張永芳，李曉

1.鄭州科技學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院（鄭州 450000）；2.鄭州科技學(xué)院鄭州市食品安全快速檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（鄭州 450000）

四環(huán)素類藥物是由金黃色鏈霉菌所形成的一類抗菌化合物，能夠抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成，主要包括四環(huán)素、土霉素、金霉素和強(qiáng)力霉素等，畜牧業(yè)中多用于治療畜禽疾病和改善飼料利用率[1]。但四環(huán)素類藥物的過(guò)度使用，不僅會(huì)使畜禽動(dòng)物產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致疾病的突然爆發(fā)，對(duì)畜牧業(yè)的發(fā)展造成一定威脅；而且畜禽肉制品中藥物殘留還會(huì)通過(guò)食物鏈富集作用進(jìn)入人體，從而產(chǎn)生中毒、過(guò)敏反應(yīng)、三致作用（致癌、致畸、致突變作用）、病原菌耐藥性及對(duì)影響胃腸道菌群等，危害人體健康[2]。我國(guó)相關(guān)法律規(guī)定，四環(huán)素類藥物的最大殘留限量在食品動(dòng)物肌肉組織中為100～600 μg/kg[3]。四環(huán)素類藥物檢測(cè)技術(shù)主要免疫分析法（放射免疫分析、熒光免疫分析等）[4]、理化分析法（薄層色譜法、高效液相色譜法、液相色-譜質(zhì)譜法）[5-8]。其中液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS）將液相色譜和質(zhì)譜優(yōu)點(diǎn)結(jié)合起來(lái)，其分離能力強(qiáng)、高選擇性、高靈敏度，被廣泛地應(yīng)用在食品分析領(lǐng)域中[9]。此次研究依據(jù)GB/T 21317—2007《動(dòng)物源性食品中四環(huán)素類獸藥殘留量檢測(cè)方式 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法與高效液相色譜法》，對(duì)畜禽類樣品的前處理、質(zhì)譜和色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，以建立一個(gè)更便捷、高效的LC-MS快速檢測(cè)方法，為四環(huán)素類藥物的檢測(cè)提供快速、有效的檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

試驗(yàn)材料選自鄭州市銀合農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)隨機(jī)選擇的豬肉、雞肉和鴨肉。

無(wú)水硫酸鈉：分析純，福晨（天津）化學(xué)試劑有限公司；乙二胺四乙酸二鈉（分析純，天津致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）；乙酸乙酯（分析純，天津致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；檸檬酸（分析純，天津致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）；磷酸氫二鈉（分析純，天津市永大化學(xué)試劑有限公司）；乙酸（色譜純，天津致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）；乙腈：色譜純，福晨（天津）化學(xué)試劑有限公司，天津致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；甲醛（色譜純，天津致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）；甲酸（色譜純，天津致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素，德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH（純度均大于95%）；純凈水（一級(jí)，杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）。

1.2 儀器與設(shè)備

賽默飛TSQ Quantis Plus三重四極桿質(zhì)譜儀（美國(guó)）；電子分析天平（TXB622L，日本島津）；電子分析天平（AUX120，日本島津）；氮吹儀（HSC-24B，天津恒奧科技有限公司）；旋渦混勻器（IKA/艾卡MS3，德國(guó)）；多管旋渦混合儀（E0AAHM-01，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）；超聲波清洗機(jī)（SB25-12DTD，寧波新芝）；高速冷凍離心機(jī)（3K15，北京五洲東方科技發(fā)展有限公司）；50 mL尖底離心管（北京蘭杰科技有限公司）；15 mL尖底離心管（北京蘭杰科技有限公司）；HLB固相萃取柱（60 mg/3 mL，江蘇杰島高新材料科技有限公司）；攪碎機(jī)；試驗(yàn)所用一次性吸管、一次性使用無(wú)菌注射器及0.22 μm有機(jī)濾膜，皆由河南省安必諾檢測(cè)技術(shù)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3 溶液配制

1.3.1 四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制

依據(jù)純度折算為100%質(zhì)量的四環(huán)素、土霉素、強(qiáng)力霉素、金霉素各稱取10.0 mg，分別通過(guò)用甲醇溶解將其定容至100 mL容量瓶?jī)?nèi)，所獲得的質(zhì)量濃度為100 mg/L，在-18 ℃以下保存，儲(chǔ)備液放入棕色瓶中，可儲(chǔ)存1年以上。

1.3.2 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制

根據(jù)需要，將0.1%甲酸+5%甲醇水溶液稀釋至所用濃度，制備混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液以便立即使用。

1.3.3 其他溶液的配制

1.3.31 0.1 mol/L檸檬酸溶液

準(zhǔn)確稱取21.01 g檸檬酸，用水定容至1 000 mL，搖勻，使其溶解。

1.3.32 0.2 mol/L磷酸氫二鈉溶液

準(zhǔn)確稱取28.41 g磷酸氫二鈉，用水定容至1 000 mL，搖勻，使其溶解。

1.3.33 Mcllvaine緩沖溶液

將1 000 mL 0.1 mol/L檸檬酸溶液與625 mL 0.2 mol/L磷酸氫二鈉溶液混合。

1.3.34 0.1 mol/L Na2EDTA-Mcllvine緩沖溶液

稱取60.5 g乙二胺四乙酸二鈉放入1 625 mL Mcllvaine緩沖溶液中，并旋渦1 min，使其完全溶解。

1.3.35 甲醇+水

準(zhǔn)確量取5 mL甲醇和95 mL水將其混合。

1.3.36 甲醇+乙酸乙酯

量取10 mL甲醇與90 mL乙酸乙酯混合。

1.3.37 OasisHLB固相萃取柱

規(guī)格為60 mg/30 mL，使用前用5 mL甲醇和5 mL水進(jìn)行預(yù)處理，保持柱體濕潤(rùn)。

1.3.38 0.1%甲酸

量取1 mL甲酸，用水定容至1 000 mL。

1.3.39 5%甲醇

量取5 mL甲醇，用水定容至100 mL。

1.3.3.10 0.1%甲酸-5%甲醇

1 000 mL 0.1%甲酸與100 mL 5%甲醇混合。

1.3.3.11 1%乙酸乙腈溶液

準(zhǔn)確量取10 mL乙酸與990 mL乙腈，將其混勻。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 樣品制備及貯存

為防止（豬肉、雞肉、鴨肉）在空氣中受到污染或殘留物量發(fā)生改變，在所有樣品中分別取800 g，通過(guò)機(jī)器高速攪拌均勻攪碎，均分成2份，1份為備樣，1份用做分析，裝入干凈自封袋中，密封過(guò)后貼標(biāo)簽做標(biāo)記，2份別用于留樣和分析，將標(biāo)記的樣品在-18℃以下的溫度下冷凍儲(chǔ)存。

1.4.2 測(cè)定步驟

1.4.21 國(guó)標(biāo)方法的樣品前處理[10]

稱取2.0 g（精確到0.01 g）待測(cè)樣品，分別放入50 mL尖底離心管中，依次加入20，20和10 mL的0.1 mol/L Na2EDTA-Mcllvainc緩沖液，并在冰水中進(jìn)行超聲波處理，進(jìn)行3次提取，每次旋渦1 min，超聲波處理10 min，離心速度3 000 r/min，離心5 min（溫度控制在15 ℃），合并上清液，定容至50.0 mL，渦旋5 000 r/min，冷凍離心10 min（溫度控制為15 ℃），并用濾紙過(guò)濾，耐心等待凈化。

用移液槍精準(zhǔn)吸取10 mL提取液，以1滴/s的速度過(guò)HLB固相萃取柱，使用前用5 mL甲醇和5 mL水進(jìn)行活化。等待液體全部流完，依次用5 mL水和5 mL甲醇-水淋洗HLB固相萃取柱，全部倒掉流出液，抽干5 min，用10 mL甲醇+乙酸乙酯進(jìn)行洗脫，將洗脫液用氮?dú)獯抵两桑囟瓤刂?0 ℃以下），加入1 mL 0.1%甲酸5%甲醇水溶解雜質(zhì)，過(guò)0.22 μm濾膜，用LC-MS法測(cè)定。

1.4.22 優(yōu)化后的樣品前處理

準(zhǔn)確稱取2.0 g（精確到0.01 g）樣品已被攪碎后的試樣放入50 mL尖底離心管中，在離心管中添加4 g無(wú)水硫酸鈉和4 g乙二胺四乙酸二鈉，加入10 mL 1%乙酸乙腈，對(duì)其進(jìn)行渦旋提取5min，利用超聲波10 min，按6 000 r/min離心5 min。用一次性5 mL吸管，吸取5 mL上清液放入15 mL離心管中，收集溶液在40 ℃內(nèi)水浴，直到氮?dú)獯抵两?，? mL 0.1%甲酸5%甲醇水溶液溶解雜質(zhì)，上振蕩器渦旋1 min，超聲波3 min，按9 000 r/min離心3 min，離心完后，棄去上層油脂，立即用注射器吸出，并通過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜上機(jī)，供LC-MS法測(cè)定。

1.4.3 色譜條件與質(zhì)譜條件

1.4.31 色譜條件

色譜柱Accucore C18（150 mm×2.1 mm，2.6 μm）；柱溫30 ℃；流速0.3 mL/min；進(jìn)樣量10 μL；流動(dòng)相A2為0.1%甲酸水，B1相為甲醇。

表1 梯度洗脫條件

1.4.32 質(zhì)譜條件

離子源，采用電噴霧離子；掃描方式，采用正離子掃描；檢測(cè)方式，采用多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（SRM）；噴霧電壓3 500 V；鞘氣壓力35 Arb；輔助氣壓力5 Arb；尾吹氣壓力0 Arb；離子傳輸管溫度350 ℃；霧化溫度350 ℃。

表2 化合物檢測(cè)離子對(duì)

1.5 方法驗(yàn)證

1.5.1 線性范圍

選取空白樣品，加入標(biāo)準(zhǔn)系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照優(yōu)化后的前處理步驟進(jìn)行操作，上機(jī)檢測(cè)，縱坐標(biāo)（y）表示峰值面積，橫坐標(biāo)（x）表示溶液濃度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)R2值，判斷線性關(guān)系是否良好。

1.5.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和加標(biāo)回收率試驗(yàn)

1.5.21 標(biāo)準(zhǔn)曲線

配制系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用0.1%甲酸5%甲醇水溶液配制5，10，25，50和100 μg/mL的系列工作液，分別從低濃度到高濃度進(jìn)樣，縱坐標(biāo)表示峰面積，橫坐標(biāo)表示溶液濃度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.5.22 加標(biāo)回收率試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取2.0 g（精確到0.01 g）樣品，將樣品（豬肉、雞肉、鴨肉）分別做3次平行樣品，將樣品在不同濃度下制備3個(gè)50 mL尖底離心管，分別為20，50和100 μg/kg質(zhì)量分?jǐn)?shù)添加4種藥物混合標(biāo)液。運(yùn)用式（1）計(jì)算[11]，并進(jìn)行3次平行試驗(yàn)，計(jì)算平均回收率。

1.5.3 檢測(cè)限和定量限的確定

檢出限的定義為添加較低含量目標(biāo)物進(jìn)行添加回收試驗(yàn)時(shí)可產(chǎn)生3倍信噪比（rSN≥3）的化合物的質(zhì)量濃度，而定量限是指通過(guò)添加法經(jīng)測(cè)定方法的全過(guò)程測(cè)定可以可靠地確定樣品中化學(xué)污染物的最低濃度，一般也認(rèn)為是至少產(chǎn)生10倍信噪比（rSN≥10）的化合物的質(zhì)量濃度[12]。

2 結(jié)果與分析

2.1 儀器方法優(yōu)化結(jié)果

四環(huán)素類藥物（四環(huán)素、土霉素、金霉素、強(qiáng)力霉素）混合標(biāo)準(zhǔn)溶液、豬肉空白樣品、雞肉空白樣、鴨肉空白樣品添加藥物。樣品加標(biāo)濃度為100 μg/mL，將國(guó)標(biāo)方法與該方法平均回收率進(jìn)行比較見(jiàn)表3，該方法采用1%乙酸乙腈提取溶劑，回收率優(yōu)于國(guó)標(biāo)法，該方法準(zhǔn)確度高、操作過(guò)程簡(jiǎn)便快捷、成本低。

表3 國(guó)標(biāo)法和試驗(yàn)方法平均回收率

由表3的檢測(cè)結(jié)果可知，優(yōu)化后的試驗(yàn)方案中采用1%乙酸乙腈，提取效果好，樣品中四環(huán)素類藥物（四環(huán)素、土霉素、金霉素、強(qiáng)力霉素）的加標(biāo)回收率均比優(yōu)化前要高。國(guó)標(biāo)法試驗(yàn)方法的豬肉加標(biāo)的平均回收率為48.3%～109.6%，雞肉加標(biāo)的平均回收率49.7%～115.6%，鴨肉加標(biāo)的平均回收率50.9%～60.6%；SRSD為2%～11%。優(yōu)化后的試驗(yàn)方法測(cè)得豬肉加標(biāo)的平均回收率82.8%～119.5%，雞肉加標(biāo)的平均回收率83.2%～120.4%，鴨肉加標(biāo)的平均回收率86.9%～94.6%，SRSD為0.7%～3.6%。

試驗(yàn)比較1%乙酸乙腈和0.1 mol/L Na2EDTAMcllvainc緩沖液提取效果，但0.1 mol/L Na2EDTAMcllvaine緩沖溶液提取液，渾濁且黏稠，雜質(zhì)多，濾紙過(guò)濾時(shí)間長(zhǎng)，容易堵塞HLB柱。針對(duì)HLB柱堵塞問(wèn)題，在緩沖溶液中加入乙腈，有利于促進(jìn)沉淀蛋白，提取液變清透，當(dāng)乙腈含量增加，沉淀蛋白效果更佳，但使用HLB柱凈化時(shí)，為降低乙腈含量需要稀釋提取液，過(guò)程繁瑣。試驗(yàn)中優(yōu)化乙酸含量，發(fā)現(xiàn)加入1%乙酸時(shí)，提取效果更優(yōu)，可獲得很高的待測(cè)物的加標(biāo)回收率。因此，采用1%乙酸乙腈進(jìn)行提取。另外，動(dòng)物源性食品中脂肪含量較高，對(duì)回收率和檢測(cè)結(jié)果造成一定程度影響，提取溶液用乙腈時(shí)，大量干擾物質(zhì)會(huì)被抽離出來(lái)，大部分干擾物是油脂，為將樣品中的油脂類的干擾物抽離出去，采用高速冷凍離心去除油脂，該方法在低溫情況下會(huì)將油脂類的干擾物從溶液中分離出來(lái)，以達(dá)到最佳的凈化分離效果。復(fù)溶后，高速冷凍離心能很好地去除樣品中的油脂類干擾物。

2.2 四環(huán)素類藥物（四環(huán)素、土霉素、金霉素、強(qiáng)力霉素）標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系

配制一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照低濃度到高濃度依次進(jìn)樣，質(zhì)量濃度為5，10，25，50和100 μg/mL的系列工作液，以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.2.1 四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

四環(huán)素在不同濃度不同樣品經(jīng)過(guò)檢測(cè)后，求得的回歸方程及相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表4，由有相關(guān)系數(shù)（R2＞0.999）可知，四環(huán)素在5～100 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系較好，適合用于樣品的檢測(cè)。

表4 檢測(cè)豬肉、雞肉、鴨肉中四環(huán)素工作曲線的回歸方程及相關(guān)系數(shù)

2.2.2 土霉素標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

土霉素在不同濃度不同樣品經(jīng)過(guò)檢測(cè)后，求得的回歸方程及相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表5，由相關(guān)系數(shù)（R2＞0.999）可知，土霉素在質(zhì)量濃度范圍5～100 μg/mL時(shí)，線性關(guān)系較好，適合用于樣品的檢測(cè)。

表5 檢測(cè)豬肉、雞肉、鴨肉中土霉素工作曲線的回歸方程及相關(guān)系數(shù)

2.2.3 金霉素的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

金霉素不同濃度不同樣品經(jīng)過(guò)檢測(cè)后，求得的回歸方程及相關(guān)系數(shù)，見(jiàn)表6。由相關(guān)系數(shù)（R2＞0.999）可知，金霉素在質(zhì)量濃度范圍5～100 μg/mL時(shí)，線性關(guān)系比較好，適合用于樣品的檢測(cè)。

表6 檢測(cè)豬肉、雞肉、鴨肉中金霉素工作曲線的回歸方程及相關(guān)系數(shù)

2.2.4 測(cè)定強(qiáng)力霉素的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

配制的強(qiáng)力霉素不同濃度不同樣品進(jìn)過(guò)檢測(cè)后，求得的回歸方程及相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表7。由相關(guān)系數(shù)（R2＞0.999）可知，強(qiáng)力霉素在5～100 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系較好，適合用于樣品的檢測(cè)。

表7 檢測(cè)豬肉、雞肉、鴨肉中強(qiáng)力霉素工作曲線的回歸方程及相關(guān)系數(shù)

四環(huán)素類藥物在質(zhì)量濃度范圍5～100 μg/mL之間，不同濃度與響應(yīng)值（峰值面積）呈現(xiàn)良好線性關(guān)系，R2值在0.999～1之間，均大于0.999。

2.3 回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.3.1 豬肉樣品

檢測(cè)時(shí)用豬肉樣品在20，50和100 μg/mL這3個(gè)水平質(zhì)量濃度上分別進(jìn)行添加回收率試驗(yàn)，并且進(jìn)行3次平行試驗(yàn)。四環(huán)素類藥物（四環(huán)素、土霉素、金霉素、強(qiáng)力霉素）在不同樣品中準(zhǔn)確度結(jié)果見(jiàn)表8。

表8 測(cè)定豬肉中四環(huán)素類藥物（四環(huán)素、土霉素、金霉素、強(qiáng)力霉素）回收率

由表8可知，測(cè)定豬肉中四環(huán)素類藥物（土霉素、金霉素、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素）的回收率在20，50和100 μg/kg這3個(gè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)水平：豬肉中加標(biāo)質(zhì)量分?jǐn)?shù)20 μg/kg時(shí)，四環(huán)素、土霉素、強(qiáng)力霉素、金霉素平均回收率分別為85.5%，86%，137.2%和126.1%。加標(biāo)質(zhì)量分?jǐn)?shù)50 μg/kg時(shí)，四環(huán)素、土霉素、強(qiáng)力霉素、金霉素平均回收率分別為108.9%，115%，113.2%和107.8%。加標(biāo)質(zhì)量分?jǐn)?shù)100 μg/kg時(shí)，四環(huán)素、土霉素、強(qiáng)力霉素、金霉素平均回收率分別為86%，82.8%，119.5%和85.8%。

2.3.2 雞肉樣品

檢測(cè)時(shí)用雞肉樣品在20，50和100 μg/kg這3個(gè)水平質(zhì)量分?jǐn)?shù)上分別進(jìn)行添加回收率試驗(yàn)，并且進(jìn)行3次平行試驗(yàn)。四環(huán)素類藥物（土霉素、金霉素、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素）在不同樣品中準(zhǔn)確度結(jié)果見(jiàn)表9。

由表9可知，測(cè)定雞肉中四環(huán)素類藥物（土霉素、金霉素、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素）的回收率在20，50和100 μg/kg這3個(gè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)水平：雞肉中加標(biāo)質(zhì)量分?jǐn)?shù)20 μg/kg時(shí)，四環(huán)素、土霉素、強(qiáng)力霉素、金霉素平均回收率分別為128.6%，96.6%，211.6%和158.3%；加標(biāo)質(zhì)量分?jǐn)?shù)50 μg/kg時(shí)，四環(huán)素、土霉素、強(qiáng)力霉素、金霉素平均回收率分別為149.6%，106.9%，136.1%和109.2%；加標(biāo)質(zhì)量分?jǐn)?shù)100 μg/kg時(shí)，四環(huán)素、土霉素、強(qiáng)力霉素、金霉素平均回收率分別為83.2%，90.6%，120.4%和95.9%。

表9 測(cè)定雞肉中四環(huán)素類藥物（四環(huán)素、土霉素、金霉素、強(qiáng)力霉素）回收率

2.3.3 鴨肉樣品

檢測(cè)時(shí)用鴨肉樣品在20，50和100 μg/kg這3個(gè)水平質(zhì)量分?jǐn)?shù)上分別進(jìn)行添加回收率試驗(yàn)，并且進(jìn)行3次平行試驗(yàn)。四環(huán)素類藥物（土霉素、金霉素、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素）在不同樣品中準(zhǔn)確度結(jié)果見(jiàn)表10。

表10 測(cè)定鴨肉中四環(huán)素類藥物（四環(huán)素、土霉素、金霉素、強(qiáng)力霉素）的回收率

由表10可知，測(cè)定鴨肉中四環(huán)素類藥物（土霉素、金霉素、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素）的回收率在20，50和100 μg/kg這3個(gè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)水平：鴨肉中加標(biāo)質(zhì)量分?jǐn)?shù)20 μg/kg時(shí)，四環(huán)素、土霉素、強(qiáng)力霉素、金霉素平均回收率分別為183.4%，164.1%，163.3%和118.5%；加標(biāo)質(zhì)量分?jǐn)?shù)50 μg/kg時(shí)，四環(huán)素、土霉素、強(qiáng)力霉素、金霉素平均回收率分別為144.7%，169.8%，190.5%和129.6%；加標(biāo)質(zhì)量分?jǐn)?shù)100 μg/kg時(shí)，四環(huán)素、土霉素、強(qiáng)力霉素、金霉素平均回收率分別為86.9%，87.5%，94.6%和88.6%。

綜上，試驗(yàn)方法檢測(cè)豬肉、雞肉、鴨肉中四環(huán)素類藥物殘留，準(zhǔn)確稱取2.0 g（精確到0.01 g）樣品，樣品中添加混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，加標(biāo)質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為20，50和100 μg/kg，按照優(yōu)化后的前處理進(jìn)行操作，四環(huán)素平均回收率為83.2%～183.4%，土霉素平均回收率為82.8%～169.8%，強(qiáng)力霉素為94.6%～211.6%，金霉素為85.8%～158.3%，SRSD在0.7%～9.0%之間，SRSD均小于10%，均符合獸藥殘留分析的要求。

2.4 檢測(cè)限和定量限的確定

加標(biāo)水平5 μg/kg情況下，測(cè)得四環(huán)素、土霉素、金霉素、強(qiáng)力霉素的rSN≥3，加標(biāo)水平25 μg/kg情況下，測(cè)得四環(huán)素、土霉素、金霉素、強(qiáng)力霉素的rSN≥10。因此，樣品中的檢出限為5 μg/kg，定量限為25 μg/kg。

3 結(jié)語(yǔ)

試驗(yàn)采用LC-MS法對(duì)四環(huán)素類藥物進(jìn)行檢測(cè)與研究，通過(guò)對(duì)樣品前處理的優(yōu)化，使用1%乙酸乙腈溶液提取，提取效果好，樣品的回收率高。LC-MS法測(cè)定四環(huán)素類藥物素殘留，對(duì)豬肉、雞肉、鴨肉進(jìn)行回收率試驗(yàn)，測(cè)得四環(huán)素平均回收率83.2%～183.4%，土霉素平均回收率82.8%～169.8%，強(qiáng)力霉素平均回收率94.6%～211.6%，金霉素平均回收率85.8%～158.3%。通過(guò)對(duì)4種四環(huán)素類藥物質(zhì)量濃度5～100 μg/mL內(nèi)范圍進(jìn)行考察，不同濃度與響應(yīng)值（峰值面積）都有良好的線性關(guān)系，R2≥0.999，準(zhǔn)確度較高。優(yōu)化后的方法檢出限為5 μg/kg，而定量限為25 μg/kg，優(yōu)化后的方法靈敏度較好，因此更符合四環(huán)素獸藥殘留的定量分析。過(guò)試驗(yàn)數(shù)據(jù)與研究，試驗(yàn)方法簡(jiǎn)便快捷、提取回收率高、準(zhǔn)確度和靈敏度高，適合廣泛應(yīng)用于動(dòng)物源性食品中檢測(cè)四環(huán)素類藥物，HLB固相萃取柱市場(chǎng)價(jià)1支最低在6元左右，優(yōu)化后的前處理降低了成本。