李文君, 王成章, 雷建都, 陳虹霞

(1.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院 林產(chǎn)化學(xué)工業(yè)研究所;江蘇省生物質(zhì)能源與材料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;國(guó)家林業(yè)和草原局林產(chǎn)化學(xué)工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;林木生物質(zhì)低碳高效利用國(guó)家工程研究中心;江蘇省林業(yè)資源高效加工利用協(xié)同創(chuàng)新中心,江蘇 南京 210042; 2.北京林業(yè)大學(xué) 材料科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,北京 100083; 3.南京林業(yè)大學(xué)江蘇省林業(yè)資源高效加工利用協(xié)同創(chuàng)新中心,江蘇 南京 210037)

羥基酪醇(HT),是油橄欖中的主要酚類化合物,可以從橄欖葉和橄欖油中提取,也可以由橄欖苦苷水解生成[1]。HT具有抗氧化、抗炎、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗血栓形成、改善內(nèi)皮功能障礙、脂質(zhì)和止血功能等[2]。此外,HT還具有抗腫瘤活性,可作為神經(jīng)保護(hù)劑[3]、心臟保護(hù)劑[4]和化學(xué)預(yù)防劑[5],用于潛在安全的藥物、天然食品添加劑和化妝品成分中。但是,HT因含有3個(gè)羥基,對(duì)空氣和光非常敏感,具有很強(qiáng)的不穩(wěn)定性和親水性,從而影響了其生物活性,使其易于快速釋放并在體內(nèi)降解,導(dǎo)致了其較低的生物利用度[6]。而脂質(zhì)體作為藥物遞送載體,具有靶向性、緩釋性和保護(hù)性等許多提高藥物有效性的優(yōu)良特性[7-11],如抗肌氨酸的抗體葉酸靶向脂質(zhì)體,表現(xiàn)出競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用[12];與游離藥物相比,藥物從脂質(zhì)體中釋放慢,作用時(shí)間延長(zhǎng)[13],且在心臟和腎臟中的蓄積顯著降低[14],并由于脂質(zhì)體的保護(hù),其穩(wěn)定性增加[15]。氫化卵磷脂和膽固醇具有良好的生物相容性和生物降解性,用作脂質(zhì)體壁材料,能夠通過提高藥物溶解度、生物利用度和體內(nèi)外穩(wěn)定性以及防止干擾來增強(qiáng)生物活性。柔性脂質(zhì)體由磷脂和能促使磷脂的雙分子層動(dòng)搖和變形的邊緣活化劑(如膽酸鈉)組成[16],邊緣活化劑的存在擾亂了脂質(zhì)體的磷脂雙分子層結(jié)構(gòu),增加了膜的流動(dòng)性和柔性,使得柔性脂質(zhì)體(甚至是較大尺寸)在角質(zhì)層細(xì)胞間擠壓以及體內(nèi)經(jīng)皮滲透壓梯度作用下發(fā)生變形而透過完整的皮膚[17-18]。近年來,已有報(bào)道柔性脂質(zhì)體作為載體促進(jìn)胰島素、疫苗、非類固醇類(布洛芬)等藥物的輸運(yùn)[19],其不僅能促進(jìn)藥物透過皮膚,也能運(yùn)載這些藥物直接到達(dá)皮膚下的深部軟組織[20]。因此,本研究通過薄膜分散法對(duì)HT脂質(zhì)體包封,研究影響脂質(zhì)體形成和乳化的參數(shù),并通過響應(yīng)面優(yōu)化處理,確定較佳工藝條件,同時(shí)考察其在不同溫度下貯藏不同時(shí)間的穩(wěn)定性,為HT柔性納米脂質(zhì)體的進(jìn)一步應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 原料、試劑與儀器

羥基酪醇(HT)標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥98%)、氫化卵磷脂、卵磷脂、膽固醇、膽酸鈉、葉酸(FA),N,N′-羰基二咪唑(CDI),上海阿拉丁生化科技股份有限公司;聚醚F127,上海麥克林生化科技有限公司;葉酸-聚醚(FA-F127),實(shí)驗(yàn)室自制[21];氯仿、甲酸、乙醇,均為分析純;甲醇、乙腈、水,均為HPLC級(jí)。

LC-20T高效液相色譜儀,日本島津公司;Nano ZS激光粒度分析儀,英國(guó)馬爾文公司;JY92-IIN超聲波細(xì)胞破碎儀,上海精其儀器有限公司;TGL-16M臺(tái)式高速冷凍離心機(jī),上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司;RE-3000A旋蒸蒸發(fā)器,上海亞榮生化儀器廠;NICOLET IS50傅里葉變換紅外光譜儀,美國(guó)賽默飛公司;TG209F1熱重分析儀,德國(guó)Netzsch公司;DSC8000差示掃描量熱儀,美國(guó)PerkinElmer公司;H-7650透射電子顯微鏡,日本日立公司。

1.2 羥基酪醇分析方法建立

1.2.1HPLC色譜條件 色譜柱為SUPELCOSILTMLC-18(25 cm× 21.2 mm, 5 μm),流動(dòng)相A為1%甲酸溶液,流動(dòng)相B為5%甲醇和1%甲酸的乙腈溶液,流速0.8 mL/min,進(jìn)樣量5 μL,梯度洗脫,以80%A開始洗脫,7 min內(nèi)流動(dòng)相B調(diào)整為30%并保持18 min,之后10 min內(nèi)增加流動(dòng)相B到95%,并保持5 min,最后調(diào)節(jié)流動(dòng)相B至20%并保持5 min,總運(yùn)行時(shí)間45 min。

1.2.2HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取HT標(biāo)準(zhǔn)品,分別配制成質(zhì)量濃度為2、 1、 0.5、 0.1、 0.05、 0.02、 0.01和0.005 g/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液,甲醇溶解定容、搖勻,經(jīng)0.45 μm的濾膜過濾后,依次進(jìn)樣5 μL檢測(cè)(進(jìn)樣3次),以峰面積積分值的平均值為縱坐標(biāo)(y),標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并擬合回歸方程。得到HT標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:y=5 366 853x-41 226,R2=0.993 0。

1.3 羥基酪醇柔性納米脂質(zhì)體制備及其制備工藝優(yōu)化

1.3.1單因素試驗(yàn) 采用薄膜分散法制備羥基酪醇柔性納米脂質(zhì)體,首先準(zhǔn)確稱取一定比例(質(zhì)量比)的氫化卵磷脂與膽固醇于100 mL圓底燒瓶中混合,加入適量氯仿充分溶解后,加入一定質(zhì)量的HT,利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在42 ℃下濃縮去除溶劑氯仿,待圓底燒瓶?jī)?nèi)部形成白色均勻的涂層即可;然后量取3 mL膽酸鈉水溶液及適量FA-F127在60 ℃下水化1 h(20 r/min);再將所得乳液通過超聲波破碎處理,形成均勻的脂質(zhì)體納米乳液。

實(shí)驗(yàn)中分別考察HT用量(0.6、 0.9、 1.2、 1.5和3.0 mg)、氫化卵磷脂與膽固醇質(zhì)量比(1∶1、 2∶1、 3∶1、 4∶1和5∶1)、FA-F127用量(0.1、 0.5、 1、 1.5和2 mg)、膽酸鈉用量(5、 10、 15、 20和25 mg)、超聲波功率(5%、 10%、 20%、 30%和40%,總功率為650 W)、超聲波作用時(shí)間(5、 10、 15、 20和25 min,均為超聲波作用2 s,中間間隔1 s)等單因素對(duì)HT柔性納米脂質(zhì)體包封率的影響。

1.3.2Plackett-Burman試驗(yàn) 根據(jù)單因素試驗(yàn)的結(jié)果,利用Design-Expert 13軟件中Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法,考察上述6個(gè)因素(n=12)對(duì)HT柔性納米脂質(zhì)體包封率的影響,并篩選出具有顯著影響的因素。

1.3.3響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn) 在Plackett-Burman試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,依據(jù)Design-Expert 13軟件中Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)方法,以HT納米脂質(zhì)體的包封率為響應(yīng)值,選擇合適的因素與水平設(shè)計(jì)響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn),確定較佳制備工藝。

1.4 羥基酪醇柔性納米脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)表征

1.4.1紅外光譜分析 利用傅里葉變換紅外光譜(FT-IR)儀分析,波數(shù)范圍為400～4 000 cm-1,每個(gè)樣品循環(huán)掃描16次,分辨率為4 cm-1。

1.4.2熱重分析 熱重分析在氮?dú)獗Ｗo(hù)下,從40 ℃起以10 K/min的升溫速率加熱到800 ℃。

1.4.3差示掃描量熱法 利用差示掃描量熱儀(DSC)分析,在-70 ℃下保持0.5 min,然后以20 ℃/min的升溫速率升溫至70 ℃,保持0.5 min,以20 ℃/min的降溫速率降溫至-70 ℃,保持3 min后,以20 ℃/min的升溫速率再次升溫至70 ℃。

1.4.4透射電鏡TEM分析 透射電子顯微鏡(TEM)用于測(cè)定HT柔性納米脂質(zhì)體的微觀結(jié)構(gòu)。首先取一滴樣品懸浮液滴在干燥的載玻片上,再把帶有支持膜的銅網(wǎng)放在懸浮液的液珠上漂浮以蘸取樣品,然后用濾紙吸干銅網(wǎng)上多余懸液,再將銅網(wǎng)在磷鎢酸染液滴珠上漂浮,時(shí)間約1.5 min,最后再用濾紙將染液吸干即可在80 kV的加速電壓下觀察脂質(zhì)體樣品的微觀形態(tài)。

1.5 羥基酪醇柔性納米脂質(zhì)體穩(wěn)定性研究

1.5.1包封率測(cè)定 脂質(zhì)體制劑的包封率是一個(gè)重要的定性評(píng)估特征,由添加的藥物總量與脂質(zhì)體中包埋的藥物量計(jì)算得出。取0.5 mL的脂質(zhì)體納米乳液加入1 mL 10% Triton X-100甲醇溶液(破乳劑),超聲波作用2 min(破乳,釋放脂質(zhì)體包埋的藥物),然后以12 000 r/min離心10 min。移取上清液用甲醇定容至5 mL,利用1.2節(jié)方法測(cè)定溶液中HT含量。包封率根據(jù)式(1)計(jì)算。

(1)

式中:YE—HT納米脂質(zhì)體乳液的包封率,%;co—溶液中HT的總質(zhì)量濃度,g/L;c—游離HT的質(zhì)量濃度, g/L;Vo—溶液中HT的總體積,mL;V—游離HT體積,mL。

1.5.2粒徑、多分散系數(shù)(PDI)及Zeta電位的測(cè)定 按優(yōu)化工藝條件制備HT納米脂質(zhì)體乳液,稀釋一定倍數(shù)后,在25 ℃、散射角90°條件下,采用激光粒度分析儀測(cè)定HT柔性納米脂質(zhì)體的粒徑、PDI及Zeta電位值。

1.5.3貯藏穩(wěn)定性 按優(yōu)化工藝條件制備HT納米脂質(zhì)體乳液,分別在4、 25和60 ℃下貯藏0、 7、 14、 21和28 d后按照1.5.1和1.5.2節(jié)方法測(cè)其包封率、粒徑、PDI及Zeta電位。

2 結(jié)果與討論

2.1 HT柔性納米脂質(zhì)體制備工藝優(yōu)化

2.1.1單因素試驗(yàn) 選擇HT用量、氫化卵磷脂與膽固醇質(zhì)量比、FA-F127用量、膽酸鈉用量、超聲波功率、超聲波作用時(shí)間為考察因素,探討各因素對(duì)HT柔性納米脂質(zhì)體包封率的影響,結(jié)果見圖1。

a.HT用量HT dosage;b.m(氫化卵磷脂)/m(膽固醇) m(hydrogenated lecithin)/m(cholesterol);c.FA-F127用量dosage of FA-F127;d.膽酸鈉用量dosage sodium cholate;e.超聲波功率ultrasonic power;f.超聲波作用時(shí)間ultrasonic time

由圖1可知,HT用量過高過低都會(huì)引起HT柔性納米脂質(zhì)體包封率的下降,當(dāng)HT用量為1.5 mg,即HT在脂質(zhì)體溶液中質(zhì)量濃度為0.5 g/L時(shí)包封率最佳。同樣,其他5個(gè)因素對(duì)HT柔性納米脂質(zhì)體包封率的影響也出現(xiàn)了先增加后下降的趨勢(shì),分別在m(氫化卵磷脂)∶m(膽固醇)=3∶1、FA-F127用量1 mg、膽酸鈉用量20 mg、超聲波功率30%、超聲波作用時(shí)間10 min達(dá)到最大包封率。由于Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)需要盡量涵蓋每個(gè)因素允許取值的最大空間,但又不需過大,因此,試驗(yàn)時(shí)可選取的HT用量范圍為1.2～3 mg,m(氫化卵磷脂)∶m(膽固醇)、FA-F127質(zhì)量、膽酸鈉質(zhì)量、超聲波功率、超聲波作用時(shí)間可選范圍分別為2∶1～4∶1、 0.5～1.5 mg、 15～25 mg、 20%～40%、 5～15 min。

2.1.2Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)關(guān)鍵因素的篩選 利用Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法,考察6個(gè)因素對(duì)HT柔性納米脂質(zhì)體包封率的影響,并篩選出對(duì)其影響較為顯著的因素,每個(gè)因素取最低和最高兩個(gè)水平,結(jié)果如表1所示。

表1 Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

根據(jù)表1試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果,進(jìn)行多元回歸方程擬合和方差分析,得一次回歸方程:Y=42.43+0.467 5X1+1.14X2+0.454 2X3+1.29X4+0.654 2X5+1.67X6,同時(shí)對(duì)該方程進(jìn)行方差分析和顯著性檢驗(yàn),結(jié)果如表2所示。

表2 Plackett-Burman試驗(yàn)方差分析

2.1.3Box-Behnken響應(yīng)面優(yōu)化 綜合單因素試驗(yàn)和Plackett-Burman試驗(yàn)結(jié)果,選取超聲波作用時(shí)間(X6)、膽酸鈉用量(X4)和m(氫化卵磷脂)∶m(膽固醇)(X2)這3個(gè)因素為響應(yīng)面模型的自變量,進(jìn)行三因素三水平的Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì),以HT柔性納米脂質(zhì)體的包封率為響應(yīng)值進(jìn)行響應(yīng)面分析。各因素水平和結(jié)果如表3所示。

表3 Box-Behnken設(shè)計(jì)與結(jié)果

表4 回歸方程方差分析

根據(jù)表4數(shù)據(jù)可知,一次項(xiàng)X2,二次項(xiàng)X22、X42、X62對(duì)HT柔性納米脂質(zhì)體包封率的影響極顯著(P<0.01),X6的影響顯著(P<0.05),根據(jù)F值大小可知影響包封率的因素排序?yàn)?m(氫化卵磷脂)∶m(膽固醇)(X2)>超聲波作用時(shí)間(X6)>膽酸鈉用量(X4)。根據(jù)模型回歸方程可知,HT柔性納米脂質(zhì)體制備工藝的優(yōu)化條件為m(氫化卵磷脂)∶m(膽固醇)為3.313 21∶1,膽酸鈉用量為20.578 2 mg,超聲波作用時(shí)間為10.944 7 min,此時(shí)HT柔性納米脂質(zhì)體包封率為46.907 6%。

為了驗(yàn)證上述響應(yīng)面結(jié)果的可靠性,進(jìn)行3次平行驗(yàn)證試驗(yàn),考慮到實(shí)際操作,對(duì)各優(yōu)化條件進(jìn)行簡(jiǎn)化處理,取m(氫化卵磷脂)∶m(膽固醇)為3.3∶1,膽酸鈉用量為20.6 mg,超聲波作用時(shí)間為11 min,仍然選擇超聲波功率、HT用量和FA-F127用量分別為10%、 1.5 mg和1 mg,制備的HT柔性納米脂質(zhì)體平均包封率為46.78%,與理論值的相對(duì)誤差為0.27%,說明該模型是可靠的。

2.2 HT柔性納米脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)表征

2.2.1紅外光譜分析 紅外光譜可通過官能團(tuán)的主要波數(shù)用于確定可能的活性物質(zhì)。烴鏈的最具特征的官能團(tuán)酯基團(tuán)特征峰位于1 740～1 700和1 250～1 050 cm-1之間,磷脂基團(tuán)特征峰處于1 250～1 040 cm-1之間[22]。986 cm-1應(yīng)該是氫化卵磷脂膽堿頭的(CH3)3-N+伸縮的特征。然而,在圖2(a)中,HT柔性納米脂質(zhì)體與空白脂質(zhì)體(不含HT),在3 300和3 280 cm-1,986和1 008 cm-1,以及HT柔性納米脂質(zhì)體與HT在1 420和1 440 cm-1,1 000和1 100 cm-1等處的不同吸收而顯示出一些變化,但是可能由于HT與脂質(zhì)基質(zhì)產(chǎn)生相容,導(dǎo)致載藥納米脂質(zhì)體光譜中觀察到載體的所有特征峰并且現(xiàn)有峰沒有主要移動(dòng)或產(chǎn)生出現(xiàn)了新的高峰[23]。

a.FT-IR;b.TG;c.DTG;d.DSC

2.2.2熱重分析 樣品的熱重分析如圖2(b)和圖2(c)所示?？瞻字|(zhì)體和HT柔性納米脂質(zhì)體均在第一階段表現(xiàn)出輕微的質(zhì)量損失,這一過程主要損失的是樣品中吸附的水分或者未完全除去的溶劑;在216.3 ℃后發(fā)生第二階段主要的質(zhì)量損失過程,這一過程發(fā)生了一系列復(fù)雜的C—C、C—O、酚羥基和苯環(huán)斷裂等反應(yīng),由DTG曲線可知,空白脂質(zhì)體和HT柔性納米脂質(zhì)體的失重率在226 ℃下分別達(dá)到-17.33 %/min和-15.028%/min,且2種脂質(zhì)體最終質(zhì)量損失分別為80.492%和77.78%,可能是負(fù)載了HT的脂質(zhì)體增強(qiáng)了其熱力學(xué)穩(wěn)定性,這一點(diǎn)也可以從DTG曲線中空白脂質(zhì)體有更高的失重率得到佐證。

2.2.3差示掃描量熱法 HT柔性納米脂質(zhì)體的DSC分析如圖2(d)所示。

由圖可知,第一次升溫曲線在48.52 ℃處出現(xiàn)一個(gè)明顯的吸熱峰峰值,只有一個(gè)峰值可能是因?yàn)榛衔锏木|(zhì)化及其結(jié)晶狀態(tài)轉(zhuǎn)化為分散無定形狀態(tài)[23],且其玻璃化轉(zhuǎn)變溫度Tg為-35.11 ℃。第二次升溫曲線的Tg在-36.54 ℃處,2次升溫曲線的Tg值相差不大,重復(fù)現(xiàn)象較好。此外,HT柔性納米脂質(zhì)體具有淺而寬的吸熱峰,寬的熔區(qū)和較低的熔點(diǎn)表明它們具有有序性較低的晶體結(jié)構(gòu),有利于載藥和包埋效率[23]。

2.2.4微觀結(jié)構(gòu)分析 利用透射電鏡觀察HT柔性納米脂質(zhì)體的微觀結(jié)構(gòu),結(jié)果如圖3所示。由圖可知,整體上,HT柔性納米脂質(zhì)體的粒子具有不同形狀,多呈圓形或者橢圓形,分布基本均勻,分散性較好。圖3(c)中可明顯看到HT納米脂質(zhì)體內(nèi)部具有層狀囊泡即同心圓的指紋狀結(jié)構(gòu),其原因可能是膽酸鈉的作用,使得脂質(zhì)體雙分子的變形性提高。

a.2 μm;b.500 nm;c.100 nm

基于已有研究[24]及本研究工藝優(yōu)化及性能分析結(jié)果可知:HT柔性納米脂質(zhì)體將是一種有前途的、更高效的、更安全的遞送系統(tǒng),可用于保護(hù)生物活性羥基的損失,從而實(shí)現(xiàn)人體內(nèi)的靶向遞送,其可以在改善羥基酪醇的低化學(xué)穩(wěn)定性、吸收性和生物利用度的前提下,更大程度地利用自身優(yōu)勢(shì),透皮給藥到所需的特定部位,避免肝臟首過效應(yīng),減少毒性。

2.3 貯藏穩(wěn)定性結(jié)果分析

為了評(píng)價(jià)HT柔性納米脂質(zhì)體的貯藏穩(wěn)定性,測(cè)定HT柔性納米脂質(zhì)體在不同溫度和不同時(shí)間的包封率、粒徑、PDI和Zeta電位,結(jié)果如圖4所示。

a.包封率encapsulation efficiency; b.粒徑grain size; c.PDI; d.Zeta電位Zeta potential圖4 HT柔性納米脂質(zhì)體的貯藏穩(wěn)定性

由圖4(a)可知,隨著貯藏時(shí)間的增加,包封率整體呈現(xiàn)下降趨勢(shì),且溫度越高,HT柔性納米脂質(zhì)體包封率下降越快;在4 ℃條件下,貯藏28 d時(shí)包封率由46.78%下降到37.56%,下降趨勢(shì)相對(duì)于25和60 ℃較為緩慢,原因可能是溫度的升高,加速了脂質(zhì)體膜材的分子熱運(yùn)動(dòng),使得脂質(zhì)雙分子層的?；鶄?cè)鏈從有序排列到無序,導(dǎo)致脂膜由凝膠狀態(tài)變成液晶態(tài),膜的橫切面增加,雙分子層的厚度減小,膜流動(dòng)性增加,導(dǎo)致包埋的HT發(fā)生泄露[25]。

在圖4(b)可知,隨著貯藏時(shí)間的增加,粒徑整體上呈現(xiàn)上升趨勢(shì),但溫度越高粒徑增加越快速;4 ℃下,貯藏28 d后,粒徑從104.7 nm增加到152.7 nm,而60 ℃下的粒徑則增加到了1 084.5 nm。原因可能是貯藏時(shí)脂質(zhì)體體系受溫度影響,導(dǎo)致磷脂膜之間發(fā)生了融合、聚集等現(xiàn)象,使其在用激光粒度儀檢測(cè)時(shí)檢測(cè)的是融合后的聚集體,顯示粒徑變大[26]。

PDI是聚合物分散性指數(shù),用于描述聚合物相對(duì)分子質(zhì)量分布,值越大,相對(duì)分子質(zhì)量分布越寬,值越小,相對(duì)分子質(zhì)量分布越均勻。由圖4(c)可知,隨著貯藏時(shí)間的增加,PDI整體上呈現(xiàn)增加趨勢(shì),溫度越高,增加越明顯,值越大,說明體系中脂質(zhì)體分布越不均勻,原因可能也是貯藏時(shí)脂質(zhì)體體系受溫度影響,導(dǎo)致磷脂膜之間發(fā)生了融合、聚集等現(xiàn)象[26]。

Zeta電位是表征膠體分散系穩(wěn)定性的重要指標(biāo),能夠度量顆粒之間相互排斥或吸引的力的強(qiáng)度,粒子越小,Zeta電位的絕對(duì)值(正或負(fù))越高,體系越穩(wěn)定,即溶解或分散可以抵抗聚集的能力越強(qiáng)。一般情況,當(dāng)Zeta電位的絕對(duì)值大于40 mV時(shí),說明體系具有較好的穩(wěn)定性,由圖4(d)可知,隨著貯藏時(shí)間的增加,Zeta電位絕對(duì)值整體上呈現(xiàn)下降趨勢(shì),溫度越高,其絕對(duì)值越低,說明較高的溫度極大破壞了體系的穩(wěn)定性,原因可能也是貯藏時(shí)脂質(zhì)體體系受溫度影響,導(dǎo)致磷脂膜流動(dòng)性增強(qiáng),由凝膠狀態(tài)變成液晶態(tài),粒子表面電位發(fā)生改變,導(dǎo)致Zeta電位絕對(duì)值減小。

根據(jù)脂質(zhì)體在4、 25和60 ℃貯藏28 d后的貯藏穩(wěn)定性結(jié)果可知,該脂質(zhì)體在4 ℃下貯藏各項(xiàng)指標(biāo)均優(yōu)于25和60 ℃,說明HT柔性納米脂質(zhì)體是一個(gè)熱不穩(wěn)定體系,低溫比較有利于HT柔性納米脂質(zhì)體的穩(wěn)定貯藏。

3 結(jié) 論

3.1利用薄膜分散法制備羥基酪醇(HT)柔性納米脂質(zhì)體,以其包封率為響應(yīng)值,通過單因素試驗(yàn)、Plackett-Burman試驗(yàn)和Box-Behnken響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn),得到制備HT柔性納米脂質(zhì)體的較佳工藝條件為:HT用量1.5 mg、氫化卵磷脂與膽固醇質(zhì)量比為3.3∶1、FA-F127用量為1 mg、膽酸鈉用量為20.6 mg、超聲波功率為10%(總功率650 W)、超聲波作用時(shí)間為11 min,此時(shí)制備的HT柔性納米脂質(zhì)體平均包封率為46.78%。

3.2HT柔性納米脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)表征結(jié)果顯示:HT柔性納米脂質(zhì)體是有利于載藥和包埋的,HT負(fù)載增強(qiáng)了空白脂質(zhì)體的熱穩(wěn)定性,其粒子的微觀結(jié)構(gòu)多呈圓形或者橢圓形,分散性良好,且可見同心圓的指紋結(jié)構(gòu),將是一種有前途的更高效更安全的遞送系統(tǒng)。

3.3較優(yōu)工藝條件下制備的HT柔性納米脂質(zhì)體平均粒徑為104.7 nm、PDI為0.231、Zeta電位為-42.5 mV。在4、 25和60 ℃分別貯藏28 d后發(fā)現(xiàn):4 ℃比較有利于HT柔性納米脂質(zhì)體的穩(wěn)定貯藏。