張學(xué)軍，張若寒（通信作者），朱麗鳳，肖瑤

1 揚(yáng)州大學(xué)附屬醫(yī)院 （江蘇 揚(yáng)州 225009）；2 上海健康醫(yī)學(xué)院 （上海 200436）；3 歐陸生物科技（上海）有限公司 （上海 200436）

尿液生化檢測(cè)不僅是一項(xiàng)重要的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)項(xiàng)目，也是某些藥物臨床試驗(yàn)的重要評(píng)價(jià)指標(biāo)。其中，尿鈣檢測(cè)是評(píng)價(jià)人體中鈣代謝和排泄的重要指標(biāo)，可用于泌尿系統(tǒng)結(jié)石、骨質(zhì)疏松和家族遺傳性低尿鈣性高鈣血癥等多種疾病的診斷和隨訪，對(duì)疾病診斷、病情觀察、療效判定均具有重要意義[1-2]。但尿液成分復(fù)雜，其中的某些陰性酸根會(huì)與鈣形成復(fù)合物，從而影響尿鈣檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性[3]。因此，藥物臨床試驗(yàn)方案和尿鈣檢測(cè)試劑廠家均推薦使用酸化容器（容器內(nèi)添加一定濃度的鹽酸）收集尿液樣本，以確保尿鈣檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性[4]。實(shí)際操作中，由于鹽酸具有強(qiáng)烈的腐蝕性，酸化容器操作不當(dāng)易增加實(shí)驗(yàn)室人員和患者受傷害的風(fēng)險(xiǎn)；同時(shí)，多中心藥物臨床試驗(yàn)中尿液收集容器需由中心實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)一制備并運(yùn)輸至各個(gè)臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，但因酸化容器屬于特殊運(yùn)輸物品[5]，不僅需要特種車輛運(yùn)輸，且裝運(yùn)前需報(bào)有關(guān)部門批準(zhǔn)，運(yùn)輸過程中需按特定路線行駛，因此運(yùn)輸時(shí)間較長，常存在運(yùn)送延誤導(dǎo)致未能及時(shí)采集尿液樣本而影響研究進(jìn)展的情況。基于以上原因，目前臨床對(duì)尿液樣本是否必須酸化存在較大爭(zhēng)議?；诖耍狙芯客ㄟ^分析未酸化樣本和酸化樣本不同時(shí)間點(diǎn)尿鈣檢測(cè)結(jié)果的可比性，探討尿液樣本酸化是否是尿鈣檢測(cè)的先決條件，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

于2023 年2 月21 日9:00—10:00 收集41 名志愿者的隨機(jī)尿液樣本各10 ml（收集容器不添加任何酸或防腐劑），志愿者均為歐陸生物科技（上海）有限公司在職員工，均簽署知情同意書。

1.2 方法

首先，樣本收集后立即使用歐陸中心實(shí)驗(yàn)室羅氏 Cobas U411 尿液分析儀檢測(cè)pH 值（儀器檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確，有利于估算鹽酸的添加量）。然后，將每份樣本分裝為2 管，每管5 ml；其中一管不進(jìn)行酸化；另一管加入2～3 滴6.0 mol/L 的鹽酸進(jìn)行酸化，使樣本pH 值保持在1～3 之間（此時(shí)只需檢測(cè)酸化樣本的pH 值范圍，不需要精確結(jié)果，使用pH試紙檢測(cè)即可）。最后，將樣本進(jìn)行二次分裝，即每管樣本（5 ml）分裝為5 管，每管1 ml，其中一管分裝完成后立即檢測(cè)尿鈣，將檢測(cè)結(jié)果作為基線數(shù)據(jù)（Day0）；其余樣本保存于歐陸中心實(shí)驗(yàn)室（保存溫度5～30 ℃），分別于第1 天（Day1）、 第2 天（Day2）、第3 天（Day3）和第7 天（Day7）檢測(cè)尿鈣。

尿鈣檢測(cè)儀為歐陸中心實(shí)驗(yàn)室的羅氏Cobas 6000 c501 全自動(dòng)生化分析儀，檢測(cè)方法為甲酚酞氨羥絡(luò)合物終點(diǎn)比色法。

1.3 臨床評(píng)價(jià)

分析未酸化樣本和酸化樣本不同時(shí)間點(diǎn)尿鈣檢測(cè)結(jié)果的可比性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料均符合正態(tài)分布，以±s 表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用獨(dú)立t檢驗(yàn)。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

未酸化樣本各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的尿鈣檢測(cè)結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；酸化樣本各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的尿鈣檢測(cè)結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；未酸化樣本和酸化樣本各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的尿鈣檢測(cè)結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

表1 41 名志愿者尿液樣本未酸化和酸化后的尿鈣檢測(cè)結(jié)果比較（mmol/L，±s）

表1 41 名志愿者尿液樣本未酸化和酸化后的尿鈣檢測(cè)結(jié)果比較（mmol/L，±s）

樣本Day0Day1Day2Day3Day7FP未酸化3.92±2.91 4.00±2.95 3.97±2.92 3.93±2.91 3.64±2.19 0.120 0.980酸化 3.92±2.88 4.01±2.95 4.02±2.97 4.01±2.96 4.00±2.95 0.010 1.000 t0.0000.0200.0800.1200.630 P1.0000.9900.9400.9000.530

3 討論

鈣是人體重要的微量元素之一，不僅參與骨骼和牙齒的形成、肌肉的生理活動(dòng)，且具有強(qiáng)化神經(jīng)系統(tǒng)傳導(dǎo)功能的作用。人體中的鈣主要經(jīng)食物攝入，并通過尿液代謝。尿鈣是尿液礦物質(zhì)檢測(cè)中的常用指標(biāo)之一，主要用于檢測(cè)尿中鈣離子的含量，正常參考范圍為2.5～7.5 mmol/24 h。

實(shí)際工作中，由于尿液中含有無機(jī)鹽、尿酸、尿素、肌酐等多種成分，某些陰性酸根會(huì)與鈣形成復(fù)合物，導(dǎo)致尿中鈣離子含量降低，影響尿鈣檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性[5]。因此，藥物臨床試驗(yàn)方案和尿鈣檢測(cè)試劑廠家均建議常規(guī)尿鈣檢測(cè)前在尿液樣本中添加鹽酸對(duì)尿液進(jìn)行酸化，以促進(jìn)鈣離子的析出，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。但鹽酸是一種危險(xiǎn)化學(xué)品，操作不當(dāng)極易導(dǎo)致嚴(yán)重皮膚灼傷和眼損傷，少量吸入即可導(dǎo)致刺激性嗆咳、咳嗽等癥狀；同時(shí)，酸化后的容器屬于危險(xiǎn)貨物，其儲(chǔ)存、操作、運(yùn)輸均需符合國家關(guān)于危險(xiǎn)化學(xué)品的運(yùn)輸要求，常存在運(yùn)輸時(shí)間較長影響臨床使用和研究進(jìn)展的情況。此外，臨床對(duì)尿鈣檢測(cè)前是否必須進(jìn)行尿液樣本酸化存在爭(zhēng)議。Sodi 等[5]對(duì)133 例患者的尿液樣本進(jìn)行配對(duì)研究，比較酸化和未酸化樣本及不同濃度鹽酸酸化樣本中尿鈣水平的差異，結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)差異，說明酸化并不是尿鈣檢測(cè)前的必要條件。Darn 等[6]通過模擬鈣的沉淀過程，得出酸化或缺乏酸化不會(huì)導(dǎo)致尿鈣檢測(cè)結(jié)果顯著變化的結(jié)論。同時(shí)，該研究結(jié)果顯示，pH 值是鈣在尿液中沉淀的主要決定因素，如果尿液pH>6.5，則應(yīng)在尿鈣檢測(cè)前進(jìn)行酸化，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

本研究結(jié)果顯示，未酸化樣本和酸化樣本各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的尿鈣檢測(cè)結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這一結(jié)果與上述研究結(jié)果相似，進(jìn)一步說明，尿液樣本酸化并不是尿鈣檢測(cè)的先決條件。但本研究存在以下不足。（1）由于尿鈣水平隨每日食物攝取量的變化而變化，因此臨床常規(guī)采用24 h 防腐尿液作為尿鈣檢測(cè)樣本[2]；但本研究由于試驗(yàn)條件和樣本來源限制而采用隨機(jī)尿液作為檢測(cè)樣本，這可能導(dǎo)致研究結(jié)果存在一定的局限性，日后需擴(kuò)大樣本來源和樣本量進(jìn)行深入研究[7]。（2）本研究雖然未發(fā)現(xiàn)未酸化樣本和酸化樣本尿鈣檢測(cè)結(jié)果的顯著差異，但隨著保存時(shí)間的延長，未酸化樣本的尿鈣水平逐漸降低，因此本研究?jī)H可證明尿液樣本短期（不超過7 d）保存后檢測(cè)尿鈣前不需酸化，對(duì)于長期保存的尿液樣本仍然建議在尿鈣檢測(cè)前進(jìn)行酸化。（3）本研究中2 份樣本的Day7 檢測(cè)結(jié)果與Day0 數(shù)據(jù)差異較大，無法排除志愿者飲食習(xí)慣和健康狀況的影響，因此后續(xù)研究需嚴(yán)格控制樣本的納排標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)盡可能涵蓋各個(gè)尿鈣水平的人群。

綜上所述，尿液樣本未酸化不會(huì)影響尿鈣檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，因此酸化并不是尿鈣檢測(cè)的先決條件。