劉麗艷,張宏馨*,邊佳悅,廉海晨,韓艷梅,袁廣富

(1.河北大學 醫(yī)學綜合實驗中心,河北 保定 071000;2.河北大學 基礎醫(yī)學院,河北 保定 071000)

生命科學研究的飛速發(fā)展、與國內外合作交流的日益頻繁,使得實驗動物福利倫理的重要性日益凸顯。根據(jù)實驗動物福利相關的國際標準和我國國家標準的要求,任何動物實驗開始之前都需要實驗動物福利倫理審查。高質量的實驗動物不僅體現(xiàn)了人類對實驗動物生命的尊重,也能夠保證實驗結果的科學性、準確性,因此建立科學、完善、規(guī)范的實驗動物福利倫理審查制度,可以促進實驗動物管理的標準化,保障實驗方案設計的合理性,監(jiān)督從業(yè)人員操作的規(guī)范性,保證實驗結果的可靠性和重復性。

為了維護和保障實驗動物福利,各級實驗動物管理部門設置了審查機構、制定了實驗動物福利倫理審查制度。與歐美國家一樣,實驗動物管理與使用委員會(IACUC)是我國管理實驗動物福利問題的主要機構,目前中國有2000 多家實驗動物專業(yè)機構,其中70%建立了IACUC,制定了IACUC 審查相關的法規(guī)標準和管理制度等[1]。在開展動物實驗前IACUC 依據(jù)實驗動物福利倫理審查制度對實驗動物的使用方案及動物實驗方案中有關問題進行審查[2]。在科研實驗動物福利倫理審查過程中發(fā)現(xiàn),部分科研人員對實驗動物相關法規(guī)和知識了解不夠,實驗動物的保護意識淡薄,不理解倫理審查的意義及重要性;在醫(yī)學生教育體系中,教學大綱中僅有醫(yī)學倫理學,動物倫理學最多只有2~4 個學時[3],而教學實驗動物的福利倫理審查一直被忽視。本文梳理了近三十年來我國實驗動物福利倫理審查相關的行政法規(guī)、國家標準、行業(yè)標準、地方標準和團體標準,分析、歸納了實驗動物福利倫理審查、監(jiān)督管理工作多年實踐中發(fā)現(xiàn)的諸多問題,對科研及教學活動中實驗動物福利倫理審查內容提出建議。希望能為涉及到動物實驗的科研項目順利通過倫理審查提供參考,為我國教學用實驗動物福利倫理審查建設提供參考,為醫(yī)學相關院校實驗動物福利課程的內容安排提供一定的建議。

國內1988 年發(fā)布了《實驗動物管理條例》[4],又經過幾次修訂,在2021 年8 月3 日,中華人民共和國科學技術部公布了《中華人民共和國實驗動物管理條例(修訂草案 征求意見稿)》以下簡稱《征求意見稿》[5],《征求意見稿》更加強調了“保障動物福利”,修訂《實驗動物管理條例》已列入國務院立法計劃。善待實驗動物,建立實驗動物福利倫理審查制度已經是國際通用原則,2018 年公布的國家標準GB/T35892[6]實驗動物福利倫理審查指南是國內第一部涉及實驗動物福利倫理的標準,隨后國內又相繼頒布了多部實驗動物福利倫理審查的國家、地方、行業(yè)、團體標準,促使我國實驗動物福利倫理的管理更加規(guī)范化、標準化。

1 我國實驗動物福利倫理審查工作的發(fā)展歷程

我國實驗動物福利倫理審查工作起步較晚,第一部實驗動物管理行政法規(guī)是1988 年由國家科學技術委員會頒布的《實驗動物管理條例》[4],僅提出對實驗動物應該被關愛的理念——從事實驗動物工作的人員對實驗動物必須愛護,不許戲弄或虐待[7]。條例經過2011 年、2013 年、2017 年三次修訂,均沒有單獨針對實驗動物福利及倫理審查做明確的相關規(guī)定[8]。2021 年8 月3 日,國家科學技術部對該條例進行了全面修訂,發(fā)布了修訂草案和征求意見稿,其中第五章第二十七條新增加了是“福利倫理審查”的相關內容,第七章對違反條例的各種情形增加了具體懲罰措施,最嚴重的懲罰會依法追究刑事責任。我國第一部專門針對實驗動物福利倫理的規(guī)范性管理文件是2006 年頒布的《關于善待實驗動物的指導性意見》(國科發(fā)財字[2006]398 號),明確指出了善待實驗動物的“3R”原則,科學、合理、人道地使用實驗動物[9],但該指導意見并沒有對IACUC 的建設和倫理審查過程中遇到的問題提出具體的細則。2018 年2 月6 日,我國正式頒布《實驗動物福利倫理審查指南》(GB/T 35892-2018)[6],這是中國第一部涉及實驗動物福利倫理的標準。該指南涉及到實驗動物福利倫理審查的各個方面,包括審查機構、原則、內容、程序、規(guī)則和檔案管理,對實驗動物福利倫理審查提供了詳細和全面的工作依據(jù)[1]。2018 年6 月30 日,中國實驗動物學會正式發(fā)布了《實驗動物 動物實驗方案審查方法》(T/CALAS 52-2018)[10],該標準對實驗動物使用方案的審查內容作出了具體詳細的要求。除此之外,其他國家標準中,也有涉及實驗動物福利的內容, 例如GB-14925 《實驗動物 環(huán)境及設施》[11],該國家標準1994 年首次發(fā)布,2020 年第三次修訂意見稿中增加了動物福利方面的內容,全文共有6 條涉及“福利”;行業(yè)標準RB/T 173-2018《實驗動物人道終點評審指南》[12]為實驗動物倫理審查工作提供了更全面、更具體的評價依據(jù)。我國一些地方、團體也相繼提出了實驗動物福利倫理審查的相關標準[13-14]。這些國家標準、行業(yè)標準、地方標準以及團體標準(見圖1)的實施必將顯著推動我國實驗動物福利倫理的規(guī)范化管理,有力推動我國實驗動物科技的健康發(fā)展。

2 實驗動物福利倫理審查存在的問題

經過三十年的發(fā)展,我國在實驗動物福利倫理審查等方面的管理雖然逐步走向法制化、規(guī)范化,但與發(fā)達國家相比仍存在欠缺[15],很多單位的實際執(zhí)行福利倫理審查的工作中還存在諸多問題。我們把多年在動物福利倫理審查、監(jiān)督管理工作中發(fā)現(xiàn)的具體問題進行總結,希望能引起醫(yī)學相關院校對教學用實驗動物福利倫理審查的高度重視,也希望科研、教學人員在福利倫理審查中可以避免。

2.1 不重視實驗動物相關知識培訓

實驗動物從業(yè)人員專業(yè)背景復雜,涉及醫(yī)學、化學、藥學、獸醫(yī)學、生命科學等多種學科,實驗動物專業(yè)的人員很少,大多數(shù)從業(yè)人員缺乏對實驗動物相關國家政策及系統(tǒng)知識的了解[16]。個別單位主管領導對實驗動物保護意識淡薄,對實驗動物從業(yè)人員培訓重視不夠,給予參加外部/內部培訓等繼續(xù)教育的機會很少;部分從業(yè)人員個人認識不足,無法關注福利倫理審查和生物安全的要求。國內不少省市都開展了實驗動物從業(yè)人員培訓工作,但部分省份欠缺對不同層次、不同專業(yè)背景的從業(yè)人員進行有針對性、實用性的專業(yè)技術培訓,個別省份專業(yè)培訓教育水平低、規(guī)模小,技能培訓不完善。實驗動物相關培訓通知發(fā)布后,受眾人群不足,如某高校的相關培訓通知只能發(fā)布在部門網(wǎng)站上,其他校區(qū)的院系可能看不到。

2.2 福利倫理審查的重要性認識不足

我國目前已建成的2000 多家實驗動物專業(yè)機構中,30%的機構并沒有成立IACUC;已建立IACUC的機構中,部分機構由于領導的不重視、IACUC 成員及實驗動物從業(yè)人員的專業(yè)技術水平參差不齊,IACUC 如同虛設,實驗動物福利倫理審查工作流于形式,個別IACUC 甚至跨過了審查的環(huán)節(jié),直接簽字蓋章后發(fā)放倫理審查報告。動物實驗方案必須在動物實驗前提交IACUC,但部分科研人員并不理會IACUC 的要求,只是在成果鑒定或論文發(fā)表被要求提供倫理證明時敷衍呈上一份不真實的倫理報告;個別不專業(yè)的IACUC 為了避免麻煩并不要求實驗方案的提交[17]。凡是涉及實驗方案的變化均應提前提交IACUC,由IACUC 決定是需要提交新的實驗方案申請還是做實驗方案的修訂[18]。但是部分科研人員在實驗執(zhí)行時隨意更改實驗方案(如更改主要負責人、增加動物數(shù)量、增加對照組、更改動物來源、改變實驗程序、更改麻醉方式等)而未提交變更申請,實驗結束后不提交倫理回顧性終結報告。

2.3 福利倫理審查內容不理解

部分實驗動物從業(yè)人員只注重動物實驗本身,不太關注或不夠全面、專業(yè)懂得倫理審查的主要內容,忽視了倫理審查中內容審批的重要性及完整性。少數(shù)項目執(zhí)行人的審查材料不齊全、不真實;少數(shù)項目組設計的動物實驗缺乏必要性、缺乏科學意義,只是盲目進行重復實驗;少數(shù)項目組不明白什么是動物來源清楚合法、選擇的品種/品系不正確;少數(shù)項目組動物的運輸不符合要求、實驗方案不符合動物福利要求、飼料-籠具-墊料-飲水不符合動物要求;少數(shù)項目組在正式開始實驗之前,沒有對實驗目的、預期利益與造成動物的傷害、死亡進行綜合評估。部分實驗動物從業(yè)人員沒有經過專業(yè)培訓,實驗技術不符合技術規(guī)程、實驗過程中沒有有效的避免和減少動物緊張與痛苦的措施、實驗時不進行科學的保定和有效的麻醉、動物處置不符合倫理規(guī)范、動物處死不符合安樂死原則、實驗動物尸體沒有實行有效、規(guī)范和安全的處理[8]。

2.4 3R 原則執(zhí)行不到位

實驗動物福利倫理審查工作中,3R 原則——即“替代、減少和優(yōu)化”是得到廣泛認可的評價原則。實驗動物數(shù)量是3R 原則中“減少”原則的具體體現(xiàn)。國家標準GB/T 35892-2018《實驗動物 福利倫理審查指南》[6]在“審查原則”中明確規(guī)定——禁止無意義的重復性實驗。

實驗動物麻醉是3R 原則中“優(yōu)化”原則的重要內容,即優(yōu)化實驗設計,將實驗動物疼痛和痛苦降到最低。在整個實驗期間降低實驗動物的痛苦和疼痛既能保障動物福利,也能獲得科學準確的實驗數(shù)據(jù)[19]。優(yōu)化實驗設計,將實驗動物疼痛和痛苦降至最低是每個IACUC 關注的核心內容[2]。但少部分科研人員在動物實驗的過程中或動物處置時既不進行麻醉,也不采取鎮(zhèn)痛措施。另外,如何根據(jù)科研目的選擇出適合所用實驗動物的麻醉藥并確定其使用劑量,是進行動物實驗的前提條件。但動物用麻醉劑相關研究內容比較少,在實驗動物福利相關的行政法規(guī)或國家標準中,并沒有涉及麻醉藥使用的詳細規(guī)定,部分科研人員僅從文獻或其他渠道查出某種藥品可以用于麻醉,但并不清楚所選用的麻醉藥是否符合實驗動物福利倫理、是否適合項目選用的實驗動物和科研目的,比如水合氯醛因其麻醉效果差、刺激強、毒性大,不符合實驗動物福利倫理等問題,很多雜志已經禁止發(fā)表用水合氯醛做麻醉劑的文章。

實驗動物人道終點和安樂死是3R 原則中“優(yōu)化”原則的一個核心內容[20-21]。部分科研人員不清楚實驗性終點和人道終點的區(qū)別、不知道如何科學的選定人道終點、不懂得人道終點的選定原則、不知道人道終點計劃如何實施、不了解安樂死的內涵及倫理學意義、不知道如何科學合理的實施安樂死。

實驗動物尸體及其廢棄物的處置關系到生物安全和環(huán)境保護,但目前我國還沒有關于實驗動物尸體管理有效的法律法規(guī)[22],缺乏系統(tǒng)的無害化管理制度,部分科研人員不知道實驗動物尸體的危害及無害化處理的重要性。

3 對實驗動物福利倫理審查的思考和建議

3.1 提高研究人員專業(yè)素質

國家標準GB/T 35892-2018《實驗動物福利倫理審查指南》中規(guī)定,實驗動物從業(yè)人員,應通過專業(yè)技術培訓,并獲得從業(yè)人員相關資質和技能[22],然后才能從事動物實驗相關工作。研究人員應定期學習實驗動物和動物實驗專業(yè)知識、福利倫理的相關法規(guī)和標準、動物實驗設施的相關管理規(guī)定,知曉實驗動物的飼養(yǎng)和生物安全,具備保護實驗動物福利的技術能力(如抓取、保定、麻醉、給藥、取材、手術、安樂死等)。在福利倫理審查申請表中除了要對研究人員從事動物實驗的經驗、培訓、資質和能力進行描述,還應該寫明相關專業(yè)證書的編號。研究人員應該具備動物認知能力,能夠正確選擇出所需、易感的實驗動物的品種品系;建議研究人員與委員會批準的人員一致。

3.2 倫理審查文件的核驗

動物實驗正式開始前,實驗負責人向IACUC 提交正式的福利倫理審查申請表和相關的舉證材料,以供核驗;動物實驗正式結束時,實驗負責人應向IACUC 提交該項目的福利倫理回顧性終結報告[6]。

3.3 動物來源、品系和數(shù)量

實驗所使用的動物應來自取得實驗動物生產許可證的單位,只有來源清楚、合法,才能保證實驗數(shù)據(jù)的可靠性,且使用實驗動物及相關產品的科學研究應在具有實驗動物使用許可證的實驗室進行;項目研究人員應能正確選擇出所需、易感的實驗動物的品種品系(不同品系動物可能對藥物的反應不同),避免濫用、錯用實驗動物;使用的實驗動物的數(shù)量應符合3R 原則中的“減少”原則,控制合理的數(shù)目,不必要的研究就不可以開展。實驗動物的實際來源、品種品系、實際數(shù)量均應與委員會批準的保持一致。

3.4 動物實驗方案

動物實驗方案是研究者根據(jù)實驗目的制訂的,在實驗動物福利倫理審查過程中是最關鍵的環(huán)節(jié)。制訂的動物實驗方案必須詳盡、科學、合理、可行,實驗方案的審查包括:是否將倫理審查申請表中的信息量最大化;是否將不必要的研究完全去除;是否充分考慮了動物實驗替代方法及3R 原則;是否詳細列出了對動物可能造成的所有可預期的傷害;實驗手法和內容、麻醉與鎮(zhèn)痛、安樂死與仁慈終點是否符合實驗動物福利倫理原則;給藥途徑和劑量是否正確(不同動物種類、不同給藥途徑,動物所承受的給藥劑量是不同的),并需說明選擇給藥途徑和劑量的理由;實驗分組、飼養(yǎng)空間、數(shù)據(jù)統(tǒng)計是否合理;實驗方案中是否包括執(zhí)行安樂死的標準。

3.5 麻醉

麻醉劑和鎮(zhèn)痛藥的種類和用量不僅關系到動物福利,也直接影響實驗結果,是實驗動物福利倫理審查的一個重要內容。動物實驗的開展必須通過適當?shù)逆?zhèn)靜或者麻醉的方法最大程度減少動物的痛苦、不適和疼痛。高質量的麻醉,不僅有利于實驗的順利進行,也能減少因動物應急產生的實驗數(shù)據(jù)的誤差,提高實驗數(shù)據(jù)的真實性和可靠性。國家標準GB/T 27416-2014《實驗動物機構 質量和能力的通用要求》[23]和地方標準DB11/T 1734-2020[13]的第七章中分別有11 個條款和8 個條款涉及動物麻醉。在實驗動物倫理審查申請表中應注明麻醉藥的名稱、劑量、使用方式和作用時間,以及使用的其他人文關懷等方法[10]。

3.6 人道終點

動物實驗人道終點的確定是科學目的與動物福利相權衡的結果[12],在實驗動物倫理審查過程中是很關鍵的一環(huán),選擇的人道終點是否科學合理、是否最大程度地減輕實驗動物的疼痛和痛苦,是否選擇了人道終點而非實驗性終點,對實驗動物達到人道終點的癥狀是否描述精確,人道終點選擇的時機是否正確,都是IACUC 主要關注的內容。GB/T 27416-2014《實驗動物機構 質量和能力的通用要求》[23]的第七章中,對人道終止時機的選擇提出了要求,科研人員也可參照RB/T 173-2018《實驗動物人道終點評審指南》[12]中對人道終點的確定原則、人道終點的評估、人道終點計劃、人道終點的再評估以及附錄A 和B 中對人道終點的通用性和特定性指標的標準要求,指導和規(guī)范動物實驗人道終點工作的開展,該標準的制定也為實驗動物倫理審查工作提供了更全面、更具體的評價依據(jù),能夠提高動物實驗人道終點審評工作的一致性和有效性。

3.7 安樂死

安樂死是實驗動物福利的一個核心內容[14],是指采用盡可能少導致疼痛和痛苦的方法結束動物的生命。美國獸醫(yī)醫(yī)學會[24]、加拿大動物保護協(xié)會[25]、歐盟委員會[26]等都發(fā)布過與動物安樂死有關的標準,中國實驗動物學會也于2017 年發(fā)布了《實驗動物安樂死指南》[14],該指南中詳細描述了安樂死的基本原則,實施條件,常用實驗動物、嚙齒類動物和二氧化碳安樂死的方法。安樂死的選擇與實驗目的、動物的品種品系、采集標本的部位等因素有關,在實驗動物倫理審查申請表中應詳細說明選擇的安樂死的方法、執(zhí)行時間等信息。

3.8 動物尸體處置

實驗后動物尸體處置應科學合理,應符合倫理規(guī)范,應最大限度地保證實驗動物的福利,處置動物尸體應符合環(huán)保要求。在處理動物尸體前,要確認動物已安樂死亡,且要選擇更有效地減少和縮短動物痛苦時間的安樂死[3]?？蒲腥藛T可參照國家標準GB 14925-2010《實驗動物 環(huán)境及設施》[11]中的規(guī)定對非感染和感染實驗動物尸體及組織進行處理。

4 總結

我國實驗動物保護起步較晚,配套的國家法規(guī)和標準有所欠缺,在科研活動中,部分科研人員在實驗動物福利倫理審查方面存在諸多問題,IACUC成員及實驗動物從業(yè)人員的水平也參差不齊,有些單位雖設立了IACUC,但其工作人員不知道如何維護實驗動物福利、不清楚如何規(guī)范實驗動物倫理審查、不確定怎樣監(jiān)督從業(yè)人員的技術能力,實驗動物福利倫理審查工作流于形式。在教學活動中,我國目前還沒有教學用實驗動物倫理審查的規(guī)定和相關文件,動物福利課程內容安排也很少涉及福利倫理審查的內容。根據(jù)國內實際情況,急需進一步規(guī)范科研用實驗動物福利倫理審查、急需建立教學用實驗動物福利倫理審查制度、急需擴大實驗動物從業(yè)人員、科研人員及在校醫(yī)學生的培訓范圍,加強從業(yè)人員、科研人員和在校醫(yī)學生福利倫理審查的教育培訓,尤其應加大本科生及研究生的培養(yǎng)力度。