【摘要】以聚合酶鏈反應（PCR）分析儀測量結果為研究對象，論述了聚合酶鏈反應（PCR）分析儀測量結果不確定度的評定方法與過程。

【關鍵詞】聚合酶鏈反應；測量結果；不確定度

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2023.06.007

Evaluation of Uncertainty in Measurement Results of Polymerase Chain Reaction （PCR） Analyzer

ZENG Bingmei

（Hainan Kerui Measurement Technology Service Co.， Ltd.， Haikou 570206， China）

Abstract： Taking the measurement results of polymerase Chain reaction （PCR） analyzer as the research object， this paper discusses the evaluation method and process of uncertainty of measurement results of polymerase Chain reaction （PCR） analyzer.

Key words： polymerase chain reaction； measurement results； uncertainty

聚合酶鏈式反應又稱為PCR，是分子生物學技術之一。PCR已成為分子生物學研究必不可少的一部分。PCR技術不僅可用于基礎研究，還適用于日常的臨床診斷、法醫(yī)學調查和農業(yè)生物技術研究。

PCR儀是一種能夠為PCR反應自動完成溫度循環(huán)和孵育的儀器，能夠在短時間內將單個DNA分子擴增數(shù)百萬倍。其擴增過程包括3個連續(xù)步驟：1）變性，對雙鏈DNA模板進行加熱，使其解離；2）退火，被稱為引物的短DNA分子與目標DNA的側翼區(qū)域結合；3）延伸，DNA聚合酶沿著模板鏈將引物3’端進行延伸。將這些步驟重復（循環(huán)）25～35次，即可按指數(shù)方式獲得精確的目標DNA拷貝。

1.1校準依據(jù)

JJF 1527—2015《聚合酶鏈反應分析儀校準規(guī)范》。

1.2標準器

PCR儀溫度驗證系統(tǒng)，EGFR基因突變標準物質。

1.3被測對象

熒光定量PCR儀。

1.4測量方法

1.4.1溫度示值誤差、溫度均勻性校準

將PCR儀（96孔）及溫度校準裝置各部件連接完好，在溫度傳感器表面上涂抹適量的導熱油，將溫度傳感器置于PCR儀（96孔）的加熱模塊設定孔中。設定溫度控制程序見表1。啟動溫度校準裝置，記錄整個數(shù)據(jù)采集過程并保存。

1.4.2升降溫速率校準

設定PCR儀的溫度控制程序，見表2。啟動溫度校準裝置，記錄整個數(shù)據(jù)采集過程并保存。

1.4.3定量PCR儀樣本示值誤差、樣本線性的校準

采購相應的PCR反應體系96孔校準板，離心后將校準板置于PCR儀（96孔）的加熱模塊設定孔中，設定溫度控制程序，見表3。設定PCR儀的數(shù)據(jù)分析參數(shù)，計算其線性回歸系數(shù)r。

2.1溫度示值誤差校準結果的不確定度評定

2.1.1測量模型

2.1.6擴展不確定度

取k=2，PCR儀溫度示值誤差的擴展不確定度U = kuci，結果見表6。

【參考文獻】

[1]聚合酶鏈反應分析儀校準規(guī)范：JJF 1527—2015[S].

[2]測量不確定度評定與表示：JJF 1059.1—2012[S].

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[5]蔣春燕，王泰健，王琴，等.實時熒光定量PCR技術[J].動物醫(yī)學進展，2005（12）：97-101.

[6]賈月梅.轉基因植物檢測技術的發(fā)展[J].世界農業(yè)，2007（6）：54-56.

【作者簡介】

曾冰梅，女，1989年出生，工程師，研究方向為溫度、壓力計量。

（編輯：李加鵬）