◎ 王 欣，紀(jì)衛(wèi)紅，郭文麗

（天津市食品安全檢測(cè)技術(shù)研究院，天津 300308）

甲基汞（Methyl Mercury）是一種有毒化學(xué)物質(zhì)，根據(jù)2017 年10 月27 日世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)公布的致癌物清單初步整理參考，其被列為2B類致癌物，可對(duì)人體健康造成嚴(yán)重危害。研究表明，除了職業(yè)暴露外，水產(chǎn)品是人們主要攝入甲基汞的來(lái)源[1-3]。在我國(guó)的飲食結(jié)構(gòu)中，魚(yú)類占有重要地位。然而，由于甲基汞的生物積累和生物放大效應(yīng)，魚(yú)類體內(nèi)的甲基汞含量比其他汞化合物更高。根據(jù)研究，魚(yú)類體內(nèi)甲基汞的含量占總汞含量的95%左右，是人體內(nèi)甲基汞的主要來(lái)源之一[4-5]。為了保障人們的身體健康，有效地檢測(cè)水產(chǎn)品中的甲基汞含量至關(guān)重要。本研究針對(duì)這一問(wèn)題開(kāi)發(fā)了一種操作簡(jiǎn)單且靈敏度高的甲基汞檢測(cè)方法，以魚(yú)肉和蝦肉為檢測(cè)基質(zhì)，采用控制變量和單點(diǎn)矯正的方法對(duì)提取工藝和檢測(cè)條件進(jìn)行了優(yōu)化。優(yōu)化后的方法操作簡(jiǎn)單，能夠準(zhǔn)確測(cè)定水產(chǎn)品中甲基汞的含量。本研究可為相關(guān)監(jiān)管部門(mén)提供科學(xué)依據(jù)，進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)水產(chǎn)品中甲基汞的監(jiān)測(cè)與控制，有助于保障人們的身體健康。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

草魚(yú)、鯉魚(yú)、鯽魚(yú)、鰱魚(yú)和蝦，購(gòu)自本地市場(chǎng)，采集樣品可食用部分，用組織粉碎機(jī)攪碎，-20 ℃冷凍；氯化甲基汞（分析純，Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司）；氯化鈉、鹽酸、苯（分析純，上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；實(shí)驗(yàn)用水均為GB/T 6682 2008 規(guī)定的一級(jí)水。

1.2 儀器與設(shè)備

天平（精確度：0.01 mg，沈陽(yáng)龍騰電子有限公司）；渦旋振蕩儀（2-16KL，上海納茲儀器有限公司）；離心機(jī)（2-16KL，上海巴玖實(shí)業(yè)有限公司）；氣相色譜儀（GC-7890A、安捷倫公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 甲基汞標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱量氯化甲基汞粉末于25 mL 容量瓶中，以苯定容，混勻后得到濃度為1 mg·mL-1的甲基汞標(biāo)準(zhǔn)苯溶液。用1 mL 移液管取1 mL 甲基汞標(biāo)準(zhǔn)苯溶液置于100 mL容量瓶中以苯定容，混勻后得10 μg·mL-1的甲基汞標(biāo)準(zhǔn)工作液，冷藏、待用。

1.3.2 樣品前處理

稱取1 g 左右的魚(yú)肉樣品置于研缽中，加1 g 氯化鈉粉末研磨，之后加入2 mL 一定濃度的鹽酸繼續(xù)研磨至糊狀。將研磨后的樣品轉(zhuǎn)移到25 mL 具塞試管中，并以鹽酸清洗研缽2 ～3 次，同樣轉(zhuǎn)移到試管中（試管內(nèi)液體總量不得超過(guò)10 mL），用鹽酸定容至10 mL；塞上試管塞，置于渦旋振蕩儀上，渦旋10 min，靜置浸泡1 h，過(guò)濾到10 mL 離心管中，加苯提取，振蕩2 min，4 000 r·min-1離心10 min，取上清液，過(guò)膜，待測(cè)。取未加標(biāo)的樣品按上述操作方法操作，得空白對(duì)照，待用。

1.3.3 色譜條件

色譜柱：Agilent DB-1701 柱(30 m 0.25 mm，0.25 μm)；檢測(cè)器：電子捕獲檢測(cè)器（ECD）；載氣（N2）流量：1 mL·min-1；進(jìn)樣量：1.0 μL，不分流進(jìn)樣。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件優(yōu)化

取甲基汞標(biāo)準(zhǔn)工作液，以苯稀釋得濃度為0.20 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1的甲基汞標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣分析，改變色譜條件（柱箱溫度、檢測(cè)器溫度及氣化室溫度），根據(jù)峰形及出峰時(shí)間進(jìn)行色譜條件優(yōu)化，優(yōu)化結(jié)果見(jiàn)表1。因此確定氣化室溫度為210 ℃，檢測(cè)器溫度為180 ℃，柱箱溫度為210 ℃。

2.2 苯用量?jī)?yōu)化

稱取空白魚(yú)肉樣品1 g左右于25 mL具塞試管中，向其中加入0.1 mL 濃度為10 μg·mL-1的甲基汞標(biāo)準(zhǔn)溶液，浸泡、冷藏放置一段時(shí)間按1.3.2（鹽酸濃度選用2 mol·L-1）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，僅改變苯用量，研究苯用量對(duì)水產(chǎn)品中甲基汞提取的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2?；厥章试诒接昧繛?.5 mL 時(shí)最高，且未發(fā)現(xiàn)明顯乳化現(xiàn)象。所以在其他條件恒定的條件下，苯用量為2.5 mL，回收率最高，為54.28%。

表2 苯用量的優(yōu)化結(jié)果表

2.3 鹽酸濃度優(yōu)化

稱取空白魚(yú)肉樣品1 g左右于25 mL具塞試管中，向其中加入0.1 mL 濃度為10 μg·mL-1的甲基汞標(biāo)準(zhǔn)溶液，浸泡、冷藏放置一段時(shí)間按1.3.2（苯萃取量為2 mL）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，僅改變鹽酸濃度，研究鹽酸濃度對(duì)水產(chǎn)品中甲基汞提取的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。第5 組、第6 組實(shí)驗(yàn)提取出的溶液為灰黑色及黑色，可能原因?yàn)?0 mol·L-1及以上濃度的濃鹽酸具有較強(qiáng)的氧化性，使魚(yú)樣中的其他物質(zhì)（如碳等）氧化、碳化，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；第1 組實(shí)驗(yàn)乳化現(xiàn)象明顯。鹽酸濃度的最優(yōu)條件為6 mol·L-1，回收率最高，為71%。

表3 鹽酸濃度的優(yōu)化結(jié)果表

2.4 檢出限

按國(guó)際理論與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)（International Union of Pure and Applied Chemistry，IUPAC）給出的檢出限的定義，檢出限換算公式為

式中：D為方法檢出限，μg·g-1；Q為實(shí)驗(yàn)進(jìn)樣量，1 g；S/N為儀器信噪比，300 db。經(jīng)計(jì)算，方法檢出限為0.01 μg·g-1。

2.5 回收率與精密度實(shí)驗(yàn)

按照1.3.2 實(shí)驗(yàn)過(guò)程（鹽酸濃度為6 mol·L-1，苯萃取量為2.5 mL）稱取空白樣品，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，加標(biāo)量分別為0.01 μg·g-1、0.02 μg·g-1、0.10 μg·g-1，每個(gè)濃度重復(fù)測(cè)定3 次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果表明，回收率為71.4%～81.5%，RSD為0.7%～1.8%，符合《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 274042008）附錄F 要求。

2.6 通用性分析

本次試驗(yàn)的通用性確定是通過(guò)對(duì)資料與實(shí)驗(yàn)原理的綜合分析得到。通過(guò)查閱文獻(xiàn)可知，各類水產(chǎn)品中甲基汞的來(lái)源均為汞的生物及非生物甲基化以及食物鏈的富集作用，并且在生物體內(nèi)的代謝基本一致；從實(shí)驗(yàn)的預(yù)處理過(guò)程中可以看出實(shí)驗(yàn)的處理過(guò)程并沒(méi)有物種差異的變化，從中分析可知此次研究所進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)具有通用性；取市售不同品種水產(chǎn)品（草魚(yú)、鯉魚(yú)、鯽魚(yú)、鰱魚(yú)、蝦）各5 份樣品，檢測(cè)甲基汞含量，可進(jìn)一步以實(shí)驗(yàn)角度證明實(shí)驗(yàn)的通用性，結(jié)果見(jiàn)表5。結(jié)果分析表明本研究建立的方法在各類水產(chǎn)品中均可實(shí)現(xiàn)甲基汞的快速有效檢測(cè)。

表5 不同品種甲基汞的檢測(cè)結(jié)果表 單位：mg·kg-1

3 結(jié)論

本研究結(jié)果顯示，甲基汞檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的最佳條件為氣化室溫度210 ℃、檢測(cè)器溫度180 ℃、柱箱溫度210 ℃、鹽酸濃度6 mol·L-1、苯萃取量2.5 mL。經(jīng)驗(yàn)證，該方法檢出限為0.01 μg·g-1，回收率可達(dá)到71.4%～81.5%，精密度良好，重現(xiàn)性良好；經(jīng)分析，本實(shí)驗(yàn)通用性良好，在各類水產(chǎn)品中均可實(shí)現(xiàn)甲基汞的快速、有效檢測(cè)，為水產(chǎn)品中甲基汞的檢測(cè)提供了操作簡(jiǎn)單、快捷、耗時(shí)短、可進(jìn)行大批量樣品測(cè)定的實(shí)驗(yàn)方法。