蔡喜中,茍 康,李丹陽

陜西省咸陽市中心醫(yī)院普外二科,陜西咸陽 712000

胃癌是一種全球常見、高發(fā)的消化道惡性腫瘤,據(jù)統(tǒng)計(jì)每年全球新增病例超過100萬例,而我國是胃癌發(fā)病的重災(zāi)區(qū)[1]。近年來,隨著診療技術(shù)不斷革新,我國胃癌的早期診斷率明顯提高,但部分中晚期患者預(yù)后仍不盡人意[2]。因此,尋找一種可準(zhǔn)確評估胃癌患者預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物至關(guān)重要。髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體-1(TREM-1)是免疫球蛋白超家族成員,被認(rèn)為是炎癥疾病的重要標(biāo)志物,對急性胰腺炎、膿毒癥等疾病具有一定的預(yù)后評估價(jià)值[3-4]。近年來有研究發(fā)現(xiàn),TREM-1與腫瘤相關(guān)性炎癥反應(yīng)有關(guān)[5]。冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白(CIRP)又稱為異源核糖核蛋白A18,可參與機(jī)體的氧化應(yīng)激反應(yīng)、細(xì)胞增殖、腫瘤進(jìn)展等過程。有研究發(fā)現(xiàn),CIRP表達(dá)上調(diào)與肝癌、乳腺癌等惡性腫瘤的預(yù)后不良有關(guān)[6-7],但是目前涉及到TREM-1、CIRP與胃癌的研究尚少。因此,本研究主要探討TREM-1與CIRP在胃癌組織中的表達(dá)及其對胃癌患者預(yù)后的評估價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年9月至2019年9月本院收治的108例胃癌患者作為研究對象,男63例,女45例;年齡18～75歲,平均(59.73±5.46)歲。收集胃癌患者的癌組織標(biāo)本作為胃癌組(癌病變區(qū)域的中心,0.5 g),對應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本作為癌旁組(距腫瘤邊緣>3 cm)。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)經(jīng)病理組織活檢確診為胃癌;(2)年齡≥18歲。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)術(shù)前有放化療史者;(2)既往有胃部手術(shù)史者;(3)肺、心、肝等組織器官功能異常者;(4)認(rèn)知異?；蚓癞惓Ｕ?(5)合并其他腫瘤者;(6)依從性差及拒絕參與本研究者。所有患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1主要試劑與儀器 兔抗人TREM-1多克隆抗體(上海科敏生物科技有限公司),兔抗人CIRP多克隆抗體、羊抗兔二抗IgG(艾美捷科技有限公司),免疫組織化學(xué)試劑盒、DAB顯色盒(上海尚寶生物科技有限公司),顯微鏡(上海永科光學(xué)儀器有限公司)。

1.2.2TREM-1、CIRP檢測 采用免疫組織化學(xué)法檢測胃癌組織及癌旁組織中TREM-1、CIRP表達(dá)情況,操作流程如下:對胃癌組織及癌旁組織標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)固定(4%多聚甲醛)、石蠟包埋、切片(4 μm)、脫蠟(二甲苯)、脫水(不同梯度的乙醇)處理后,在高壓、高溫環(huán)境內(nèi)加入檸檬酸鈉溶液進(jìn)行抗原修復(fù),恢復(fù)正常溫度后,加入磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗3次(每次5 min),隨后加入5%山羊血清抗體進(jìn)行封閉,滴加兔抗人TREM-1多克隆抗體(稀釋比例為1∶500)、兔抗人CIRP多克隆抗體(稀釋比例為1∶150),4 ℃冰箱內(nèi)孵育過夜,加入PBS沖洗3次,加入羊抗兔二抗IgG(稀釋比例為1∶1 000),37 ℃環(huán)境內(nèi)孵育30 min,PBS沖洗3次,采用DAB染色試劑盒進(jìn)行顯色,隨后進(jìn)行蘇木精復(fù)染、乙醇脫水、二甲苯透明及中性樹膠封片,顯微鏡下觀察結(jié)果。結(jié)果判定[8]:顯微鏡下觀察到細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性細(xì)胞。陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度分別為無顏色(計(jì)0分)、淺黃色或黃色(計(jì)1分)、棕黃色(計(jì)2分)、棕褐色(計(jì)3分);陽性細(xì)胞百分比評分分別為<5%(計(jì)0分)、5%～25%(計(jì)1分)、>25%～50%(計(jì)2分)、>50%～75%(計(jì)3分),>75%(計(jì)4分)。染色指數(shù)(SI)=陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度×陽性細(xì)胞百分比。根據(jù)SI得分情況分為陽性表達(dá)(SI>3分)和陰性表達(dá)(SI≤3)。

1.2.3預(yù)后 采用電話、門診復(fù)查等方式對出院胃癌患者進(jìn)行連續(xù)3年隨訪,記錄患者的生存狀況,隨訪截止時(shí)間為2022年9月。第1年每2個(gè)月隨訪1次,第2、3年每4個(gè)月隨訪1次,隨訪終止為患者死亡或隨訪截止。

2 結(jié) 果

2.1兩組TREM-1、CIRP表達(dá)情況比較 胃癌組TREM-1、CIRP陽性表達(dá)率均高于癌旁組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1、圖1、圖2。

注:A為胃癌組;B為癌旁組。

注:A為胃癌組;B為癌旁組。

表1 兩組TREM-1、CIRP表達(dá)情況比較[n(%)]

2.2不同臨床病理特征的胃癌患者TREM-1、CIRP表達(dá)情況比較 不同性別、年齡、腫瘤位置、Lauren分型、浸潤深度的胃癌患者TREM-1、CIRP表達(dá)情況比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);低分化、腫瘤最大徑>5 cm、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者TREM-1、CIRP陽性表達(dá)率均高于中/高分化、腫瘤最大徑≤5 cm、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同臨床病理特征的胃癌患者TREM-1、CIRP表達(dá)情況比較[n(%)]

2.3不同臨床病理特征的胃癌患者3年生存情況比較 108例胃癌患者連續(xù)隨訪3年后,共有56例患者存活,存活率為51.85%。低分化、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TREM-1陽性表達(dá)、CIRP陽性表達(dá)胃癌患者3年生存率均低于中/高分化、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TREM-1陰性表達(dá)、CIRP陰性表達(dá)的胃癌患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 不同臨床病理特征的胃癌患者3年生存情況比較

2.4胃癌患者預(yù)后的多因素Cox回歸分析 賦值:臨床分期(Ⅰ～Ⅱ期=0、Ⅲ～Ⅳ期=1)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(無=0、有=1)、TREM-1(陰性=0、陽性=1)、CIRP(陰性=0、陽性=1)。將胃癌患者的預(yù)后作為因變量,將表3中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)作為自變量進(jìn)行多因素Cox回歸分析,結(jié)果顯示,臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TREM-1陽性表達(dá)、CIRP陽性表達(dá)是胃癌患者生存的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表4。

表4 胃癌患者預(yù)后的多因素Cox回歸分析

3 討 論

胃癌是威脅我國居民健康的常見惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和病死率分別位于惡性腫瘤的第2、3位[9]。早期胃癌無特異性臨床癥狀,容易與慢性胃部疾病癥狀混淆,故多數(shù)患者確診時(shí)病情較為嚴(yán)重,已處于中晚期,治療效果很難達(dá)到預(yù)期目標(biāo),導(dǎo)致預(yù)后生存期較短[10]。因此,早期評估胃癌患者預(yù)后情況可為臨床治療提供指導(dǎo)。

TREM-1屬于免疫球蛋白超家族成員,其基因位于染色體6p21-1,廣泛表達(dá)于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等表面,作為炎癥反應(yīng)激發(fā)的相關(guān)受體,可使細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)、磷脂酰肌醇-3激酶等磷酸化,激活相關(guān)信號傳導(dǎo)通路,促使白細(xì)胞介素-2、腫瘤壞死因子-α等促炎因子水平上調(diào),同時(shí)可與Toll樣受體發(fā)揮協(xié)同作用,誘發(fā)炎癥級聯(lián)反應(yīng)[11-12]。潘薇等[13]探討了直腸癌組織的TREM-1表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)TREM-1在直腸癌組織中呈高表達(dá),且與預(yù)后密切相關(guān)。李皖云等[14]研究發(fā)現(xiàn),TREM-1可參與癌細(xì)胞的增殖、侵襲及凋亡等過程,與肝癌的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn),TREM-1可作為評估肺癌手術(shù)效果及預(yù)后的標(biāo)志物,為臨床提供新的治療靶點(diǎn)[15]。本研究結(jié)果顯示,胃癌組TREM-1陽性表達(dá)率高于癌旁組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);不同分化程度、腫瘤最大徑、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的TREM-1表達(dá)情況比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提示TREM-1在胃癌患者中呈高表達(dá),且與病情進(jìn)展有關(guān)。究其原因,TREM-1是重要的炎癥反應(yīng)激發(fā)受體,能夠募集單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞,促使腫瘤微環(huán)境中炎癥因子水平上調(diào),加速腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、侵襲過程,并且可抑制腫瘤細(xì)胞凋亡,進(jìn)而參與胃癌的發(fā)生和發(fā)展。本研究結(jié)果顯示,TREM-1陽性表達(dá)患者3年生存率低于TREM-1陰性表達(dá)患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提示TREM-1高表達(dá)與胃癌患者的預(yù)后不良有關(guān),可作為評估胃癌預(yù)后的標(biāo)志物。

CIRP是冷休克蛋白家族成員之一,最初被發(fā)現(xiàn)于小鼠睪丸組織,在人體肝、胃、肺等多個(gè)組織器官中表達(dá),可與Toll樣受體4結(jié)合后激活核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)信號通路,增加炎癥介質(zhì)釋放[16]。張琳梅等[17]研究發(fā)現(xiàn),CIRP在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中呈高表達(dá),且與較差的生存率有關(guān)。楊柳等[18]研究發(fā)現(xiàn),腎癌組織中CIRP表達(dá)下調(diào),可促進(jìn)腎癌細(xì)胞的增殖與遷移。LIAO等[19]研究發(fā)現(xiàn),CIRP可通過CTNNB1激活Wnt/β-catenin信號,促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌的進(jìn)展。由此可知,CIRP具有抑癌和促癌作用,可參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。本研究結(jié)果顯示,胃癌組CIRP陽性表達(dá)率高于癌旁組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);CIRP陽性表達(dá)與分化程度、腫瘤最大徑、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。提示CIRP高表達(dá)與胃癌的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。究其原因,CIRP作為內(nèi)源性促炎癥介質(zhì),其過表達(dá)可使機(jī)體炎癥因子水平上調(diào),并通過Toll樣受體介導(dǎo)的信號通路,活化NF-κB,進(jìn)而促進(jìn)腫瘤新生血管形成,抑制腫瘤細(xì)胞凋亡;同時(shí)CIRP可通過調(diào)控ERK、p38信號通路,促進(jìn)細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖與侵襲能力[20]。因此,CIRP高表達(dá)與胃癌進(jìn)展有關(guān),下調(diào)CIRP表達(dá)可抑制胃癌細(xì)胞的增殖、分化、侵襲等過程。本研究結(jié)果顯示,CIRP陽性表達(dá)患者3年生存率低于CIRP陰性表達(dá)患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。由此提示CIRP高表達(dá)與胃癌患者的預(yù)后不良有關(guān)。本研究結(jié)果顯示,臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TREM-1陽性表達(dá)、CIRP陽性表達(dá)是胃癌患者生存的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。由此提示TREM-1、CIRP過表達(dá)可增加胃癌死亡的風(fēng)險(xiǎn),監(jiān)測其表達(dá)情況可預(yù)測其預(yù)后。

綜上所述,TREM-1、CIRP在胃癌患者中均呈高表達(dá),且與臨床病理特征及預(yù)后密切相關(guān),可作為胃癌預(yù)后評估的生物學(xué)標(biāo)志物,有望為胃癌提供新的治療靶點(diǎn)。