謝全森　栗建軍　王曉寧　李歲艷　郭少華　孫彩娟　梁合文　周棟

摘 要：為研究飼料中添加不同濃度益生菌制劑后對(duì)南美白對(duì)蝦（Penaeus vannamei）生長(zhǎng)、體成分及營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)的影響，采用單因子變量法設(shè)計(jì)4個(gè)組，益生菌制劑（主要成分為枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌復(fù)合物、乳酸菌以2∶1∶1的比例的混合發(fā)酵液）占飼料的重量分別為100、200、300、0 g/t，對(duì)南美白對(duì)蝦（平均初始質(zhì)量均為5.50 g）進(jìn)行飼喂試驗(yàn)。結(jié)果顯示，8周后，添加益生菌的試驗(yàn)組對(duì)蝦體質(zhì)量、成活率及蝦體粗蛋白、粗灰分、粗脂肪含量均顯著高于對(duì)照組，并且在益生菌濃度梯度處于200 g/t飼料時(shí)，對(duì)蝦體各項(xiàng)指標(biāo)的增長(zhǎng)最為顯著。結(jié)果表明內(nèi)服益生菌對(duì)于南美白對(duì)蝦體成分營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)具有顯著影響。

關(guān)鍵詞：益生菌；南美白對(duì)蝦（Penaeus vannamei）；營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)

益生菌通過定殖于水產(chǎn)動(dòng)物宿主的腸道，加快宿主對(duì)其體內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，提高宿主機(jī)體免疫力和腸道菌群結(jié)構(gòu)平衡[1-3]。相關(guān)研究顯示，使用益生菌復(fù)合產(chǎn)品對(duì)南美白對(duì)蝦進(jìn)行飼喂，可提高酶活、非特異性免疫指標(biāo)提高以及生長(zhǎng)性能[4-6]。

南美白對(duì)蝦（Penaeus Vannamei）肉質(zhì)肥美、養(yǎng)殖成活率高、生長(zhǎng)周期較短，倍受人們喜愛。養(yǎng)殖過程使用抗生素類藥可用于防治病害，但對(duì)食物鏈帶來極大風(fēng)險(xiǎn)[7]。以益生菌產(chǎn)品對(duì)對(duì)蝦進(jìn)行飼喂的方法，不僅可以提高產(chǎn)量，而且對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖水體水質(zhì)具有一定的凈化作用，并且不會(huì)產(chǎn)生抗藥性。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)使用益生菌制品在魚類、蝦類等水產(chǎn)養(yǎng)殖方面均有研究，顯示其可促進(jìn)生長(zhǎng)和降低病害[8]。

基于此，本研究擬通過對(duì)南美白對(duì)蝦進(jìn)行不同濃度梯度的益生菌（益生菌為100、200、300、0 g/t飼料）飼喂后，對(duì)南美白對(duì)蝦的蝦體成分以及營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)進(jìn)行初步研究，以期為益生菌對(duì)生物的影響研究提供參考依據(jù)，也為對(duì)蝦養(yǎng)殖飼喂益生菌提高養(yǎng)殖效益的技術(shù)應(yīng)用前景提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)研究材料 試驗(yàn)所用南美白對(duì)蝦均來自邯鄲水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)。益生菌為商品制劑（生產(chǎn)廠家：云南陸良生物科技有限公司），通過使用枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌復(fù)合物、乳酸菌三種菌按一定配比制備而成的混合發(fā)酵液。

1.1.2 試驗(yàn)儀器 快速水分含量測(cè)定儀、索氏抽提器、凱氏定氮儀、瓷坩堝、電爐、干燥器、馬福爐、分析天平、滴定管、脫脂濾紙。

1.1.3 試驗(yàn)藥品 鹽酸、硼酸、氫氧化鈉、無(wú)水乙醇、石油醚、硫酸銅、硫酸鉀、濃硫酸。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用單因子變量法設(shè)置試驗(yàn)，對(duì)照組使用基礎(chǔ)飼料飼喂對(duì)蝦，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)飼料中添加益生菌對(duì)南美白對(duì)蝦進(jìn)行飼喂，對(duì)照組和試驗(yàn)組內(nèi)的對(duì)蝦均在生態(tài)缸中進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)過8周生長(zhǎng)試驗(yàn)之后，檢測(cè)對(duì)照組及三個(gè)濃度益生菌下試驗(yàn)組內(nèi)南美白對(duì)蝦的生長(zhǎng)狀況及營(yíng)養(yǎng)成分變化。

1.3 益生菌的選用及制備

選用的益生菌為枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌復(fù)合物、乳酸菌三類菌通過2∶1∶1的比例混合發(fā)酵制成的益生菌商品制劑。綜合益生菌商品制劑的功效可得，將枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌復(fù)合物添加入飼料內(nèi)，能夠增加水生動(dòng)物的腸道蛋白消化酶活性及酶的數(shù)量，在一定程度上可以起到降低對(duì)蝦對(duì)于飼料需求量的作用，可以節(jié)約資金；并且可以降低有害細(xì)菌的繁殖速度，從而減少疾病發(fā)生率。另一方面，芽孢桿菌具有較為穩(wěn)定的特性，加入飼料中可以對(duì)飼料作用，分解多余物質(zhì)，從而凈化養(yǎng)殖水體水質(zhì)[7，9]。將乳酸菌添加進(jìn)入飼料內(nèi)，可以提高生物體的消化作用，從而提高對(duì)于飼料的利用率[10]。另一方面，乳酸菌可改善生物體腸道內(nèi)環(huán)境，增加生物體系統(tǒng)免疫能力。

1.4 南美白對(duì)蝦的養(yǎng)殖及飼喂

1.4.1 分組及南美白對(duì)蝦放養(yǎng) 在實(shí)驗(yàn)室的生態(tài)養(yǎng)殖缸中進(jìn)行的。生態(tài)養(yǎng)殖缸所用水源為邯鄲本地的自來水，經(jīng)曝氣處理后使用。共20個(gè)生態(tài)缸。每周進(jìn)行一次養(yǎng)殖水體的更換，換水量為生態(tài)養(yǎng)殖缸水體的1/4。養(yǎng)殖過程中，通過加熱裝置使溫度保持在 25 ℃左右。試驗(yàn)選用健康強(qiáng)壯的南美白對(duì)蝦300尾，試驗(yàn)前進(jìn)行7 d的暫養(yǎng)。蝦的放養(yǎng)量為15尾/箱，按照單因素試驗(yàn)，設(shè)4組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15尾蝦，共計(jì)300尾。

1.4.2 南美白對(duì)蝦的飼喂 設(shè)3個(gè)試驗(yàn)組（分別標(biāo)號(hào)為A、B、C）和1個(gè)對(duì)照組（標(biāo)號(hào)為D），對(duì)3個(gè)試驗(yàn)組中的南美白對(duì)蝦投喂益生菌，益生菌添加濃度梯度分別為添加水平100、200、300 g/t飼料；日投喂量為在池蝦體總體重的3%范圍內(nèi)。每日進(jìn)行2次飼喂。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼料，其他條件均一致。試驗(yàn)持續(xù)8周，采用人工少量多次的方法進(jìn)行飼喂，使得缸內(nèi)對(duì)蝦能夠較大程度利用飼料。每2周進(jìn)行1次蝦體稱重，調(diào)整日投喂量。為保證對(duì)蝦體質(zhì)量無(wú)較大偏差，因此稱重前1 d禁食。

1.5 相關(guān)指標(biāo)測(cè)定方法

8周生長(zhǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)于試驗(yàn)所用的南美白對(duì)蝦進(jìn)行24 h的空腹處理后，每組從每個(gè)魚缸中隨機(jī)取樣3尾合并測(cè)定，計(jì)算平均數(shù)。稱重計(jì)數(shù)各蝦體的重量及長(zhǎng)度，蝦體內(nèi)基本營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定：水分含量使用快速水分含量測(cè)定儀測(cè)定，粗脂肪含量使用索氏抽提法測(cè)定[11]，粗蛋白含量按照凱式定氮法測(cè)定[11-12]，粗灰分使用干式灰化法[11-12]，蝦體的前處理采用鹽酸水解法。

測(cè)定粗脂肪計(jì)算公式：

式中：X為試樣所含粗脂肪的量，％；m1為脂肪和脂肪燒瓶的總單位質(zhì)量，g；m2為脂肪燒瓶的總單位質(zhì)量，g；m為樣品的質(zhì)量，g。

蛋白質(zhì)含量計(jì)算公式：

式中：X為試樣中蛋白質(zhì)的平均含量，g/100g；V1為樣品滴定耗費(fèi)鹽酸國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)水溶液體積，mL；V2為真空滴定耗費(fèi)鹽酸標(biāo)準(zhǔn)水溶液容積，mL；c為鹽酸的滴定溶劑含量大小，mol/L；m為樣品的質(zhì)量，g；F為將氮原子轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì)的過程系數(shù)。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法

計(jì)算試驗(yàn)前后南美白對(duì)蝦平均體質(zhì)量及試驗(yàn)?zāi)┐婊盥?，使用Excel進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析內(nèi)服益生菌前后南美白對(duì)蝦體內(nèi)水分含量、粗灰分、粗蛋白、粗脂肪含量等指標(biāo)的變化規(guī)律。用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)軟件使用單因子方差分析（One-way ANOVA）的方法，分析內(nèi)服益生菌前后南美白對(duì)蝦體內(nèi)水分含量、粗灰分、粗蛋白、粗脂肪含量等指標(biāo)的顯著性變化，并對(duì)不同試驗(yàn)組的組間差異進(jìn)行多重比較分析，且在P＜0.05時(shí)認(rèn)為差異顯著。

2 結(jié)果和分析

2.1 南美白對(duì)蝦體質(zhì)量及存活率分析

南美白對(duì)蝦的體質(zhì)量情況可以初步反映出對(duì)蝦的生長(zhǎng)發(fā)育、健康情況，在進(jìn)行試驗(yàn)前對(duì)照組及益生菌濃度梯度為100、200、300 g/t飼料的試驗(yàn)組內(nèi)南美白對(duì)蝦的初始體質(zhì)量各組之間并無(wú)顯著性差異（P＞0.05），見表1。對(duì)比分析各組間終末體質(zhì)量及增重量可得出，在益生菌濃度梯度為200 g/t飼料的試驗(yàn)組中南美白對(duì)蝦的體質(zhì)量增長(zhǎng)最快；對(duì)照組與濃度梯度為100 g/t益生菌飼料試驗(yàn)組無(wú)顯著性差異（P＞0.05），而與益生菌濃度梯度為200、300 g/t飼料的試驗(yàn)組有顯著性差異；且益生菌濃度梯度為200 g/t飼料的試驗(yàn)組終末體質(zhì)量和增重量均高于300 g/t飼料的試驗(yàn)組。因此在益生菌濃度大于200 g/t飼料時(shí)對(duì)于南美白對(duì)蝦體質(zhì)量增長(zhǎng)有影響，并且在益生菌濃度為200 g/t飼料時(shí)，效果最為顯著。分析比較各組間存活率的關(guān)系可以發(fā)現(xiàn)，飼喂益生菌對(duì)于蝦體存活率有一定提高，并且在益生菌濃度為200 g/t飼料時(shí)南美白對(duì)蝦的存活率最高。

2.2 飼喂益生菌對(duì)蝦體粗灰分含量影響分析

粗灰分主要是南美白對(duì)蝦蝦體飼料、蝦體組織、蝦體排泄物等樣品經(jīng)高溫焚燒過后剩余的氧化殘?jiān)黐13]。根據(jù)表2對(duì)比分析對(duì)照組及益生菌濃度梯度為100、200、300 g/t飼料的試驗(yàn)組可得，對(duì)照組與三個(gè)試驗(yàn)組間均存在顯著性差異，因此飼喂益生菌可以增加南美白對(duì)蝦蝦體粗灰分含量，并且益生菌濃度為200 g/t飼料的試驗(yàn)組顯著高于100 g/t試驗(yàn)組和對(duì)照組（P＜0.05），而在益生菌濃度為200 g/t飼料和300 g/t飼料時(shí)無(wú)顯著性差異（P＞0.05），因此，在益生菌濃度達(dá)到200 g/t飼料時(shí)，南美白對(duì)蝦體內(nèi)粗灰分含量達(dá)到最大值。

2.3 飼喂益生菌對(duì)蝦體粗脂肪含量影響分析

脂肪是一種重要營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)，可以很好地表示動(dòng)物體的營(yíng)養(yǎng)狀況[14]。根據(jù)表2對(duì)比分析可得，對(duì)照組與三個(gè)濃度梯度的試驗(yàn)組之間均存在顯著性差異（P＜0.05），因此可得出，飼喂益生菌對(duì)于南美白對(duì)蝦體的粗脂肪含量具有顯著效果，而益生菌濃度為100 g/t飼料和300 g/t飼料的試驗(yàn)組之間無(wú)顯著性差異（P＞0.05），因此，對(duì)于蝦體粗脂肪含量的增長(zhǎng)而言，飼喂益生菌濃度達(dá)到200 g/t飼料時(shí)具有更優(yōu)的效果。

2.4 飼喂益生菌對(duì)蝦體粗蛋白含量影響分析

據(jù)表2對(duì)比分析，益生菌濃度為200 g/t飼料時(shí)蝦體粗蛋白的增長(zhǎng)量最高，益生菌濃度為200 g/t飼料時(shí)蝦體粗蛋白的增長(zhǎng)量次之。因此，飼喂益生菌制劑能夠增加蝦體粗蛋白含量。

2.5 飼喂益生菌對(duì)蝦體水分含量影響分析

據(jù)表2對(duì)比分析可得，對(duì)照組及各益生菌濃度梯度的試驗(yàn)組之間蝦體水分含量均無(wú)顯著性差異（P＞0.05），因此對(duì)于南美白對(duì)蝦而言，飼喂益生菌對(duì)于南美白對(duì)蝦體內(nèi)水分含量變化不顯著。

3 討論

3.1 益生菌對(duì)對(duì)蝦體質(zhì)量增長(zhǎng)的影響

本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在飼喂益生菌后對(duì)于南美白對(duì)蝦的體質(zhì)量有顯著增長(zhǎng)趨勢(shì)，并且，當(dāng)益生菌濃度為200 g/t飼料時(shí)體質(zhì)量增長(zhǎng)狀況最為顯著，300 g/t飼料次之；對(duì)比以往[15-17]的研究可得，飼喂益生菌商品制劑對(duì)于對(duì)蝦體質(zhì)量增長(zhǎng)影響較顯著，與前人研究結(jié)果均吻合，無(wú)較大差異。因此，飼喂益生菌相關(guān)產(chǎn)品可以促進(jìn)南美白對(duì)蝦體質(zhì)量增長(zhǎng)。

3.2 益生菌對(duì)于蝦體營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)影響

本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在飼喂益生菌后對(duì)于南美白對(duì)蝦的營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)具有顯著提升，對(duì)于有機(jī)質(zhì)、蛋白質(zhì)等蝦體成分也有明顯增長(zhǎng)，除水分含量之外，粗蛋白、粗脂肪、粗灰分、體質(zhì)量、存活率等指標(biāo)含量均有顯著增長(zhǎng)。并且，對(duì)于蝦體的粗脂肪含量而言，益生菌濃度200 g/t飼料最好，300 g/t飼料次之；而對(duì)于蝦體粗蛋白含量而言，益生菌濃度200 g/t飼料最好，100 g/t飼料次之。根據(jù)本研究結(jié)果顯示，在益生菌濃度為200 g/t飼料時(shí)對(duì)于蝦體各營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)效果最顯著，基于本試驗(yàn)僅參考相關(guān)文獻(xiàn)做出設(shè)置，效果更顯著的益生菌濃度區(qū)間可能會(huì)更具體。本研究結(jié)果與以往研究結(jié)果基本一致，飼喂益生菌產(chǎn)品可以顯著促進(jìn)南美白對(duì)蝦體內(nèi)各營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)的變化[18-20]。

3.3 益生菌濃度及種類對(duì)蝦體的影響

本研究使用的益生菌菌種為枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌復(fù)合物、乳酸菌三類，可能使用不同的菌種對(duì)于南美白對(duì)蝦體營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)含量的增加會(huì)有不同。并且不同的益生菌濃度對(duì)于飼喂南美白對(duì)蝦之后產(chǎn)生的影響會(huì)有不同[12，20]。本研究通過參考文獻(xiàn)及相關(guān)研究，僅設(shè)置100、200、300 g/t飼料這三個(gè)益生菌濃度梯度，對(duì)于不同營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)的最適益生菌濃度區(qū)間還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

本研究表明，在飼喂益生菌濃度梯度為100、200、300 g/t飼料后對(duì)蝦體質(zhì)量具有顯著增長(zhǎng)，并且在益生菌濃度為200 g/t飼料時(shí)體質(zhì)量增長(zhǎng)最為顯著；蝦體粗蛋白含量也具有顯著的增長(zhǎng)，在益生菌濃度為200 g/t飼料時(shí)蝦體粗蛋白含量增長(zhǎng)最為顯著；同樣，蝦體粗灰分、粗脂肪含量也同樣在飼喂益生菌之后具有顯著的增長(zhǎng)，并且在益生菌濃度為200 g/t飼料時(shí)增長(zhǎng)最為顯著。因此，可得出結(jié)論，飼喂益生菌后南美白對(duì)蝦的營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)具有顯著性的增長(zhǎng)，有待商榷的是，不同益生菌濃度對(duì)于南美白對(duì)蝦營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)具有的影響不同，本研究表明最適于南美白對(duì)蝦體營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)增長(zhǎng)的濃度為200 g/t飼料。

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The effect of dietary probiotics on growth and nutritional indexes of body composition of Penaeus vannamei

XIE Quansen1， LI Jianjun2， WANG Xiaoning2， LI Suiyan2， GUO Shaohua2， SUN Caijuan2， LIANG Hewen2， ZHOU Dong2

（1.College of Life Science and Engineering，Handan University，Handan 056005，China;2.Handan Fisheries Technology Promotion Station，Handan 056005，China）

Abstract：In order to understand the effects of probiotics in feed with different concentrations on growth， body composition and nutritional indexes of the shrimp Penaeus vannamei，four groups were designed by single factor variable method. The probiotics （mainly composed of Bacillus subtilis，B. licheniformis complex and lactic acid bacteria in the proportion of 2：1：1） accounted for 100，200，300 g/t and 0 g/t of the feed. The feeding experiment was conducted on the shrimp （with the average initial mass of 5.50 g/ind.）. After 8 weeks of growth，the results showed that the body weight，survival rate，crude protein，crude ash and crude fat content of shrimp in the experimental group with probiotics were significantly higher than those in the control group，and the growth indexes of shrimp was the most significant when the concentration gradient of probiotics was 200 g/t in feed. The results indicated that probiotics had a significant effect on the body composition and nutritional indexes of Penaeus vannamei.

Key words：probiotics; Penaeus vannamei; nutritional indicator

（收稿日期：2023-05-17）

作者簡(jiǎn)介：謝全森（1983-），男，博士，副教授，研究方向：水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)生理生態(tài)學(xué)。E-mail：xiequansen@163.com。

通訊作者：栗建軍（1963-），男，本科，研究員，研究方向：水產(chǎn)養(yǎng)殖。E-mail：china.ljj@163.com。