戴建忠，濮利罡，陳偉國(guó)，楊一平，孫海燕，戎鳳鳴

（1. 海寧市經(jīng)濟(jì)作物技術(shù)服務(wù)站，浙江 嘉興 314400；2. 浙江雅云生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司，浙江 嘉興 314407）

農(nóng)用殺菌劑是一類重要的農(nóng)藥，廣泛用于各種農(nóng)作物的病害防治。近年來(lái)，隨著國(guó)內(nèi)外對(duì)殺菌劑研發(fā)的加速，殺菌劑產(chǎn)品不斷創(chuàng)新。由于殺菌劑種類繁多、性質(zhì)復(fù)雜、作用機(jī)制不同，雖然許多殺菌劑對(duì)家蠶的毒性較低［1］，但也有部分殺菌劑對(duì)家蠶具有一定的毒性風(fēng)險(xiǎn)［2-3］。為此，我們持續(xù)開(kāi)展殺菌劑對(duì)家蠶的毒性試驗(yàn)，本試驗(yàn)測(cè)定了53種殺菌劑對(duì)家蠶的急性食下毒性，根據(jù)各種殺菌劑的推薦施用濃度，評(píng)價(jià)其對(duì)養(yǎng)蠶的安全性風(fēng)險(xiǎn)，并對(duì)急性毒性和風(fēng)險(xiǎn)性較高的殺菌劑，進(jìn)行了田間殘毒期試驗(yàn)，觀察了推薦濃度下對(duì)3 齡家蠶的中毒進(jìn)程和癥狀表現(xiàn)，為蠶桑地區(qū)農(nóng)作物合理使用殺菌劑和預(yù)防中毒提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試家蠶

家蠶品種為‘白玉×秋豐’，蠶種由浙江省諸暨市健寶農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司提供，按常規(guī)方法飼養(yǎng)至3齡起蠶供試。

1.1.2 供試桑園

浙江雅云生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司桑園，4年生‘強(qiáng)桑1號(hào)’，中干偏低樹(shù)型養(yǎng)成，每667 m2桑園栽植750株。

1.1.3 供試藥劑

供試藥劑名稱及田間推薦施用濃度見(jiàn)表1，共有15類53種殺菌劑。

表1 供試藥劑Table 1 Test chemicals

表1 供試藥劑（續(xù)）Table 1 Test chemicals(Cont)

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 殺菌劑對(duì)家蠶的急性毒性測(cè)定

殺菌劑對(duì)家蠶的急性毒性試驗(yàn)方法參考文獻(xiàn)［4］的浸葉法，并稍作改進(jìn)（如供試家蠶由2 齡起蠶改為3 齡起蠶，浸漬桑葉10 s 改為1 min，整個(gè)試驗(yàn)期間飼喂處理桑葉改為飼喂處理桑葉24 h 后更換成無(wú)毒桑葉）。經(jīng)預(yù)試驗(yàn)初步判定各供試農(nóng)藥的毒性范圍后，設(shè)5～7 個(gè)等比級(jí)差濃度梯度，將適齡桑葉分別浸入不同濃度的藥液中1 min，取出后自然晾干，藥液處理后的桑葉置于保鮮盒內(nèi)，選取發(fā)育一致的3 齡起蠶20 頭，在溫度26.5℃±1℃、相對(duì)濕度75%～85%的恒溫室內(nèi)飼養(yǎng)，每個(gè)處理重復(fù)3 次，以清水處理為空白對(duì)照，24 h 后更換成無(wú)毒桑葉，繼續(xù)飼養(yǎng)到4 齡餉食。每天調(diào)查觀察家蠶幼蟲(chóng)中毒和死亡數(shù)，采用DPS 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)藥液質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)與幼蟲(chóng)死亡率概率值進(jìn)行線性回歸分析［5］，求出各藥劑對(duì)家蠶的致死中濃度（LC50）和95%置信限。

1.2.2 殺菌劑對(duì)家蠶的毒性和風(fēng)險(xiǎn)性等級(jí)評(píng)價(jià)方法

參照《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則第11部分：家蠶急性毒性試驗(yàn)》（GB/T 31270.11—2014）的方法，農(nóng)藥對(duì)家蠶的急性毒性大小分為四級(jí)：LC50≤0.5 mg/L為劇毒，0.5 mg/L＜LC50≤20 mg/L為高毒，20 mg/L＜LC50≤200 mg/L為中毒，LC50＞200 mg/L為低毒［4］。

國(guó)家環(huán)境保護(hù)總局南京環(huán)境科學(xué)研究所提出根據(jù)農(nóng)藥田間推薦濃度（mg/L）與LC50的比值劃分對(duì)家蠶的風(fēng)險(xiǎn)性（即毒性比），分為4個(gè)等級(jí)：毒性比＞10.0為極高風(fēng)險(xiǎn)性，毒性比在10.0～1.0為高風(fēng)險(xiǎn)性，毒性比在1.0～0.1為中等風(fēng)險(xiǎn)性，毒性比＜0.1為低風(fēng)險(xiǎn)性［6-7］。

1.2.3 殺菌劑在桑葉上的殘毒期試驗(yàn)和中毒癥狀

根據(jù)急性毒性測(cè)定和毒性比評(píng)價(jià)結(jié)果，對(duì)家蠶毒性大、風(fēng)險(xiǎn)性高的5種殺菌劑，參考田間推薦施用濃度確定試驗(yàn)濃度。5種殺菌劑稀釋藥液均勻噴灑于供試桑樹(shù)上，桑葉正反面噴濕。噴藥后間隔一定時(shí)間采葉養(yǎng)蠶，以新鮮無(wú)毒桑葉為對(duì)照，共6 個(gè)處理，每處理喂飼30 頭3 齡起蠶，重復(fù)3 次，供試蠶持續(xù)用各處理桑葉飼養(yǎng)至4 齡餉食，逐日調(diào)查記載各小區(qū)死亡幼蟲(chóng)數(shù)量，至不再出現(xiàn)中毒癥狀或死亡蠶的間隔天數(shù)為殘毒期。

以上5 種殺菌劑處理后的桑葉，晾干后飼喂3齡起蠶，觀察記錄家蠶的中毒進(jìn)程和癥狀。

2 結(jié)果與分析

2.1 53種殺菌劑對(duì)家蠶的急性毒性

采用浸葉法測(cè)定了53種殺菌劑對(duì)家蠶3齡起蠶的急性毒性，按LC50值大小排序，見(jiàn)表2。根據(jù)文獻(xiàn)［4］的農(nóng)藥毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，12.5%氟環(huán)唑懸浮劑、0.2%補(bǔ)骨脂種子提取物微乳劑和0.3%四霉素水劑等3種殺菌劑對(duì)家蠶的毒性等級(jí)為中毒（20 mg/L＜LC50≤200 mg/L），22.5%啶氧菌酯懸浮劑等47種殺菌劑對(duì)家蠶的毒性等級(jí)為低毒（LC50＞200 mg/L），2億孢子/g木霉菌可濕性粉劑、10億CFU/g多粘類芽孢桿菌可濕性粉劑、100億/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑等3種微生物殺菌劑以孢子或菌落數(shù)計(jì)量，不宜采用質(zhì)量濃度的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)來(lái)劃分毒性等級(jí)。從表2 可見(jiàn)，大多數(shù)殺菌劑對(duì)家蠶的毒性等級(jí)為低毒，不同殺菌劑對(duì)家蠶的LC50值差異極大，毒性最低的68%精甲霜·錳鋅水分散粒劑＞27 200 mg/L，是毒性最高的12.5%氟環(huán)唑懸浮劑36.51 mg/L的745倍以上。由于0.2%補(bǔ)骨脂種子提取物微乳劑、0.3%四霉素水劑的有效含量很低，稀釋倍數(shù)低至25倍時(shí)，對(duì)3齡起蠶仍無(wú)中毒反應(yīng)，因此，將其劃為對(duì)家蠶中毒農(nóng)藥與實(shí)際不相符。

表2 53種殺菌劑對(duì)家蠶的急性毒性和風(fēng)險(xiǎn)性等級(jí)Table 2 Acute toxicity and risk levels of 53 fungicides on silkworms

2.2 53種殺菌劑對(duì)家蠶的風(fēng)險(xiǎn)性評(píng)價(jià)

采用毒性比分級(jí)法，即53 種殺菌劑田間推薦施用濃度（表1）與實(shí)驗(yàn)室測(cè)定的LC50（表2）的比值。從表2 可見(jiàn)，12.5%氟環(huán)唑懸浮劑和72%霜脲·錳鋅可濕性粉劑的毒性比為4.28、1.01，對(duì)家蠶具有高風(fēng)險(xiǎn)性；22.5%啶氧菌酯懸浮劑等20 種殺菌劑的毒性比介于1 和0.1 之間，對(duì)家蠶具有中等風(fēng)險(xiǎn)性；0.2%補(bǔ)骨脂種子提取物微乳劑等31 種殺菌劑的毒性比＜0.1，對(duì)家蠶為低風(fēng)險(xiǎn)性。

2.3 5種殺菌劑在桑葉上的殘毒期

5 種殺菌劑稀釋藥液噴于桑樹(shù)后，間隔一定時(shí)間采葉飼喂3齡起蠶，測(cè)試對(duì)家蠶的殘毒期，結(jié)果見(jiàn)表3。12.5%氟環(huán)唑懸浮劑1 000 倍噴藥后3 d 對(duì)家蠶無(wú)中毒和死亡，66%代森錳鋅·纈菌胺水分散粒劑400 倍噴藥后5 d 對(duì)家蠶無(wú)中毒和死亡，72%霜脲·錳鋅可濕性粉劑250 倍噴藥后7 d 對(duì)家蠶無(wú)中毒和死亡，這3 種殺菌劑在桑葉上的殘留毒性均較短。60%唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑1 000 倍噴藥后30 d采葉飼喂3齡起蠶仍出現(xiàn)中毒死亡，22.5%啶氧菌酯懸浮劑1 000 倍噴藥后40 d 采葉飼喂3 齡起蠶仍出現(xiàn)中毒死亡，這2種殺菌劑在桑葉上的殘留期較長(zhǎng)。

表3 5種殺菌劑對(duì)家蠶的殘毒期Table 3 Residual toxicity period of five fungicides on silkworm

2.4 5種殺菌劑對(duì)家蠶的中毒癥狀

5 種殺菌劑處理的桑葉飼喂3 齡起蠶，多數(shù)在1～2 h后出現(xiàn)拒食或食桑減少，均有靜伏現(xiàn)象（表4）；22.5%啶氧菌酯懸浮劑約在12 h后食桑減少，中毒癥狀表現(xiàn)慢，24 h后少數(shù)側(cè)倒、頭胸伸出，約48 h后蠶體縮短，排連珠糞，部分個(gè)體吐液、蠶體明顯縮短，陸續(xù)死亡；60%唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑也有排連珠糞和蠶體縮短癥狀，72 h后部分死亡；其余3種殺菌劑12～72 h停止食桑，靜伏呈假死狀，無(wú)其他明顯癥狀。

表4 5種殺菌劑對(duì)家蠶的中毒進(jìn)程和癥狀Table 4 Poisoning process and symptoms of five fungicides on silkworm

3 討論與結(jié)論

本試驗(yàn)測(cè)定了53種殺菌劑對(duì)3齡起蠶的急性食下毒性，12.5%氟環(huán)唑懸浮劑、0.2%補(bǔ)骨脂種子提取物微乳劑和0.3%四霉素水劑為中毒，22.5%啶氧菌酯懸浮劑等47種殺菌劑為低毒，2億孢子/g木霉菌可濕性粉劑、10 億CFU/g 多粘類芽孢桿菌可濕性粉劑、100億/g枯草芽孢桿菌可濕性粉劑等3種微生物殺菌劑未劃分毒性等級(jí)。采用毒性比評(píng)價(jià)風(fēng)險(xiǎn)性等級(jí)方法，12.5%氟環(huán)唑懸浮劑和72%霜脲·錳鋅可濕性粉劑對(duì)家蠶具有高風(fēng)險(xiǎn)性，22.5%啶氧菌酯懸浮劑等20種殺菌劑對(duì)家蠶具有中等風(fēng)險(xiǎn)性，0.2%補(bǔ)骨脂種子提取物微乳劑等31 種殺菌劑對(duì)家蠶為低風(fēng)險(xiǎn)性。12.5%氟環(huán)唑懸浮劑1 000倍、66%代森錳鋅·纈菌胺水分散粒劑400倍、72%霜脲·錳鋅可濕性粉劑250倍噴霧處理桑葉，對(duì)家蠶的殘毒期分別為3 d、5 d、7 d，60%唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑1 000倍對(duì)家蠶的殘毒期超過(guò)30 d，22.5%啶氧菌酯懸浮劑1 000倍對(duì)家蠶的殘毒期超過(guò)40 d；其余48種殺菌劑對(duì)家蠶急性毒性低，推薦濃度下對(duì)家蠶風(fēng)險(xiǎn)性較小，未測(cè)定殘毒期。

試驗(yàn)結(jié)果表明，評(píng)價(jià)農(nóng)藥對(duì)養(yǎng)蠶生產(chǎn)的安全性，應(yīng)全面分析每種農(nóng)藥的急性毒性、毒性比、殘毒期各要素，如12.5%氟環(huán)唑懸浮劑對(duì)家蠶中毒，急性毒性是53 種殺菌劑中最高的，毒性比為高風(fēng)險(xiǎn)性，但在桑葉上的殘毒期僅3 d；而22.5%啶氧菌酯懸浮劑對(duì)家蠶低毒，毒性比為中等風(fēng)險(xiǎn)性，但在桑葉上的殘毒期＞40 d；顯然，12.5%氟環(huán)唑懸浮劑比22.5%啶氧菌酯懸浮劑對(duì)養(yǎng)蠶安全的可控性高。

因此，對(duì)桑園及附近農(nóng)作物施用殺菌劑時(shí)，應(yīng)選擇對(duì)家蠶毒性低、安全風(fēng)險(xiǎn)小、在桑葉上殘留時(shí)間短的品種，防止污染桑葉而導(dǎo)致養(yǎng)蠶中毒損失。