)備進(jìn)入到病理科并發(fā)揮著巨大作用,同時(shí)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢查對(duì)組織標(biāo)本的處理要求日益提高,傳統(tǒng)的手工組織脫水由于耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng),工作量大,脫水效果不理想等原因,已經(jīng)逐步被全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)取代。自動(dòng)病理組織脫水機(jī)是集固定、脫水、透明、浸蠟于一體的高技術(shù)檢測(cè)儀器,具有自動(dòng)化、安全高效、污染小、組織處理好的優(yōu)點(diǎn),因此其開始被廣泛應(yīng)用于病理科對(duì)組織塊的處理過程中,有效滿足了病理科工作量不斷增長(zhǎng)的需求[8]。在實(shí)際病理切片處理過程中,會(huì)出現(xiàn)許多因素影響到切片質(zhì)量,比如組織固定、組織脫水等,但是主要還是取決于對(duì)標(biāo)本組織前期處理得好壞,脫水又是前期處理過程中的一個(gè)重要環(huán)節(jié),因此對(duì)全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)乙醇濃度的變化對(duì)組織塊的影響進(jìn)行研究分析并制定有效的應(yīng)對(duì)措施具有重要現(xiàn)實(shí)意義。

實(shí)驗(yàn)室換液方法大多為階梯替換法以及分組替換法,這兩種換液方法可使得乙醇的濃度產(chǎn)生并保持合適的梯度,便于將組織內(nèi)的游離水置換出來,為后續(xù)透明、浸蠟操作創(chuàng)造有利條件,保證了組織細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)完整[9]。通過本次研究發(fā)現(xiàn),將多個(gè)周期乙醇濃度的變化量控制在一定范圍內(nèi),其組織脫水質(zhì)量就能得到保證。

本研究對(duì)多個(gè)周期內(nèi)缸中乙醇濃度進(jìn)行了檢測(cè),結(jié)果表明第1和第2缸中的乙醇濃度變化相對(duì)較大,通過分析第1和第2缸的乙醇濃度的檢測(cè)結(jié)果,就能確定全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)的換液時(shí)機(jī)。通過本研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)?shù)?缸中的乙醇濃度降至50%的時(shí)候,在最開始設(shè)定的脫水程序下,全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)會(huì)偶爾發(fā)生部分大塊組織脫水不良的情況,在研究時(shí)對(duì)相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行查詢確認(rèn)后發(fā)現(xiàn)研究結(jié)果與文獻(xiàn)內(nèi)容記載基本一致;因此如果要確保脫水質(zhì)量,就要時(shí)刻注意第1缸和第2缸中的乙醇濃度,當(dāng)前者濃度降至50%左右,后者降至80%左右時(shí),就需要及時(shí)更換新的乙醇;當(dāng)組織塊數(shù)量較少并且其中的小組織塊的數(shù)量占比較高時(shí),在經(jīng)過換液處理過后,觀察發(fā)現(xiàn),組織塊的質(zhì)地明顯較硬并且偏脆,制片過程中的難度相對(duì)較大,在其中出現(xiàn)了少數(shù)組織脫水質(zhì)量較差的情況。通過對(duì)相關(guān)研究資料的分析結(jié)合實(shí)際情況變現(xiàn)來看,導(dǎo)致出現(xiàn)此類情況的原因可能是濃度較高的乙醇溶液在脫水時(shí)的速度較快,使得體積較大的組織塊表面發(fā)生硬化的情況,乙醇此時(shí)就難以發(fā)揮滲透、置換的作用,就會(huì)使得該組織塊內(nèi)存在部分水分[10]。同時(shí)在本次研究過程中還出現(xiàn)了體積較大的組織塊脫水不徹底的情況,比如子宮內(nèi)膜組織、子宮肌瘤組織中存在的部分體積較大的組織塊。部分組織塊在切完片后還出現(xiàn)了組織蠟塊凹陷的現(xiàn)象,根據(jù)相關(guān)研究資料并結(jié)合實(shí)際效果進(jìn)行判斷,導(dǎo)致出現(xiàn)這種現(xiàn)象與組織塊的體積有關(guān),體積過大就會(huì)導(dǎo)致取材較厚,如果在脫水時(shí)使用的乙醇濃度過低,其內(nèi)部仍會(huì)留存一定的低濃度乙醇,其內(nèi)部水分不能完全被置換出來,同時(shí),由于二甲苯和水互不相容的特性,使得后續(xù)的組織透明、浸蠟操作無法有效進(jìn)行,當(dāng)組織蠟塊中的水分揮發(fā)之后,蠟塊內(nèi)部就會(huì)留有一些空隙,最終使得其中心部位組織發(fā)生凹陷[11]。當(dāng)按照上述操作要求及時(shí)更換乙醇溶液之后,組織塊則未出現(xiàn)脫水質(zhì)量差的相關(guān)情況,所以在更換試劑過程中,需要準(zhǔn)確把握前兩缸的乙醇濃度并嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行換液操作。對(duì)乙醇濃度進(jìn)行日常檢測(cè)并詳細(xì)記錄相關(guān)檢測(cè)結(jié)果,對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析總結(jié)就可以準(zhǔn)確把握每個(gè)換液周期內(nèi)每缸中的乙醇濃度的變化規(guī)律,并據(jù)此適時(shí)調(diào)整全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)的運(yùn)行程序并按照操作流程更換新的溶液,從而保證組織塊的脫水質(zhì)量[12]。每缸乙醇濃度需要定時(shí)測(cè)定,特別注意其中前兩缸乙醇濃度的變化,這樣檢測(cè)人員可明確并把握換液的時(shí)機(jī),使得全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)中的乙醇濃度始終保持在合理的態(tài)度范圍內(nèi)。

綜上所述,每個(gè)病理組織檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中的接受檢測(cè)的組織類型以及數(shù)量都是不同的,各個(gè)實(shí)驗(yàn)室使用的脫水機(jī)類型以及相關(guān)脫水程序的設(shè)定也是不同的,但是在條件允許的情況下,都可以通過適當(dāng)?shù)膿Q液方法和換液時(shí)機(jī)維持每個(gè)缸中乙醇濃度的正常范圍,最大程度上減少乙醇濃度變化對(duì)組織塊造成的影響,從而保證脫水質(zhì)量。

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