黃敏

川崎病是一種好發(fā)于5歲以下兒童的急性發(fā)熱性疾病，其主要病理特征為中小動(dòng)脈血管炎，侵犯冠狀動(dòng)脈（簡(jiǎn)稱(chēng)冠脈）可引起冠脈擴(kuò)張和動(dòng)脈瘤，遠(yuǎn)期可發(fā)生狹窄性病變、AMI乃至猝死，已成為發(fā)達(dá)國(guó)家兒童獲得性心臟病的主要病因之一。目前，川崎病的診斷仍依賴(lài)臨床特征的組合，受評(píng)估者主觀判斷影響，早期明確診斷困難，易遺漏癥狀、體征不典型的不完全性川崎病，部分確診患兒對(duì)靜脈注射免疫球蛋白（intravenous immunoglobulin，IVIG）治療反應(yīng)不敏感，診治的延誤進(jìn)一步導(dǎo)致冠脈病變發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)升高，損害患兒健康，給患兒家庭帶來(lái)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[1］。因此，尋找生物標(biāo)志物作為診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”是臨床上川崎病診治亟待解決的問(wèn)題，探索特異性治療靶標(biāo)是實(shí)現(xiàn)川崎病精準(zhǔn)醫(yī)療的必然方向。

近年來(lái)，研究者們借助高通量測(cè)序和質(zhì)譜技術(shù)，對(duì)川崎病患者的血漿、尿液、外泌體、組織細(xì)胞，以及相關(guān)動(dòng)物模型中的物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定和組學(xué)分析，積累了大量生物信息數(shù)據(jù)。目前，主流觀點(diǎn)認(rèn)為川崎病是遺傳易感個(gè)體受病原刺激后免疫系統(tǒng)異常激活觸發(fā)的炎癥風(fēng)暴，其中蘊(yùn)含著復(fù)雜的多信號(hào)交互機(jī)制，尤其適合開(kāi)展組學(xué)研究，系統(tǒng)性分子特異性變化的過(guò)程正是遺傳和環(huán)境交互作用的結(jié)果。組學(xué)為全面了解川崎病發(fā)病機(jī)制、發(fā)掘生物標(biāo)志物提供了豐富的數(shù)據(jù)資源，與此同時(shí)，數(shù)據(jù)的爆發(fā)增長(zhǎng)也使研究者面臨重大挑戰(zhàn)，即如何從海量的數(shù)據(jù)中獲取對(duì)科學(xué)探索和轉(zhuǎn)化應(yīng)用有價(jià)值的關(guān)鍵信息；如何使實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)更趨合理，選用最適宜的前沿技術(shù)以充分利用珍貴的臨床樣本，節(jié)約成本；如何將計(jì)算機(jī)技術(shù)與生物信息深度融合以實(shí)現(xiàn)更深層次的數(shù)據(jù)挖掘，這些都是科學(xué)技術(shù)發(fā)展帶來(lái)的難點(diǎn)和痛點(diǎn)。

1 基因組學(xué)

基因組學(xué)研究提供了川崎病遺傳易感性、IVIG治療敏感性、冠狀動(dòng)脈損傷（coronary arterylesion，CAL）發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)和疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)信息。全基因組關(guān)聯(lián)分析（genome wide association study，GWAS）對(duì)大規(guī)模群體DNA樣本進(jìn)行高密度遺傳標(biāo)記分型，包括單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）和拷貝數(shù)變異（copy number variation，CNV）等，揭示基因與表型的關(guān)聯(lián)。目前研究較多的川崎病易感基因有1，4，5-三磷酸肌醇3激酶C（inositol-1，4，5-trisphosphate3-kinase C，ITPKC）、FCGR2A、半胱天冬蛋白酶3（cysteiny laspartate specific proteinase 3，CASP3）、B淋巴酪氨酸激酶（B lymphoid tyrosine kinase，BLK）、CD40和HLA等。ITPKC作為鈣離子（Ca2+）／活化的T細(xì)胞核因子（nuclear factor of activated T cell，NFAT）通路的第二信使，可抑制T細(xì)胞活化，CASP3編碼caspase-3調(diào)控未成熟細(xì)胞凋亡，F(xiàn)CGR2A在樹(shù)突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞表面表達(dá)低親和力IgG抗體Fc段受體，BLK則參與B細(xì)胞受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，且對(duì)小鼠體內(nèi)γδT細(xì)胞發(fā)育起關(guān)鍵作用，CD40表達(dá)于B細(xì)胞、單核或巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和脂肪細(xì)胞表面，這些基因多態(tài)性引起免疫細(xì)胞異常激活，細(xì)胞因子釋放，ITPKC和CASP3遺傳變異的協(xié)同作用可能導(dǎo)致IVIG無(wú)應(yīng)答或高CAL風(fēng)險(xiǎn)的發(fā)生[2］。盡管已經(jīng)鑒定出大量川崎病相關(guān)的遺傳變異位點(diǎn)，但只有少數(shù)研究得出一致的關(guān)聯(lián)性，多數(shù)易感基因與川崎病的關(guān)聯(lián)在不同地區(qū)、種族或性別的研究中顯示出不同的結(jié)果，不同人群間風(fēng)險(xiǎn)等位基因頻率亦存在差異。目前，川崎病易感基因研究可解釋一部分川崎病流行病學(xué)特征和發(fā)病機(jī)制，但其在臨床場(chǎng)景中用于早期診斷的證據(jù)尚不充分，其臨床轉(zhuǎn)化更多指向高危人群的篩選，指導(dǎo)特異性藥物的應(yīng)用。FCGR2A基因功能研究為明確IVIG治療川崎病的效應(yīng)原理提供了生物學(xué)基礎(chǔ)，Ca2+／NFAT通路抑制劑他克莫司和環(huán)孢素A或可作為IVIG無(wú)應(yīng)答者的補(bǔ)救治療。

DNA是生命體遺傳信息的承載者，隨著遺傳學(xué)研究的進(jìn)展，研究者們發(fā)現(xiàn)表型不僅由基因完全決定，在不改變DNA序列的情況下對(duì)基因進(jìn)行的各種修飾同樣影響著個(gè)體的分化發(fā)育和疾病進(jìn)程，聚焦基因表觀修飾的研究被稱(chēng)為表觀基因組學(xué)。DNA甲基化是最早被發(fā)現(xiàn)、最為典型，也是川崎病中研究最為廣泛的表觀修飾方式，甲基與基因組胞嘧啶-磷酸-鳥(niǎo)嘌呤（Cp G）島共價(jià)結(jié)合，調(diào)節(jié)基因表達(dá)，低甲基化水平可引發(fā)基因活化增強(qiáng)。川崎病相關(guān)基因大多處于低甲基化狀態(tài)，集中呈現(xiàn)在炎癥反應(yīng)、先天免疫反應(yīng)和凝血反應(yīng)，以及血小板活化、破骨細(xì)胞分化和趨化因子信號(hào)途徑等通路，與川崎病全身高炎癥狀態(tài)和冠脈病變形成相關(guān)。ITPKC啟動(dòng)子區(qū)域甲基化與參與NLRP3炎性小體激活[3］，F(xiàn)CGR2A啟動(dòng)子甲基化與川崎病易感性和IVIG治療結(jié)果之間存在顯著關(guān)聯(lián)，其啟動(dòng)子Cp G位點(diǎn)甲基化水平可作為IVIG治療方案優(yōu)化的重要指標(biāo)[4］。通過(guò)比較川崎病患兒接受IVIG治療前后的DNA甲基化改變，已證明IVIG可能通過(guò)減少Cp G標(biāo)志物以抑制免疫炎癥的發(fā)生[5］。鑒于DNA本身性質(zhì)的穩(wěn)定性和可擴(kuò)增性，隨著表觀遺傳學(xué)研究的深入和技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展，可以預(yù)見(jiàn)川崎病基因啟動(dòng)子異常甲基化的檢測(cè)在早期診斷和IVIG治療的敏感性預(yù)測(cè)等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。

2 轉(zhuǎn)錄組學(xué)

轉(zhuǎn)錄組學(xué)是研究細(xì)胞表型和功能的一個(gè)重要手段，轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的研究對(duì)象是特定細(xì)胞在特定條件下轉(zhuǎn)錄出來(lái)的所有RNA的總和，主要包括傳統(tǒng)轉(zhuǎn)錄組學(xué)所指的信使RNA（messenger RNA，mRNA）和近年研究火熱的非編碼RNA。川崎病患兒冠脈組織轉(zhuǎn)錄譜表現(xiàn)出抗病毒反應(yīng)特征，包括細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活化和I型IFN誘導(dǎo)的信號(hào)通路上調(diào)[6］，這一發(fā)現(xiàn)支持川崎病的病毒病原學(xué)說(shuō)，并為潛在的致死性冠脈病變高危患兒的免疫調(diào)節(jié)治療提供了方向。IVIG無(wú)應(yīng)答與冠脈病變發(fā)生高度相關(guān)，目前轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究尚未分離到有效預(yù)測(cè)IVIG反應(yīng)性的生物標(biāo)志物，更具分辨力的優(yōu)化算法或可破解這一困局。對(duì)于樣本量較多的復(fù)雜轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，加權(quán)基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析（weighted gene co-expression network analysis，WGCNA）可鑒定表達(dá)模式相似的基因集合，并鑒別模塊中權(quán)重最高的核心基因，研究者利用這一技術(shù)發(fā)現(xiàn)，髓系細(xì)胞激活與川崎病患兒的IVIG無(wú)應(yīng)答相關(guān)，轉(zhuǎn)錄因子IL1R2、GK、HK3、C5orf32、CXCL16、NAMPT和EMILIN2在共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮關(guān)鍵作用[7］。Rambabu等[8］通過(guò)定義基因表達(dá)的“開(kāi)”“關(guān)”開(kāi)發(fā)了一種名為布爾分析的方法，發(fā)現(xiàn)外周血單核細(xì)胞代謝在IVIG無(wú)應(yīng)答中起到了至關(guān)重要的作用。若能對(duì)這些代謝參數(shù)開(kāi)展快速測(cè)定，或可幫助臨床醫(yī)師早期識(shí)別IVIG無(wú)應(yīng)答者，啟動(dòng)替代治療，降低冠脈病變發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)和治療成本。

微RNA（microRNA，miRNA）是川崎病領(lǐng)域研究最廣泛的非編碼RNA，作為一種長(zhǎng)約20 nt的單鏈RNA，可與靶向m RNA直接結(jié)合，參與轉(zhuǎn)錄后水平的基因調(diào)控。大量研究[9-11］數(shù)據(jù)顯示，川崎病患兒體內(nèi)失調(diào)控的miRNA集中參與了TGF-β信號(hào)通路、內(nèi)皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（Endo MT）、凋亡相關(guān)信號(hào)、免疫相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等過(guò)程，提示miRNA調(diào)控在川崎病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。miRNA在體液中普遍易得，檢測(cè)方法成熟，具有成為生物標(biāo)志物的巨大潛力，但由于尚未鑒定出足以用于川崎病診斷的單一miRNA，目前的開(kāi)發(fā)多為基于數(shù)個(gè)miRNA結(jié)合的診斷面板或合并臨床指標(biāo)構(gòu)建診斷模型[12-13］，而現(xiàn)有的研究結(jié)論多來(lái)自單中心、同種族人群，樣本數(shù)量和來(lái)源限制了診斷效能的提升和模型的推廣應(yīng)用。外源性給予miRNA類(lèi)似物或抑制物為實(shí)現(xiàn)川崎病靶向治療提供了新的思路，但是以miR-223為例，綜合多項(xiàng)研究[14-19］結(jié)論顯示，其經(jīng)由不同細(xì)胞組織來(lái)源和效應(yīng)通路在川崎病進(jìn)程中發(fā)揮了迥異的作用，未來(lái)應(yīng)進(jìn)一步明確miRNA在川崎病患兒體內(nèi)的作用網(wǎng)絡(luò)和真實(shí)效應(yīng)，為基于miRNA的靶向藥物開(kāi)發(fā)提供更可靠的有效性和安全性證據(jù)。

傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序是在多細(xì)胞基礎(chǔ)上進(jìn)行的，其得到的是樣本組織或細(xì)胞群中所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的平均水平，丟失了細(xì)胞異質(zhì)性的信息，常忽略豐度較低亞群的表達(dá)特征。單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)克服了這一弊端，從體液或混雜組織中捕獲單個(gè)細(xì)胞，高分辨率地識(shí)別生物組織中以細(xì)胞為單位的轉(zhuǎn)錄組信息，為全面揭示各亞群特異性變化和基因的時(shí)空分布提供了有力工具。本課題組首次應(yīng)用單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（single-cell RNA-sequencing，scRNA-seq）技術(shù)繪制了川崎病患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞免疫圖譜，結(jié)果顯示，相較于健康對(duì)照組，單核細(xì)胞是IVIG治療前主要的差異表達(dá)基因來(lái)源，治療后可見(jiàn)B細(xì)胞豐度下降伴漿細(xì)胞比例升高，B細(xì)胞受體（B cell receptor，BCR）寡克隆擴(kuò)增，以及Ig M／Ig D向IgG／Ig A的同型轉(zhuǎn)化，提示B細(xì)胞分化發(fā)育異常在川崎病的發(fā)生、發(fā)展和IVIG應(yīng)答中扮演重要角色，此外T細(xì)胞受體（TCR）和BCR測(cè)序結(jié)果顛覆了以往對(duì)川崎病病原學(xué)的認(rèn)知，提示其免疫激活更可能由特定抗原而非超抗原引發(fā)[20］，但后續(xù)Fan等[21］開(kāi)展的scRNA-seq結(jié)果顯示川崎病患兒B細(xì)胞減少而自然殺傷細(xì)胞增多，這與本課題組研究的結(jié)論不一致，可能是受到樣本量的限制。目前，sc RNA-seq技術(shù)還存在諸多問(wèn)題與爭(zhēng)議，高昂的成本使其大規(guī)模應(yīng)用難以實(shí)現(xiàn)，完全基于機(jī)器學(xué)習(xí)算法的聚類(lèi)和分析得到的生物學(xué)意義可靠性有待商榷，表達(dá)譜層面的解釋距離臨床價(jià)值還相去甚遠(yuǎn)。目前公開(kāi)發(fā)表的川崎病scRNA-seq數(shù)據(jù)樣本來(lái)源單一，以外周血單個(gè)核細(xì)胞為主，對(duì)照組僅有健康和感染性發(fā)熱，IVIG治療無(wú)應(yīng)答川崎病患兒的單細(xì)胞基因表達(dá)情況尚為空白，未來(lái)應(yīng)當(dāng)收集更多病程階段和臨床亞型的病例樣本，設(shè)置包括各類(lèi)血管炎、自身免疫性疾病等在內(nèi)的豐富對(duì)照，優(yōu)化數(shù)據(jù)分析方法和流程，對(duì)已有數(shù)據(jù)開(kāi)展更具深度和臨床意義的挖掘，驅(qū)動(dòng)科研成果向技術(shù)應(yīng)用轉(zhuǎn)化，指導(dǎo)川崎病精細(xì)分型和精準(zhǔn)診療。

3 蛋白質(zhì)組學(xué)

蛋白質(zhì)組學(xué)的研究對(duì)象是特定時(shí)間、空間下生物體、組織或細(xì)胞全部蛋白質(zhì)的集合，旨在探索其組成、結(jié)構(gòu)、功能和相互作用。與基因組和轉(zhuǎn)錄組相比，蛋白質(zhì)作為生命活動(dòng)的執(zhí)行分子，能更直接反映機(jī)體生物學(xué)功能和動(dòng)態(tài)變化。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)包括分離、鑒定和定量，以及后續(xù)的生物信息分析處理，目前最主流的是基于質(zhì)譜技術(shù)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究，常用定量方法包括蛋白質(zhì)非標(biāo)記定量技術(shù)（label-free）、iTRAQ／TMT、DIA／SWATH等。近年來(lái)，蛋白質(zhì)組學(xué)已廣泛應(yīng)用于常見(jiàn)的心血管系統(tǒng)疾病如高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、心力衰竭、擴(kuò)張型心肌病等。

血漿蛋白標(biāo)志物一直是臨床場(chǎng)景下分子診斷的主力軍，以氨基末端腦利鈉肽前體（NTproBNP）為代表的經(jīng)典指標(biāo)可提示川崎病活動(dòng)但診斷特異性明顯不足，因此迫切需要開(kāi)發(fā)更具代表性的蛋白質(zhì)分子。借助日新月異的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，研究者們現(xiàn)已鑒別出與川崎病相關(guān)的多種蛋白質(zhì)，這些蛋白質(zhì)在炎癥、免疫應(yīng)答、血管生成和內(nèi)皮細(xì)胞損傷等過(guò)程中發(fā)揮作用。S100A蛋白家族與炎癥和免疫調(diào)節(jié)相關(guān)，多個(gè)S100A蛋白家族成員的水平在川崎病急性期升高，其中S100A12受到較多關(guān)注，S100A12與sRAGE的比值可能有助于評(píng)估IVIG無(wú)應(yīng)答的風(fēng)險(xiǎn)[22］；S100A4體外引起內(nèi)皮細(xì)胞松散，更易受中性粒細(xì)胞侵襲，有希望成為川崎病冠脈病變標(biāo)志物及潛在治療靶點(diǎn)[23］。其他篩選出的川崎病相關(guān)血漿蛋白還包括甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（TTR）、脂多糖結(jié)合蛋白（LBP）和富含亮氨酸糖蛋白（LRG1）等[24-25］，盡管這些分子的表達(dá)豐度達(dá)到了微陣列ELISA檢測(cè)的要求，能夠?qū)崿F(xiàn)快速準(zhǔn)確定量，具備臨床應(yīng)用的潛質(zhì)，但其對(duì)川崎病的鑒別診斷效能還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。此外，在以尋找臨床生物標(biāo)志物為導(dǎo)向的蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，尿液樣本具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，因其取樣過(guò)程完全無(wú)創(chuàng)，可重復(fù)性高，且尿液蛋白質(zhì)成分簡(jiǎn)單，易于檢測(cè)分析，是標(biāo)志物分子的良好來(lái)源。尿液蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)已鑒定出免疫調(diào)節(jié)分子meprin A、內(nèi)皮和心肌損傷相關(guān)蛋白細(xì)絲蛋白c在川崎病患兒尿液中高表達(dá)，無(wú)論是從疑似患者中識(shí)別川崎病，還是對(duì)不典型患者明確診斷層面，上述分子均展現(xiàn)出良好的效能，優(yōu)于目前使用的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)ESR和CRP[26］。

外泌體是一種直徑為30～100 nm的細(xì)胞外囊泡，內(nèi)容物包含豐富的RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)成分，參與細(xì)胞間通訊。脂質(zhì)雙分子層的保護(hù)作用使得外泌體能在體液內(nèi)穩(wěn)定存在，維持內(nèi)容物的理化性質(zhì)，頗具臨床診斷價(jià)值。與細(xì)菌感染性患兒相比，川崎病患兒血清外泌體差異蛋白在補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)中顯著富集，候選蛋白纖維蛋白原γ（FGG）和補(bǔ)體成分1q子成分c（C1QC）有望成為川崎病的補(bǔ)充診斷標(biāo)志物[27］。比較川崎病患兒接受IVIG治療前后血清外泌體的蛋白質(zhì)分布發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)體C3、載脂蛋白A-Ⅳ和胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白復(fù)合酸不穩(wěn)定亞基存在差異，或可用于IVIG療效監(jiān)測(cè)[28］。伴冠脈病變的川崎病患兒血清外泌體中TN、LRG1、RBP4和APOA4差異表達(dá)，這些蛋白質(zhì)參與了免疫、炎癥、發(fā)育、凋亡和黏附等生物學(xué)過(guò)程，但尚未證明其與冠脈病變有特異性相關(guān)，現(xiàn)有研究較小的樣本量可能掩蓋了兩者關(guān)聯(lián)的真實(shí)性[29］。

4 代謝組學(xué)

核酸和蛋白質(zhì)是生物學(xué)過(guò)程發(fā)生的基礎(chǔ)，但基因組、轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組的分析結(jié)論對(duì)功能狀態(tài)僅有提示作用，體內(nèi)代謝物的變化才是生物事件的真實(shí)反映。代謝組學(xué)是研究生物體被擾動(dòng)后代謝產(chǎn)物種類(lèi)、數(shù)量及其變化規(guī)律的科學(xué)。目前，川崎病代謝組學(xué)研究仍處于起步階段，主要圍繞脂代謝開(kāi)展。日本的一項(xiàng)前瞻性研究[30］全面分析了一組川崎病患兒的血清脂質(zhì)成分并在獨(dú)立隊(duì)列中開(kāi)展驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)急性期氧化磷脂酰膽堿（Ox PC）表達(dá)水平升高，氧化磷脂炎癥信號(hào)的激活參與了冠狀動(dòng)脈炎的發(fā)生，但這一研究結(jié)論僅來(lái)自日本人群，未來(lái)應(yīng)擴(kuò)大樣本的種族和地區(qū)來(lái)源，以探索Ox PC及其相關(guān)產(chǎn)物在廣泛人群中用于冠狀動(dòng)脈瘤預(yù)測(cè)的可能性。在IVIG反應(yīng)性方面，一項(xiàng)基于液相色譜液質(zhì)譜法（LC／MS）的脂質(zhì)組學(xué)研究[31］數(shù)據(jù)顯示，IVIG敏感組和中等反應(yīng)組脂質(zhì)譜表達(dá)模式相似，但I(xiàn)VIG耐藥組脂質(zhì)成分在治療前后有顯著差異，其中溶血磷脂酰膽堿（LPC）和溶血磷脂酰乙醇胺（LPE）在治療前后的差異最大，可用于川崎病患兒IVIG反應(yīng)性分層，兩者與Gunma評(píng)分結(jié)合顯著增高了對(duì)IVIG無(wú)應(yīng)答的診斷效能，因此，測(cè)定血清LPC和LPE有助于在治療前實(shí)現(xiàn)對(duì)患兒IVIG反應(yīng)性的準(zhǔn)確評(píng)估。未來(lái)，應(yīng)擴(kuò)大川崎病代謝組學(xué)研究范圍，納入其他小分子代謝物如氨基酸、有機(jī)酸、核苷酸等，深入分析川崎病表型與各種代謝變化的關(guān)聯(lián)，發(fā)掘代謝標(biāo)志物以指導(dǎo)川崎病診斷分型、CAL風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)、療效與安全性評(píng)估等臨床應(yīng)用。然而，目前的分析技術(shù)所能檢測(cè)并注釋的代謝物種類(lèi)數(shù)量非常有限，生物機(jī)體本身就是一個(gè)動(dòng)態(tài)的、多因素調(diào)控復(fù)雜體系，地理、氣候、藥物等外界因素，以及種族、遺傳背景、健康狀況等內(nèi)在環(huán)境都會(huì)引起代謝物的聯(lián)動(dòng)變化，對(duì)代謝物的簡(jiǎn)單檢測(cè)可能很難精確反映川崎病的病程狀態(tài)。

5 展 望

自1967年日本學(xué)者川崎富作首次報(bào)道川崎病，50余年來(lái)隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步和科學(xué)家的不懈探索，對(duì)川崎病的認(rèn)識(shí)已經(jīng)貫穿整個(gè)基因表達(dá)過(guò)程，一方面，現(xiàn)在比以往任何時(shí)候都更加接近川崎病發(fā)病的真相；另一方面，臨床上川崎病診療仍有許多懸而未決的難題，早期診斷是減輕疾病負(fù)擔(dān)的首要任務(wù)，也是目前臨床實(shí)施最為困難的環(huán)節(jié)。2017版美國(guó)心臟協(xié)會(huì)（AHA）《川崎病的診斷、治療和長(zhǎng)期管理：美國(guó)心臟協(xié)會(huì)給衛(wèi)生專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)聲明》[32］中明確要求診斷川崎病需滿足發(fā)熱≥5 d這一條件。而最新的日本《川崎病診斷指南（第6次修訂版）》[33］已刪除對(duì)特定熱程的要求，并將卡介苗瘢痕發(fā)紅納入早期臨床特征。我國(guó)2022年發(fā)布的《川崎病診斷和急性期治療專(zhuān)家共識(shí)》[34］采用了日本指南的部分更新，但對(duì)不完全川崎病的診斷仍要求滿足發(fā)熱≥5 d這一條件。因此，目前仍沒(méi)有一套能在不同種族和地區(qū)推廣的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)流程可幫助臨床醫(yī)師快速、準(zhǔn)確診斷川崎病，尋找生物標(biāo)志物或是解開(kāi)這一困局的最佳答案。人類(lèi)基因組計(jì)劃如一陣春風(fēng)將組學(xué)研究吹拂到醫(yī)療科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，川崎病特異性生物標(biāo)志物開(kāi)發(fā)迎來(lái)了前所未有的浪潮，大量不同分子水平的生物信息極速累積，運(yùn)算能力不斷飛躍，DNA、RNA、蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物等各種新標(biāo)志物層出不窮。但在熱潮之下，研究者們?nèi)孕枥潇o思考，過(guò)度膨脹的生物數(shù)據(jù)應(yīng)用價(jià)值如何，套路化的分析流程是否使結(jié)論假象叢生；標(biāo)志物從實(shí)驗(yàn)室走向臨床實(shí)踐的過(guò)程中還面臨著鑒定方法不便捷、診斷效能不穩(wěn)定等問(wèn)題；單一組學(xué)標(biāo)志物在川崎病準(zhǔn)確診斷方面尚無(wú)突破性進(jìn)展，多組學(xué)信息整合分析或可彌補(bǔ)這一不足，但又存在價(jià)格高和用時(shí)長(zhǎng)的劣勢(shì)，目前在臨床應(yīng)用的性?xún)r(jià)比較低。對(duì)于已經(jīng)開(kāi)發(fā)的生物標(biāo)志物，未來(lái)應(yīng)當(dāng)擴(kuò)大樣本量、納入多種族人群、增加對(duì)照類(lèi)型、聯(lián)合多中心數(shù)據(jù)進(jìn)一步驗(yàn)證，加入微生物組、空間組等擴(kuò)大數(shù)據(jù)類(lèi)型，繼續(xù)推進(jìn)單一標(biāo)志物開(kāi)發(fā)，優(yōu)化現(xiàn)有模型提高特異度和靈敏度以達(dá)到臨床應(yīng)用要求，多路徑實(shí)現(xiàn)川崎病的早期精確診斷，預(yù)測(cè)治療反應(yīng)性以盡早啟動(dòng)替代治療，減少心血管事件發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，使患兒及其家庭真正受益。