凌慶輝 陳路

【摘 要】目的：探索建立狗蟻草中槲皮素的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜（HPLC）法對藥材中槲皮素的含量進(jìn)行測定，色譜柱為ODS-C18柱，以乙腈-1%乙酸溶劑系統(tǒng)為流動相，進(jìn)行梯度洗脫，檢測波長為365 nm。結(jié)果：槲皮素在進(jìn)樣量0.125～1.25 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R2=0.9996），測得槲皮素含量為0.981～1.237 mg/g。結(jié)論：所建立的方法操作簡單，可控性好，可用于狗蟻草藥材的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 狗蟻草；槲皮素；HPLC

【中圖分類號】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2023）17-0045-03

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.17.zgmzmjyyzz202317011

Determination of Quercetin in a Zhuang Medicine： Alysicarpus Vagnalis

LING Qinghui1 CHEN Lu2*

1.Department of Pharmacology， Maternal and child health hospital of Guangxi Zhuang autonomous region， Nanning 530003， China; 2.Guangxi Zhuang Autonomous Regional Botanical Garden of Medicinal Plants， Nanning 530023， China

Abstract：Objective To establish a new method for determination of quercetin in Alysicarpus vagnalis （Linn. ） DC. Methods HPLC methods were used to the determination， the separation was performed on a ODS-C18 column with acetonitrile-1% glacial acetic acid as the mobile phase to gradient elute which was monitored at 365 nm. Results The linear ranges of quercetin was 0.125-1.25 μg（R2=0.9996） and the content of quercetin in A.vagnalis was determined as 0.981-1.237 mg/g. Conclusion The method for determination of quercetin with simple manipulate and good controllability that can use to control the quality of A.vagnalis.

Key words：Alysicarpus vagnalis （Linn.） DC; Quercetin; HPLC

狗蟻草為豆科鏈莢豆屬植物鏈莢豆Alysicarpus vagnalis （Linn.） DC的干燥根、葉及全草，性平、味甘、苦，具有活血通絡(luò)、駁骨消腫等功效，民間常用于治療慢性肝炎、跌打損傷等疾?。?-3］。文獻(xiàn)研究［4-5］發(fā)現(xiàn)，目前國內(nèi)外僅有2篇文獻(xiàn)對狗蟻草中的化學(xué)成分（水楊酸、胡蘿卜苷、β-谷甾醇）進(jìn)行含量測定。研究［6］表明槲皮素能夠調(diào)控PI3K/AKT/NF- B信號通路，改善非酒精性脂肪性肝炎大鼠的肝臟炎癥癥狀，對慢性肝炎具有治療作用，該作用與狗蟻草藥材主治慢性肝炎相一致。槲皮素的抗炎作用是其最核心最顯著的藥理作用之一［7］。本文以槲皮素為指標(biāo)性成分，探索其含量測定方法，為進(jìn)一步完善狗蟻草藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；JN-52000DTS型超聲波清洗儀（寧波江南儀器廠）；FA2204B型電子天平（上海精密儀器儀表有限公司）。

1.2 材料 甲醇、乙腈、冰醋酸均為色譜純，水為重蒸水（實驗室自制），其他試劑均為分析純。槲皮素對照品（批號：100081-201408，中國食品藥品檢定研究院）；狗蟻草3批樣品采自廣西南寧市郊，經(jīng)廣西藥用植物園藍(lán)鳴生教授鑒定為豆科植物狗蟻草Alysicarpus vagnalis （Linn. ） DC。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液 精密稱取槲皮素對照品適量，置于10 mL容量瓶中，加適量甲醇，超聲溶解，再加甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）過濾，制成每1 mL含槲皮素1.25 g的對照品溶液（1.25 g/mL）。

2.1.2 供試品溶液 取狗蟻草根粗粉約10 g，精密稱定，加10倍量70%乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液，減壓回收乙醇至無醇味，殘渣用適量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）過濾，即得供試品溶液。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Prevail ODS-C18 （5 μm， 250 mm×4.6 mm）；流動相：乙腈（A）-1%乙酸（B）；梯度洗脫：0～15 min，5%A；15～20 min，15%A；20～30 min，25%A；30～40 min，65%A；檢測波長：365 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃。在此條件下，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀進(jìn)行測定。色譜圖如圖1所示。

2.2.2 線性關(guān)系考察 依次精密吸取“2.1.1”項下對照品溶液0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.8 mL、1.0 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）過濾。分別吸取上述對照品溶液10 μL，按照“2.2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，記錄峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=364866X+109.58（R2=0.9996），如圖2所示，表明進(jìn)樣量在0.125～1.25 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.3 精密度試驗 精密吸取“2.1.1”項下的對照品溶液10 μL，按“2.2.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果槲皮素峰面積的RSD值為1.72%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.2.4 穩(wěn)定性試驗 取“2.1.2”項下的供試品溶液，分別于0、2 h、4 h、8 h、16 h、24 h按“2.2.1”項下色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積。結(jié)果槲皮素峰面積的RSD值為0.94%（n=6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.5 重復(fù)性試驗 取同一批南寧產(chǎn)狗蟻草藥材6份，按照“2.1.2”項下的方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件測定槲皮素含量。結(jié)果槲皮素含量的RSD值為1.12%（n=6），表明重復(fù)性良好。

2.2.6 加樣回收試驗 取已知槲皮素含量（1.0236 mg/g）的同一批南寧產(chǎn)狗蟻草藥材干品9份，每份約5 g，精密稱定，分別按100%的水平加入槲皮素對照品，按照“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定槲皮素的含量，計算回收率?；厥章剩?）=［實測值（mg）-樣品含量（mg）］/對照品加入量（mg）×100%。結(jié)果平均回收率為99.3%，RSD值為1.06%（n=9），表明回收率良好。詳見表1。

2.2.7 樣品測定 取3批狗蟻草藥材，每批3份。每份取約10 g，粉碎成粗粉（過40目篩），按照“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件分別進(jìn)樣，測定峰面積，計算樣品中槲皮素的含量。結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 含量測定指標(biāo)成分的選擇 根據(jù)中藥及其制劑分析中含量測定指標(biāo)成分的選擇原則，含量測定指標(biāo)成分應(yīng)確保藥材及其制劑的有效性、安全性和專屬性，研究首選有效成分作為含量測定指標(biāo)成分［8］。以本研究［6］為例，槲皮素具有抗炎活性，是狗蟻草藥材發(fā)揮治療作用的有效成分，同時也是該藥材主治功能的重要體現(xiàn)，故選擇槲皮素作為含量測定指標(biāo)成分。

3.2 流動相的選擇 在參考文獻(xiàn)［9-11］的基礎(chǔ)上，對比分析了①甲苯-乙酸乙酯-甲酸（10∶[KG-*3/5]8∶[KG-*3/5]1）、②乙腈-0.4%磷酸溶液（30∶[KG-*3/5]70）、③甲醇-0.4%磷酸溶液（47∶[KG-*3/5]53）3種溶劑系統(tǒng)，最終確定乙腈-1%乙酸為流動相，進(jìn)行梯度洗脫，槲皮素的分離度大于1.5，色譜圖峰形較理想。

狗蟻草是廣西壯族民間常用草藥，其乙醇提取物具有抗腫瘤、抑菌、抗氧化等多種藥理活性，具有較好的開發(fā)應(yīng)用前景［12-14］。目前，狗蟻草化學(xué)成分研究較為欠缺，分離鑒定的化合物不足20個，且藥理作用研究對象均為提取物，具體是何種成分在起作用尚未明確，還有待進(jìn)一步研究。

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