李 麗 章琳俐 辛清武 繆中緯 朱志明 朱春紅 邱君志 黃勤樓 鄭嫩珠*

(1.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所/福建省畜禽遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,福州 350013;2.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院,福州 350013;3.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 家禽研究所,江蘇 揚(yáng)州 225125;4.福建農(nóng)林大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院,福州 350002)

半番鴨又稱騾鴨,是家鴨與番鴨的屬間雜交產(chǎn)物,具有很強(qiáng)的雜種優(yōu)勢,如抗逆性強(qiáng)、生長速度快等,但半番鴨不育,沒有實(shí)際種用價(jià)值。若想獲得半番鴨苗,只能飼養(yǎng)其父母本并采用人工授精技術(shù),但親本間自然交配受精率低,僅為15%～45%,極大限制了半番鴨產(chǎn)業(yè)發(fā)展。屬間雜交不育是一個(gè)非常復(fù)雜的性狀,其中雄性不育可表現(xiàn)為性腺發(fā)育缺陷,如精索或睪丸發(fā)育不全。除了父母本染色體差異及生理生化影響,半番鴨性腺發(fā)育可能由多個(gè)基因控制。因此半番鴨性腺發(fā)育異常研究可為探究屬間雜交不育機(jī)理提供理論參考依據(jù)。

長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)雖未直接編碼蛋白,但可在多種生物學(xué)過程中發(fā)揮作用[1-4],并主要通過靶基因或miRNA途徑影響多種生物學(xué)過程,如Wang等[5]研究了雞卵巢中與性成熟雜種優(yōu)勢相關(guān)的lncRNA和mRNA的系統(tǒng)圖譜。Jiang等[6]發(fā)現(xiàn)lncPGCR/miR-6577-5p/Btrc途徑可促進(jìn)雞原始生殖細(xì)胞(Primordial germ cells,PGCs)生長發(fā)育。lncPGCAT-1靶向ILF3激活JNK信號通路可促進(jìn)雞PGCs形成[7]。

前期研究中,李麗等[8]通過測序發(fā)現(xiàn)TCONS_00246198(簡稱lnc46198)在不育半番鴨性腺中特異性高表達(dá),推測lnc46198可能靶向17β-HSD3基因抑制生殖細(xì)胞發(fā)育進(jìn)而影響半番鴨胚胎期性腺發(fā)育。然而,尚未有l(wèi)nc46198對鴨細(xì)胞分化發(fā)育調(diào)控機(jī)制的相關(guān)研究。因此,本研究擬測定lnc46198在半番鴨不同發(fā)育時(shí)期胚胎性腺中的表達(dá)規(guī)律及在半番鴨不同組織中表達(dá)情況,同時(shí)構(gòu)建過表達(dá)載體初步分析lnc46198對鴨胚成纖維細(xì)胞的增殖和凋亡的影響,旨在探索lncRNA功能及對半番鴨性腺發(fā)育的影響,可為半番鴨生殖細(xì)胞發(fā)生機(jī)制提供基礎(chǔ)資料,為半番鴨種質(zhì)創(chuàng)新提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

鴨胚成纖維細(xì)胞購自湖南豐暉生物科技有限公司,過表達(dá)載體(pcDNA3.1-3 Flag質(zhì)粒)和MEM α購自美國英杰生命技術(shù)有限公司,Trypsin-EDTA(0.25%)、PlatinμmTMPCR SμperMix High Fidelity、GeneArt?Seamless Cloning and Assembly Enzyme Mix、LipofectamineTM 3000 Transfection Reagent、TRIzol?Plus RNA Purification Kit和SuperScriptTMIII First-Strand Synthesis SuperMix均購自美國賽默飛世爾科技公司,QIAqμick PCR &Gel Cleanμp Kit購自德國凱杰公司,感受態(tài)細(xì)胞DH5α購自上海唯地生物技術(shù)有限公司。

Power SYBR?Green PCR Master Mix購自德國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司,Cell Counting Kit-8購自日本同仁化學(xué)研究所,Annexin-V-FITC Apoptosis Detection Kit購自sigma-aldrich(上海)貿(mào)易有限公司,PowerUpTMSYBRTMGreen Master Mix購自德國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司,TUNEL BrightRed Apoptosis Detection Kit購自美國諾唯贊生物科技股份有限公司。

1.2 半番鴨鴨胚lnc46198特異性表達(dá)分析

收集番鴨和北京鴨人工授精獲得的半番鴨鴨胚,雌雄鑒定后選擇雄性樣本,在體視顯微鏡下采集雄性半番鴨10、15、20和25 d不同胚齡的性腺組織,同時(shí)采集12.5 d胚齡大腦、心臟、肝臟、肺臟、肌肉、腎臟和睪丸。提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄后cDNA貯存在-20 ℃?zhèn)溆谩＠肦T-qPCR技術(shù)測定半番鴨不同組織和不同時(shí)期lnc46198相對表達(dá)量。根據(jù)lnc46198測序序列,內(nèi)參基因?yàn)镚APDH,引物序列:F:GGAGCTGCCCAGAACATTATC,R:GCAGGTCAGGTCCACGACA。采用Primer Premier 6.0和Beacon designer 7.8軟件設(shè)計(jì)定量PCR引物,由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。lnc46198引物序列:F1:CGGCTGATTCCGTTATGGGTAT,R1:CAGGGCTTCCTCCACCTTT,擴(kuò)增長度98 bp,退火溫度60 ℃。20 μL反應(yīng)體系:cDNA 1.0 μL,SDW 8.0 μL,Power SYBR?Green Master Mix 10.0 μL,正向引物/10 μmol/L 0.5 μL,反向引物/10 μmol/L 0.5 μL,反應(yīng)條件:95 ℃ 1 min;95 ℃ 15 s,63 ℃ 25 s,40個(gè)循環(huán)。每個(gè)樣品重復(fù)3次,相對表達(dá)水平以2-ΔΔCt進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.3 lnc46198-pcDNA3.1-3 Flag重組載體構(gòu)建

以半番鴨性腺組織提取RNA,后逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,以cDNA為模板設(shè)計(jì)引物,lncRNA-F和lncRNA-R為引物,引物序列:lncRNA-F:TTGGTACCGAGCTCGGATCCGTTAGATGATGTTTAGTTAGTTTAA,下劃線代表BamHI酶切位點(diǎn),lncRNA-R:CTGTGCTGGATATCTGCAGAATTCCAGAAATAAGAGCCTGTTTAA,下劃線代表EcoRI酶切位點(diǎn),擴(kuò)增長度3 525 bp,退火溫度60 ℃。對lncRNA CDS序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增獲得序列,50 μL擴(kuò)增反應(yīng)體系:SDW 1.0 μL,lncRNA-F (10 μmol/L) 1.0 μL,lncRNA-R (10 μmol/L) 1.0 μL,cDNA2.0 μL,Platinμm?PCR SμperMix,High Fidelity 45 μL,反應(yīng)條件:預(yù)變性94 ℃,2 min,94 ℃,30 s,60 ℃,30 s,68 ℃,3.5 min,35個(gè)循環(huán)。In Fusion進(jìn)行載體和目的片段的重組,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物采用QIAqμick PCR &Gel Cleanμp Kit進(jìn)行切膠回收(具體參照試劑盒說明書),然后采用GeneArt?Seamless Cloning and Assembly Enzyme Mix進(jìn)行重組載體的無縫克隆。lncRNA和pcDNA3.1-3 Flag融合10 μL反應(yīng)體系:SDW 2.0 μL,lncRNA Purified product 2.0 μL,pcDNA3.1(BamHI/EcoRI)(50 ng)1.0 μL,GeneArt?2X Enzyme Mix 5.0 μL,反應(yīng)條件:室溫放置20 min;冰上放置2～3 min,然后全部轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞DH5α,挑選單克隆菌落進(jìn)行搖菌培養(yǎng),篩選陽性菌液送生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行重組載體測序。

1.4 鴨胚成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染試驗(yàn)

1.4.1鴨胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)和傳代

鴨胚成纖維細(xì)胞采用MEM α培養(yǎng)液(含10% FBS以及雙抗)進(jìn)行復(fù)蘇,在37 ℃、5% CO2條件下進(jìn)行培養(yǎng)至匯合度90%左右;加入Trypsin-EDTA(0.25%)進(jìn)行消化,以5×105個(gè)/mL細(xì)胞密度接種6孔板進(jìn)行傳代。

1.4.2lnc46198過表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞轉(zhuǎn)染

鴨胚成纖維細(xì)胞以5×105個(gè)/mL密度接種6孔板,在37 ℃、5% CO2孵育箱中過夜;待細(xì)胞匯合度約為70%時(shí),換成新鮮完全培養(yǎng)液,按照LipofectamineTM 3000說明書分別轉(zhuǎn)染lnc46198-pcDNA3.1過表達(dá)質(zhì)粒以及pcDNA3.1對照質(zhì)粒,8 h后更換完全培養(yǎng)液;轉(zhuǎn)染48 h后收集細(xì)胞提取總RNA用于后續(xù)qPCR分析過表達(dá)效率。

1.5 RT-qPCR檢測lnc46198過表達(dá)效率

收集過表達(dá)后的DEF細(xì)胞和對照細(xì)胞,采用TRIzol?Plus RNA Purification Kit提取總RNA,由DNase I去除殘余的基因組DNA,然后按SuperScriptTMIII First-Strand Synthesis SuperMix說明書合成cDNA。以GAPDH為內(nèi)參,采用PowerUp SYBRTM Green Master Mix試劑盒進(jìn)行RT-qPCR擴(kuò)增。引物序列:F2:CAAATCTAGGCAACACCACA,R2:CAGCAACAATCATAGGAGGC,擴(kuò)增長度94 bp,退火溫度60 ℃。20 μL反應(yīng)體系:cDNA 4.0 μL,SDW 5.0 μL,Power SYBR?Green Master Mix 10.0 μL,正向引物/10 μmol/L 0.5 μL,反向引物/10 μmol/L 0.5 μL,反應(yīng)條件:95 ℃ 1 min;95 ℃ 15 s,63 ℃ 25 s,40個(gè)循環(huán),每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)3次,每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)復(fù)孔,其相對表達(dá)量采用2-ΔΔCt法進(jìn)行計(jì)算。

1.6 CCK8法檢測過表達(dá)lnc46198對鴨胚成纖維細(xì)胞增殖的影響

增殖和凋亡是細(xì)胞功能研究的2個(gè)基本的研究現(xiàn)象,且兩者也可以相互應(yīng)驗(yàn)。將轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒以及l(fā)nc46198-pcDNA3.1過表達(dá)質(zhì)粒24 h后的鴨胚成纖維細(xì)胞進(jìn)行消化收集,細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞密度。按每孔2×103/100 μL細(xì)胞密度接種96孔板,待細(xì)胞貼壁后記為0 h,繼續(xù)培養(yǎng)48 h加入10 μL CCK8,在37 ℃、5% CO2條件下孵育2 h后用酶標(biāo)儀檢測450 nm處的吸光值,每組均進(jìn)行6復(fù)孔重復(fù)。

1.7 流式細(xì)胞術(shù)分析過表達(dá)lnc46198對鴨胚成纖維細(xì)胞細(xì)胞凋亡的影響

為確定過表達(dá)lnc46198對鴨胚成纖維細(xì)胞準(zhǔn)確的凋亡率,本試驗(yàn)將轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒以及l(fā)nc46198-pcDNA3.1過表達(dá)質(zhì)粒48 h后的鴨胚成纖維細(xì)胞進(jìn)行消化收集,預(yù)冷PBS漂洗細(xì)胞2次。加入300 μL預(yù)熱的無EDTA-胰酶消化3～5 min,然后加入預(yù)熱 200 μL含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng);同時(shí)加入500 μL PBS清洗殘余的細(xì)胞進(jìn)入到2 mL離心管。離心(1 500 g,5 min),棄去上清;加入1 mL預(yù)熱PBS輕輕吹打重懸,離心同上;再次加入1 mL PBS重懸,離心同上。每管加入500 μL Binding Buffer,輕輕重懸細(xì)胞。先加入5.0 μL Annexin V-FITC和10 μL PI,顛倒混勻,室溫避光放置5～15 min,然后進(jìn)行流式細(xì)胞分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 lnc46198在半番鴨胚齡時(shí)期性腺和不同組織中的表達(dá)

lnc46198在半番鴨胚齡時(shí)期性腺中特異表達(dá)結(jié)果如圖1所示,結(jié)果表明,在所有檢測胚齡性腺中均出現(xiàn)表達(dá),且隨著胚齡增加lnc46198在性腺中相對表達(dá)量有升高趨勢,表明lnc46198具有時(shí)間特異性。lnc46198在半番鴨12.5 d胚齡性腺和不同組織中特異性表達(dá)結(jié)果顯示(圖2),lnc46198在半番鴨12.5胚齡性腺中的表達(dá)量極顯著高于其他組織(P<0.01),推測lnc46198可能在鴨性腺中發(fā)揮作用。

(a)半番鴨不同胚齡性腺;(b)半番鴨不同組織。

M:DL5K DNA marker(100、250、500、750、1 000、2 000、3 000、5 000 bp)

2.2 lnc46198-pcDNA3.1-3 Flag重組載體構(gòu)建

BamHI和EcoRI酶雙酶切割lncRNA片段,采用全基因合成,lnc46198全長插入到pcDNA3.1-3 Flag,lncRNA PCR擴(kuò)增序列結(jié)果如圖2(a)所示,lnc46198 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物約3 525 bp。重組載體測序結(jié)果如圖2(b)所示,結(jié)果顯示重組載體含有序列與lnc46198一致,表明重組載體構(gòu)建成功。

2.3 lnc46198過表達(dá)分析

對鴨胚成纖維細(xì)胞系進(jìn)行培養(yǎng)和傳代,傳至第三代細(xì)胞。鴨胚成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染lnc46198-pcDNA3.1-3 Flag過表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染后48 h lnc46198過表達(dá)效率結(jié)果如圖3所示,與轉(zhuǎn)染對照組pcDNA3.1相比,lnc46198的表達(dá)水平上調(diào)了29.28倍(P<0.01),表明lnc46198過表達(dá)成功。

**P<0.01表示差異顯著。下同。

2.4 過表達(dá)lnc46198對鴨胚成纖維細(xì)胞增殖活力的影響

為探究lnc46198對鴨胚成纖維細(xì)胞的影響,轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒以及l(fā)nc46198-pcDNA3.1過表達(dá)質(zhì)粒,CCK8法檢測過表達(dá)lnc46198后鴨胚成纖維細(xì)胞的活力情況。結(jié)果顯示(圖4),與空白組以及pcDNA3.1組比較,過表達(dá)該lnc46198后,鴨胚成纖維細(xì)胞活力極顯著降低(P<0.01)。表明過表達(dá)lnc46198可抑制鴨胚成纖維細(xì)胞的增殖活力。

圖4 過表達(dá)lnc46198對鴨胚成纖維細(xì)胞增殖活力的影響

2.5 流式細(xì)胞分析過表達(dá)lnc46198對鴨胚成纖維細(xì)胞凋亡的影響

為探究lnc46198對鴨胚成纖維細(xì)胞凋亡的影響,鴨胚成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒以及l(fā)nc46198-pcDNA3.1過表達(dá)質(zhì)粒,利用Annexin V-FITC流式檢測過表達(dá)lnc46198后鴨胚成纖維細(xì)胞的凋亡情況,結(jié)果顯示(圖5(a)),與pcDNA3.1對照組相比,過表達(dá)lnc46198后,鴨胚成纖維細(xì)胞凋亡增多,過表達(dá)組鴨胚成纖維細(xì)胞凋亡率是pcDNA3.1對照組的7.30倍(圖5(b),P<0.01),表明過表達(dá)lnc46198可促進(jìn)鴨胚成纖維細(xì)胞凋亡。

(a)、(b)細(xì)胞凋亡散點(diǎn)圖;(c)細(xì)胞凋亡率。

3 討 論

大多數(shù)lncRNAs在組織分化發(fā)育過程中,都具有明顯的組織或時(shí)間表達(dá)特異性。Wichman等[9]研究表明lncRNA動(dòng)態(tài)表達(dá)對小鼠精子發(fā)生和生育發(fā)揮潛在作用。lncRNAs失調(diào)可能造成雄性低精子數(shù)或不育癥。Liu等[10]研究發(fā)現(xiàn)lncRNA在城口山地雞胚胎中期E12的表達(dá)模式和其他時(shí)間點(diǎn)均不同。Bao等[11]發(fā)現(xiàn)雄性種系發(fā)育過程6個(gè)關(guān)鍵時(shí)間點(diǎn)lncRNA的動(dòng)態(tài)表達(dá)調(diào)控。本研究對半番鴨胚胎不同發(fā)育時(shí)期性腺中l(wèi)nc46198的表達(dá)量進(jìn)行檢測分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),在所有檢測胚齡性腺中l(wèi)nc46198均有表達(dá),且隨著胚齡增加lnc46198的表達(dá)量也逐漸升高,表明lnc46198具有較高的時(shí)間特異性。這與夏雪平等[12]研究一致,夏雪平等發(fā)現(xiàn)lncRNA 54770.30在黃鱔卵巢至精巢轉(zhuǎn)變過程中表達(dá)量呈上升趨勢,提示lncRNA 54770.30可能參與黃鱔性腺發(fā)育過程,lncRNA的表達(dá)規(guī)律可為研究其功能提供參考依據(jù)。同時(shí),本研究還測定了lnc46198在半番鴨不同組織中的表達(dá),結(jié)果顯示lnc46198在半番鴨性腺中的表達(dá)量極顯著高于其他組織,即在性腺中特異性表達(dá),推測lnc46198可能在半番鴨性腺發(fā)育中發(fā)揮作用,這與前人的研究結(jié)果相近,如黃子妍等[13]認(rèn)為MSTRG.15568.9與SPAG4基因具有較明顯的組織表達(dá)特異性,并靶向SPAG4基因參與雄性精子發(fā)生與精子活力調(diào)控;Jastrzebski等[14]則發(fā)現(xiàn)多個(gè)lncRNA在火雞輸精管、睪丸和附睪中表達(dá),并認(rèn)為其可能參與雄性性腺發(fā)育。以上研究結(jié)果提示lncRNA表達(dá)具有組織特異性。另外,本研究中l(wèi)nc46198的時(shí)間和組織特異表達(dá)趨勢與繆中緯等[15]研究中17β-HSD3基因的組織特異性相近,二者表達(dá)模式一致,提示lnc46198可能與靶基因17β-HSD3共同參與生物學(xué)過程,如影響睪酮合成或睪丸間質(zhì)細(xì)胞發(fā)育[16-18]。

Hu等[19]發(fā)現(xiàn)lncRNA TCONS_00814106可通過miR-1343調(diào)控豬顆粒細(xì)胞的增殖和凋亡,Wu等[20]認(rèn)為lnc13814通過apla-miR-145-4途徑促進(jìn)鴨顆粒細(xì)胞的凋亡,Liang等[21]研究也表明lncRNA在小鼠精子發(fā)生特定階段與基因表現(xiàn)出協(xié)同變化,上述研究均表明lncRNAs可通過miRNA或轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因功能。lncRNA可通過調(diào)控基因上游調(diào)控機(jī)制參與動(dòng)物性腺或胚胎發(fā)育,Spga-lncRNA[22]和Gm2044[23]等研究發(fā)現(xiàn)關(guān)鍵lncRNA Gm2044可抑制小鼠精原細(xì)胞增殖進(jìn)而參與小鼠精子發(fā)生過程。Zou等[24]認(rèn)為lncRNAs的特異性劑量補(bǔ)償機(jī)制可能導(dǎo)致雞卵巢不對稱發(fā)育。Zhang等[25]發(fā)現(xiàn)lnc5926調(diào)控胚胎基因組激活基因(Embryonic genome activation,EGA)表達(dá)進(jìn)而影響山羊早期胚胎發(fā)育。因lnc46198為新篩選的未知lncRNA,需根據(jù)靶基因功能預(yù)測lncRNA功能,本研究中l(wèi)nc46198靶基因?yàn)?7β-HSD3,研究表明17β-HSD3基因是類固醇激素合成途徑中的關(guān)鍵基因,其對睪丸激素合成和雄性繁育性狀至關(guān)重要[26-27],若缺陷可能造成性腺發(fā)育障礙[28-30],因而推測lnc46198靶向17β-HSD3基因參與半番鴨性腺發(fā)育。lncRNA異常表達(dá)則可影響細(xì)胞增殖、分化或凋亡作用,本研究過表達(dá)lnc46198后發(fā)現(xiàn)其可抑制鴨胚成纖維細(xì)胞增殖活力,并促進(jìn)鴨胚成纖維細(xì)胞凋亡,進(jìn)一步驗(yàn)證了lnc4619抑制細(xì)胞增殖的作用。Hu等[31]認(rèn)為lncRNA-Gm2044在轉(zhuǎn)基因小鼠精原細(xì)胞中過表達(dá)不會(huì)影響睪丸形態(tài)和生育能力,但會(huì)阻斷精子生成,并可作為診斷不育的分子靶標(biāo)。Liang等[32]研究認(rèn)為過表達(dá)lncRNA-Gm2044或敲除miR-335-3p可以降低轉(zhuǎn)錄因子A-MYB對突觸復(fù)合體蛋白1基因(Synaptonemal complex protein 1,SYCP1)表達(dá)和細(xì)胞增殖的影響。同時(shí),lncRNA還可能影響其他類型細(xì)胞的增殖或凋亡活動(dòng),Sun等[33]研究表明lnc90386敲除可顯著抑制雞胚成纖維細(xì)胞凋亡和炎癥因子,并促進(jìn)雞胚成纖維細(xì)胞增殖。楊光等[34]發(fā)現(xiàn)了一條新的lncRNA lncbMD,結(jié)果表明干擾lncbMD后能夠促進(jìn)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖,孟珊等[35]通過干擾試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)豬肌肉組織中顯著高表達(dá)的lncRNA-6617可促進(jìn)豬肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞分化,上述研究與本研究結(jié)果均表明干擾、過表達(dá)或敲除lncRNA可影響細(xì)胞活動(dòng),但其作用方式不盡相同。本研究初步分析lnc46198對細(xì)胞增殖或凋亡的作用,然而,lnc46198對生殖細(xì)胞分化、精子發(fā)生及減數(shù)分裂的作用機(jī)制尚不清楚,后續(xù)將分析lnc46198表達(dá)水平與半番鴨胚胎性腺發(fā)育異常之間的效應(yīng)關(guān)系,以進(jìn)一步確定lnc46198靶向17β-HSD3在鴨生殖細(xì)胞增殖或分化過程中的功能,可為lncRNA對半番鴨生殖細(xì)胞分化發(fā)育作用機(jī)制提供參考依據(jù),對半番鴨不育研究具有重要意義。

4 結(jié) 論

lnc46198在不同胚齡半番鴨性腺中動(dòng)態(tài)表達(dá),在半番鴨12.5 d胚齡性腺中特異性高表達(dá),并抑制鴨胚成纖維細(xì)胞增殖,促進(jìn)鴨胚成纖維細(xì)胞凋亡,可為lncRNA對鴨生殖細(xì)胞分化發(fā)育作用機(jī)制提供科學(xué)參考依據(jù)。