尤紅俊　茍棋玲　趙倩倩　董夢(mèng)雅

摘要目的：利用加權(quán)基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析（WGCNA）聯(lián)合機(jī)器學(xué)習(xí)法篩選缺血性心肌病（ICM）的生物標(biāo)記，并進(jìn)行免疫浸潤(rùn)分析。方法：對(duì)來(lái)自基因表達(dá)綜合數(shù)據(jù)庫(kù)（GEO）的ICM轉(zhuǎn)錄譜進(jìn)行差異分析。對(duì)差異表達(dá)基因（DEGs）進(jìn)行基因本體（GO）富集分析和京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路富集分析。整合WGCNA和套索回歸（LASSO）分析，篩選出ICM的生物標(biāo)記。繪制受試者工作特征曲線（ROC）評(píng)估其診斷效能，并進(jìn)行免疫浸潤(rùn)分析。結(jié)果：ICM左心室組織中有517個(gè)DEGs，主要參與細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成、含膠原蛋白的細(xì)胞外基質(zhì)等；同時(shí)，DEGs參與磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）信號(hào)通路、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)加工、酪氨酸激酶/信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活因子（JAK/STAT）信號(hào)通路、糖尿病并發(fā)癥中的晚期糖基化終產(chǎn)物/晚期糖基化終產(chǎn)物受體（AGE/RAGE）信號(hào)通路、細(xì)胞凋亡、缺氧誘導(dǎo)因子1（HIF-1）信號(hào)通路等。鑒定出的生物標(biāo)記無(wú)孢蛋白（ASPN）和高溫需求絲氨酸肽酶1（HTRA1）具備良好的診斷效能。T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)在ICM的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，并與ASPN和HTRA1顯著相關(guān)。結(jié)論：ASPN和HTRA1可作為ICM的生物標(biāo)記，并與T淋巴細(xì)胞顯著相關(guān)，在ICM的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。

關(guān)鍵詞缺血性心肌病；加權(quán)基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析；機(jī)器學(xué)習(xí)；生物標(biāo)記；免疫浸潤(rùn)

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2023.23.005

缺血性心肌?。╥schemic cardiomyopathy，ICM）是指因冠狀動(dòng)脈病變引起的左心室收縮功能障礙，是心力衰竭常見的病因之一。冠心病的全球大流行造成多達(dá)2 600萬(wàn)人受到心力衰竭的影響，全球衛(wèi)生系統(tǒng)損失超過(guò)300億美元［1-2］。ICM是一種慢性免疫系統(tǒng)激活狀態(tài)，免疫系統(tǒng)的失調(diào)、心肌梗死后的炎癥反應(yīng)及纖維化的過(guò)度活躍可導(dǎo)致心肌梗死后心肌的不良重塑，從而導(dǎo)致心力衰竭的發(fā)生［3］。炎癥和免疫反應(yīng)的治療性調(diào)節(jié)可能為預(yù)防梗死后心力衰竭帶來(lái)希望，因而開發(fā)精準(zhǔn)的生物標(biāo)記，并從免疫-炎癥角度探索其致病機(jī)制，對(duì)提高ICM的診治水平有著積極的臨床意義。

加權(quán)基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析（weighted gene co-expression network analysis，WGCNA）是一種常用的系統(tǒng)生物信息學(xué)方法，不僅用于構(gòu)建基因網(wǎng)絡(luò)，還用于檢測(cè)基因模塊和識(shí)別模塊中的核心基因和/或分子標(biāo)志物。WGCNA適用于復(fù)雜的多樣本轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，通過(guò)合適的加權(quán)系數(shù)對(duì)基因間的相關(guān)系數(shù)進(jìn)行加權(quán)運(yùn)算，使得基因網(wǎng)絡(luò)近似服從無(wú)尺度網(wǎng)絡(luò)分布，從而具有更好的統(tǒng)計(jì)性能，避免了由大量的多重校正導(dǎo)致的假陰性結(jié)果［4］。研究表明，WGCNA比未加權(quán)的網(wǎng)絡(luò)具有更穩(wěn)健的結(jié)果［5］。WGCNA不是將單個(gè)基因與表型聯(lián)系起來(lái)，而是關(guān)注少數(shù)模塊與性狀之間的關(guān)系，緩解了微陣列或測(cè)序數(shù)據(jù)分析中固有的多重檢驗(yàn)問(wèn)題，可更準(zhǔn)確地篩選出與疾病關(guān)聯(lián)密切的特定模塊及模塊內(nèi)基因［6］。

本研究通過(guò)對(duì)基因表達(dá)綜合數(shù)據(jù)庫(kù)（gene expression omnibus，GEO）中大樣本量的ICM病人和健康對(duì)照者左心室組織轉(zhuǎn)錄譜芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息學(xué)分析，包括運(yùn)用R語(yǔ)言篩選出差異表達(dá)基因（differentially expressed genes，DEGs），并進(jìn)行基因本體（Gene Ontology，GO）和京都基因與基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析，探討DEGs在ICM發(fā)生發(fā)展中的作用。同時(shí)，進(jìn)行WGCNA分析，計(jì)算基因之間的相關(guān)性，構(gòu)建加權(quán)基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)，與臨床表型相結(jié)合進(jìn)一步分析基因與臨床表型之間的關(guān)系，篩選出ICM候選分子標(biāo)志物，并整合機(jī)器學(xué)習(xí)法套索回歸（least absolute shrinkage and selection operator，LASSO）分析，提高分子標(biāo)志物鑒定的準(zhǔn)確性，再進(jìn)行免疫浸潤(rùn)分析，探索鑒定的分子標(biāo)志物與免疫細(xì)胞關(guān)聯(lián)性，從而揭示ICM免疫相關(guān)分子機(jī)制，為臨床診療提供更多理論依據(jù)。

1資料與方法

1.1數(shù)據(jù)下載及預(yù)處理

在GEO數(shù)據(jù)庫(kù)［7-8］中搜索“ischemic cardiomyopathy”，獲取數(shù)據(jù)集GSE5406、GSE42955和GSE57338。剔除非ICM病人，保留ICM病人和健康對(duì)照的左心室心肌組織樣本，樣本量及資源貢獻(xiàn)見表1。用“sva”包合并GSE5406和GSE42955，作為訓(xùn)練集，GSE57338作為驗(yàn)證集。

表1數(shù)據(jù)集信息數(shù)據(jù)集平臺(tái)樣本量（例）貢獻(xiàn)者GSE5406（訓(xùn)練集）GPL96ICM（108）；健康對(duì)照（16）Cappola T P，Margulies K B，Putt M E，et alGSE42955（訓(xùn)練集）GPL6244ICM（12）；健康對(duì)照（5）Molina-Navarro M M，Roselló-Lletí E，Tarazón E，et alGSE57338（驗(yàn)證集）GPL11532ICM（136）；健康對(duì)照（95）Liu Y，Morley M P，Brandimarto J，et al

1.2差異表達(dá)分析

采用統(tǒng)計(jì)軟件R4.1.1中l(wèi)imma包進(jìn)行基因差異表達(dá)分析。以|fold change（FC）|＞1.2及P＜0.05為差異表達(dá)基因的篩選條件，并以R語(yǔ)言ggplot2包和pheatmap包繪制火山圖和熱圖可視化DEGs。

1.3DEGs富集分析

利于R語(yǔ)音ClusterProfiler包、org.Hs.eg.db包、enrichplot包等對(duì)DEGs進(jìn)行GO和KEGG分析［9-10］。GO分析分別在生物學(xué)過(guò)程（biological processes，BP）、細(xì)胞組分（cellular component，CC）和分子功能（molecular function，MF）3個(gè)方面對(duì)基因進(jìn)行功能注釋［11］。并利用R語(yǔ)言ggplot2包將結(jié)果可視化。P＜0.05被認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.4WGCNA

采用R包WGCNA進(jìn)行WGCNA［5］，并使用“pickSoftThreshold”函數(shù)分析1～20的參數(shù)值。構(gòu)建權(quán)重基因網(wǎng)絡(luò)，選擇最佳軟閾值，既保證網(wǎng)絡(luò)接近無(wú)尺度分布，又保證網(wǎng)絡(luò)平均連通性不會(huì)太小，利于網(wǎng)絡(luò)包含足夠信息以挖掘模塊。在層次聚類樹中，為了保證模塊的可靠性，將基因集的最小數(shù)目設(shè)定為25個(gè)。在構(gòu)建模塊之后，設(shè)定合并閾值為0.25，經(jīng)動(dòng)態(tài)分支切割得到若干合并后的模塊。

1.5關(guān)鍵模塊的鑒定

為了鑒定與臨床性狀顯著相關(guān)的關(guān)鍵模塊，分析臨床性狀與模塊特征基因之間的相關(guān)性，并以熱圖展示。與ICM呈最正相關(guān)的模塊被確定為關(guān)鍵模塊?；蝻@著性（gene significance，GS）為基因表達(dá)與每個(gè)臨床特征本身的相關(guān)性。模塊隸屬度（module membership，MM）為基因表達(dá)與模塊之間的關(guān)系。為了驗(yàn)證模塊-性狀的關(guān)聯(lián)，采用Pearson相關(guān)分析檢驗(yàn)GS與MM的相關(guān)性。

1.6核心基因的鑒定

按基因重要性（過(guò)濾條件設(shè)定為＞0.5）和基因與模塊相關(guān)性（過(guò)濾條件設(shè)定為＞0.8）篩選關(guān)鍵模塊內(nèi)的關(guān)鍵基因，再與DEGs繪制韋恩圖，獲得交集基因，最后進(jìn)行LASSO分析獲得核心基因。LASSO是一種具有特征選擇功能的回歸分析模型，屬于機(jī)器學(xué)習(xí)方法之一。LASSO回歸算法通過(guò)R語(yǔ)言中的glmnet包實(shí)現(xiàn)，用以篩選區(qū)分疾病和正常的生物標(biāo)記。

1.7核心基因診斷效能評(píng)估

比較訓(xùn)練集和驗(yàn)證集中核心基因的表達(dá)水平來(lái)檢測(cè)核心基因作為生物標(biāo)記的準(zhǔn)確性和可靠性，并繪制箱線圖。利用pROC包在訓(xùn)練集和驗(yàn)證集中分別繪制受試者工作特征曲線（receiver operator characteristic curve，ROC），并計(jì)算曲線下面積（area under the curve，AUC）評(píng)估核心基因作為生物標(biāo)記區(qū)分疾病或正常的診斷效能。

1.8免疫浸潤(rùn)分析

單樣本基因集富集分析（single sample gene set enrichment analysis，ssGSEA）［12］根據(jù)表達(dá)譜計(jì)算每個(gè)基因的rank值，統(tǒng)計(jì)分析得到每個(gè)樣本的免疫細(xì)胞的相對(duì)含量，有助于了解疾病狀態(tài)下組織中所有免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)情況，并探究其與疾病轉(zhuǎn)歸的關(guān)系。采用ssGSEA算法分析ICM中28種免疫細(xì)胞在免疫浸潤(rùn)微環(huán)境中的比例。并將核心基因與免疫細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)性分析。采用R語(yǔ)言pheatmap包和vioplot包繪制熱圖和小提琴圖以可視化。

1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用R語(yǔ)言進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1基因差異表達(dá)分析

合并GSE5406和GSE42955為訓(xùn)練集后，共篩選出517個(gè)DEGs，其中220個(gè)上調(diào)，297個(gè)下調(diào)。對(duì)DEGs繪制可視化火山圖，詳見圖1。取差異顯著前100個(gè)基因繪制熱圖，詳見圖2。

2.2DEGs富集分析

GO富集分析提示DEGs主要參與對(duì)折疊蛋白的應(yīng)答、對(duì)拓?fù)溴e(cuò)誤蛋白質(zhì)的應(yīng)答、細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成、含膠原蛋白的細(xì)胞外基質(zhì)、纖維膠原蛋白三聚體、帶狀膠原纖維、細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)成分賦予抗拉強(qiáng)度等，詳見圖3。DEGs參與磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3 kinase/AKT，PI3K/AKT）信號(hào)通路、絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號(hào)通路、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)加工、酪氨酸激酶-信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子（Janus kinase/signal transducer and activator of transcription，JAK/STAT）信號(hào)通路、糖尿病并發(fā)癥中的晚期糖基化終產(chǎn)物-晚期糖基化終產(chǎn)物受體（advanced glycation endproducts/receptor for advanced glycation endproducts，AGE/RAGE）信號(hào)通路、細(xì)胞凋亡、缺氧誘導(dǎo)因子1（hypoxia-inducible factor1，HIF-1）信號(hào)通路等，詳見圖4。

2.3WGCNA鑒定關(guān)鍵模塊

通過(guò)WGCNA，選定最佳軟閾值為6，既保證網(wǎng)絡(luò)接近無(wú)尺度分布，又保證網(wǎng)絡(luò)平均連通性不會(huì)太小。經(jīng)動(dòng)態(tài)分支切割得到24個(gè)模塊。臨床性狀（ICM患病狀態(tài)）與模塊特征基因之間的相關(guān)性分析可見，紫色模塊（MEviolet）與ICM呈正相關(guān)（相關(guān)系數(shù)＝0.64，P＜0.001），被確定為關(guān)鍵模塊。詳見圖5～圖10。

2.4核心基因的鑒定

紫色模塊（MEviolet）按基因重要性（＞0.5）和基因與模塊相關(guān)性（＞0.8）篩選出關(guān)鍵模塊內(nèi)關(guān)鍵基因?yàn)闊o(wú)孢蛋白（ASPN）、高溫需求絲氨酸肽酶1（high-temperature requirement A serine peptidase 1，HTRA1）和富含亮氨酸重復(fù)蛋白的免疫球蛋白超家族（immunoglobulin superfamily containing leucine-rich repeat protein，ISLR），并與DEGs繪制韋恩圖，詳見圖11，獲得3個(gè)交集基因（ASPN、HTRA1和ISLR）。進(jìn)行LASSO分析，最終獲得2個(gè)核心基因（ASPN和HTRA1），詳見圖12。

2.5核心基因診斷效能評(píng)估

在訓(xùn)練集和驗(yàn)證集中比較核心基因ASPN和HTRA1的表達(dá)水平，具有一致性，在ICM中均顯著上調(diào)，繪制箱線圖，見圖13。利用訓(xùn)練集和驗(yàn)證集分別繪制ROC，AUC提示ASPN和HTRA1作為生物標(biāo)記區(qū)分ICM或正常具備良好的診斷效能（AUC均＞0.85）。詳見圖14。

2.6免疫浸潤(rùn)分析

免疫浸潤(rùn)分析顯示，在ICM心肌組織中活化的CD8＋T細(xì)胞、γδT細(xì)胞、輔助型T細(xì)胞2（T helper 2 cell，Th2）、效應(yīng)記憶型CD4＋T細(xì)胞、中央記憶型CD4＋T細(xì)胞顯著上調(diào)；活化的樹突狀細(xì)胞、輔助型T細(xì)胞17（T helper 17 cell，Th17）顯著下調(diào)。詳見圖15。

上調(diào)的核心基因ASPN、HTRA1與免疫細(xì)胞相關(guān)性分析如圖16所示，其中，γδT細(xì)胞、中央記憶型CD4＋T細(xì)胞與ASPN、HTRA1均呈正相關(guān)，活化的CD8＋T細(xì)胞、效應(yīng)記憶型CD4＋T細(xì)胞分別與HTRA1呈正相關(guān)，活化的樹突狀細(xì)胞與ASPN、HTRA1均呈正相關(guān)。

3討論

本研究結(jié)果顯示，與健康對(duì)照者左心室組織比較，ICM存在517個(gè)DEGs。富集分析發(fā)現(xiàn)，DEGs的功能主要集中在細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成、含膠原蛋白的細(xì)胞外基質(zhì)等；同時(shí)，DEGs參與PI3K/AKT信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)加工、JAK/STAT信號(hào)通路、AGE/RAGE信號(hào)通路、細(xì)胞凋亡、HIF-1信號(hào)通路等，進(jìn)一步提示免疫-炎癥相關(guān)基因在ICM發(fā)病機(jī)制中的作用。

線粒體未折疊蛋白反應(yīng)（unfolded protein response，UPR）是關(guān)鍵的進(jìn)化保守信號(hào)通路之一，通過(guò)激活蛋白酶、伴侶蛋白和抗氧化酶，清除錯(cuò)誤或未折疊的蛋白質(zhì)等來(lái)恢復(fù)線粒體功能、維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)［13-14］。UPR通路的適度激活能夠保護(hù)心肌缺血/再灌注損傷［14］。而UPR通路的過(guò)度激活則會(huì)促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡，參與ICM在內(nèi)的多種心血管疾病的發(fā)生發(fā)展。研究顯示，通過(guò)調(diào)節(jié)參與UPR的蛋白質(zhì)激酶RNA樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase，PERK）信號(hào)通路可減少心肌細(xì)胞凋亡［15］。抑制UPR通路可抑制心肌梗死后心律失常的發(fā)生［16］。提示UPR信號(hào)通路對(duì)于維持正常心肌細(xì)胞功能至關(guān)重要，恢復(fù)其正常功能可能是ICM治療的關(guān)鍵方向之一。心肌梗死后細(xì)胞外基質(zhì)的纖維增生是一種正常的防御反應(yīng)，目的是快速關(guān)閉缺血受損區(qū)域，維持心肌組織的完整性，但I(xiàn)CM中細(xì)胞外基質(zhì)反應(yīng)過(guò)度可能導(dǎo)致纖維分隔增多和心臟舒張功能障礙，因此，心肌梗死后細(xì)胞外基質(zhì)反應(yīng)過(guò)程的平衡對(duì)于維持心臟正常的結(jié)構(gòu)和功能至關(guān)重要［17］。研究表明，在心肌缺血再灌注損傷模型中，通過(guò)抑制細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生，可減少心肌細(xì)胞凋亡、減少心肌梗死面積［18］。研究顯示，ASPN在ICM細(xì)胞外基質(zhì)的重塑中發(fā)揮著特異性的作用［19-20］。研究表明，維持正常的細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)，能夠提高心臟來(lái)源的干細(xì)胞和祖細(xì)胞的生存能力，從而促進(jìn)心臟修復(fù)，是ICM的治療選擇之一［21］。這些結(jié)果提示細(xì)胞外基質(zhì)也可能是ICM治療的靶點(diǎn)之一。ICM發(fā)生發(fā)展過(guò)程中涉及多條信號(hào)通路。研究發(fā)現(xiàn)，PI3K/AKT信號(hào)通路通過(guò)促進(jìn)纖維化、增加氧化應(yīng)激、誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡和凋亡等多種途徑參與缺血誘導(dǎo)的心肌病變［22-25］。而MAPK信號(hào)通路則能夠通過(guò)增加細(xì)胞凋亡、促進(jìn)炎癥反應(yīng)、增加鐵死亡和自噬反應(yīng)等參與ICM的發(fā)生發(fā)展［26-29］。JAK/STAT信號(hào)通路能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞向促炎表型轉(zhuǎn)化、增加心肌細(xì)胞凋亡、提高氧化應(yīng)激水平來(lái)參與心肌缺血再灌注損傷［30-33］。雖然AGE/RAGE信號(hào)通路參與多種心血管疾病的發(fā)生發(fā)展，但其在ICM中的研究仍然有限［34］。研究顯示，AGE/RAGE信號(hào)通路的激活可能通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞凋亡等途徑來(lái)加重心肌細(xì)胞缺血損傷［35-36］。這些結(jié)果提示ICM的發(fā)病機(jī)制涉及多個(gè)生物過(guò)程和多條信號(hào)通路，針對(duì)這些方向進(jìn)一步研究，可能探索出ICM新的治療靶點(diǎn)。

本研究通過(guò)WGCNA和LASSO分析等鑒定出在ICM發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的2個(gè)核心基因（ASPN和HTRA1）。并利用外部數(shù)據(jù)集驗(yàn)證了其在ICM中具有良好的診斷效能。ASPN是富含亮氨酸的小蛋白聚糖（small leucine rich proteoglycan，SLRP）Ⅰ類家族成員，其主要作用是作為轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（transforming growth factor，TGF）-β的天然抑制劑，調(diào)節(jié)與其受體的相互作用［37］。研究顯示，ASPN在ICM及擴(kuò)張型心肌病中表達(dá)顯著升高，是心力衰竭的生物標(biāo)志物之一［37-38］，這與本研究結(jié)果一致。但是，目前對(duì)于ASPN在ICM發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制尚未明確。有學(xué)者認(rèn)為其在心肌缺血再灌注損傷過(guò)程中的升高是機(jī)體的一種自我保護(hù)，是對(duì)TGF-β釋放和其下游信號(hào)通路激活的負(fù)反饋，增加ASPN水平能夠減輕心肌細(xì)胞死亡，降低心肌纖維化和梗死面積，而降低ASPN則損害心肌功能，這些現(xiàn)象可能與ASPN增加線粒體呼吸能力、抑制TGF-β誘導(dǎo)的SMAD2/3信號(hào)通路有關(guān)［37］。HTRA1是一種絲氨酸蛋白酶，目前缺乏其與ICM或心力衰竭關(guān)系及機(jī)制的研究。但是HTRA1能夠通過(guò)結(jié)合TGF-β家族的多種蛋白質(zhì)從而抑制其功能［39］。研究顯示，HTRA1-/-小鼠表現(xiàn)為血管內(nèi)膜增厚、中膜平滑肌異常，最終造成血流減少［40］。本研究結(jié)果顯示，在ICM中HTRA1水平顯著升高，但其機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

本研究進(jìn)行了免疫細(xì)胞浸潤(rùn)分析，發(fā)現(xiàn)與健康對(duì)照相比，7種細(xì)胞在ICM中的含量有顯著差異。在心肌遭受缺血這種非免疫介導(dǎo)的損傷后，固有和浸潤(rùn)的免疫細(xì)胞就激活了炎癥/修復(fù)通路，而病理性炎癥和組織修復(fù)（生理性炎癥）之間的動(dòng)態(tài)平衡對(duì)心力衰竭的發(fā)生發(fā)展至關(guān)重要［41］。T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)在冠心病和心力衰竭的進(jìn)展中發(fā)揮核心作用，本研究結(jié)果也提示，大部分在ICM中含量顯著變化的免疫細(xì)胞是T細(xì)胞，與之前的報(bào)道［42］一致。研究顯示，CD8＋T細(xì)胞、CD4＋T細(xì)胞、Th2等細(xì)胞在ICM的心肌、循環(huán)及淋巴組織中數(shù)量均升高，而缺乏B細(xì)胞和/或T細(xì)胞的小鼠則表現(xiàn)出更好的心功能［43-44］。與本研究結(jié)果一致。但是目前關(guān)于ASPN、HTRA1與這些免疫細(xì)胞關(guān)系的報(bào)道較少，需要在未來(lái)的研究中進(jìn)一步探索。

綜上所述，本研究鑒定的2個(gè)核心基因 ASPN和HTRA1通過(guò)多種免疫炎癥通路參與ICM的發(fā)生發(fā)展，是ICM防治的潛在靶點(diǎn)。

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（收稿日期：2023-05-16）

（本文編輯鄒麗）