李欣然，梁依依，屠 紅

1. 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院上海市腫瘤研究所，腫瘤系統(tǒng)醫(yī)學(xué)全國重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海200032；

2. 復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，上海 200032

自20世紀(jì)20年代在人類腫瘤組織中首次培養(yǎng)出細(xì)菌以來，越來越多的證據(jù)［1-2］表明，腫瘤中存在著微生物群落。但由于腫瘤內(nèi)微生物含量極豐度極低，難以排除實(shí)驗(yàn)過程中外部細(xì)菌或細(xì)菌DNA的污染，因而實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性在早年備受爭(zhēng)議。近年來，隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，腫瘤中存在微生物群落的觀點(diǎn)逐漸受到認(rèn)同。2020年，Nejman等［3］在一項(xiàng)全球多中心研究中，對(duì)7個(gè)癌種的1 010例腫瘤標(biāo)本和516例癌旁標(biāo)本進(jìn)行了16S rRNA測(cè)序，發(fā)現(xiàn)這些癌種中均存在細(xì)菌DNA，包括與外界并不相通的卵巢癌、腦膠質(zhì)瘤和骨肉瘤等。這一研究開啟了腫瘤微生物組學(xué)研究的新篇 章。

1 腫瘤內(nèi)微生物組的種類、來源和作用

存在于腫瘤組織中并構(gòu)成腫瘤微環(huán)境的微生物群體被稱為腫瘤內(nèi)微生物組，包括細(xì)菌、真菌、病毒和支原體等，目前已在20余種惡性腫瘤中檢測(cè)到微生物的存在。在大多數(shù)癌種中，變形菌門和擬桿菌門比例較高，但不同癌種間也會(huì)有變化，如結(jié)直腸癌中豐度最高的是厚壁菌門和擬桿菌門（70% ～ 80%），而胰腺癌中則是變形菌門占主導(dǎo)地位（約80%）［3］。

腫瘤內(nèi)微生物的來源可能有3 個(gè)途經(jīng)：① “原住民”，即微生物來自于腫瘤起源的組織內(nèi)部，例如，當(dāng)口腔微生物組中的058型鏈球菌、口腔消化鏈球菌成為優(yōu)勢(shì)菌群時(shí)，可能與口腔鱗癌的發(fā)生相關(guān)［4］；當(dāng)腸道菌群中的梭桿菌比例增加時(shí)，結(jié)直腸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)上升［5］。② 血液運(yùn)輸，即微生物隨血液循環(huán)到達(dá)腫瘤部位，這一過程也可與癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移相伴隨，例如，原發(fā)性結(jié)直腸癌中的細(xì)菌，可穿過被腫瘤破壞的腸道血管屏障，經(jīng)門靜脈系統(tǒng)到達(dá)肝臟的繼發(fā)灶中［6］。③ 腸道逆流，即腸道菌群經(jīng)膽總管、肝總管和主胰管等逆行至肝、膽、胰的腫瘤部位，例如，有研究［7］發(fā)現(xiàn)，胰腺癌微生物組與正常十二指腸微生物組的構(gòu)成十分相似，由于胰總管開口于十二指腸乳頭部，這一現(xiàn)象提示細(xì)菌有可能沿管道逆行遷移至胰腺癌中。

腫瘤內(nèi)微生物可能在癌前階段即已存在于病變組織中并參與了腫瘤形成。在反流性食管炎的食管組織中，彎曲桿菌的豐度增加，且白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-8隨之上調(diào)，提示彎曲桿菌可能通過慢性炎癥及致癌代謝物的產(chǎn)生而誘發(fā)食管癌［8］。但更多研究者認(rèn)為腫瘤內(nèi)細(xì)菌可能是在癌形成后才遷移過來的。腫瘤新生血管內(nèi)皮滲漏性增加，有助于外周循環(huán)中的細(xì)菌穿出血管進(jìn)入腫瘤。腫瘤中獨(dú)特的缺氧環(huán)境，十分有利于厭氧菌的生長。而不斷壞死的腫瘤組織能為細(xì)菌的繁殖提供充足的養(yǎng)分。加之腫瘤微環(huán)境的高度免疫抑制狀態(tài)，這些都為細(xì)菌的長期生存創(chuàng)造了條件。

2 腫瘤微生物組的檢測(cè)方法

16S rRNA測(cè)序方法是腫瘤內(nèi)微生物研究最常用的方法。該方法通過大通量測(cè)序，分析細(xì)菌16S rRNA基因的可變區(qū)序列以獲得各細(xì)菌的分類學(xué)特征。該方法可對(duì)樣品中的所有細(xì)菌進(jìn)行分類學(xué)鑒定和定量，但對(duì)于種間差異較小的細(xì)菌，16S rRNA不能準(zhǔn)確鑒定到種。此外，對(duì)于細(xì)菌以外的微生物，也無法通過16S rRNA測(cè)序進(jìn)行鑒 定。

宏基因組學(xué)的發(fā)展使腫瘤內(nèi)微生物組研究跨上了一個(gè)新臺(tái)階。宏基因組是指環(huán)境中所有微生物基因組的總和。與16S rRNA測(cè)序不同的是，宏基因組并不只針對(duì)某個(gè)特定微生物群（真菌、細(xì)菌或病毒）進(jìn)行單一性的靶向測(cè)序，而是對(duì)所有微生物基因組的總和進(jìn)行序列分析，因而其在物種的精確鑒定中具有優(yōu)勢(shì)，并能推測(cè)微生物組的功能特性。其不足之處在于序列的組裝和比對(duì)受微生物序列數(shù)據(jù)庫中參照序列條目的限制，且從腫瘤組織中提取的遺傳信息絕大部分是人類DNA，而低含量微生物的數(shù)據(jù)較為有限。

在細(xì)胞水平上，研究者通常使用針對(duì)革蘭氏陰性菌的脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）或革蘭氏陽性菌的脂磷壁酸所進(jìn)行的免疫組織化學(xué)證實(shí)腫瘤組織中細(xì)菌的存在。以特異性16S rRNA基因序列為探針的熒光原位雜交（fluorescencein situhybridization，F(xiàn)ISH）也可確認(rèn)瘤內(nèi)細(xì)菌的存在。FISH聯(lián)合透射電鏡成像還能精確地鑒定細(xì)菌在癌細(xì)胞或浸潤性免疫細(xì)胞中的亞定位。目前，通過分離培養(yǎng)技術(shù)獲得腫瘤內(nèi)活菌的研究較少。與宏基因組學(xué)相比，培養(yǎng)組學(xué)能夠獲得微生物的純培養(yǎng)物，有助于進(jìn)一步研究菌株的生物學(xué)特性并構(gòu)建體外模型。若能將宏基因組學(xué)和培養(yǎng)組學(xué)聯(lián)合應(yīng)用，將能獲得更為客觀真實(shí)的研究結(jié)論。

3 腫瘤內(nèi)微生物組在各類腫瘤中的研究進(jìn)展

3.1 乳腺癌瘤內(nèi)微生物組研究

3.1.1 乳腺及乳腺癌中的微生物

乳腺在傳統(tǒng)上被認(rèn)為是一個(gè)無菌器官。但近年來研究［9］發(fā)現(xiàn)，哺乳期婦女的母乳樣本中存在著各種不同的細(xì)菌群落，且會(huì)受肥胖等因素的影響。以16S rRNA測(cè)序和細(xì)菌培養(yǎng)的方法，能檢測(cè)到乳腺組織中存在著大量不同類型的細(xì)菌，門水平以變形桿菌為主［10］。Nejman等［3］對(duì)乳腺癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、惡性黑色素瘤、骨肉瘤和腦膠質(zhì)瘤等7種惡性腫瘤中的微生物組進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)乳腺癌中的細(xì)菌種類最多，平均每個(gè)樣本中可檢測(cè)到17種細(xì)菌，而其他腫瘤中的細(xì)菌種類平均小于9種。

與正常乳腺相比，乳腺癌組織中普遍存在著微生物菌群失調(diào)現(xiàn)象。Banerjee等［11］還發(fā)現(xiàn)癌旁組織中的微生物顯著高于健康對(duì)照組，尤其是芽孢桿菌、腸桿菌、葡萄球菌、具核梭桿菌等的豐度較正常乳腺或乳腺良性病灶顯著增高，提示腫瘤內(nèi)微生物可能會(huì)影響到鄰近組織，或乳腺癌中的微生物在癌前病變時(shí)已經(jīng)存在。

此外，在乳腺癌中還發(fā)現(xiàn)了病毒（包括副痘病毒科、人乳頭狀瘤病毒、皰疹病毒科、反轉(zhuǎn)錄病毒科、多瘤病毒）、真菌和寄生蟲的存在，它們與細(xì)菌一起構(gòu)成的腫瘤微生物組型別，具有臨床預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值［12-13］。

3.1.2 乳腺癌內(nèi)微生物對(duì)腫瘤的作用及機(jī)制

在小鼠乳腺癌模型中，瘤內(nèi)注射人乳腺癌來源的細(xì)菌，能增強(qiáng)小鼠乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的潛能；相反，應(yīng)用抗生素清除瘤內(nèi)細(xì)菌，則乳腺癌肺轉(zhuǎn)移病灶減少［14］。機(jī)制研究［14］表明，在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中，攜帶有細(xì)菌的循環(huán)腫瘤細(xì)胞通過重塑肌動(dòng)蛋白獲得了更強(qiáng)的抵抗流體剪應(yīng)力的能力，從而促進(jìn)了癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。乳腺癌中的細(xì)菌還能與細(xì)胞外基質(zhì)相互作用，通過對(duì)硫酸皮膚素的降解、肽聚糖的合成抑制及蛋白聚糖穩(wěn)定性的減弱［15］等途經(jīng)，為癌細(xì)胞的侵襲、遷移創(chuàng)造有利條件。

乳腺癌內(nèi)微生物多樣性降低或關(guān)鍵種群結(jié)構(gòu)的改變，能影響腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的募集和活化。Tzeng等［16］發(fā)現(xiàn)丙酸桿菌在乳腺癌中缺失，由于該菌豐度與T細(xì)胞激活相關(guān)基因的表達(dá)呈正相關(guān)，因而這一現(xiàn)象提示丙酸桿菌缺失可能通過抑制腫瘤局部T細(xì)胞免疫從而促進(jìn)腫瘤的生長。此外，也有研究［17］發(fā)現(xiàn)，隨著乳腺癌瘤內(nèi)微生物組菌群多態(tài)性的下降，細(xì)菌相關(guān)代謝產(chǎn)物也會(huì)發(fā)生相應(yīng)變化，例如，石膽酸濃度降低后，其所誘發(fā)的細(xì)胞氧化應(yīng)激凋亡效應(yīng)減少，從而促進(jìn)乳腺癌的進(jìn)展。

具核梭桿菌存在于30%的乳腺癌標(biāo)本中，在小鼠乳腺癌模型中，具核梭桿菌的致病因子Fap2能與乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá)的半乳糖-N-乙酰半乳糖胺結(jié)合，使具核梭桿菌特異性定植于乳腺癌組織中，并抑制腫瘤浸潤T細(xì)胞積聚，促進(jìn)乳腺癌的生長和轉(zhuǎn)移［18］。具核梭桿菌還能通過調(diào)節(jié)雌激素的生物利用度或誘導(dǎo)乳腺細(xì)胞DNA損傷，促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生［2］。

3.2 胰腺癌瘤內(nèi)微生物組研究

3.2.1 胰腺及胰腺癌中的微生物

2017年，Geller等［7］對(duì)胰腺導(dǎo)管腺癌手術(shù)切除標(biāo)本和20例正常胰腺對(duì)照標(biāo)本進(jìn)行了細(xì)菌16S rRNA的定量分析，發(fā)現(xiàn)胰腺癌樣本中細(xì)菌的檢出率顯著高于正常胰腺組織（76%vs15%，P＜0.005）。FISH和免疫組織化學(xué)檢測(cè)也均證實(shí)了人胰腺癌組織中存在細(xì)菌。胰腺癌組織中最常見的細(xì)菌是γ-變形菌綱中的腸桿菌科和假單胞菌科，約占細(xì)菌總數(shù)的51.7%。Pushalkar等［19］也發(fā)現(xiàn)胰腺癌中存在著13個(gè)門的細(xì)菌，其中以變形菌門（45%）、擬桿菌門（31%）和厚壁菌門（22%）最為豐富。胰腺癌中的細(xì)菌可能是從十二指腸逆行遷移而來的。用熒光標(biāo)記的糞腸球菌對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃，可以直觀地觀察到細(xì)菌自腸道逆行至胰腺［19］。在臨床上，接受胰管固定術(shù)的患者腫瘤內(nèi)的細(xì)菌明顯增多，也支持這一推測(cè)。但與腸道菌群相比，胰腺癌組織中的細(xì)菌仍有其獨(dú)特性，尤其是變形桿菌在從腸道向胰腺的移位過程中發(fā)生了選擇性富集［19］。

胰腺癌中另一個(gè)值得注意的微生物群是真菌。Aykut等［20］發(fā)現(xiàn)馬拉色菌屬等真菌在小鼠和人胰腺癌組織中大量存在，是正常胰腺組織的3 000倍。未來也可嘗試使用靶向真菌的抗生素來抑制胰腺癌的生長。

3.2.2 胰腺癌內(nèi)微生物對(duì)腫瘤的作用及機(jī)制

細(xì)菌能促進(jìn)胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展。將p48Cre、LsL-KrasG12D（KC）小鼠飼養(yǎng)于無菌環(huán)境中，以抗生素口服清理腸道菌群后，小鼠胰腺癌形成進(jìn)程減緩。腸道重定植Pdx1Cre、LsL-KrasG12D和P53R172H（KPC）胰腺癌小鼠的糞菌后，KC小鼠胰腺癌生長速度恢復(fù)，但定植正常對(duì)照小鼠的糞菌則不能促進(jìn)胰腺癌的生長。在胰腺癌原位模型中，口服抗生素清除瘤內(nèi)細(xì)菌后，也能引起腫瘤縮小50%左 右［19］。

關(guān)于瘤內(nèi)微生物促進(jìn)胰腺癌發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制，目前研究主要集中于腫瘤微環(huán)境中細(xì)菌與免疫細(xì)胞間的交互作用。生存期長的胰腺癌患者，其腫瘤中所富集的糖多孢菌、革蘭氏芽孢桿菌和克勞西芽孢桿菌具有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)功能［21］。將抗生素處理過的小鼠胰腺癌原位腫瘤中浸潤T細(xì)胞分離后過繼給胰腺癌皮下瘤模型小鼠，結(jié)果能使瘤重下降50%左右［19］。在KPC小鼠中，抗生素處理能提高胰腺癌中CD8+/CD4+T細(xì)胞比例，增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞的殺傷能力，并促進(jìn)CD4+T細(xì)胞向Th1分化。細(xì)菌清除還能導(dǎo)致腫瘤微環(huán)境中髓源性抑制細(xì)胞（myeloid-derived suppressor cell，MDSC）的減少和M1型巨噬細(xì)胞的增加［19］。

細(xì)菌代謝產(chǎn)物多胺可能也參與胰腺癌的進(jìn)展。通過宏基因組分析KPC小鼠在胰腺癌發(fā)生過程中的微生物代謝途徑改變，發(fā)現(xiàn)其主要與腐胺、亞精胺和精胺的代謝通路相關(guān)［22］。胰腺癌患者血清中多胺水平顯著高于健康對(duì)照者［22］，進(jìn)一步提示細(xì)菌代謝產(chǎn)物在胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。腫瘤內(nèi)部真菌也具有促胰腺癌生長的作用。通過口服兩性霉素B減少腫瘤中的真菌，能使小鼠胰腺自發(fā)瘤顯著縮小，小鼠生存期延長［23］。其機(jī)制可能為特定真菌刺激胰腺癌細(xì)胞分泌IL-33，招募并激活Th2細(xì)胞和Ⅱ型天然免疫細(xì)胞［23］。真菌促癌的另一種機(jī)制可能與激活補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)有關(guān)［20］。

3.3 肺癌瘤內(nèi)微生物組研究

3.3.1 肺及肺癌中的微生物

2011年，Apostolou等［24］在肺癌樣本中首次發(fā)現(xiàn)了支原體、表皮葡萄球菌、鏈球菌和芽孢桿菌等的存在。隨后，越來越多的研究［25-28］證實(shí)了這一現(xiàn)象。在健康肺中，普雷沃菌、鏈球菌和奈瑟菌等最為豐富［26］，但Yu等［27］研究發(fā)現(xiàn)，變形菌門在非惡性腫瘤的肺組織中占主導(dǎo)地位（約60%）。Jin等［28］則證實(shí)小鼠肺癌原位模型中草螺菌和鞘脂單胞菌在腫瘤組織中較為富集，肺癌組織中細(xì)菌菌群多樣性顯著低于正常肺組織。

Nejman等［3］比較了吸煙與非吸煙的肺癌患者腫瘤組織中的細(xì)菌富集通路，發(fā)現(xiàn)約半數(shù)通路與降解香煙中尼古丁、鄰苯甲醚、甲苯和苯酚等物質(zhì)的通路相關(guān)，提示高濃度的香煙代謝物為這些細(xì)菌提供了良好的生存環(huán)境。參與香煙代謝過程的細(xì)菌主要屬于變形菌門、放線菌門和藍(lán)藻門。Greathouse等［29］研究發(fā)現(xiàn)，在TP53突變的肺鱗癌中存在獨(dú)特的細(xì)菌構(gòu)成，如嗜酸菌屬豐度增加等，提示肺癌中微生物組的改變可能還與驅(qū)動(dòng)基因突變存在關(guān)聯(lián)。

最近，Dohlman等［30］研究發(fā)現(xiàn)，肺癌細(xì)胞中存在真菌，且吸煙患者中的瘤內(nèi)真菌豐度更高、含更多的曲真菌和傘菌綱真菌。他們?cè)趦蓚€(gè)獨(dú)立的隊(duì)列中，證實(shí)以真菌作為標(biāo)志物可有效地區(qū)分肺癌和健康對(duì)照，在肺癌的早期診斷中有一定的潛力。

3.3.2 肺癌瘤內(nèi)微生物對(duì)腫瘤的作用及機(jī)制

肺癌共生菌具有促進(jìn)肺癌發(fā)生、發(fā)展的作用。LsL-KrasG12D、p53flox/flox（KP）小鼠在無菌（germ free，GF）條件下，肺部腫瘤生長減慢，數(shù)量減少，出現(xiàn)高級(jí)別癌前病變的比例顯著降低；令GF小鼠與無特定病原體小鼠共居，GF對(duì)KP小鼠的抑瘤現(xiàn)象消失，表明共生細(xì)菌具有促進(jìn)肺癌發(fā)生、發(fā)展的作用［28］。

目前認(rèn)為肺癌中細(xì)菌主要通過改變免疫微環(huán)境、調(diào)節(jié)局部免疫反應(yīng)來影響腫瘤進(jìn)程。細(xì)菌引起的慢性炎癥可促進(jìn)肺癌的生長和轉(zhuǎn)移［26］，局部細(xì)菌負(fù)荷的增加和菌群組成的改變，可刺激髓系免疫細(xì)胞通過MyD88依賴性途徑產(chǎn)生IL-1β和IL-23，這些細(xì)胞因子刺激Vγ6+Vδ1+γδ T細(xì)胞活化和增殖，進(jìn)而產(chǎn)生IL-17和其他效應(yīng)分子促進(jìn)炎癥和腫瘤發(fā)生［28］?？股仂F化吸入使小鼠肺部細(xì)菌數(shù)量減少后，能激活腫瘤浸潤T細(xì)胞和自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞，并減少免疫抑制性的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量，增強(qiáng)局部抗腫瘤免疫反應(yīng)［31］。

3.4 其他腫瘤中的微生物組學(xué)研究

除胰腺癌、乳腺癌和肺癌外，幾乎所有常見惡性腫瘤中都發(fā)現(xiàn)有微生物組的存在。表1概括了這些腫瘤中微生物的種類及其對(duì)疾病發(fā)展的作用和機(jī)制。

4 腫瘤內(nèi)微生物組的臨床應(yīng)用

4.1 瘤內(nèi)微生物組在腫瘤患者預(yù)后判斷中的作用

瘤內(nèi)微生物群落的分布特征，有望成為新的腫瘤進(jìn)展預(yù)測(cè)標(biāo)志物［53］。Riquelme等［21］根據(jù)代表細(xì)菌群落多樣性的香農(nóng)指數(shù)將胰腺癌患者分為高α-多樣性組和低α-多樣性組，結(jié)果顯示，前者的中位生存期達(dá)9.66年，而后者僅為1.66年（P＜0.001）?；诩冱S單胞菌、糖多孢菌、鏈霉菌和克勞西芽孢桿菌4種菌所構(gòu)建的預(yù)測(cè)模型，受試者工作特征曲線的曲線下面積（area under curve，AUC）在發(fā)現(xiàn)隊(duì)列和驗(yàn)證隊(duì)列中分別可達(dá)0.98和0.99。Peters等［54］研究發(fā)現(xiàn)，肺癌癌旁組織中細(xì)菌的豐度和多樣性與無復(fù)發(fā)生存期（recurrence-free survival，RFS）具有相關(guān)性。具體而言，紅藻科菌的豐度增加與RFS呈正相關(guān)，而糞桿菌和瘤胃球菌的豐度增加則與RFS呈負(fù)相關(guān)。

腫瘤內(nèi)微生物也能影響藥物治療的敏感性。目前發(fā)現(xiàn)至少有13種細(xì)菌能引起癌細(xì)胞對(duì)吉西他濱耐藥，其中以γ-變形菌綱為主。由于胰腺癌組織中存在的細(xì)菌以γ-變形菌綱為主，Geller等［7］將胰腺癌標(biāo)本中的細(xì)菌培養(yǎng)后處理腸癌細(xì)胞，結(jié)果使后者產(chǎn)生了吉西他濱耐藥。此外，有臨床研究［55］顯示，腫瘤內(nèi)LPS可作為吉西他濱治療胰腺癌療效的預(yù)測(cè)因子。未來將特定抗生素與吉西他濱聯(lián)用，將有助于提高胰腺癌化療的有效性。

4.2 循環(huán)微生物DNA（circulating microbial DNA，cmDNA）在腫瘤診斷中的作用

cmDNA是指外周血中存在的微生物來源的游離DNA。迄今為止，cmDNA在肺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、乳腺癌和肝癌中都顯示出較好的診斷價(jià)值。Poore等［56］對(duì)癌癥基因組圖譜（The Cancer Genome Atlas，TCGA）數(shù)據(jù)庫信息進(jìn)行整合分析后發(fā)現(xiàn)，cmDNA能較好地區(qū)分早期腫瘤和正常對(duì)照，尤其是在前列腺癌和肺癌的診斷中，AUC高達(dá)0.947 7和0.971 6。在結(jié)腸癌中，Xiao等［57］也發(fā)現(xiàn)有28個(gè)菌種在患者和正常對(duì)照血清中存在顯著差異。不過這些菌種在結(jié)腸腺瘤患者中也有相應(yīng)改變，并不能很好地鑒別腫瘤的良惡性。Messaritakis等［58］研究發(fā)現(xiàn)，16S rDNA、大腸桿菌β-半乳糖苷酶、脆弱雙歧桿菌谷氨酰胺合酶及5.8S rDNA與結(jié)腸癌的轉(zhuǎn)移及總生存期顯著相關(guān)（P＜0.001）。Cho等［59］研究發(fā)現(xiàn)，與肝硬化和正常對(duì)照相比，肝癌患者血清中有7個(gè)屬的細(xì)菌豐度發(fā)生了顯著改變，尤其是葡萄球菌在肝癌患者血清中上升了4.3倍（P＜0.001）?；?種細(xì)菌構(gòu)建的評(píng)分模型，能有效地區(qū)分肝癌與對(duì)照組，AUC在發(fā)現(xiàn)隊(duì)列和驗(yàn)證隊(duì)列中分別達(dá)0.879和0.875，提示cmDNA在肝癌診斷中具有潛在價(jià)值。

5 總結(jié)與展望

目前已證實(shí)，在腫瘤微環(huán)境中存在著細(xì)菌和真菌等微生物。這些微生物可游離于細(xì)胞外，也可寄居于腫瘤細(xì)胞或免疫細(xì)胞中，利用腫瘤細(xì)胞壞死提供的養(yǎng)分長期生存。這些微生物究竟是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的“驅(qū)動(dòng)”因子，還是僅作為“旁觀者”存在，尚待更多研究進(jìn)一步驗(yàn)證。相對(duì)于腫瘤細(xì)胞而言，腫瘤內(nèi)微生物在數(shù)量上占比很少，因此目前的研究在很大程度上依賴于深度測(cè)序技術(shù)，在微生物豐度極低的組織樣本中如何做到消除污染及精準(zhǔn)分類仍具有挑戰(zhàn)性。由于共生菌與腫瘤間錯(cuò)綜復(fù)雜的關(guān)系，也使得一些小樣本臨床研究所得出的結(jié)論重復(fù)性欠佳。

展望未來，瘤內(nèi)共生菌的種類鑒定及臨床意義仍是研究重點(diǎn)?，F(xiàn)有的機(jī)制研究主要集中于瘤內(nèi)菌通過免疫介導(dǎo)發(fā)揮間接調(diào)控腫瘤的作用，有關(guān)共生菌對(duì)癌細(xì)胞本身的直接作用研究報(bào)道較少。將微生物組學(xué)與代謝組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、免疫組學(xué)等進(jìn)行多組學(xué)整合分析，將有助于全面系統(tǒng)地了解微生物在腫瘤微環(huán)境中的作用?？傊?，腫瘤內(nèi)微生物組這一全新概念，將進(jìn)一步豐富人們對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展的認(rèn)識(shí)，也為腫瘤的臨床診治提供新的線索。

利益沖突聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。