【摘 要】目的：利用代謝組學(xué)方法研究膿毒癥中整蛋白營養(yǎng)制劑引起的代謝紊亂，為膿毒癥的臨床治療提供了新的理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法：8～12周齡雄性小鼠隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組（Sham組）、膿毒癥組（CLP組）和膿毒癥+整蛋白組（CLP+IPEN組），每組6只小鼠。CLP組采用盲腸結(jié)扎和穿刺誘導(dǎo)膿毒癥，而Sham組僅行剖腹手術(shù)，未行結(jié)扎穿刺。CLP+IPEN組術(shù)后接受額外的整蛋白腸內(nèi)營養(yǎng)制劑。每天監(jiān)測體質(zhì)量變化7 d，并在建模和喂養(yǎng)3 d后采集樣本。染色觀察回腸組織病理學(xué)變化，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative real-time PCR）檢測不同目的基因mRNA的表達(dá)。根據(jù)特定的標(biāo)準(zhǔn)，篩選整蛋白營養(yǎng)制劑治療膿毒癥的差異代謝物。結(jié)果：CLP組與CLP+IPEN組進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)有15種差異代謝物。在CLP+IPEN組中，3-甲基-1，3，5-戊三醇（dimethyl 3-hydroxy-3-methylpentane-1，5-dioate）、丙二酸（malonic acid）、苯酰胺（l-Serine，n-methoxycarbonylmethylester）等5種代謝物的含量比CLP組有所增加（Plt;0.05）。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，3組小鼠的體質(zhì)量均逐漸減輕，其中CLP組在4 d的體質(zhì)量減輕最為明顯（Plt;0.05）。這表明，整蛋白營養(yǎng)制劑可以減輕膿毒癥小鼠的體質(zhì)量減輕。CLP+IPEN組的Chiu評分明顯低于CLP組（Plt;0.05），提示腸黏膜損傷明顯減少。CLP組和Sham組中閉合蛋白（occludin）、緊密連接蛋白1（zonulaoccludens-1，ZO-1）和結(jié)腸黏蛋白（recombinant mucin 2，MUC2）的表達(dá)均升高，提示膿毒癥導(dǎo)致腸道屏障功能受損。與CLP組相比，CLP+IPEN組中Occludin、ZO-1和MUC2的表達(dá)明顯降低（Plt;0.05）。結(jié)論：本研究通過代謝組學(xué)方法深入研究整蛋白營養(yǎng)制劑中膿毒癥引起的代謝紊亂。整蛋白腸內(nèi)營養(yǎng)制劑可以通過調(diào)節(jié)亞油酸代謝、不飽和脂肪酸生物合成、脂肪酸生物合成和細(xì)胞色素P450物質(zhì)的代謝來改善膿毒癥相關(guān)腸道損傷的代謝紊亂。此外，這些制劑在增強(qiáng)腸道屏障功能、減輕小鼠體質(zhì)量減輕和減輕腸道損傷嚴(yán)重程度方面具有潛力，從而為增強(qiáng)膿毒癥治療功效奠定了基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】整蛋白型；膿毒癥；腸損傷；代謝紊亂

【中圖分類號】R151 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【收稿日期】2024-01-28

膿毒癥被定義為由機(jī)體對感染反應(yīng)失調(diào)引起的危及生命的器官功能障礙[1]。也是導(dǎo)致患者入住ICU的主要病因之一，其病死率仍居高不下[2]。膿毒癥和膿毒性休克是重大的國際公共衛(wèi)生問題；世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，其中院內(nèi)每10萬膿毒癥患者中約有189例發(fā)生死亡[3]。它通常是由感染、休克、創(chuàng)傷、燒傷、外科手術(shù)等嚴(yán)重疾病引起的；重癥患者可發(fā)展為嚴(yán)重膿毒癥、膿毒性休克和多器官功能障礙綜合征[4]。腸道的免疫反應(yīng)和屏障功能在膿毒癥的發(fā)病機(jī)制和進(jìn)展中起重要作用[5]。眾所周知，膿毒癥會對腸黏膜造成損傷，導(dǎo)致細(xì)菌移位，并加重局部和遠(yuǎn)端器官損傷[6]。膿毒癥會嚴(yán)重破壞腸道的微生物平衡[7]。胃腸道衰竭既可能是膿毒癥的原因，也可能是膿毒癥中全身促炎反應(yīng)的結(jié)果[8]?？刂颇摱景Y期間的炎癥級聯(lián)仍然是一個(gè)主要的臨床挑戰(zhàn)[9]。因此，修復(fù)受損的腸道免疫屏障功能、逆轉(zhuǎn)免疫功能障礙、改善腸道代謝紊亂在膿毒癥的預(yù)防和治療中發(fā)揮著重要作用。早期腸內(nèi)營養(yǎng)可滋養(yǎng)腸道及維護(hù)腸屏障和免疫功能，啟動時(shí)推薦整蛋白型制劑[10]。然而，整蛋白型腸內(nèi)營養(yǎng)制劑對膿毒癥誘導(dǎo)的腸損傷代謝紊亂的保護(hù)作用還需進(jìn)一步探索，因此本研究采用盲腸結(jié)扎穿刺膿毒癥小鼠模型，深入研究整蛋白營養(yǎng)制劑改善膿毒癥小鼠腸損傷代謝紊亂的機(jī)制研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物。

選用雄性8～12周齡小鼠，體質(zhì)量約18～22 g，購自重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。動物許可證編號：SYXK（渝）2022-0016。本研究已獲得重慶市大足區(qū)人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)（批件號：2021LLSC047）。

1.2 營養(yǎng)制劑與試劑

整蛋白型腸內(nèi)營養(yǎng)制劑，規(guī)格：360 g/聽（其中：100 g含462 kcal；蛋白質(zhì)18.5 g；碳水化合物56.4 g；脂肪8.2 g），進(jìn)口藥品注冊證號：H20090007。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 模型構(gòu)建及分組

選用雄性8～12周齡小鼠，飼養(yǎng)于重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，在實(shí)驗(yàn)之前，將小鼠在22℃下適應(yīng)新環(huán)境7 d，自由獲取水和食物并且給予12 h光照/黑暗周期喂養(yǎng)。 按隨機(jī)數(shù)表法將小鼠分為3組，分別為膿毒癥組（CLP 組）、假手術(shù)組（Sham 組）、膿毒癥+整蛋白組（CLP+IPEN組），每組數(shù)量均為6只。CLP組：采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)（cecal ligation and Puncture，CLP）復(fù)制Rittirsch 等[11]膿毒癥小鼠模型；首先將動物放在泡沫塑料墊上，取仰臥位，頭遠(yuǎn)離操作者，通過給小鼠腹腔注射10％水合氯醛（0.05 mL/10 g）進(jìn)行麻醉，用鑷子捏腳趾監(jiān)測麻醉強(qiáng)度，直到它們對針刺激沒有反應(yīng)為止。實(shí)驗(yàn)過程中所有程序均在無菌條件下進(jìn)行，體溫保持在36～38 ℃使用加熱墊進(jìn)行手術(shù)部位常規(guī)備皮、消毒，手術(shù)刀在皮膚中部做縱向切口（不穿透腹膜腔），再用小剪刀將切口延伸并進(jìn)入腹膜腔（約2 cm），識別腹部肌肉組織的中間白色筋膜，并對其進(jìn)行解剖，并進(jìn)行肌間切開及筋膜層和腹膜層的切開，使用鈍性解剖鉗定位盲腸，以使暴露；用3-0絲線結(jié)扎盲腸中部，在結(jié)扎處于盲腸遠(yuǎn)端之間18號穿刺針穿刺，穿刺后，盲腸被擠出少量糞便保證穿刺成功，然后將盲腸送回腹腔恢復(fù)到原始位置，然后腹部切口關(guān)閉。將小鼠送回籠子，在37 ℃的溫度下立即皮下注射生理鹽水（50 mL/kg）進(jìn)行液體復(fù)蘇。Sham組：只游離盲腸，不予以結(jié)扎和穿刺情況下進(jìn)行剖腹手術(shù)，其余操作步驟均膿毒癥組。其中：Sham組和CLP組術(shù)后常規(guī)飲食、飲水。CLP+IPEN組：術(shù)后常規(guī)飲食處理基礎(chǔ)上額外補(bǔ)充整蛋白腸內(nèi)營養(yǎng)制劑（整蛋白型腸內(nèi)營養(yǎng)粉4 g和40 ℃溫開水100 mL）。記錄3組每日的體質(zhì)量變化，觀察7 d，另外建模后飼養(yǎng)3 d后取材。

1.3.2 取材

采用小動物氣體麻醉機(jī)結(jié)合異氟烷對小鼠進(jìn)行麻醉，5%異氟烷用于誘導(dǎo)小鼠深度麻醉，而后采用3%異氟烷用于維持麻醉狀態(tài)，麻醉后開腹取回腸組織，留取形態(tài)學(xué)標(biāo)本，剩余組織剪碎后勻漿放入-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 HE染色

取小鼠回腸組織，去除腸內(nèi)容物，將新鮮腸組織固定在4%多聚甲醛中。多聚甲醛固定回腸組織Hamp;E染色：所有切片用不同濃度的乙醇和二甲苯脫水，石蠟包埋，其組織厚度4～5 μm，切片后用蘇木精和伊紅進(jìn)行染色封片。在光學(xué)顯微鏡下觀察回腸組織病理變化，并拍照收集圖像。

1.3.4 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative real-time，PCR）對目的基因閉合蛋白（occludin）、緊密連接蛋白1（zonula occludens-1，ZO-1）和結(jié)腸黏蛋白（recombinant mucin 2，MUC2）的mRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測。

1.3.5 RNA的提取及濃度和純度測定

從-80 ℃冰箱取出部分回30 mg腸組織，向其加入1 mL RNAisoPlus，用剪刀剪碎腸組織，再使用電動勻漿機(jī)充分進(jìn)行勻漿4次，室溫靜置5 min。然后高速離心5 min（4 ℃，12 000 r/min），吸取上清液，轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中，并加入RNAiso Plus的1/5體積量的氯仿，震蕩混勻，溫室下靜置5 min后再次高速離心15 min（4 ℃，12 000 r/min），將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，加入1倍RNAiso Plus體積量的異丙醇后充分混勻，室溫靜置10 min，再次高速離心10 min（4 ℃，12 000 r/min）后試管底部出現(xiàn)RNA 沉淀。小心棄去上清保留沉淀物，加入與RNAiso Plus等量的75％乙醇清洗沉淀物，7 500× 4 ℃離心5 min。打開離心管蓋，室溫下干燥沉淀幾分鐘。待沉淀干燥后，加入適量0.1% 的焦碳酸二乙酯（diethyl Pyrocarbon?ate，DEPC）水溶解沉淀。再用瓊脂糖凝膠電泳（1% 瓊脂糖+溴乙錠）進(jìn)行RNA純度分析。符合要求后于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.6 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA

反應(yīng)液配制在冰上進(jìn)行，按試劑盒的要求進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)得到cDNA，合成的cDNA保存于-20 ℃或更低溫度保存。

1.3.7 Q-PCR擴(kuò)增

配制反應(yīng)液時(shí)，試劑請于冰上放置，避免強(qiáng)光照射。根據(jù)Q-PCR 試劑盒說明書的試驗(yàn)步驟進(jìn)行Q-PCR反應(yīng)。

1.3.8 代謝組學(xué)分析

本研究采用安捷倫GC7890B色譜儀結(jié)合MSD5977A質(zhì)譜法進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜分析。ZB-1701GC毛細(xì)管柱（14%腈丙苯基，86%二甲基聚硅氧烷，20 m×180 μm×0.15 mm，飛諾美）用于代謝物分離。GC-MS入口參數(shù)設(shè)置如下：注入體積（1 μL），脈沖無分流模式（180 kPa，持續(xù)1 min）、保護(hù)芯片（溫度290 ℃）和氦氣載體流速（1 mL/min）。氣相色譜烤箱在45 ℃下啟動2 min，以9 ℃/min的速度升至180 ℃，并保持5 min；然后以40 ℃/min的速度升至220 ℃并保持5 min，以40 ℃/min 的速度繼續(xù)升溫至240 ℃，保持5 min；最終以80 ℃/min的速度升至280 ℃并保持3 min。輔助、質(zhì)譜四極桿和質(zhì)譜源的溫度分別控制在290 ℃、230 ℃和150 ℃。質(zhì)譜分析是在70 eV的電子碰撞電離下進(jìn)行的。溶劑延遲設(shè)定為5.5 min，質(zhì)量范圍為30～550 mm，掃描速度為1.562 m/s。

1.4 差異代謝物篩選和統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

MetaboAnalyst 5.0（https：//www.MetaboAnalyst.ca） 用于代謝組學(xué)研究。并將濃度數(shù)據(jù)上傳到網(wǎng)站，進(jìn)行求和歸一化處理。然后執(zhí)行l(wèi)og10轉(zhuǎn)換和自動縮放使功能更具可比性。首先應(yīng)用無監(jiān)督PCA來檢測組間的分布和分離。采用監(jiān)督偏最小二乘判別分析（partial least squares discriminant analy?sis，PLS-DA），最大限度地提高分類差別。R2和Q2用于評價(jià)PLS-DA 模型的預(yù)測精度和預(yù)測能力。基于PLS-DA 模型，通過結(jié)合使用t檢驗(yàn)的FDR和變量重要性投影（variableimPortant for the Projection，VIP）值來識別差異性代謝物。閾值設(shè)置為VIPgt;1、Plt;0.05 及FCgt;1.2 或lt;0.8。采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示；多組間比較用單因素方差分析，兩兩比較用SNK（student-newman-keuls）法。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 整蛋白腸內(nèi)營養(yǎng)制劑對小鼠的體質(zhì)量影響

在實(shí)驗(yàn)過程中小鼠體重變化如圖1所示，1 d后，3組小鼠均體質(zhì)量開始逐漸減輕，到4 d，與CLP組（21.183±1.837）相比，CLP+IPEN 組（20.867±1.331）及Sham 組（10.133±1.108）小鼠體重下降相對較少，CLP組小鼠體質(zhì)量下降最明顯（F=111.791，Plt;0.001）。

2.2 整蛋白腸內(nèi)營養(yǎng)制劑對小鼠腸上皮黏膜的影響

HE染色：CLP組顯示不同程度的腸上皮黏膜損傷，并可看出整蛋白腸內(nèi)營養(yǎng)制劑可明顯改善膿毒癥小鼠的腸道黏膜損傷，見圖2；與CLP組（4.500±0.548）相比，CLP+IPEN組（3.000±0.894）的Chiu評分明顯降低（F=39.605，Plt;0.001；表1），表明腸黏膜損傷程度明顯減輕。

2.3 整蛋白腸內(nèi)營養(yǎng)制劑對CLP組小鼠腸道屏障的影響

與Sham 組（0.384±0.033）相比，CLP 組（1.142±0.088）及CLP+IPEN組（0.601±0.154）的Occludin蛋白水平表達(dá)明顯增加；CLP+IPEN 組（0.601±0.154）比CLP 組（1.142±0.088）的Occludin 表達(dá)明顯下降（F=84.025，Plt;0.001）。與Sham組（0.664±0.311）相比，CLP組（1.367±0.573）及CLP+IPEN 組（0.251±0.061）的ZO-1 蛋白水平表達(dá)明顯增加；CLP+IPEN組（0.251±0.061）比CLP組（1.367±0.573）的ZO-1 表達(dá)明顯下降（F=13.364，Plt;0.001）。與Sham 組（0.287±0.103）相比，CLP組（5.250±1.230）及CLP+IPEN組（3.183±0.979）的MUC2 蛋白水平表達(dá)明顯增加；CLP+IPEN 組（3.183±0.979）比CLP 組（5.250±1.230）的MUC2 表達(dá)明顯下降（F=45.064，Plt;0.001）。以上結(jié)果表明：膿毒癥可導(dǎo)致腸道屏障功能出現(xiàn)不同程度的損傷，整蛋白腸內(nèi)營養(yǎng)制劑的干預(yù)有效地增強(qiáng)了膿毒癥小鼠的腸屏障功能（表1）。

2.4 PLS-DA模式識別及結(jié)果分析，差異代謝產(chǎn)物篩選

采用偏最小二乘判別分析（partial least squares discrimi?nant analysis，PLS-DA））模式識別方法，以VIPgt;1、Plt;0.05及FCgt;1.2或lt;0.8為條件篩選差異代謝物。結(jié)果顯示，與CLP組相比，CLP+IPEN組的3-甲基-1，3，5-戊三醇（dimethyl 3-hydroxy-3-methylpentane-1，5-dioate）、丙二酸（malonic acid）、苯酰胺（l-serine，n-methoxycarbonyl-methyl ester）、反式亞油酸（linolelaidic acid）、棕櫚酯（palmitelaidic acid）、順式-11，14-二十碳二烯酸（11，14-eicosadienoic acid）等15個(gè)代謝物含量改變明顯。其中3-甲基-1，3，5-戊三醇、丙二酸、苯酰胺、2，2，2-三氯乙醇（trichloroethanol）、N-（[ 甲氧基羰基）甘氨酸甲酯（glycine，n-methoxycarbonyl-methyl ester）5個(gè)代謝產(chǎn)物含量增加（Plt;0.05），見表2；而正十五烷酸（pentadeca?noic acid）、順-8，11，14-二十碳三烯酸（8，11，14-eicosatri?enoic acid）、十甲基環(huán)五硅氧烷（cyclopentasiloxane，deca?methyl）、酮戊二酸單酰胺（dl-gamma-methyl ketoglutaramateisomer 2）、2-羥雌甾二醇（2-hydroxyglutaramic acid）、反式亞油酸、棕櫚酸酯、順式-11，14-二十碳二烯酸、肉豆蔻酸（my?ristic acid）、硬脂酸（stearic acid）10個(gè)代謝產(chǎn)物含量減少（Plt;0.05），見表2；其中VIP值最高的為棕櫚酯，見圖3、4。

2.5 整蛋白腸內(nèi)營養(yǎng)制劑對膿毒癥代謝通路的影響

將篩選的CLP組與實(shí)驗(yàn)組共同差異代謝物正十五烷酸、順-8，11，14-二十碳三烯酸、十甲基環(huán)五硅氧烷、酮戊二酸單酰胺、2-羥雌甾二醇、反式亞油酸、棕櫚酯、順式-11，14-二十碳二烯酸、肉豆蔻酸、硬脂酸輸入在線網(wǎng)站MetaboAna?lyst 5.0分析其參與的相關(guān)代謝通路，結(jié)果顯示，與CLP組差異代謝物共涉及4條代謝通路，為亞油酸代謝、不飽和脂肪酸的生物合成、脂肪酸的生物合成、細(xì)胞色素P450物質(zhì)代謝（impactgt;0.05），見圖5；表明整蛋白腸內(nèi)營養(yǎng)可能通過調(diào)控亞油酸代謝、不飽和脂肪酸的生物合成、脂肪酸的生物合成、細(xì)胞色素P450物質(zhì)代謝改善膿毒癥腸損傷代謝紊亂。

3 討 論

膿毒癥作為1種由感染引起機(jī)體生理、病理和生化紊亂的特異性反應(yīng)，可導(dǎo)致肺、肝、腎等多器官功能障礙，并導(dǎo)致嚴(yán)重的糖代謝紊亂[12]。膿毒癥是1 種對感染引起危及生命的器官功能障礙的疾病[13]。膿毒癥引起的多器官衰竭仍然是治療有限的重癥監(jiān)護(hù)病房發(fā)病率和死亡率的主要原因[14]。腸道是膿毒癥重要的“效應(yīng)器”和“啟動器”，是膿毒癥治療的潛在靶標(biāo)[15]。胃腸道是膿毒癥期間最容易和最頻繁受損的器官[16]。當(dāng)膿毒癥發(fā)生時(shí)，腸道上皮細(xì)胞和細(xì)胞間連接容易受到過度的“炎癥因子風(fēng)暴”的影響[17]。所以腸屏障功能障礙的相關(guān)的促炎機(jī)制可能是治療是多器官功能障礙綜合征及膿毒癥的重點(diǎn)所在。目前針對膿毒癥腸損傷的研究得到明顯提升。然而，由于目前膿毒癥腸損傷的具體發(fā)病機(jī)制不詳，臨床缺乏早期的診斷方法，給其治療帶來巨大困難，因此，尋找特異性較高的膿毒癥腸損傷診斷標(biāo)志物成為目前臨床醫(yī)學(xué)的研究重點(diǎn)。因此深入研究整蛋白營養(yǎng)制劑對膿毒癥小鼠腸損傷代謝紊亂的機(jī)制研究是非常必要。

膿毒癥是導(dǎo)致腸道功能障礙的器官功能損害或衰竭的重要因素[18]，腸屏障功能障礙是膿毒癥進(jìn)展的誘因[19]。膿毒癥涉及1種急性異常代謝狀態(tài)，體質(zhì)量增加可以提供間接的營養(yǎng)儲備，在危及生命的急性疾病中起著至關(guān)重要的作用，較高的身體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）是ICU膿毒癥患者預(yù)后的保護(hù)因素[20]。整蛋白型腸內(nèi)營養(yǎng)劑含酪蛋白、維生素、礦物質(zhì)等，其適用于膿毒血癥患者[21]。本次試驗(yàn)結(jié)果得出第1 d后3組小鼠均體質(zhì)量開始逐漸減輕，到第4 d CLP組的小鼠體質(zhì)量下降最明顯（Plt;0.05），但仍需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)了解后期治療是否對體質(zhì)量有明顯增重效果。

腸道提供了強(qiáng)大的黏膜屏障，黏膜形成了保護(hù)身體健康的3個(gè)基本屏障，包括物理屏障、生物化學(xué)屏障和免疫屏障[22]。其中緊密連接（tight junction，TJ）在腸黏膜屏障中起到重要作用，occludin是TJ的重要成分，膿毒癥時(shí)炎癥介質(zhì)和內(nèi)毒素相關(guān)的降鈣素原（procalcitonin，PCT）升高可能誘導(dǎo)腸黏膜細(xì)胞凋亡增加和腸上皮TJ損害[23]。在膿毒血癥模型小鼠回腸中，Occludin、ZO-1、MUC2表達(dá)均明顯增加，表明膿毒血癥可導(dǎo)致腸道屏障功能不同程度的損傷。實(shí)驗(yàn)中使用“整蛋白腸內(nèi)營養(yǎng)制劑”治療的CLP+IPEN組，其Chiu評分及Occludin、ZO-1、MUC2的表達(dá)與CLP組相比均明顯下降，提示其可改善腸道屏障功能，降低其通透性，能減輕膿毒癥腸損傷程度，認(rèn)為可能機(jī)制是整蛋白型腸內(nèi)營養(yǎng)治療能通過維護(hù)膿毒血癥在應(yīng)激狀態(tài)下的腸道黏膜屏障功能，防止腸道細(xì)菌移位的發(fā)生 從而減少內(nèi)源性感染的發(fā)生。

本研究結(jié)果表明，CLP 組與CLP+IPEN 組腸組織代謝組學(xué)存在差異，從膿毒癥小鼠中篩選出15個(gè)整蛋白營養(yǎng)治療膿毒癥的差異代謝物，其中5種代謝物明顯升高，10種代謝物明顯降低。與CLP組的差異代謝物共涉及4條代謝通路，為亞油酸代謝、不飽和脂肪酸的生物合成、脂肪酸的生物合成、細(xì)胞色素p450物質(zhì)代謝（impactgt;0.05），其中亞油酸代謝最具統(tǒng)計(jì)有意義，其次為不飽和脂肪酸的生物合成、脂肪酸的生物合成、細(xì)胞色素p450物質(zhì)代謝。本次研究結(jié)果表明亞油酸代謝在2組患者代謝途徑之間差異最明顯，亞油酸是1種雙不飽和脂肪酸，是人類營養(yǎng)中必需的脂肪酸，也是長和發(fā)育所必需的不飽和脂肪酸。亞油酸可轉(zhuǎn)化為花生四烯酸，花生四烯酸是C反應(yīng)蛋白、白細(xì)胞白介素-6等炎癥因子的前體，可以促進(jìn)炎癥因子的產(chǎn)生[24]。Kirkup SE等[25]的體外實(shí)驗(yàn)同樣發(fā)現(xiàn)亞油酸使PGE2合成。增加亞油酸會產(chǎn)生大量的白三烯和前列腺素，對炎癥不利。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，與CLP組小鼠相比，CLP+IPEN 組的Occludin、ZO-1、MUC2 的表達(dá)明顯下降，改善腸道屏障功能，減輕腸功能損傷程度，進(jìn)一步促進(jìn)了亞油酸代謝及去飽和的過程，也提高了小鼠對亞油酸的利用率。此外，也參與了不飽和脂肪酸的生物合成、脂肪酸的生物合成、細(xì)胞色素p450物質(zhì)代謝過程?？傊囼?yàn)結(jié)果表明整蛋白腸內(nèi)營養(yǎng)制劑可以通過調(diào)節(jié)亞油酸代謝、不飽和脂肪酸生物合成、脂肪酸生物合成和細(xì)胞色素p450物質(zhì)的代謝來改善膿毒癥相關(guān)腸道損傷的代謝紊亂。其亞油酸代謝最有意義。

綜上所述，本研究通過代謝組學(xué)方法深入研究了整蛋白營養(yǎng)制劑中膿毒癥引起的代謝紊亂。研究結(jié)果表明，整蛋白腸內(nèi)營養(yǎng)制劑可以通過調(diào)節(jié)亞油酸代謝、不飽和脂肪酸生物合成、脂肪酸生物合成和細(xì)胞色素p450物質(zhì)的代謝來改善膿毒癥相關(guān)腸道損傷的代謝紊亂。此外，這些制劑在增強(qiáng)腸道屏障功能、減輕小鼠體重減輕和減輕腸道損傷嚴(yán)重程度方面具有潛力，從而為增強(qiáng)膿毒癥治療功效奠定了基礎(chǔ)。

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（責(zé)任編輯：周一青）

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