梁瑋珈，陳小慶

南昌市動(dòng)物園圈養(yǎng)動(dòng)物3種腸道原蟲(chóng)的分子檢測(cè)及基因型鑒定

梁瑋珈，陳小慶*

（江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，江西 南昌 330045）

【目的】隱孢子蟲(chóng)、畢氏腸微孢子蟲(chóng)和芽囊原蟲(chóng)是3種常見(jiàn)的寄生于人、家養(yǎng)動(dòng)物和野生動(dòng)物等腸道的寄生原蟲(chóng)，主要引起人和動(dòng)物的腹瀉。試驗(yàn)旨在調(diào)查南昌市動(dòng)物園部分圈養(yǎng)動(dòng)物3種原蟲(chóng)的感染情況并鑒定其基因型，為制訂動(dòng)物園人獸共患病傳播防控措施提供參考依據(jù)?！痉椒ā繌哪喜袆?dòng)物園采集非人靈長(zhǎng)類、偶蹄類、奇蹄類、象類、有袋類、鳥(niǎo)類和食肉類等圈養(yǎng)動(dòng)物糞便樣品共42份，提取糞樣總DNA；采用PCR技術(shù)擴(kuò)增隱孢子蟲(chóng)小亞單位核糖體RNA（SSU rRNA）、畢氏腸微孢子蟲(chóng)核糖體RNA內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS）和芽囊原蟲(chóng)SSU rRNA基因序列；并對(duì)陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序、序列比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化分析，確定3種腸道原蟲(chóng)的感染情況和基因型。【結(jié)果】42份糞便樣本中有17份樣品原蟲(chóng)為陽(yáng)性，總檢出率40.5%（17/42）；其中隱孢子蟲(chóng)、畢氏腸微孢子蟲(chóng)和芽囊原蟲(chóng)感染率分別為2.4%（1/42）、14.3%（6/42）和23.8%（10/42）。檢出動(dòng)物陽(yáng)性占比分別為：非人靈長(zhǎng)類64.7%（11/17）、偶蹄類23.5%（4/17）、奇蹄類5.9%（1/17）、有袋類5.9%（1/17）；且非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物存在畢氏腸微孢子蟲(chóng)和芽囊原蟲(chóng)混合感染。通過(guò)序列比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化分析，在矮馬（奇蹄類）鑒定出1種隱孢子蟲(chóng)基因型（姬鼠基因型II），在長(zhǎng)臂猿、金絲猴、博士猴、紅尾長(zhǎng)尾猴和羊駝中共鑒定到2種畢氏腸微孢子蟲(chóng)基因型（，）。在松鼠猴、黑白疣猴、博士猴、黑葉猴、金絲猴、羚羊和袋鼠中共鑒定到5種芽囊原蟲(chóng)基因型（、、、和）；其中芽囊原蟲(chóng)（、）和畢氏腸微孢子蟲(chóng)（、）均屬人獸共患基因型?！窘Y(jié)論】南昌市動(dòng)物園圈養(yǎng)動(dòng)物存在畢氏腸微孢子蟲(chóng)、芽囊原蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)感染；從畢氏腸微孢子蟲(chóng)和芽囊原蟲(chóng)中鑒定出人獸共患基因型，有潛在的人獸共患傳播風(fēng)險(xiǎn)。動(dòng)物園應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)圈養(yǎng)動(dòng)物腸道寄生原蟲(chóng)的監(jiān)測(cè)，做好驅(qū)蟲(chóng)、消毒及預(yù)防人-獸傳播等預(yù)防工作。

圈養(yǎng)動(dòng)物；畢氏腸微孢子蟲(chóng)；芽囊原蟲(chóng)；隱孢子蟲(chóng)；分子檢測(cè)；基因型

【研究意義】隱孢子蟲(chóng)（）、畢氏腸微孢子蟲(chóng)（）和芽囊原蟲(chóng)（）是3種常見(jiàn)的腸道寄生原蟲(chóng)。其屬內(nèi)種類復(fù)雜，具有廣泛的宿主適應(yīng)性，可以感染人類、哺乳類、爬行類、鳥(niǎo)類等多種動(dòng)物[1-3]。宿主感染后主要出現(xiàn)腹痛、腹瀉、嘔吐等臨床癥狀[1,3]，且可通過(guò)水源、食物、空氣等進(jìn)行傳播，具有人獸共患風(fēng)險(xiǎn)。因此，調(diào)查動(dòng)物園中圈養(yǎng)動(dòng)物腸道原蟲(chóng)感染情況，對(duì)于有效監(jiān)測(cè)和防控動(dòng)物園圈養(yǎng)動(dòng)物3種腸道原蟲(chóng)病具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】隱孢子蟲(chóng)和畢氏腸微孢子蟲(chóng)基因型較多，具有人獸共患潛能，免疫力低下的兒童和老人更易感，癥狀相對(duì)較為嚴(yán)重[1,4]。目前已鑒定出240多種畢氏腸微孢子蟲(chóng)基因型，常見(jiàn)的人獸共患畢氏腸微孢子蟲(chóng)基因型主要有基因型、和等[5]；而隱孢子蟲(chóng)主要為人隱孢子蟲(chóng)（）、微小隱孢子蟲(chóng)（）、鼠隱孢子蟲(chóng)（）和火雞隱孢子蟲(chóng)（）等基因型[6-7]。芽囊原蟲(chóng)也可感染人類和多種動(dòng)物，引發(fā)感染性腹瀉[8]。雖然一些研究表明在某些情況下芽囊原蟲(chóng)可能對(duì)宿主的腸道微生物多樣性和健康產(chǎn)生積極影響，但它們也可以在某些情況下引發(fā)嚴(yán)重的疾病，特別是在免疫系統(tǒng)受損的人群中。芽囊原蟲(chóng)主要有和基因型[9]。此外，多項(xiàng)研究表明，這3種原蟲(chóng)在我國(guó)各地動(dòng)物園圈養(yǎng)動(dòng)物中有不同程度的流行。王利勤等[10]檢測(cè)成都、碧峰峽和貴陽(yáng)動(dòng)物園圈養(yǎng)動(dòng)物微孢子蟲(chóng)感染率為10.6%～34.5%，隱孢子蟲(chóng)感染率為0.51%～16.7%。貴陽(yáng)某動(dòng)物園芽囊原蟲(chóng)流行率為10.8%，鑒定出4個(gè)人獸共患亞型[11]；圈養(yǎng)大熊貓畢氏腸微孢子蟲(chóng)感染率45.2%，有和兩種畢氏腸微孢子蟲(chóng)基因型[12]。因此，動(dòng)物園圈養(yǎng)動(dòng)物可能是這3種腸道原蟲(chóng)的重要儲(chǔ)存宿主，易造成水源污染和人獸共患原蟲(chóng)病的傳播?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】上述3種原蟲(chóng)在南昌市動(dòng)物園圈養(yǎng)動(dòng)物中的流行情況及其基因型尚不清楚，有必要對(duì)其流行病學(xué)和分子特征進(jìn)行調(diào)查分析，為制訂動(dòng)物園人獸共患病傳播防控措施提供參考依據(jù)?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本研究采集42份圈養(yǎng)動(dòng)物糞便樣本，通過(guò)PCR擴(kuò)增、測(cè)序及序列比對(duì)分析等方法對(duì)園內(nèi)部分圈養(yǎng)動(dòng)物腸道隱孢子蟲(chóng)、畢氏腸微孢子蟲(chóng)和芽囊原蟲(chóng)的感染情況進(jìn)行分子流行病學(xué)調(diào)查。旨在為該動(dòng)物園圈養(yǎng)動(dòng)物腸道原蟲(chóng)的流行病學(xué)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，為制訂動(dòng)物園人獸共患病傳播防控措施提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 糞便樣品

于2022年7月在南昌市動(dòng)物園采集非人靈長(zhǎng)類、偶蹄類、奇蹄類、象類、有袋類、鳥(niǎo)類和食肉類動(dòng)物共42份糞便樣本，置-20 ℃保存?zhèn)溆?。?dòng)物均為圈養(yǎng)，由動(dòng)物飼養(yǎng)員飼喂。

1.2 主要試劑與儀器

糞便DNA提取試劑盒，購(gòu)自O(shè)MEGA公司；rDNA聚合酶、ExDNA聚合酶、dNTP Mixture、MgCl2、6×Loading Buffer、DL1000 DNA marker，均購(gòu)自Takara公司；50×TAE，購(gòu)自Solarbio公司；Nanodrop 2000核酸檢測(cè)儀，購(gòu)自Thermo Scientific公司；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，購(gòu)自Eppendorf 公司；PCR儀和凝膠成像儀，均購(gòu)自Bio-Rad公司。

1.3 DNA提取及引物合成

每份糞樣取約200 mg于滅菌2 mL離心管中，嚴(yán)格按照糞便DNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)提取糞便樣品DNA；具體步驟為：將糞便樣本用無(wú)菌去離子水（ddH2O）勻漿后用60目的金屬過(guò)濾篩（孔徑約為0.42 mm）過(guò)濾去除糞便中較大的雜質(zhì)，加入SP1 Buffer和蛋白酶K裂解糞便中的細(xì)胞以釋放DNA；經(jīng)消化樣本中的蛋白質(zhì)后，分離DNA；再通過(guò)加入BL buffer和無(wú)水乙醇使DNA在溶液中沉淀出來(lái)，并通過(guò)HiBind DNA吸附柱收集DNA，最后用乙醇洗滌DNA沉淀，去除雜質(zhì)和余留的溶液，靜置吸附柱待乙醇完全揮發(fā)，用ddH2O洗脫DNA。所提取的糞便DNA采用Nanodrop 2000檢測(cè)DNA質(zhì)量和濃度，測(cè)得濃度≥50 ng/μL用于后續(xù)的PCR擴(kuò)增，分裝后置-20 ℃保存?zhèn)溆?。參照文獻(xiàn)[13-16]提供的引物序列合成隱孢子蟲(chóng)SSU rRNA、畢氏腸微孢子蟲(chóng)及芽囊原蟲(chóng)基因擴(kuò)增引物。引物序列信息見(jiàn)表1，均由西安擎科澤西生物科技有限責(zé)任公司合成。

1.4 PCR擴(kuò)增

以提取的糞便DNA為模板，采用巢式PCR方法擴(kuò)增隱孢子蟲(chóng)和畢氏腸微孢子蟲(chóng)基因序列；常規(guī)PCR擴(kuò)增芽囊原蟲(chóng)基因片段。3種原蟲(chóng)PCR擴(kuò)增體系和程序具體如下：

隱孢子蟲(chóng)PCR反應(yīng)體系（總體積為25 μL）：DNA模板2 μL，dNTPs（2.5 mmol/L）2 μL，MgCl2（25 mmol/L）1.5 μL，10×PCR buffer 2.5 μL，rDNA聚合酶0.125 μL，上下游引物各1 μL，ddH2O 14.875 μL。第一輪擴(kuò)增程序?yàn)椋?4 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性30 s，56 ℃退火30 s，72 ℃延伸40 s，共35個(gè)循環(huán)；72 ℃再延伸10 min；第二輪擴(kuò)增程序除退火溫度為58 ℃，其余條件同前[13,16]。畢氏腸微孢子蟲(chóng)PCR擴(kuò)增體系（總體積為25 μL）：DNA模板1 μL，dNTPs（2.5 mmol/L）2 μL，MgCl2（25 mmol/L）2 μL，10×Exbuffer 2.5 μL，ExDNA聚合酶0.125 μL，上下游引物各1 μL，ddH2O 15.375 μL。兩輪擴(kuò)增程序均為：94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性45 s，55 ℃退火45 s，72 ℃延伸1 min，共35個(gè)循環(huán)；72 ℃再延伸10 min[13-14]。芽囊原蟲(chóng)擴(kuò)增總體積為25 μL，包括：DNA模板2 μL，dNTPs（2.5 mmol/L）2 μL，MgCl2（25 mmol/L）2 μL，10×Exbuffer 2.5 μL，ExDNA聚合酶0.25 μL，上下游引物各1 μL，ddH2O 14.25 μL。擴(kuò)增程序?yàn)椋?4 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性45 s，65 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min，共35個(gè)循環(huán)；72 ℃再延伸2 min[13,15]。1.2%的核酸凝膠電泳分析PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。

1.5 測(cè)序及序列分析

將陽(yáng)性PCR產(chǎn)物送至擎科澤西生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測(cè)序；使用DNAStar 5.0分析原始序列，通過(guò)BLASTn在線程序（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast）與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中已發(fā)表的序列進(jìn)行比對(duì)；利用ClustalX 1.83軟件進(jìn)行多序列校對(duì)，以Mega7.0軟件中最大似然法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，確定隱孢子蟲(chóng)、畢氏腸微孢子蟲(chóng)及芽囊原蟲(chóng)的基因型。

表1 3種腸道原蟲(chóng)的PCR擴(kuò)增引物

2 結(jié)果與分析

2.1 隱孢子蟲(chóng)SSU rRNA基因PCR結(jié)果及基因型鑒定

巢式PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示：僅有1份矮馬樣品為陽(yáng)性，經(jīng)二輪PCR擴(kuò)增出大小約830 bp片段，與預(yù)期大小相符（圖1）。測(cè)序成功后經(jīng)序列比對(duì)分析判定為隱孢子蟲(chóng)姬鼠基因型II（Csp.genotype II）（表2）。

1～5：糞便樣品；+：陽(yáng)性對(duì)照；-：陰性對(duì)照；M：DL1 000核酸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 畢氏腸微孢子蟲(chóng)ITS基因PCR擴(kuò)增結(jié)果及基因型鑒定

巢式PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示，二輪PCR成功擴(kuò)增出6份陽(yáng)性樣品，其中包括長(zhǎng)臂猿1份、金絲猴1份、博士猴1份、紅尾長(zhǎng)尾猴1份以及羊駝2份，PCR片段大小約390 bp，與預(yù)期大小相符（圖2）。序列比對(duì)分析后鑒定出2種基因型，分別為（=4）和（=2）；系統(tǒng)進(jìn)化分析表明均聚類于group 1（圖3），為人獸共患基因亞型。

1～6：糞便樣品；+：陽(yáng)性對(duì)照；-：陰性對(duì)照；M：DL1 000核酸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

▲：南昌市動(dòng)物園中鑒定的畢氏腸微孢子蟲(chóng)基因型和宿主。

2.3 芽囊原蟲(chóng)SSU rRNA基因PCR結(jié)果及基因型鑒定

PCR結(jié)果顯示：共有10份采自松鼠猴（=1）、黑白疣猴（=1）、博士猴（=1）、黑葉猴（=1）、金絲猴（=3）、羚羊（=2）和袋鼠（=1）的糞便樣品DNA成功擴(kuò)增出目的條帶，大小約600 bp，與預(yù)期大小相符（圖4）。序列比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化分析鑒定到5種基因型，分別為：（=3），（=2），（=1），（=2），（=2）；其中和為人獸共患基因型（表2，圖5）。

1～10：糞便樣品；+：陽(yáng)性對(duì)照；-：陰性對(duì)照；M：DL1 000核酸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.4 不同品種圈養(yǎng)動(dòng)物感染率分析

結(jié)果表明：南昌市動(dòng)物園中圈養(yǎng)動(dòng)物總感染率為40.5%（17/42），其中隱孢子蟲(chóng)、畢氏腸微孢子蟲(chóng)和芽囊原蟲(chóng)檢出率分別為2.4%（1/42）、14.3%（6/42）和23.8%（10/42），且存在畢氏腸微孢子蟲(chóng)和芽囊原蟲(chóng)混合感染的情況。其中非人靈長(zhǎng)類共檢測(cè)14份糞便樣本，其中有11份樣本檢測(cè)到原蟲(chóng)感染，包括7個(gè)芽囊原蟲(chóng)陽(yáng)性樣本，經(jīng)序列比對(duì)鑒定為（=2）、（=2）、（=1）和（=2），以及4個(gè)畢氏腸微孢子蟲(chóng)陽(yáng)性樣本，經(jīng)序列鑒定為基因型（=4），其總陽(yáng)性率為78.6%（11/14）；偶蹄類共檢測(cè)14份糞便樣本，其中有4份檢測(cè)到原蟲(chóng)感染，包括2個(gè)芽囊原蟲(chóng)陽(yáng)性，經(jīng)鑒定為型以及2個(gè)畢氏腸微孢子蟲(chóng)陽(yáng)性樣本，經(jīng)序列比對(duì)鑒定為型，其總陽(yáng)性率為28.6%（4/14）；奇蹄類共檢測(cè)4份糞便樣品，只有1份檢測(cè)到隱孢子蟲(chóng)感染，經(jīng)序列比對(duì)鑒定為姬鼠基因型II，陽(yáng)性率為25%（1/4）；有袋類共檢測(cè)2份糞便樣本，其中有1份樣本檢測(cè)到芽囊原蟲(chóng)陽(yáng)性，經(jīng)序列比對(duì)鑒定為型，其陽(yáng)性率為50%（1/2）。在本研究中共檢測(cè)到17份陽(yáng)性，不同類別動(dòng)物中檢測(cè)陽(yáng)性占比分別為：非人靈長(zhǎng)類64.7%（11/17）、偶蹄類23.5%（4/17）、奇蹄類5.9%（1/17）、有袋類5.9%（1/17），其中非人靈長(zhǎng)類的感染率顯著高于其他動(dòng)物（<0.05）。

◆：南昌市動(dòng)物園中鑒定的芽囊原蟲(chóng)基因型和宿主。

3 結(jié)論與討論

根據(jù)上述研究結(jié)果，南昌市動(dòng)物園中的圈養(yǎng)動(dòng)物普遍存在腸道原蟲(chóng)感染，總感染率為40.5%。本試驗(yàn)結(jié)果表明了圈養(yǎng)動(dòng)物中腸道原蟲(chóng)感染的普遍性，可能成為人獸共患原蟲(chóng)病的潛在感染源，對(duì)動(dòng)物及人類的健康造成極大威脅，同時(shí)也建議加強(qiáng)動(dòng)物園圈養(yǎng)動(dòng)物的健康管理和防控措施。不同類別的動(dòng)物中感染率有顯著的差異，非人靈長(zhǎng)類的感染率最高，為64.7%。這可能與非人靈長(zhǎng)類的生態(tài)習(xí)慣、社交行為、食物來(lái)源等有關(guān)。這些因素可能使非人靈長(zhǎng)類更容易接觸到感染源，增加感染的機(jī)會(huì)。相比之下，偶蹄類的感染率為23.5%，奇蹄類和有袋類的感染率均為5.9%。這些差異可能與動(dòng)物的生態(tài)環(huán)境、飲食習(xí)慣、免疫系統(tǒng)等因素有關(guān)。針對(duì)不同動(dòng)物類別，應(yīng)該制定相應(yīng)的預(yù)防和管理策略，以降低感染風(fēng)險(xiǎn)。

本研究表明南昌市動(dòng)物園圈養(yǎng)動(dòng)物畢氏腸微孢子蟲(chóng)的感染率為14.3%，低于鄭州動(dòng)物園（15.8%）[17]，高于北京動(dòng)物園（7.3%）[18]的感染率；此結(jié)果提供了不同地區(qū)動(dòng)物園中畢氏腸微孢子蟲(chóng)感染情況的比較，反映了不同地理環(huán)境和管理水平對(duì)于動(dòng)物感染率的影響。值得注意的是，雖然南昌市動(dòng)物園的感染率略高于北京動(dòng)物園，但并不一定意味著南昌市動(dòng)物園的動(dòng)物健康狀況更差。不同動(dòng)物園的采樣方法、樣本量、動(dòng)物種類、動(dòng)物密度、飼養(yǎng)環(huán)境以及防控措施等都可能會(huì)對(duì)感染率產(chǎn)生影響。本項(xiàng)研究的另一個(gè)重要發(fā)現(xiàn)是，在非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物中檢測(cè)到了畢氏腸微孢子蟲(chóng)基因型，以及在羊駝中檢測(cè)到基因型。這兩種基因型都被認(rèn)為是人畜共患基因型，意味著它們不僅可以感染動(dòng)物，還可能對(duì)人類造成健康風(fēng)險(xiǎn)。此外，南昌市動(dòng)物園中的圈養(yǎng)動(dòng)物隱孢子蟲(chóng)的感染率為2.4%，高于鄭州動(dòng)物園（1.6%）[17]，低于貴陽(yáng)動(dòng)物園（15.5%）和西寧動(dòng)物園（70%）[19-20]感染率；這些感染差異可能受到多種因素的影響，包括動(dòng)物種類、飼養(yǎng)環(huán)境、采樣方法、防控措施及地理位置、氣候條件以及不同動(dòng)物園的管理水平等。同時(shí)，在矮馬中鑒定到了隱孢子蟲(chóng)姬鼠基因型II（sp. apodemus genotype II），表明在矮馬中存在這種特定的隱孢子蟲(chóng)亞型。而南昌市動(dòng)物園中的動(dòng)物芽囊原蟲(chóng)的感染率為23.8%，明顯低于秦嶺動(dòng)物園感染率（40.2%）[9]；說(shuō)明國(guó)內(nèi)不同動(dòng)物園原蟲(chóng)流行程度存在差異。但在南昌市動(dòng)物園中非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物中芽囊原蟲(chóng)的感染率為64.7%，且存在芽囊原蟲(chóng)和畢氏腸微孢子蟲(chóng)混合感染。既往研究已證實(shí)芽囊原蟲(chóng)是非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物最易感的一種腸道寄生蟲(chóng)[21]；Petráová等[22]調(diào)查魯邦多島國(guó)家公園中黑猩猩、黑臉綠猴和黑白疣猴芽囊原蟲(chóng)感染率分別為71.4%、84.7%和83.7%。在我國(guó)多地也檢測(cè)到非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物芽囊原蟲(chóng)感染率較高，如秦嶺地區(qū)平均感染率達(dá)75.6%，廣州地區(qū)為16.7%～78.9%，西雙版納野生猴群檢出率為40%[9,23-24]。根據(jù)南昌市動(dòng)物園的研究以及既往研究，芽囊原蟲(chóng)感染在非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物中普遍存在，且感染率相對(duì)較高。這表明芽囊原蟲(chóng)在這類動(dòng)物中的傳播較為廣泛。同時(shí)，目前報(bào)道的非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物易感基因型有10個(gè)，包括～、、、、和；其中、和是優(yōu)勢(shì)基因型[25-26]。本研究也檢測(cè)到、、和基因型，與國(guó)內(nèi)外報(bào)道的研究結(jié)果基本一致[27-29]。此外，Yoshikawa等[25]認(rèn)為基因型在恒河猴和人之間可能存在相互感染；珀斯動(dòng)物園非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物中分離出和基因型，其中型與飼養(yǎng)員分離株相似[30]；格但斯克動(dòng)物園非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物感染、、和基因型，飼養(yǎng)員感染和基因型，人和猴序列相同[29]；以上結(jié)果均表明動(dòng)物可能是人芽囊原蟲(chóng)病的重要感染源，存在直接傳播的可能性。

表2 南昌市動(dòng)物園不同圈養(yǎng)動(dòng)物3種腸道原蟲(chóng)感染情況及基因型

以上發(fā)現(xiàn)表明圈養(yǎng)動(dòng)物中腸道原蟲(chóng)感染具有廣泛性和嚴(yán)重性。不同類別動(dòng)物的感染率差異可能與生態(tài)習(xí)慣、飲食、社交行為等因素有關(guān)。研究還檢測(cè)到了多個(gè)人獸共患基因型的腸道原蟲(chóng)，說(shuō)明其多樣性和潛在的人獸共患感染風(fēng)險(xiǎn)。提示園內(nèi)動(dòng)物，包括金絲猴、黑白疣猴、長(zhǎng)臂猿、袋鼠等為主要的原蟲(chóng)儲(chǔ)存宿主，有潛在傳播人獸共患病原風(fēng)險(xiǎn)。鑒于3種腸道原蟲(chóng)主要通過(guò)污染的水源和食物傳播，建議動(dòng)物園進(jìn)一步加強(qiáng)動(dòng)物飼養(yǎng)管理，逐步改善動(dòng)物的生活環(huán)境，確保飼養(yǎng)用水和食物的清潔；按時(shí)清理動(dòng)物糞便和消毒圈舍，避免動(dòng)物之間的相互傳播；定期監(jiān)測(cè)飼養(yǎng)動(dòng)物寄生蟲(chóng)感染，制定合理的驅(qū)蟲(chóng)方案，以控制園內(nèi)寄生蟲(chóng)病的流行及降低其人獸共患風(fēng)險(xiǎn)?？傊?，本研究為進(jìn)一步開(kāi)展圈養(yǎng)動(dòng)物腸道原蟲(chóng)流行病學(xué)調(diào)查奠定了基礎(chǔ)，也為南昌市動(dòng)物園的飼養(yǎng)管理措施優(yōu)化及飼養(yǎng)員和游客的健康防護(hù)提供了參考依據(jù)；對(duì)保護(hù)動(dòng)物及公共衛(wèi)生安全均有重要意義。

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Molecular Detection and Genotyping of Three Enteric Protozoa in Captive Animals from Nanchang Zoo

LIANG Weijia, CHEN Xiaoqing*

（School of Animal Science and Technology, Jiangxi Agricultural University, Nanchang 330045, China）

,andsp. are three common parasites, which inhabit in the intestines of humans, domestic animals, and wildlife, primarily causing diarrhea in human and animals. This experiment aimed to investigate the epidemiological status and identify their genotypes of three parasites among captive animals in Nanchang Zoo, and provide references for the prevention and treatment of intestinal parasitic diseases in wild animals.A total of 42 fecal samples were collected from captive animals including non-human primates, ungulates, perissodactyls, elephants, marsupials, birds, and carnivores in Nanchang Zoo. Total DNA was extracted from the fecal samples, and a PCR assay was employed to amplify the small subunit ribosomal RNA (SSU rRNA) gene of, the internal transcribed spacer (ITS) region of, and the SSU rRNA gene ofsp.. Positive amplicons were sequenced, aligned, and subjected to phylogenetic analysis to determine the infection status and genotypes/subtypes of these three intestinal parasites.The results indicated that 17 out of 42 fecal samples were positive by PCR, with a total infection rate of 40.5% (17/42). The infection rates of,, andsp.were 2.4% (1/42), 14.3% (6/42), and 23.8% (10/42), respectively. Among the detected animals, the positivity rates were as follows: non-human primates 64.7% (11/17), ungulates 23.5% (4/17), perissodactyls 5.9% (1/17), and marsupials 5.9% (1/17). Furthermore, mixed infections ofandsp. were observed in non-human primates. Through sequence alignment and phylogenetic analysis, onegenotype (sp. apodemus genotype II) was identified in ponies, and twogenotypes (,) were identified in gibbons, golden snub-nosed monkeys, rhesus monkeys, red-tailed langurs, and alpacas. Fivesp. subtypes (,,,, and) were identified in squirrel monkeys, black-and-white colobus monkeys, rhesus monkeys, black leaf monkeys, golden snub-nosed monkeys, antelopes, and kangaroos. Notably, the genotypes,,, andare known as zoonotic genotypes.Captive animals in Nanchang Zoo were infected with,andsp.. The zoonotic genotypes are identified fromandsp., which have a potential transmission risk. This underscores the need for enhanced monitoring of intestinal protozoa in captive animals, and the implementation of deworming, disinfection, and preventive measures against zoonotic transmission within the zoo setting.

captive animal;;sp.;spp.; molecular detection; genotype

10.3969/j.issn.2095-3704.2023.04.71

S852.61+1

A

2095-3704（2023）04-0469-09

2023-09-26

2023-11-06

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（32202839）和江西省教育廳科技創(chuàng)新項(xiàng)目（GJJ180185）

梁瑋珈（2002—），女，主要從事動(dòng)物寄生蟲(chóng)學(xué)研究，2283078323@qq.com；*通信作者：陳小慶，講師，博士，chenxiaoqing2013jl@163.com。

梁瑋珈，陳小慶.南昌市動(dòng)物園圈養(yǎng)動(dòng)物3種腸道原蟲(chóng)的分子檢測(cè)及基因型鑒定[J]. 生物災(zāi)害科學(xué), 2023, 46(4): 469-477.