汪一江 田 珂 劉榮枝 張人俊 毛以智 吳通奎 王 彬 汪忠榮*

(1 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150006；2 貴州農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 551400；3 貴州省黔東南州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州凱里 556000；4 貴州省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州貴陽(yáng) 550008；5 貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 550025）

豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）是一種可引起多種動(dòng)物共患的烈性傳染病病毒，患病豬是該病毒的主要儲(chǔ)存宿主[1]，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部最新發(fā)布的動(dòng)物疫病病種名錄中明確將其列為二類(lèi)動(dòng)物疫病，并被列為規(guī)模種豬場(chǎng)必須凈化的病種之一。據(jù)有關(guān)研究資料報(bào)道，從2011年起，全國(guó)豬場(chǎng)PRV-gE 抗體陽(yáng)性率在增加[2]。在貴州省也有對(duì)部分地區(qū)豬偽狂犬病野毒感染情況的研究[3]，但針對(duì)黔東南州規(guī)模豬場(chǎng)比較全面的豬偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性率調(diào)查方面的研究報(bào)道還未見(jiàn)到，因此，本研究在2022年對(duì)黔東南州轄區(qū)內(nèi)規(guī)模豬場(chǎng)（含合作社）的豬群進(jìn)行偽狂犬病gE抗體監(jiān)測(cè)，分析不同季節(jié)、不同生長(zhǎng)階段和不同飼養(yǎng)條件下豬偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性率，為黔東南州豬偽狂犬病的凈化、有效預(yù)防與控制提供科學(xué)的數(shù)據(jù)支撐，為生豬健康發(fā)展提供一定參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)樣品

采集貴州省黔東南州16 個(gè)縣市不同規(guī)模豬場(chǎng)臨床健康豬群的血液，分離血清，棄去溶血樣品，-86℃保存。共收集血清樣品1 388 份。

1.1.2 試劑來(lái)源

豬偽狂犬病病毒gE 蛋白ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20220906，武漢科前生物股份有限公司）由貴州省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心贈(zèng)送。

1.1.3 主要儀器

生物安全柜（BSC-1100ⅡA-2）生產(chǎn)廠家為濟(jì)南鑫貝西生物技術(shù)有限公司，酶標(biāo)儀生產(chǎn)廠家為賽默飛世爾儀器有限公司，臺(tái)式離心機(jī)生產(chǎn)廠家為江蘇金壇雙捷實(shí)驗(yàn)儀器廠，-86℃超低溫冰箱（TH-86-500-LA）生產(chǎn)廠家為北京天地精儀科技有限公司，生化培養(yǎng)箱購(gòu)于上海雙捷實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 檢測(cè)

試劑室溫平衡，稀釋血清，加入包被板、溫育、洗板、加入酶標(biāo)記物、洗板、加入底物液、避光顯色后加入終止液，記錄酶標(biāo)儀上630 nm 波長(zhǎng)的讀數(shù)。

1.2.2 結(jié)果判定

將讀取的OD630nm值根據(jù)公式計(jì)算，若試驗(yàn)成立，根據(jù)讀數(shù)判定樣品的陰陽(yáng)性。用Excel 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)匯總。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同季度豬偽狂犬病gE抗體

從表1 可見(jiàn)，2022年第一季度檢測(cè)生豬243 頭，豬偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性頭數(shù)為51 頭，陽(yáng)性率為20.99%，4 個(gè)季度中陽(yáng)性率最低；第二季度的陽(yáng)性率為29.34%（93/317）；第三季度的陽(yáng)性率為35.29%（144/408），在4 個(gè)季度的檢測(cè)中陽(yáng)性率最高；第四季度的陽(yáng)性率為23.33%（98/420）。全年豬偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性率為27.81%。按照季度排序?yàn)榈谌径龋镜诙径龋镜谒募径龋镜谝患径鹊呢i偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性率。

表1 不同季度豬偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性率

2.2 不同生長(zhǎng)階段豬群偽狂犬病gE抗體

從表2 可看出，生產(chǎn)母豬的豬偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性率為31.99%（167/522），種公豬抗體陽(yáng)性率為7.34%（8/109），哺乳仔豬抗體陽(yáng)性率為46.10%（71/154），保育仔豬抗體陽(yáng)性率為28.40%（69/243），育肥豬抗體陽(yáng)性率為20.28%（73/360）。由此可知，豬群中豬偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性率由高到低依次為：哺乳仔豬＞生產(chǎn)母豬＞保育仔豬＞育肥豬＞種公豬。

表2 不同生長(zhǎng)豬階段豬群豬偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性率

2.3 不同飼養(yǎng)條件豬群偽狂犬病gE抗體

從表3 可知，小型豬場(chǎng)（合作社）豬偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性率為45.41%（198/436），高于中型豬場(chǎng)的陽(yáng)性率（27.08%），遠(yuǎn)高于大型豬場(chǎng)的抗體陽(yáng)性率（10.61%）。

表3 不同飼養(yǎng)條件豬群豬偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性率

3 討論

gE 基因是PRV 的主要毒力基因[4]，該基因編碼產(chǎn)生的蛋白抗體可以應(yīng)用ELISA 法區(qū)分與gE 基因缺失疫苗免疫產(chǎn)生的抗體。據(jù)有關(guān)研究顯示，近年來(lái)，我國(guó)多地相繼發(fā)生了豬偽狂犬病，豬偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性率呈上升趨勢(shì)，本次調(diào)查結(jié)果黔東南州規(guī)模豬場(chǎng)PRV-gE 抗體平均陽(yáng)性率為27.81%，高于2018年汪忠榮等[5]對(duì)黔東南州部分規(guī)模化豬場(chǎng)的調(diào)查結(jié)果，這與全國(guó)豬偽狂犬病野毒感染調(diào)查相關(guān)研究變化趨勢(shì)一致[6-8]。在研究調(diào)查中還發(fā)現(xiàn)，小型豬場(chǎng)或合作社豬偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性率相對(duì)較高，黔東南州小型合作社大多是幾戶(hù)或十幾戶(hù)村民自發(fā)組織成立的，部分小型豬場(chǎng)由原有養(yǎng)殖大戶(hù)發(fā)展而成，飼養(yǎng)管理粗放，奉行原生態(tài)飼養(yǎng)模式，對(duì)動(dòng)物疫病防控的意識(shí)較低。同時(shí)，國(guó)家將豬偽狂犬病免疫列入常規(guī)強(qiáng)制免疫病種，費(fèi)用需養(yǎng)殖場(chǎng)自行負(fù)擔(dān)，基于成本考慮，養(yǎng)殖場(chǎng)主更不愿意接種豬偽狂犬病疫苗。此外，黔東南州民族節(jié)日較多，村民走親訪友較頻繁，一旦有豬偽狂犬病疫情發(fā)生，更易造成病毒的傳播和擴(kuò)散，在一定層面推動(dòng)了該地區(qū)豬偽狂犬病的流行和傳播。因此，政府應(yīng)加強(qiáng)豬偽狂犬病防控知識(shí)的宣傳和指導(dǎo)，同時(shí)，加強(qiáng)指導(dǎo)大型規(guī)模場(chǎng)對(duì)豬偽狂犬病的凈化，提升生物安全管理水平和意識(shí)。

黔東南州夏秋多雨，易引發(fā)山洪，蚊蟲(chóng)較多，鼠類(lèi)活動(dòng)也較多，增加了疫病防控難度。本次調(diào)查結(jié)果顯示，第二季度和第三季度豬偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性率均較高，第三季度最高。豬偽狂犬病的主要傳染源來(lái)自發(fā)病豬、隱性帶毒豬和鼠類(lèi)，但犬貓食用含有病毒的老鼠或病死豬廢棄物，也會(huì)將病毒傳播和擴(kuò)散。小型養(yǎng)殖場(chǎng)（或合作社）對(duì)場(chǎng)內(nèi)防鼠防鳥(niǎo)設(shè)施設(shè)備和管理措施不是很重視，到夏秋季鼠類(lèi)活動(dòng)頻繁，飼料等常有被鼠類(lèi)偷食現(xiàn)象。此外，很多小型養(yǎng)殖場(chǎng)主喜歡在場(chǎng)內(nèi)飼養(yǎng)幾只獵犬，且?guī)缀醪扇》硼B(yǎng)方式，獵犬食物來(lái)源復(fù)雜[9]。因此，第二、三季度豬偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性率上升可能與鼠類(lèi)和犬類(lèi)活動(dòng)頻繁有關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，豬在潮濕、氣溫多變的夏季、秋季更容易感染豬偽狂犬病，提示在夏季，更要注重該病的防控，本次調(diào)查與相關(guān)研究資料報(bào)道基本一致[10]。

在隱性帶毒豬場(chǎng)，隨著生產(chǎn)母豬胎次的增加，豬偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性率也會(huì)增加，哺乳仔豬豬偽狂犬病gE抗體水平高低與母豬乳汁帶毒相關(guān)，在本次調(diào)查中，生產(chǎn)母豬和哺乳仔豬的偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性率都相對(duì)較高，結(jié)果與他人研究結(jié)果一致[11,12]。因此，應(yīng)加強(qiáng)豬場(chǎng)豬偽狂犬病的監(jiān)測(cè)，推行種豬凈化，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行淘汰豬偽狂犬gE 抗體陽(yáng)性個(gè)體或生產(chǎn)性能不佳的母豬。對(duì)曾為偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性豬場(chǎng)，建議采用偽狂犬病基因缺失疫苗實(shí)施免疫接種，并定期采樣檢測(cè)免疫效果，根據(jù)檢測(cè)情況，建立完善適合本場(chǎng)的免疫程序，以防止病毒對(duì)未感染豬群及仔豬的早期感染。育肥豬群檢測(cè)到豬偽狂犬病毒gE 抗體陽(yáng)性，提示生豬在育肥豬階段也存在感染豬偽狂犬病病毒的風(fēng)險(xiǎn)，有研究表明，生豬在120日齡后感染豬偽狂犬病野毒的概率會(huì)逐漸增加，建議對(duì)育肥豬在100日齡加強(qiáng)1 次豬偽狂犬病疫苗免疫，防止野毒感染[13-15]。同時(shí)，育肥場(chǎng)也應(yīng)關(guān)注豬群的免疫程序是否科學(xué)合理，加強(qiáng)采樣監(jiān)測(cè)等，定期開(kāi)展風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，降低因感染病毒而對(duì)豬群造成的危害，減少經(jīng)濟(jì)損失。

4 結(jié)論

貴州省黔東南州規(guī)模豬場(chǎng)存在豬偽狂犬病gE抗體陽(yáng)性，且有上升趨勢(shì)，2022年的第二季度和第三季度相對(duì)較高，使其感染呈現(xiàn)一定的季節(jié)性，比較檢測(cè)結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，小型養(yǎng)豬場(chǎng)（合作社）豬偽狂犬病毒gE 抗體陽(yáng)性率最高，說(shuō)明在今后偽狂犬病的防控中，小型養(yǎng)豬場(chǎng)（合作社）應(yīng)作為重點(diǎn)監(jiān)測(cè)對(duì)象，并加以關(guān)注。