王 誠，丁博群，董桂紅，范秋蘋

（1.山東寵言生物科技有限公司，山東 泰安 271000；2.山東健源生物科技有限公司，山東 泰安 271000）

近年來，人們對精神生活的追求越來越高，出于緩解壓力或是尋找精神寄托，越來越多的家庭選擇飼養(yǎng)寵物，養(yǎng)寵物漸漸成為一種流行趨勢，隨之帶動了寵物用品行業(yè)的快速發(fā)展。寵物食品是寵物的必需品，通過在寵物食品中添加益生菌來調節(jié)寵物腸道菌群、提高寵物免疫力、促進寵物機體健康。

益生菌是一類安全無害并對機體健康具有一定功效的活性微生物，其功效主要包括降低血脂血糖血壓、增強機體免疫力、抑制病原菌生長、抗氧化、促進營養(yǎng)吸收等[1]。它主要分為乳桿菌類、雙歧桿菌類、芽孢桿菌類、鏈球菌類、其他類等5大類[2]。目前，益生菌主要應用于食品、醫(yī)療、養(yǎng)殖、農業(yè)等領域，其在安全無害的同時還具有促進營養(yǎng)吸收和提高免疫力等優(yōu)點，因此具有廣闊的發(fā)展前景。此外，益生菌還可以作為寵物食品添加劑，通過調節(jié)pH值、維持腸道優(yōu)勢菌群平衡、促進免疫屏障的構建、阻抗病原菌的定植等作用機制，抑制病原菌的生長并提高動物機體免疫力[3]。如Strompfová等[4]的研究表明，給健康犬補充發(fā)酵乳桿菌AD1，顯著增加了犬消化道中乳酸菌的數量，促進了犬對某些營養(yǎng)物質的吸收。劉鮮姣[5]研究發(fā)現，口服益生菌可改善犬胃腸消化功能，并快速糾正腸道機能紊亂現象。這些研究表明，益生菌可以調節(jié)犬的胃腸道菌群，建立免疫屏障，從而提升犬的免疫力。

血常規(guī)結果不僅是某些疾病的診斷指標，而且可以在一定程度上反映動物機體的狀態(tài)及健康狀況[6-7]。其中，免疫球蛋白可以在一定體系或環(huán)境中與菌體或病毒體發(fā)生凝集反應，產生抑菌效果，從而提高機體免疫力[8]。白細胞介素6（Interleukin 6，IL-6）可以在不同炎癥環(huán)境下發(fā)揮相應的抑制炎癥或促炎癥作用，是一種幾乎可以調節(jié)先天免疫系統(tǒng)各個方面的多功能細胞因子[9]。本試驗開展了嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌、沼澤紅假單胞菌3種益生菌對寵物犬貓機體免疫力影響的試驗，主要對寵物犬貓血清中的免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）和白細胞介素6（IL-6）4個免疫指標進行測定分析，以期為復合益生菌制劑在寵物犬貓養(yǎng)殖中的應用價值提供一定理論支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗菌株

試驗選取的菌株分別為嗜酸乳桿菌（保藏號為CICC 20985）、長雙歧桿菌（保藏號為CICC 6207）、沼澤紅假單胞菌（保藏號為CICC 23812），均購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心。

1.2 試驗儀器

動物血常規(guī)分析儀（海力孚HF-3800）。

1.3 試驗動物

試驗設在泰安市某寵物醫(yī)院，研究對象為滿足寵物實驗標準的成年健康犬和健康貓。

1.4 飼養(yǎng)管理

選取健康的成年犬、貓各21只，分別隨機分為7組，每組3只，其中1組為對照組，其余6組為試驗組。飼養(yǎng)環(huán)境：溫度（23±2）℃，相對濕度（55±5）%。喂養(yǎng)市售寵物食品為對照組，在市售寵物食品的基礎上分別按照表1補飼益生菌菌劑，其中試驗4、5、6組中菌劑的添加量為前期試驗篩選出的單菌株最優(yōu)添加量，試驗1、2、3組分別為低于、高于、等于單菌株最優(yōu)添加量復合益生菌制劑。每組動物提供相同食盆，每天同一時間飼喂，每天1餐，喂食量為試驗犬貓體重的6%，喂食周期為1周，每次飼喂前清潔食具，補充足量的飲用水，每日定時清潔犬舍、貓舍，做好通風消殺工作。

表1 不同菌劑的添加量 單位：cfu/g

1.5 血液采集與血清免疫指標測定

1周后，取每只試驗動物的血樣置于4 ℃環(huán)境靜置4 h后，在4 ℃、5 000 r/min條件下離心15 min進行血常規(guī)檢查。具體如下：取試驗動物前肢靜脈血液；取20 μL全血置于稀釋液中，振動稀釋均勻；將血樣置于動物血常規(guī)分析儀中進行血常規(guī)檢查，記錄數據。

1.6 數據處理

試驗數據采用Excel 2010進行初步整理計算，采用IBM SPSS Statistics 21軟件進行單因素方差分析，使用Duncan's法進行多重比較。

2 結果與分析

2.1 益生菌制劑對寵物犬免疫力的影響

由表2可知，與對照組相比，各試驗組犬的血清IgA和IgM含量均無顯著差異（P＞0.05），IgG含量顯著高于對照組（P＜0.05），補充單種益生菌的犬血清IL-6含量與對照組相比無顯著差異（P＞0.05），補充復合益生菌制劑的犬血清IL-6顯著高于對照組（P＜0.05）。其中，將嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌、沼澤紅假單胞菌按不同添加量復合配置補充的3個試驗組（1、2、3組）均可顯著提高寵物犬血清中IgG和IL-6的含量（P＜0.05），IgG含量較對照組分別增加71.17%、65.91%、79.14%，IL-6含量較對照組分別增加20.42%、20.76%、22.17%，IgG的增加量明顯高于IL-6的增加量。補充單菌株的3個試驗組（4、5、6組）與對照組相比，IgG的含量顯著增加（P＜0.05）。試驗1、2、3組中IgG和IL-6的含量均顯著高于補充單菌株的試驗4、5、6組（P＜0.05）。由此推測，在寵物犬食品中分別單獨補充嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌、沼澤紅假單胞菌均可提高寵物犬血清中的IgG含量，而補充上述3種菌的復合益生菌制劑可以大大提高寵物犬血清中IgG和IL-6的含量，且效果遠遠優(yōu)于添加單菌株。

表2 各組犬血清中IgG、IgA、IgM和IL-6的含量

2.2 益生菌制劑對寵物貓免疫力的影響

由表3可知，各試驗組貓的血清IgG含量顯著高于對照組（P＜0.05），其中試驗1、2、3組對貓血清中IgG的提升效果優(yōu)于試驗4、5、6組。各試驗組IgA、IgM、IL-6含量與對照組相比均無顯著差異（P＞0.05），但試驗1、2、3組貓血清中IgA、IgM、IL-6的含量有增加趨勢。由此推測，在寵物貓食品中補充嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌、沼澤紅假單胞菌的復合益生菌制劑有助于提高寵物貓血清中IgG的含量。

表3 各組貓血清中IgG、IgA、IgM和IL-6的含量

3 討論

益生菌可以通過調節(jié)腸道功能提高犬貓的消化吸收能力，同時刺激腸道產生分泌型免疫球蛋白增強寵物機體免疫力，提高胃腸道免疫功能[10]。Tanprasertsuk等[11]研究發(fā)現，喂食嗜酸乳桿菌等7種益生菌和菊粉合生元的犬，腹瀉發(fā)生率往往較低。Strompfová等[12]研究發(fā)現，犬源益生菌菌株發(fā)酵乳桿菌CCM 7421可以在犬胃腸道內定植，改變腸道微生物群，并調節(jié)犬的血清生化參數和免疫參數。血清免疫球蛋白與白細胞介素均是體現機體免疫能力的相關指標。連麗娜等[13]在黃羽肉雞基礎飼糧中添加枯草芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌復合益生菌，發(fā)現雞體內IgG含量顯著增加，肉雞腸道形態(tài)發(fā)生變化。Baillon等[14]在狗糧中摻入嗜酸乳桿菌，狗血清中IgG濃度顯著增加，研究推斷這種益生菌可能具有保護狗腸道健康和增強免疫力的潛力。Alizadeh等[15]在小母雞基礎飼料中補充嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、糞鏈球菌、枯草芽孢桿菌第3周后，小母雞血清中IgG含量增加，免疫力提升。Alonge等[16]對妊娠期母犬補充屎腸球菌和嗜酸乳桿菌，測得犬血清中IgG和IgM的含量顯著提升。吳占月等[17]的研究表明，在柴達木絨山羊的短期飼養(yǎng)中，飼料中添加雙歧桿菌的山羊血清中IgG和IL-6的含量顯著增加，其生長性能、免疫力、抗氧化功能等均有所改善。孟祥晨等[18]研究發(fā)現，長雙歧桿菌可以顯著增加小白鼠血液中IgG、IL-6的含量，對小白鼠的免疫功能產生正向調節(jié)作用。這些研究均表明，嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌可以不同程度地使動物血清中IgG、IL-6含量增加，使腸道保持健康狀態(tài)，并對機體免疫力有所改善。邵林等[19]研究發(fā)現，沼澤紅假單胞菌及沼澤紅假單胞菌與枯草芽孢桿菌的復合菌均可通過菌株的代謝產物來增強鯽魚的免疫特性。目前，沼澤紅假單胞菌多應用于水產養(yǎng)殖，在畜禽養(yǎng)殖中的應用報道較少。本試驗將嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌、沼澤紅假單胞菌單獨補充及以不同添加量復合補充到寵物食品中時，可達到增加寵物犬貓血清中IgG和IL-6含量的效果，與上述研究結果相似。添加不同比例的復合益生菌制劑對血清中IgG和IL-6含量的提升效果遠遠優(yōu)于單獨添加，說明嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌、沼澤紅假單胞菌復合益生菌制劑可以在一定程度上增強寵物犬貓機體免疫力。

4 結論

在寵物犬貓食品中添加由嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌、沼澤紅假單胞菌組成的復合益生菌制劑，可以改善寵物犬貓血清生化指標，增強寵物犬貓機體免疫力。