王青青 魏 芳 劉瑩瑩 李立文 張秀剛

在中國非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）的發(fā)病率較高，且隨著人們生活水平的提高及生活方式的改變，近年來其發(fā)病率呈升高趨勢；在中國NAFLD 的患病率為20.09%，其已成為重要的公共健康問題之一[1-2]。既往有研究認為，腸道菌群失調(diào)、肝纖維化在NAFLD 的發(fā)生和進展過程中具有重要的作用[3-4]。內(nèi)皮素（ET）作為調(diào)節(jié)心血管功能的重要因子，具有收縮血管、促進細胞增殖等功能[5]。研究表明，潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道菌群改變是其血清ET 水平的獨立影響因素[6]。C 型凝集素-1（Dectin-1）是一類含有C 型凝集素樣結(jié)構(gòu)域的模式識別受體，其與真菌感染疾病關(guān)系密切[7]。由此推測，NAFLD 患者血清ET、Dectin-1 水平可能與小腸細菌過度生長（SIBO）及肝纖維化程度有關(guān)，本文對此進行探討。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象

選擇2021 年10 月至2022 年10 月滄州市中心醫(yī)院收治的88 例NAFLD 患者作為研究對象（設為NAFLD 組），其中男性58 例，女性30 例，年齡30～80 歲，平均年齡為（50.66±5.62）歲。另選擇同期在該院體檢的65 名健康體檢者設為對照組，其中男性45 人，女性20 人，年齡31～80 歲，平均年齡為（50.95±5.84）歲。納入標準：（1）NAFLD患者均符合《非酒精性脂肪性肝病防治指南（2018年更新版）》[8]中的診斷標準，并結(jié)合實驗室相關(guān)檢查確診；（2） 受試者及家屬均簽署知情同意書；（3）健康體檢者均身心健康。排除標準：（1）伴有重要臟器功能障礙者；（2）合并自身免疫病、代謝性疾病、遺傳性疾病、血液性疾病、凝血功能障礙疾病及惡性腫瘤者；（3）合并病毒性肝炎、酒精性肝病、藥物性肝損傷及原發(fā)性膽汁性膽管炎者；（4）近1 個月內(nèi)使用過抗生素、乳果糖和抑酸劑者；（5）妊娠期或哺乳期者；（6）既往有精神病史者；（7）臨床資料缺失者；（8）不配合治療、中途退出研究或死亡者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核批準。

1.2 血清ET、Dectin-1 水平檢測

采用ELISA 法檢測受試者血清ET 和Dectin-1水平。抽取所有受試者清晨空腹外周靜脈血5 mL，室溫下以3 000 r/min 離心15 min 后取上清液，使用ELISA 試劑盒（購自美國BD 公司）檢測血清ET、Dectin-1 水平，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.3 SIBO 的診斷方法

使用EC60 Gastrolyzer 氫氣檢測儀（購自英國Bedfont 公司）進行乳果糖氫呼氣試驗（LHBT）以檢測SIBO 情況[9]。檢測前1 日晚上禁食牛奶、奶制品、豆制品、富含纖維素食品及辛辣刺激食物，并確保在進行LHBT 前已禁食12 h 及以上。檢測當日先測量空腹氫呼氣濃度（即基礎值），隨后口服10 g 乳果糖（購自荷蘭蘇威制藥公司），每隔15 min 收集呼出氣體并測定氫濃度，持續(xù)2 h。以各時間節(jié)點的氫呼氣濃度值減去基礎值作為各時間節(jié)點的氫呼氣濃度實際值。符合以下任意1 條可判定為SIBO 陽性：（1）基礎值＞20 ppm，且每隔30 min 重復測定2 次均顯示氫呼氣濃度值＞20 ppm；（2）明顯的雙峰圖形（早期小腸峰和后期結(jié)腸峰）；（3）口服乳果糖后開始產(chǎn)氫氣時間＜90 min，氫呼氣濃度升高的絕對值達到20 ppm[9]。將90 min 內(nèi)的7 次測量值之和作為LHBT 集值，其能夠間接反映小腸內(nèi)細菌生長情況。

1.4 肝纖維化病理分期

NAFLD 患者在B 超定位下行肝臟活體組織穿刺術(shù)，并根據(jù)《肝纖維化中西醫(yī)結(jié)合診療共識意見（2017 年）》[10]判斷病理結(jié)果。肝纖維化病理分期標準如下：S0 期表示無明顯肝纖維化（設為無肝纖維化組，n＝28），S1～S2 期表示輕度肝纖維化（設為輕度肝纖維化組，n＝36），S3～S4 期表示重度肝纖維化（設為重度肝纖維化組，n＝24）。

1.5 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 24.0 軟件進行統(tǒng)計學分析。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，2 組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，組內(nèi)比較采用SNK-q檢驗。計數(shù)資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。采用Pearson相關(guān)系數(shù)法分析NAFLD 患者外周血ET、Dectin-1水平與SIBO 的相關(guān)性。采用ROC 曲線分析外周血ET、Dectin-1 水平對NAFLD 患者肝纖維化的評估價值。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 NAFLD 組與對照組的SIBO 陽性率及血清ET、Dectin-1 水平比較

NAFLD 組的SIBO 陽性率為62.50%，顯著高于對照組（3.08%），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。與對照組相比，NAFLD 組的血清ET、Dectin-1 水平均顯著升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P均＜0.001）。見表1。

表1 NAFLD 組與對照組的SIBO 陽性率及血清ET、Dectin-1 水平比較

2.2 SIBO 陽性組與SIBO 陰性組的LHBT 集值及血清ET、Dectin-1 水平比較

如表2 所示，與SIBO 陰性組相比，SIBO 陽性組的LHBT 集值及血清ET、Dectin-1 水平均顯著升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P均＜0.001）。

表2 SIBO 陽性組與SIBO 陰性組的LHBT 集值及血清ET、Dectin-1 水平比較

2.3 血清ET、Dectin-1 水平與LHBT 集值的相關(guān)性分析

Pearson 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，NAFLD 組血清ET、Dectin-1 水平與LHBT 集值均呈正相關(guān)（r＝0.552，P＜0.05；r＝0.451，P＜0.05）。

2.4 各組血清ET、Dectin-1 水平比較

如表3 所示，與對照組相比，無肝纖維化組、輕度肝纖維化組和重度肝纖維化組的血清ET、Dectin-1 水平均顯著升高（P均＜0.05）；與無肝纖維化組相比，輕度肝纖維化組和重度肝纖維化組的血清ET、Dectin-1 水平均顯著升高（P均＜0.05）；與輕度肝纖維化組相比，重度肝纖維化組的血清ET、Dectin-1 水平均顯著升高（P均＜0.05）。4 組血清ET、Dectin-1 水平的差異均有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05）。

表3 各組血清ET、Dectin-1 水平比較

2.5 血清ET、Dectin-1 水平對NAFLD 患者肝纖維化的評估價值

ROC 曲線分析結(jié)果顯示，血清ET、Dectin-1水平評估NAFLD 患者肝纖維化的最佳截斷值分別為65.63 pg/mL、18.52 pg/mL。血清ET 和Dectin-1聯(lián)合檢測評估NAFLD 患者肝纖維化的曲線下面積（AUC）均大于單項檢測，差異均有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05），且聯(lián)合檢測的特異度較高。血清ET 與Dectin-1 水平評估NAFLD 患者肝纖維化的AUC、敏感度、特異度差異均無統(tǒng)計學意義（P均＞0.05）。見表4。

圖1 血清ET、Dectin-1 水平評估NAFLD 患者肝纖維化的ROC曲線

表4 血清ET、Dectin-1 水平對NAFLD 患者肝纖維化的評估價值

3 討論

SIBO 是一種由于小腸內(nèi)細菌數(shù)量增加或種類增多而引起消化吸收障礙的臨床綜合征，其與NAFLD 的發(fā)生和進展密切相關(guān)[11-12]。研究發(fā)現(xiàn)，肝纖維化是NAFLD 進展為肝硬化及肝細胞癌的基礎性病變[13]。因此，早期準確診斷NAFLD 合并SIBO 或肝纖維化有助于延緩病程進展。ET 是一種具有多種生物效應的活性肽，可參與調(diào)控血管平滑肌細胞的增殖、遷移和基因表達等[14]。Dectin-1屬于NK 細胞受體樣C 型凝集素，作為Ⅱ型跨膜受體，參與了機體防御真菌病原體的天然免疫反應[15]。

本研究結(jié)果顯示，NAFLD 組的血清ET、Dectin-1 水平均顯著高于對照組，這提示血清ET、Dectin-1 可能參與了NAFLD 的發(fā)生過程；NAFLD組的SIBO 陽性率顯著高于對照組，這表明NAFLD患者普遍存在小腸細菌感染。此外，NAFLD 患者中SIBO 陽性組血清ET、Dectin-1 水平均顯著高于SIBO 陰性組，這提示血清ET、Dectin-1 水平可反映NAFLD 患者合并SIBO 狀況。LHBT 集值是目前反映小腸內(nèi)細菌生長情況的常用指標[16-17]。本研究結(jié)果表明，NAFLD 患者血清ET、Dectin-1 水平與LHBT 集值均呈正相關(guān)，這提示NAFLD 患者血清ET、Dectin-1 水平越高，小腸細菌感染越嚴重。SIBO 可導致腸道微生態(tài)失衡，同時可誘導免疫細胞釋放炎癥因子，加重肝功能損傷，從而引發(fā)NAFLD。ET 主要分布于結(jié)腸、回腸、空腸黏膜細胞內(nèi)，可促進腸系膜血管和胃腸道平滑肌收縮，并促進平滑肌細胞增殖，從而加重炎癥反應。本研究結(jié)果顯示，NAFLD 組血清ET 水平升高，導致其介導的炎癥反應增強，使小腸黏膜下微血管收縮，血流量減少，腸道局部缺血、缺氧，進而導致腸道組織損傷，而腸道組織損傷可影響小腸動力功能，進而增高SIBO 的發(fā)生風險[18]。Dectin-1 對于維持胃腸道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定具有重要作用，其水平升高可加重腸道炎癥反應，進而損傷腸道上皮屏障功能，減弱其防御細菌及其他病原體的能力[19]。由此推測，NAFLD 患者血清ET、Dectin-1 水平升高可誘發(fā)SIBO。

本研究結(jié)果顯示，與對照組相比，無肝纖維化組、輕度肝纖維化組和重度肝纖維化組的血清ET、Dectin-1 水平均顯著升高，且隨著肝纖維化程度加重，血清ET、Dectin-1 水平隨之升高。ROC 曲線分析結(jié)果顯示，血清ET、Dectin-1 水平聯(lián)合檢測評估NAFLD 患者肝纖維化的AUC 為0.912，均大于單項檢測，這提示聯(lián)合檢測評估NAFLD 患者肝纖維化具有一定的應用價值，可為臨床上及時采取積極有效的干預治療措施提供指導，從而改善臨床結(jié)局。炎癥反應是肝纖維化發(fā)生和進展過程中的重要因素。ET 是一種有效的血管收縮劑，其水平升高不僅可以刺激血管平滑肌細胞增殖，還可以促進纖維化和炎癥反應[20]。Dectin-1 具有促進機體分泌促炎細胞因子的作用，有研究報道，沉默Dectin-1可顯著改善心肌梗死后小鼠的心肌纖維化[21]。由此推測，NAFLD 患者血清ET、Dectin-1 水平升高可導致肝纖維化發(fā)生。

綜上所述，與健康人群相比，NAFLD 患者外周血ET、Dectin-1 水平均顯著升高，且其水平均與SIBO 陽性率呈正相關(guān)。NAFLD 患者外周血ET 與Dectin-1 聯(lián)合檢測評估患者肝纖維化具有一定應用價值。本研究為單中心數(shù)據(jù)分析，納入的樣本量較小，結(jié)論存在局限性；此外，本研究未涉及血清ET 和Dectin-1 水平與常規(guī)指標聯(lián)合檢測評估肝纖維化的價值，以及該2 項指標與NAFLD 患者其他臨床病理特征的關(guān)系，今后需加大樣本量并進行深入分析。