劉鵬飛，李 炎，2

（1.揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合老年病防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 揚(yáng)州 225009；2.揚(yáng)州大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇 揚(yáng)州 225009）

阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease，AD）是一種常見的神經(jīng)退行性疾病，其病理特征包括突觸和神經(jīng)元的丟失、神經(jīng)纖維纏結(jié)和老年斑的形成[1]。該病的臨床表現(xiàn)以記憶和其他認(rèn)知功能的逐漸喪失為特征[2]。AD在組織病理學(xué)上與其他癡呆癥的區(qū)別在于大量淀粉樣β蛋白（Amyloid β，Aβ）在神經(jīng)元外沉積，而Aβ在AD的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用[3-5]。Aβ及其沉積物具有廣泛的神經(jīng)毒性[6-8]，包括抑制神經(jīng)元突觸可塑性和誘導(dǎo)神經(jīng)元死亡[9-11]。年齡的增長(zhǎng)是晚發(fā)型AD的最大危險(xiǎn)因素，這表明衰老過程可以啟動(dòng)或促成AD發(fā)病。衰老與下丘腦-垂體-性腺（hypothalamic- pituitary-gonadal，HPG）軸的變化和性腺功能的逐漸下降密切相關(guān)[12-15]。研究表明，雄激素或雌激素可通過減少Aβ的產(chǎn)生、改善突觸信號(hào)傳導(dǎo)[16]及對(duì)抗神經(jīng)元凋亡發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[17-18]，因此性激素的缺乏參與了晚發(fā)型AD的發(fā)生發(fā)展。

蓯蓉散“久服至老不忘”，出自《證治準(zhǔn)繩》。蓯蓉散臨床常用于防治老年期認(rèn)知障礙性疾病，但其作用機(jī)制還未見報(bào)道。本研究基于晚發(fā)型AD患者的主要病理和生理特征，通過單側(cè)性腺（睪丸）切除和雙側(cè)海馬齒狀回注射Aβ建立雄性晚發(fā)型AD小鼠模型并以蓯蓉散加以干預(yù)，觀察蓯蓉散的改善作用并探究其作用機(jī)制，以期為蓯蓉散“久服至老不忘”提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 8周齡SPF級(jí)雄性ICR小鼠50只，體質(zhì)量（25.32±3.76）g，由揚(yáng)州大學(xué)比較中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（蘇）2022-0009；使用許可證號(hào)：SYXK（蘇）2022-0044。動(dòng)物飼料均由揚(yáng)州大學(xué)比較中心提供，飼養(yǎng)環(huán)境：溫度20～25 ℃，12 h光照/12 h黑暗周期，相對(duì)濕度50%～65%。小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開展實(shí)驗(yàn)。本研究對(duì)動(dòng)物的各種處理均遵守?fù)P州大學(xué)有關(guān)動(dòng)物使用及倫理學(xué)規(guī)定，所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)獲得揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，批準(zhǔn)編號(hào)：YXYLL-2022-132。

1.2 藥物與試劑 蓯蓉散方藥組成（成人劑量）：肉蓯蓉15 g，續(xù)斷15 g，遠(yuǎn)志10 g，石菖蒲10 g，茯苓10 g?？偵幜繛?0 g，中藥材均由揚(yáng)州市中醫(yī)院中藥房提供，經(jīng)鑒定均為正品。藥材鑒定人：揚(yáng)州大學(xué)蘇佩清教授。蓯蓉散水煎液制備：以藥物8倍質(zhì)量的水浸泡2 h，煎煮30 min后，取出藥汁。再向藥物中加入同體積的水，同樣方法煎煮40 min，兩次煎煮的藥汁混合，60 ℃揮發(fā)濃縮至相當(dāng)于生藥質(zhì)量濃度為1.6 g/mL，4 ℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

氟他胺（雄激素受體拮抗劑，0.25g/片，上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司，批號(hào)：210803）；青霉素鈉（聯(lián)邁生物公司，批號(hào)：LM1026）；4%多聚甲醛固定液（批號(hào)：P0099）、蘇木素-伊紅（HE）染色試劑盒（批號(hào)：C0105S）、Aβ1～42（批號(hào)：P9001）、二甲亞砜（DMSO）（批號(hào)：ST038）、磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）（批號(hào)：C0221A）均購自上海碧云天生物技術(shù)公司；小鼠促性腺激素釋放激素（GnRH）ELISA試劑盒（酶免生物公司，批號(hào)：MM-0506M2）；小鼠雄激素（T）ELISA試劑盒（研謹(jǐn)生物公司，批號(hào)：F07944）。

Aβ寡聚體準(zhǔn)備：將Aβ1～42單體用DMSO溶解，制成3 mmol/mL的原溶液，并在PBS中稀釋10倍（300 μmol/mL Aβ1～42，90%PBS，10% DMSO）。將Aβ1～42單體溶液在37 ℃下孵育24 h以促進(jìn)Aβ1～42寡聚體的形成，然后分裝并在-80 ℃下冷凍備用。

1.3 主要儀器 Morris水迷宮視頻分析系統(tǒng)（上海欣軟科技有限公司，型號(hào)：SuperMaze V2.0）；小鼠腦立體定位儀（成都儀器廠，型號(hào)：STW-3）；微量進(jìn)樣器（上海高鴿工貿(mào)有限公司，規(guī)格：10 μL）；RM2235型輪轉(zhuǎn)式組織切片機(jī)（德國(guó)徠卡公司）；生物顯微鏡（日本Nikon公司，型號(hào):E100）；ELISA酶標(biāo)儀（美國(guó)伯騰儀器有限公司，商品號(hào)：800TS，序列號(hào)：180106A）。

1.4 造模與分組

1.4.1 小鼠晚發(fā)型AD模型制作 （1）單側(cè)性腺（睪丸）摘除：1%戊巴比妥鈉（50 mg/kg）麻醉小鼠。碘伏消毒陰囊后，用眼科剪刀在一個(gè)陰囊的最下部剪出一個(gè)約5 mm的切口。按壓小鼠的腹部，使睪丸從陰囊切口處突出來。用鑷子夾住睪丸腹膜，將其撕開，并將睪丸拉出。用鑷子夾住精索，用“切刀型”電烙鐵進(jìn)行切割和燒灼。在切口處撒上青霉素鈉粉。將精索推入陰囊。閉合陰囊切口，不縫合。若小鼠術(shù)后出現(xiàn)活動(dòng)量減少，體質(zhì)量減輕，飲水及進(jìn)食量減少，體毛無光澤、發(fā)黃及稀疏，喜扎堆蜷縮拱背等現(xiàn)象，即證明造模成功[19]。（2）雙側(cè)海馬齒狀回Aβ1～42寡聚體注射：?jiǎn)蝹?cè)性腺切除術(shù)7 d后，將小鼠麻醉，剪掉小鼠頭部的毛發(fā)并固定在腦立體儀的耳桿上。向雙眼滴無菌PBS，以防止角膜干燥。用碘伏消毒頭部皮膚，用眼科剪刀在頭部中間切開一個(gè)1 cm的切口。眼瞼開口器撐開切口，定位前囟，在前囟門后方2.0 mm、側(cè)方1.4 mm處做標(biāo)記。用7號(hào)針頭緩慢鉆孔。用雙側(cè)微量注射器吸取Aβ1～42寡聚體后固定在腦立體儀上，從鉆孔處插入2.5 mm，到達(dá)海馬齒狀回。以0.2 μL/min的速度，將Aβ1～42同時(shí)注入兩側(cè)海馬，每側(cè)腦海馬齒狀回內(nèi)注射300 μmol/mL的Aβ1～42寡聚體1 μL，持續(xù)5 min，然后將針留在原位5 min，以幫助Aβ1～42的擴(kuò)散。退出注射針，縫合切口[20]。造模后進(jìn)行6 d的水迷宮行為學(xué)檢測(cè)，然后取材，腦組織石蠟切片行HE染色，若出現(xiàn)小鼠學(xué)習(xí)能力明顯受損[21]，且腦組織海馬齒狀回HE染色表現(xiàn)為海馬錐體細(xì)胞帶排列紊亂、變稀、中斷，許多細(xì)胞體積縮小，胞核固縮，染色加深等[22]，即證明造模成功。本實(shí)驗(yàn)已通過多次預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定模型的可靠性，然后固定相關(guān)實(shí)驗(yàn)條件，造模給藥后，應(yīng)用水迷宮檢測(cè)行為學(xué)差異。

1.4.2 動(dòng)物分組 將50只ICR小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、晚發(fā)型AD模型組、蓯蓉散低劑量組、蓯蓉散高劑量組及氟他胺組，每組10只。實(shí)驗(yàn)周期為15 d，小鼠在實(shí)驗(yàn)周期第1天實(shí)施性腺摘除術(shù)。除假手術(shù)組小鼠外，其他各組均進(jìn)行單側(cè)性腺（睪丸）摘除。假手術(shù)組小鼠只在陰囊做切口。在實(shí)驗(yàn)周期第8天進(jìn)行海馬齒狀回內(nèi)注射，假手術(shù)組小鼠注射無菌生理鹽水，其余各組均注射Aβ1～42寡聚體，各實(shí)驗(yàn)組小鼠注射溶液體積相等。在實(shí)驗(yàn)第10～15天各組小鼠進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)。小鼠在實(shí)驗(yàn)期間，每天均給予灌胃處理，蓯蓉散低、高劑量組小鼠分別灌胃低、高劑量的蓯蓉散溶液，氟他胺組小鼠同時(shí)灌胃高劑量蓯蓉散溶液和氟他胺溶液；假手術(shù)組、晚發(fā)型AD模型組灌胃等體積的生理鹽水。

1.5 實(shí)驗(yàn)給藥 預(yù)實(shí)驗(yàn)中設(shè)置了3個(gè)劑量組，即等效劑量、2倍等效劑量、4倍等效劑量，但在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)4倍等效劑量組小鼠死亡率較高，死亡的小鼠腹部脹大，經(jīng)解剖發(fā)現(xiàn)小鼠腸道蠕動(dòng)障礙均出現(xiàn)顯著膨脹?？赡茉蚴歉邉┝窟h(yuǎn)志產(chǎn)生腸毒性[23-24]。因此將4倍等效劑量組剔除。除4倍等效劑量組外，其余組間小鼠死亡率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

蓯蓉散及氟他胺的給藥劑量按照《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》[25]中人和動(dòng)物間體表面積折算的等效劑量比值，小鼠給藥劑量=人的臨床劑量×0.002 6，換算得出的小鼠給藥劑量作為低劑量組小鼠給藥量，其2倍劑量作為高劑量組小鼠的給藥量。蓯蓉散低、高劑量組小鼠灌胃劑量分別為5.2、10.4 g/（kg·d），氟他胺組灌胃劑量為65 mg/（kg·d）。假手術(shù)組和晚發(fā)型AD模型組小鼠給予等體積生理鹽水，1次/d，連續(xù)給藥15 d。

1.6 觀察指標(biāo)

1.6.1 小鼠認(rèn)知功能 采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)評(píng)估小鼠海馬體依賴性空間學(xué)習(xí)記憶能力。Morris水迷宮包括一個(gè)黑色的圓形水池（直徑120 cm，高40 cm），注入一定量的水，水溫設(shè)置26 ℃，水池被分為4個(gè)象限（第一象限、第二象限、第三象限和第四象限）。（1）定位航行實(shí)驗(yàn)：在迷宮第一象限中放置一個(gè)平臺(tái)（直徑10 cm），并將平臺(tái)浸沒在水面下1 cm。實(shí)驗(yàn)連續(xù)5 d，平臺(tái)位置不變，每天訓(xùn)練4次，每次從4個(gè)固定位置下水，每次訓(xùn)練60 s，如果在60 s內(nèi)沒有找到平臺(tái)，則引導(dǎo)小鼠到平臺(tái)上停留15 s。記錄并分析每天找到平臺(tái)的逃離潛伏期，以評(píng)估小鼠的學(xué)習(xí)能力。（2）空間搜索實(shí)驗(yàn)：定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)束后移除平臺(tái)，進(jìn)行60 s的搜索實(shí)驗(yàn)，各組小鼠下水位置相同。記錄并分析小鼠穿越平臺(tái)區(qū)域的次數(shù)和在每個(gè)象限的游泳時(shí)間，以評(píng)價(jià)小鼠的記憶能力。

1.6.2 血清和腦組織收集 在完成Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)后對(duì)小鼠進(jìn)行深度麻醉（1%戊巴比妥鈉，150 mg/kg），然后收集左心室血液和腦組織。將血液在室溫下靜置30 min，并在4 ℃下以3 500 r/min離心15 min（離心半徑為48 mm）。取血清進(jìn)行性腺軸相關(guān)激素含量測(cè)試。將取出的小鼠大腦切成左右兩半，在4 ℃的4%多聚甲醛（PFA）PBS溶液中浸泡24 h。

1.6.3 小鼠海馬區(qū)組織形態(tài) 將多聚甲醛固定的腦組織按常規(guī)方法經(jīng)流水沖洗、梯度乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋后制成蠟塊。將蠟塊切至Aβ1～42注射的位置，即距大腦中線1.4 mm處，保留切片，切片厚度為5 μm。切片經(jīng)烘烤干燥后，經(jīng)二甲苯、梯度乙醇脫蠟至水，蘇木精、伊紅染色，再經(jīng)乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片后，在光鏡下觀察并拍照。以切片中海馬齒狀回（DG）區(qū)顆粒細(xì)胞層損傷長(zhǎng)度為直徑，計(jì)算出Aβ對(duì)顆粒細(xì)胞層的損傷面積。

1.6.4 血清雄激素、促性腺激素釋放激素（GnRH）水平 將性腺軸相關(guān)激素ELISA試劑盒從冰箱中取出，在室溫下平衡20 min。嚴(yán)格按照試劑盒說明書的步驟，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品和血清樣品中雄激素及GnRH的光密度（OD）值。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)品的線性回歸曲線，并根據(jù)曲線方程計(jì)算血清雄激素、GnRH水平。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用IBM SPSS 27.0軟件，計(jì)量資料以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（±s）表示。多組數(shù)據(jù)差異性檢驗(yàn)用單因素方差分析，組間兩兩比較應(yīng)用LSD-t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究將實(shí)驗(yàn)過程中死亡、在行為學(xué)實(shí)驗(yàn)中游泳狀態(tài)不佳及未表現(xiàn)出逃離欲望的小鼠剔除，在各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果中不納入統(tǒng)計(jì)范圍。

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠學(xué)習(xí)記憶能力比較 定位航行實(shí)驗(yàn)中，在訓(xùn)練的第5天，晚發(fā)型AD模型組小鼠逃離潛伏期長(zhǎng)于假手術(shù)組（P＜0.01）；蓯蓉散低、高劑量組小鼠逃離潛伏期短于晚發(fā)型AD模型組（P＜0.05或P＜0.01）；氟他胺組小鼠逃離潛伏期長(zhǎng)于蓯蓉散高劑量組（P＜0.05）。（見表1）

表1 各組小鼠Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較 （±s）

注：與假手術(shù)組比較，aP＜0.01；與晚發(fā)型AD模型組比較，bP＜0.05，cP＜0.01；與蓯蓉散高劑量組比較，dP＜0.05。

定位航行實(shí)驗(yàn) 空間搜索實(shí)驗(yàn)逃離潛伏期/s 穿越平臺(tái)區(qū)次數(shù)/次 第一象限游泳時(shí)間百分比/%假手術(shù)組 8 21.70±5.38 6.86±1.51 35.15±10.42晚發(fā)型AD模型組 7 39.62±5.37a 1.74±1.25a 22.78±6.99a蓯蓉散低劑量組 7 27.10±4.36b 3.86±1.35 29.76±7.32蓯蓉散高劑量組 7 23.90±5.97c 4.86±2.36c 36.54±7.65c氟他胺組 7 31.98±6.84d 2.63±1.72d 27.42±7.22d F 5.291 4.805 3.638 P 0.002 0.004 0.015組別 n

空間搜索實(shí)驗(yàn)中，晚發(fā)型AD模型組小鼠穿越平臺(tái)區(qū)次數(shù)及在第一象限游泳時(shí)間百分比低于假手術(shù)組（P＜0.01）；蓯蓉散高劑量組小鼠的穿越平臺(tái)區(qū)次數(shù)及在第一象限游泳時(shí)間百分比高于晚發(fā)型AD模型組（P＜0.01）；氟他胺組小鼠的穿越平臺(tái)區(qū)次數(shù)及在第一象限游泳時(shí)間百分比低于蓯蓉散高劑量組（P＜0.05）；蓯蓉散低劑量組小鼠穿越平臺(tái)區(qū)次數(shù)及在第一象限游泳時(shí)間百分比與晚發(fā)型AD組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（見表1）提示蓯蓉散的干預(yù)作用具有劑量依賴性。

2.2 各組小鼠腦損傷比較 假手術(shù)組小鼠DG區(qū)神經(jīng)元（顆粒細(xì)胞）結(jié)構(gòu)形態(tài)正常；晚發(fā)型AD模型組小鼠DG區(qū)顆粒細(xì)胞層斷裂，大量神經(jīng)元丟失；蓯蓉散低、高劑量組小鼠DG區(qū)可見顆粒細(xì)胞層斷裂程度減輕，且呈劑量依賴性；氟他胺組小鼠顆粒細(xì)胞層損傷程度較蓯蓉散高劑量組嚴(yán)重。（見圖1）

圖1 各組小鼠DG 區(qū)顆粒細(xì)胞層損傷情況 （HE，×100）

與假手術(shù)組比較，晚發(fā)型AD模型組小鼠DG區(qū)注射位置顆粒細(xì)胞層斷裂、大量顆粒細(xì)胞丟失，且損傷面積大于假手術(shù)組（P＜0.01）；蓯蓉散低、高劑量組顆粒細(xì)胞層損傷面積明顯小于晚發(fā)型AD模型組（P＜0.01）；氟他胺組小鼠顆粒細(xì)胞層損傷面積明顯大于蓯蓉散高劑量組（P＜0.01）。（見表2）

表2 各組小鼠DG 區(qū)顆粒細(xì)胞層損傷面積比較 （±s）

表2 各組小鼠DG 區(qū)顆粒細(xì)胞層損傷面積比較 （±s）

注：與假手術(shù)組比較，aP＜0.01；與晚發(fā)型AD模型組比較，bP＜0.01；與蓯蓉散高劑量組比較，cP＜0.01。

組別 n 腦海馬齒狀回區(qū)顆粒細(xì)胞層損傷面積/μm2假手術(shù)組 8 0.00±0.00晚發(fā)型AD模型組 7 91 245.05±14 138.70a蓯蓉散低劑量組 7 71 744.35±11 389.86b蓯蓉散高劑量組 7 59 814.32±11 428.98b氟他胺組 7 78 231.14±10 052.59c F 89.398 P 0.000

2.3 各組小鼠血清雄激素、GnRH水平比較 晚發(fā)型AD模型組小鼠血清雄激素、GnRH水平低于假手術(shù)組（P＜0.01）；蓯蓉散低、高劑量組小鼠血清雄激素、GnRH水平高于晚發(fā)型AD模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；氟他胺組小鼠血清雄激素、GnRH水平與蓯蓉散高劑量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（見表3）

表3 各組小鼠血清雄激素、GnRH 水平比較 （±s）

表3 各組小鼠血清雄激素、GnRH 水平比較 （±s）

注：與假手術(shù)組比較，aP＜0.01；與晚發(fā)型AD模型組比較，bP＜0.01；與蓯蓉散高劑量組比較，cP＞0.05。

組別 n 雄激素/（ng/mL） GnRh/（mIU/mL）假手術(shù)組 8 11.81±2.25 102.86±8.11晚發(fā)型AD模型組 7 6.74±2.11a 74.33±9.91a蓯蓉散低劑量組 7 8.99±1.62b 87.21±7.68b蓯蓉散高劑量組 7 10.71±2.15b 99.37±8.99b氟他胺組 7 10.15±1.51c 101.96±5.14c F 7.473 16.812 P 0.000 0.000

3 討 論

復(fù)制接近晚發(fā)型AD行為學(xué)及病理生理學(xué)特點(diǎn)（性腺軸完整、性激素下降、Aβ代謝障礙及神經(jīng)元丟失等）的動(dòng)物模型對(duì)AD的早期預(yù)防和治療等研究具有重要價(jià)值。在以往的AD模型中，多數(shù)研究忽略了老年AD性激素缺乏的生理特征。因此，在性激素水平正常的AD模型動(dòng)物中研究神經(jīng)元再生、抗神經(jīng)元凋亡和抗炎作用，可能會(huì)因?yàn)樽陨硇约に氐纳窠?jīng)保護(hù)作用而出現(xiàn)假陽性。此外，海馬齒狀回-CA3系統(tǒng)在記憶的編碼、儲(chǔ)存和檢索中起著核心作用[15]。齒狀回是哺乳動(dòng)物大腦中僅有的兩個(gè)存在神經(jīng)元再生的區(qū)域之一[16]，動(dòng)物海馬齒狀回內(nèi)的Aβ1～42浸潤(rùn)是模擬AD快速而有效的方法。因此本研究通過雄性小鼠單側(cè)睪丸切除術(shù)結(jié)合雙側(cè)海馬齒狀回Aβ1～42注射建立晚發(fā)型AD小鼠模型。結(jié)果發(fā)現(xiàn)小鼠經(jīng)單側(cè)睪丸摘除、齒狀回注射Aβ1～42后，性激素水平下降，海馬區(qū)顆粒細(xì)胞大量丟失，同時(shí)學(xué)習(xí)和記憶能力顯著下降，說明小鼠的行為學(xué)變化、組織形態(tài)學(xué)變化及HPGA功能變化符合晚發(fā)型AD的特點(diǎn)。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為晚發(fā)型AD屬“健忘”“癡呆”“呆病”等范疇。其發(fā)病與“痰”密切相關(guān)，如《石室秘錄》曰“治呆無奇法，治痰即治呆也。然而痰勢(shì)最盛，呆氣最深”。年老體虛，脾腎功能不足。脾失健運(yùn)，腎虛不能主水，導(dǎo)致水濕內(nèi)停，濕聚成痰，隨氣機(jī)升降蒙蔽清竅?！疤得孕母[，則遇事多忘”（《名醫(yī)指掌》），即出現(xiàn)健忘、癡呆等神明失用表現(xiàn)。再者腎藏志，主骨生髓通于腦。腎虛則腦髓失養(yǎng)、失聰，亦可導(dǎo)致健忘、癡呆。老年期認(rèn)知障礙的致病因素主要為痰，且與脾、腎、心功能失調(diào)密切相關(guān)，因此治療原則需包括補(bǔ)腎、健脾、開心竅及祛痰以標(biāo)本兼治。蓯蓉散中肉蓯蓉、續(xù)斷溫補(bǔ)腎陽，充養(yǎng)腦髓；茯苓健脾滲濕，寧心安神；石菖蒲、遠(yuǎn)志祛痰開竅，交通心腎。諸藥合用，共奏溫腎助陽、寧心安神、豁痰開竅之功。蓯蓉散的功用與老年期認(rèn)知障礙的治法一致。

本研究中在蓯蓉散干預(yù)后，晚發(fā)AD模型小鼠血清GnRH及雄激素水平明顯升高，海馬區(qū)顆粒細(xì)胞損傷面積縮小，學(xué)習(xí)和記憶能力改善，并且干預(yù)作用呈現(xiàn)劑量依賴性。蓯蓉散能改善晚發(fā)型AD模型小鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力，同時(shí)具有增強(qiáng)HPG軸功能及神經(jīng)保護(hù)作用。該結(jié)果為“蓯蓉散，久服至老不忘”的論述提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。為進(jìn)一步探究蓯蓉散的作用機(jī)制，本研究應(yīng)用雄激素受體拮抗劑氟他胺干預(yù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)氟他胺能在一定程度上阻斷蓯蓉散對(duì)晚發(fā)型AD模型小鼠認(rèn)知功能、海馬區(qū)組織形態(tài)的改善作用。說明雄激素是蓯蓉散腦保護(hù)及改善認(rèn)知功能作用的重要執(zhí)行者。由此推斷蓯蓉散可通過增強(qiáng)HPG軸功能，提高血清雄激素濃度，從而抵抗Aβ1～42的神經(jīng)毒性作用。

4 結(jié) 論

單側(cè)性腺切除術(shù)結(jié)合雙側(cè)海馬齒狀回Aβ1～42注射能有效復(fù)制晚發(fā)型AD認(rèn)知功能下降、海馬神經(jīng)元丟失及HPG軸功能下降的行為學(xué)及病理生理學(xué)特點(diǎn)。蓯蓉散改善晚發(fā)型AD認(rèn)知障礙的作用機(jī)制可能為增強(qiáng)HPG軸功能，提高血清雄激素水平，進(jìn)而減少Aβ1～42誘導(dǎo)的神經(jīng)元丟失。