◎ 佟芳荻，張 煒，謝安娜，林惠鎮(zhèn)

（深圳市中鼎檢測技術(shù)有限公司，廣東 深圳 518000）

測量不確定度的定義是根據(jù)所得到的信息，表征賦予被測量量值分散性的非負(fù)參數(shù)[1]。測量結(jié)果的不確定度分為A類不確定度和B類不確定度。A類不確定度指的是用對觀測列統(tǒng)計分析的方法來獲得的不確定度；B類不確定度指的是用不同于對觀測列統(tǒng)計分析的方法來獲得的不確定度[2]。目前，安眠酮殘留量的檢測方法主要有液質(zhì)聯(lián)用法[3]和氣相色譜法[4]。本研究建立了LCMS/MS法測定魚肉中安眠酮殘留量測不確定度的評定方法，依據(jù)檢測法建立安眠酮殘留量的數(shù)學(xué)模型，通過對不確定度分量的量化結(jié)果計算出各個分量的標(biāo)準(zhǔn)不確定度，合成后得到測量結(jié)果相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度。分析不同分量對不確定度的影響，為完善該方法檢測魚肉中安眠酮殘留量的質(zhì)量控制體系提供理論基礎(chǔ)。

1 實驗步驟

1.1 試劑及設(shè)備

液質(zhì)聯(lián)用儀：配有ESI源；天平：最小分度量為0.1 mg；移液器：100～1000μL；容量瓶：10 mL，25 mL。純水：GB/T 6682規(guī)定的一級水；甲醇：色譜純；乙腈：色譜純；丙酮：色譜純；甲酸：色譜純；乙醚：色譜純。安眠酮（CAS號：75-44-6）；安眠酮-D7（CAS號：136567-41-8）。

1.2 測試步驟

稱取已均質(zhì)的魚肉5 g，置于50 mL離心管中，加入內(nèi)標(biāo)，加水3 mL，渦旋混勻，加15 mL正己烷，振蕩超聲提取，離心后取上清液至25 mL容量瓶中，殘渣用8 mL正己烷重復(fù)提取1次，合并上清液，用正己烷定容至刻度，備用。取10 mL備用液，經(jīng)硅膠固相萃取小柱凈化，洗脫液40 ℃氮吹至近干，用1 mL定容液定容，過0.22 μm濾膜，用液質(zhì)聯(lián)用儀檢測[5]。

2 建立數(shù)學(xué)模型

式中：W為樣品含量(μg/kg) ；C0為樣品溶液中安眠酮的濃度(ng/mL)；V為樣品溶液的體積 (mL)；m為樣品的質(zhì)量(g)；R為回收率；f為稀釋倍數(shù)；P為代表重復(fù)性的校正因子。

3 不確定度分量的主要來源及其分析

采用GB 31656.5—2021測定水產(chǎn)品中安眠酮殘留量的不確定度來源如圖1所示。

圖1 安眠酮殘留量的不確度來源圖

4 不確定度分量的量化

4.1 測量結(jié)果重復(fù)性帶來的不確定度

在一定時間內(nèi)對樣品溶液的濃度測定P=6 次，結(jié)果見表1。

表1 安眠酮殘留量的測定結(jié)果表（P=6）

4.2 定量曲線擬合帶入的不確定度評定

此次評定采用n=6個不同濃度水平的每一點重復(fù)測試m=3次（表2），標(biāo)準(zhǔn)曲線公式：y= 0.256715x-0.03991，式中：y為外標(biāo)峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值；x為標(biāo)液濃度ng/mL；線性相關(guān)系數(shù)r2= 0.99995；斜率k=0.256715；截距b=0.039910。

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合表

4.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制引入的不確定度

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過程如下。

用量程為200 μL的移液器移取100 μg/mL的安眠酮標(biāo)準(zhǔn)溶液100 μL于50 mL容量瓶中。用量程為200 μL的移液器移取10 μg/mL的安眠酮-D7標(biāo)準(zhǔn)溶液100 μL于25 mL容量瓶中。

加甲醇定容至刻度，此為濃度200 ng/mL的安眠酮標(biāo)準(zhǔn)工作液；濃度40 ng/mL的安眠酮-D7標(biāo)準(zhǔn)工作液。查詢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書得知，安眠酮純度99.9%，u(STD)= 5%(k=2)，其相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

用200 μL移液器吸取100 μL安眠酮標(biāo)準(zhǔn)溶液，允許誤差為±2.0%，假設(shè)為均勻分布，其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

定容所用50 mL容量瓶為檢定A級，允許誤差為±0.05 mL，假設(shè)為三角分布，其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

實驗室溫度在20±5 ℃內(nèi)波動，甲醇的膨脹系數(shù)為1.19×10-3mL/℃，假設(shè)為矩形分布，其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:

綜上可知，由安眠酮標(biāo)準(zhǔn)工作液配制引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

查詢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書得知，安眠酮-D7純度99.1%，u(STD)= 5% (k=2)，其相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

用200 μL移液器吸取100 μL安眠酮標(biāo)準(zhǔn)溶液，允許誤差為±2.0%，假設(shè)為均勻分布，其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

定容所用25 mL容量瓶為檢定A級，允許誤差為±0.03 mL，假設(shè)為三角分布，其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

實驗室溫度在20±5 ℃內(nèi)波動，甲醇的膨脹系數(shù)為1.19×10-3mL/℃，假設(shè)為矩形分布，其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

綜上可知，由安眠酮-D7工作液配制引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

4.4 樣品稱量引入的不確定度

用最小分度為0.001 g的天平稱取5 g樣品，天平的允許誤差為±0.005 g，假設(shè)為矩形分布，其相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

4.5 加標(biāo)回收率引入的不確定度

本次實驗進行6次獨立的回收率測試，求得不確定度，結(jié)果如表3。

表3 安眠酮殘留量的回收率表（n=6）

同時進行顯著性檢驗，以確定回收率校正因子是否在計算公式中采用。

用顯著性檢驗來確定平均回收率是否與1.0有顯著性差異。檢測統(tǒng)計數(shù)據(jù)t：

這個數(shù)值與n-1自由度，置信度為95%的雙邊臨界值tcrit比較：t＜tcrit=4.3，則回收率與1無顯著性差異。因此，校正因子（1/R）不需要在結(jié)果的公式計算中采用。

5 計算合成相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度及擴展不確定度

如表4所示為不確定度分量結(jié)果表。

表4 不確定度分量結(jié)果表

5.1 計算合成相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

5.2 計算擴展不確定度

由實驗數(shù)據(jù)計算得出樣品中安眠酮的含量為0.497 μg/kg，測量結(jié)果的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度為0.497×0.05239=0.02603 μg/kg，取包含因子k=2，以正態(tài)分布估計，則置信概率約為95%，計算的擴展不確定度為u=0.02603×2=0.0521 μg/kg。

6 結(jié)論

LC-MS/MS方法檢測魚肉中安眠酮殘留量的測量結(jié)果可表示為：(0.497±0.053)μg/kg，k=2。其中對不確定度貢獻較大的分量為樣品測量重復(fù)性產(chǎn)生的不確定度，標(biāo)準(zhǔn)工作液配制過程中產(chǎn)生的不確定度，標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合的不確定度。

愛糧節(jié)糧，建設(shè)節(jié)約型社會