桑 野，關(guān) 皎，潘 旭，朱鶴云，馮 波 （吉林醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院，吉林 吉林 132013）

糖尿病和高血脂是臨床十分常見(jiàn)的疾病，這些疾病會(huì)引發(fā)多種疾病癥狀與體征，從而對(duì)人體健康造成不同程度的損害[1]。隨著時(shí)代的發(fā)展和進(jìn)步，人們的健康意識(shí)不斷增強(qiáng)，開(kāi)始從治療疾病向預(yù)防疾病轉(zhuǎn)變，這一時(shí)代背景極大地促進(jìn)了保健品行業(yè)的發(fā)展。植物多糖具有較多的生物功能，例如增強(qiáng)人體免疫力、降低血糖、促進(jìn)造血、抗利尿、抗衰老、抗菌抗炎、抗腫瘤等[2-3]。研究表明，菊芋多糖具有降糖、抗氧化等作用[4-5]；絞股藍(lán)多糖具有抗炎、抗腫瘤、降血壓、降血脂、降血糖、抗衰老、抑制血栓形成等作用[6]；甘草為藥食兩用物品，其多糖具有抗氧化、降血糖等作用[7-8]。以上述植物多糖為基礎(chǔ)，制備了具有降糖、降脂作用的多糖片劑，具有方便運(yùn)輸、儲(chǔ)藏、便于攜帶、服用方便等優(yōu)點(diǎn)。本次研究擬制備一種具有降低血糖、血脂的菊甘藍(lán)多糖片，該片劑主要以菊芋、絞股藍(lán)、甘草多糖為主原料，其他輔料相復(fù)配，經(jīng)研磨、過(guò)篩、制粒、壓片而成，并對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定，以期為其工業(yè)化生產(chǎn)提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

菊芋粗多糖、絞股藍(lán)粗多糖、甘草粗多糖（實(shí)驗(yàn)室自制）；硬脂酸鎂（北京澤平科技有限責(zé)任公司）；聚乙烯比咯烷酮[PVP（K30）]（武漢普洛夫生物科技有限公司）；羧甲基淀粉鈉（CMS-Na，江蘇奧福生物科技有限公司）；乙醇（濟(jì)南普萊華化工有限公司）；微晶纖維素（山東六佳藥用輔料股份有限公司）；葡萄糖（江蘇成謙生物科技有限公司）；濃硫酸（分析純，深圳市華亞新材料有限公司）；苯酚（分析純，山東旭晨化工科技有限公司）；蒸餾水（實(shí)驗(yàn)室自制）。

電子天平（ME54，海圣科儀器設(shè)備有限公司），單沖式壓片機(jī)（TDP-5，上海天峰制藥設(shè)備有限公司），片劑四用測(cè)定儀（78X-2，天津市嘉鑫海機(jī)械設(shè)備有限公司），紫外分光光度計(jì)（UV-1800，上海昂拉儀器有限公司）。

1.2 處方篩選及優(yōu)化

1.2.1 苯酚硫酸法處理

因所制片劑主要成分為多糖，而多數(shù)輔料為多糖類(lèi)，為防止對(duì)主成分紫外分析產(chǎn)生影響，故對(duì)多種輔料進(jìn)行苯酚-硫酸法處理，測(cè)定吸光度。吸光度值越小，對(duì)多糖紫外吸收影響越小，從而確定菊甘藍(lán)多糖片劑處方中輔料組成。

1.2.2 單因素試驗(yàn)

通過(guò)單因素試驗(yàn)篩選填充劑、崩解劑、黏合劑的用量，以片劑外觀、黏合度、崩解時(shí)限和硬度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，確定菊甘藍(lán)多糖片劑最優(yōu)處方。

1.3 制備工藝確定

使用普通片劑的幾種常用制備方法，對(duì)苯酚硫酸法和單因素試驗(yàn)篩選出的輔料種類(lèi)和用量進(jìn)行片劑的制備，根據(jù)輔料的性質(zhì)、粉體或顆粒的流動(dòng)性及片劑的成型性選擇最佳制備方法，并確定輔料和原料藥的添加順序。

1.4 片劑一般檢查

1.4.1 片重差異檢查

取3 批樣品，每批抽取20 片，精密測(cè)定總重量，計(jì)算平均片重。再分別精密測(cè)定各片重量，每片重量與平均片重比較不得超出±5%，要求超出差異限度的片劑不得超過(guò)2片，并不得有1片超出限度1倍。

1.4.2 硬度檢查

取3 批樣品，每批抽取10 片，用片劑四用測(cè)定儀測(cè)每片硬度，要求硬度在45~55 N之間。

1.4.3 崩解時(shí)限檢查

取3 批樣品，每批分別抽取6 片置吊籃玻璃管中，啟動(dòng)片劑四用測(cè)定儀檢查崩解時(shí)間，各片均應(yīng)在15 min內(nèi)全部崩解。

1.5 含量測(cè)定

1.5.1 方法的建立

應(yīng)用紫外分光光度計(jì)采用苯酚硫酸法進(jìn)行菊甘藍(lán)多糖片的含量測(cè)定。檢測(cè)波長(zhǎng)為490 nm。

1.5.2 溶液配制

對(duì)照品溶液制備：稱(chēng)取葡萄糖對(duì)照品0.1005 g，加入到100 mL容量瓶中，以水為溶劑，稀釋并定容至刻度，搖勻，即得濃度為1.005 g/L 對(duì)照品儲(chǔ)備液；精密量取不同體積（0.0、0.8、1.6、2.4、3.2、4.0 mL）的上述對(duì)照品儲(chǔ)備液，加入到50 mL 容量瓶中，得到濃度分別為0、16.08、32.16、48.24、64.32、80.40 mg/L 對(duì)照品溶液。供試品溶液制備：取菊甘藍(lán)多糖片劑5片研磨成粉，取樣品1 g，加入適量的75%乙醇溶液進(jìn)行溶解、搖勻、過(guò)濾。濾液轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，以水為溶劑稀釋至刻度，作為供試品溶液。

1.5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍

吸取不同體積（0、16.08、32.16、48.24、64.32、80.40 mg/L）的對(duì)照品溶液各1 mL，轉(zhuǎn)移至10 mL 容量瓶中（苯酚硫酸法處理），測(cè)定吸光度A（檢測(cè)波長(zhǎng)：490 nm），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（橫坐標(biāo)為對(duì)照品濃度，縱坐標(biāo)為吸光度），計(jì)算回歸方程。

1.5.4 精密度實(shí)驗(yàn)

吸取濃度為32.16 mg/L 的對(duì)照品溶液1 mL，測(cè)定6次吸光度，計(jì)算RSD值，RSD值應(yīng)小于2%。

1.5.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，室溫下放置不同時(shí)間（0、2、4、8、12、24 h）后測(cè)吸光度，計(jì)算吸光度的RSD 值應(yīng)小于2%。

1.5.6 回收率試驗(yàn)

分別量取供試品溶液9 份，每份0.5 mL，置于9個(gè)容量瓶中。分別加入低、中、高濃度（16.08、48.24、80.40 mg/L）的對(duì)照品溶液各0.5 mL，每個(gè)濃度各3份，測(cè)定吸光度，計(jì)算回收率及RSD 值，RSD 值應(yīng)小于2%。

1.5.7 含量測(cè)定

按“1.5.2”方法制備三批樣品溶液，苯酚硫酸法處理，測(cè)定吸光度，帶入回歸方程計(jì)算多糖含量。

2 結(jié)果

2.1 處方篩選及優(yōu)化

2.1.1 輔料種類(lèi)篩選

對(duì)淀粉、糊精、微晶纖維素、PVP（K30）、蔗糖、硬脂酸鎂等多種輔料進(jìn)行苯酚-硫酸法處理，紫外吸收情況見(jiàn)表1。結(jié)果顯示，微晶纖維素、PVP（K30）、硬脂酸鎂紫外吸光度值較小，對(duì)多糖紫外吸收影響較小，可以用作輔料。因此確定菊甘藍(lán)多糖片劑處方中輔料組成，填充劑為微晶纖維素，黏合劑選擇PVP（K30），硬脂酸鎂為潤(rùn)滑劑，考慮成本因素，崩解劑選擇CMS-Na。

表1 輔料苯酚-硫酸法測(cè)定結(jié)果Tab.1 Determination results of auxiliary material phenolsulfuric acid method

2.1.2 填充劑用量篩選

以外觀、硬度、崩解時(shí)限為考察指標(biāo)，選擇最佳微晶纖維素用量。結(jié)果顯示，微晶纖維素用量逐漸增多時(shí)，外觀變整潔，且硬度及崩解時(shí)間相應(yīng)減小。當(dāng)微晶纖維素用量為4 g 時(shí)，外觀及硬度符合片劑要求，但崩解時(shí)間仍大于15 min，所以下一步對(duì)崩解劑CMS-Na的用量進(jìn)行考察。

2.1.3 崩解劑用量篩選

以硬度和崩解時(shí)限為指標(biāo)對(duì)片劑進(jìn)行評(píng)價(jià)，選擇最佳CMS-Na 用量。因微晶纖維素也具有崩解作用，所以CMS-Na 用量不需太多。結(jié)果顯示，隨著CMS-Na 用量增加，片劑崩解時(shí)間減少，硬度減小。當(dāng)用量為1 g時(shí)，崩解時(shí)間<15 min，硬度適中。

2.1.4 黏合劑用量篩選

以黏合效果、崩解時(shí)限和硬度為指標(biāo)對(duì)片劑進(jìn)行評(píng)價(jià)，從而選出最佳的PVP（K30）濃度。該片劑主料為多糖，本身黏合性較好，故黏合劑PVP（K30）需求不大。結(jié)果顯示，當(dāng)PVP（K30）用量逐漸增加，片劑黏度增大，崩解時(shí)間及硬度也逐漸增大。當(dāng)PVP（K30）濃度為1.5%時(shí)，黏度適中，且崩解時(shí)限和硬度符合要求。

2.1.5 處方確定

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，確定最優(yōu)處方：以20 g計(jì)，菊芋粗多糖10 g，甘草粗多糖3 g，絞股藍(lán)粗多糖2 g，微晶纖維素4 g，CMS-Na1g，聚乙烯吡咯烷酮濃度為1.5%，硬脂酸鎂0.2%。

2.2 制備工藝

制備方法選擇濕法制粒壓片法。將原料藥菊芋、甘草、絞股藍(lán)粗多糖及所有輔料分別研磨，加入微晶纖維素，過(guò)100目篩充分混勻，得到無(wú)結(jié)塊粉末。加入1.5% PVP（K30）溶液（溶劑為80%乙醇），制備軟材，制粒（18 目篩），50 ℃烘箱中干燥后整粒（10 目篩），最后加硬脂酸鎂，充分混合。將所得粉末用單沖壓片機(jī)壓片，即得菊甘藍(lán)多糖片。

2.3 片劑一般檢查

2.3.1 片重差異檢查

樣品片重檢查結(jié)果如表2 所示。3 批樣品（每批20片）總片重分別為8.02、8.09、8.04 g，平均片重分別為0.401、0.405、0.402g，因此3 批樣品每片的重量應(yīng)分別在0.381~0.421 g、0.385~0.425 g、0.382~0.422 g范圍內(nèi)，3批樣品均符合要求。

表2 片劑一般檢查結(jié)果Tab.2 General inspection results of tablets

2.3.2 硬度檢查

供試品硬度檢查結(jié)果如表2 所示，3 批樣品硬度均在45~55 N之間，平均硬度為51 N，符合要求。

2.3.3 崩解時(shí)限檢查

崩解時(shí)限結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果顯示，3 批樣品均在15 min內(nèi)崩解完畢，符合規(guī)定。

2.4 含量測(cè)定

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍

根據(jù)對(duì)照品溶液吸光度A（檢測(cè)波長(zhǎng)：490 nm），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（橫坐標(biāo)為對(duì)照品濃度，縱坐標(biāo)為吸光度），計(jì)算得到回歸方程（A=0.009 7C+0.096 1；R=0.999 7）。由此可知，該方法在16.08~80.40 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.2 精密度實(shí)驗(yàn)

根據(jù)精密度測(cè)定結(jié)果，RSD 為0.53%，符合相關(guān)要求，儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果顯示，RSD為1.62%，樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4 回收率試驗(yàn)

結(jié)果顯示，菊甘藍(lán)多糖片的平均回收率為99.89%，RSD為1.03%，樣品回收率符合要求。

2.4.5 含量測(cè)定

含量測(cè)定結(jié)果如表3 所示，3 批樣品中，多糖含量平均值為0.215 g/片，RSD為0.22%。

表3 菊甘藍(lán)多糖片中多糖含量Tab.3 Polysaccharide content in chrysanthemum cabbage polysaccharide tablets

3 討論

多糖片主成分為多糖，黏性較大，且遇水黏合性更強(qiáng)，對(duì)崩解時(shí)間影響較大。此外，本著綠色健康的原則，應(yīng)盡量添加較少的輔料。片劑制備中，填充劑直接選用主成分菊芋多糖，片劑崩解時(shí)間超過(guò)2 h，可能是由于多糖占處方比例過(guò)大，黏性太強(qiáng)。通過(guò)考察多種填充劑，微晶纖維素對(duì)多糖含量測(cè)定影響最小，考慮成本因素，崩解劑最終選擇CMS-Na。由于主成分本身黏性大，黏合劑PVP（K30）濃度也不需太高，以免發(fā)生黏沖、硬度過(guò)大等問(wèn)題。通過(guò)對(duì)以上輔料進(jìn)行單因素試驗(yàn)考察，獲得最佳處方：每20 g 含有菊芋粗多糖10g，甘草粗多糖3 g，絞股藍(lán)粗多糖2 g，微晶纖維素4 g，CMS-Na 1g，加入1.5%聚乙烯吡咯烷酮適量，濕法制粒，得干顆粒后，加約總量0.2%硬脂酸鎂，壓片，即得。

濕法制粒壓片制備工藝得到的片劑具有外觀美觀、流動(dòng)性好、耐磨性較強(qiáng)、壓縮成形性好等特點(diǎn)，是一種優(yōu)良的片劑制備工藝。但濕法制粒壓片法過(guò)程較為復(fù)雜，需要使用較多的水和有機(jī)溶劑，并嚴(yán)格把控制粒條件和干燥溫度等參數(shù)。本試驗(yàn)為保證片劑流動(dòng)性，且減小輔料對(duì)多糖含量測(cè)定的影響，故黏合劑溶劑選擇80%乙醇，干燥溫度為50 ℃。

為了對(duì)菊甘藍(lán)多糖片劑的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，根據(jù)中華人民共和國(guó)藥典（2020 版）對(duì)其一般性能進(jìn)行檢查。經(jīng)檢查制備的片劑的硬度、片重差異和崩解時(shí)限均符合標(biāo)準(zhǔn)。進(jìn)一步建立了苯酚硫酸法處理采用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行含量測(cè)定方法，在使用硫酸苯酚法測(cè)定多糖時(shí)，由于反應(yīng)的時(shí)間以及溫度會(huì)對(duì)溶液的顯色反應(yīng)有一定的影響，從而導(dǎo)致誤差[11]。所以在實(shí)際測(cè)定過(guò)程中，應(yīng)盡量保證反應(yīng)時(shí)間與要求時(shí)間相符。最終得到多糖含量平均值為0.215 g/片。

綜上所述，通過(guò)本次試驗(yàn)，篩選得出菊甘藍(lán)多糖片最佳處方與制備工藝，制成片劑含量均勻、性狀穩(wěn)定、表面光滑圓整，為菊甘藍(lán)多糖片工業(yè)化生產(chǎn)提供數(shù)據(jù)，并為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供了可靠依據(jù)。