洪 波 馬燕強(qiáng) 劉益錢

(杭州市種豬試驗(yàn)場(chǎng)，浙江杭州 311115）

豬偽狂犬?。≒seudorabies,PR）是由豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）感染豬而引起的一種急性傳染性疾病，是危害生豬健康養(yǎng)殖的重要疫病之一[1,2]。PRV 屬于皰疹病毒科（Herpesviridae）α-皰疹病毒亞科，毒力是由幾種基因協(xié)同調(diào)控，主要有胸苷激酶（TK）基因、gE、gD、gI 基因等調(diào)控，缺失一種或幾種毒力基因，可使偽狂犬病毒的毒力下降，但仍保持免疫原性[3]，這使得偽狂犬病基因工程苗對(duì)該病的預(yù)防發(fā)揮了非常重要的作用，同時(shí)偽狂犬病病毒基因缺失蛋白抗體的ELISA 檢測(cè)方法可以準(zhǔn)確區(qū)分免疫抗體和野毒感染抗體，這為豬場(chǎng)偽狂犬病的凈化提供了理論基礎(chǔ)[4]。

浙江省杭州市某二元種豬場(chǎng)有長(zhǎng)白母豬487 頭，公豬12 頭，為了進(jìn)一步提高種豬質(zhì)量和生產(chǎn)成績(jī)，利用近3年時(shí)間對(duì)公豬、母豬、哺乳豬、保育豬、生長(zhǎng)豬、后備種豬實(shí)施采血檢測(cè)、隔離淘汰、調(diào)整免疫程序等技術(shù)，同時(shí)嚴(yán)控生物安全體系，完成了對(duì)該場(chǎng)豬偽狂犬病的凈化任務(wù)。

1 試驗(yàn)材料

1.1 主要試劑

PRV-gE 抗體檢測(cè)試劑盒、PRV-gB 抗體檢測(cè)試劑盒均購自IDEXX 公司。血清樣品的檢測(cè)步驟和結(jié)果判定均嚴(yán)格按照試劑盒說明書。

1.2 臨床樣品

浙江省杭州市某二元種豬場(chǎng)血清。

1.3 疫苗

豬偽狂犬病病毒gE 缺失活疫苗（Bartha-k61 株），生產(chǎn)廠商為美國(guó)碩騰。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

全豬場(chǎng)實(shí)行閉群管理、自繁自養(yǎng)，不從場(chǎng)外引種，準(zhǔn)備了1 棟600 m2的后備豬舍。

2.1 豬場(chǎng)偽狂犬病的流行調(diào)查與調(diào)整

由表1 可知，PRV-gE 抗體檢測(cè)結(jié)果表明，豬場(chǎng)所有的豬均有PRV 感染，但感染率不高，都在10.0%以內(nèi)；根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，豬場(chǎng)應(yīng)立即淘汰PRV-gE 抗體陽性的種公豬、種母豬、后備種豬及后備種豬同欄豬。PRV-gB 抗體檢測(cè)結(jié)果表明，種公豬、種母豬、哺乳前期、保育中后期陽性率高，保護(hù)力合格；哺乳后期、保育前期、生長(zhǎng)豬、后備種豬gB 抗體陽性率低，保護(hù)力不合格。經(jīng)分析，該豬場(chǎng)哺乳后期和保育前期豬的PRV-gB 陽性率低的主要原因是母源抗體下降；生長(zhǎng)豬和后備豬的保護(hù)力不夠的主要原因是免疫抗體的消長(zhǎng)規(guī)律。隨即調(diào)整了偽狂犬病的免疫程序（見表2）。

表1 2020年3月份對(duì)豬場(chǎng)PRV 感染和疫苗的免疫效果進(jìn)行調(diào)查

表2 調(diào)整前后的豬偽狂犬疫苗免疫程序

由表2 可看出，免疫程序調(diào)整后，增加了仔豬初生后的滴鼻免疫，并且在保育和后備豬階段各增加了1 次免疫。從2020年4月份開始執(zhí)行調(diào)整后的免疫程序，執(zhí)行5 個(gè)月后，再次進(jìn)行PRV 的凈化檢測(cè)。

2.2 豬場(chǎng)偽狂犬病感染陽性豬清除

2020年9月對(duì)實(shí)施凈化PRV 的豬群進(jìn)行PRV-gB陽性率檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在哺乳后期、保育前期、生長(zhǎng)豬、后備種豬階段PRV-gB 陽性率有了大幅度上升，且都超過了90.0%，說明調(diào)整后的免疫程序是可行的。PRV-gE檢測(cè)結(jié)果顯示，除了種公豬，每個(gè)階段的豬都有不同程度的野毒感染，說明僅調(diào)整免疫程序達(dá)不到凈化PRV 的目的。經(jīng)分析，淘汰PRV-gE 陽性種母豬、后備種豬及后備種豬同欄豬。同時(shí)，認(rèn)為豬場(chǎng)各豬只間存在水平交叉感染，需要加強(qiáng)豬場(chǎng)的生產(chǎn)管理。如加大種群淘汰力度，確保凈化順利進(jìn)行；加強(qiáng)后備豬的監(jiān)測(cè)，確保PRV-gE 100%陰性；嚴(yán)格實(shí)行“全進(jìn)全出”，進(jìn)出豬只前后，對(duì)欄舍徹底清洗消毒；及時(shí)從正常豬中挑出病豬并進(jìn)行隔離治療，死豬及時(shí)進(jìn)行無害化處理；加強(qiáng)豬場(chǎng)人員、物品和環(huán)境消毒，人員進(jìn)入豬舍換衣?lián)Q鞋；加強(qiáng)豬只日常保健。此后，免疫程序保持不變，繼續(xù)執(zhí)行PRV 的凈化，6月后豬場(chǎng)已出售大部分潛在帶毒豬只，并再次實(shí)施PRV 感染陽性豬清除。至2021年4月，再對(duì)豬群進(jìn)行PRV 抗體檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)各階段豬只PRV-gE抗體陽性率均為0，說明PRV 陽性初步清除成功，豬只間的水平傳播得到有效控制。各階段豬只PRV-gB 抗體陽性率也有了提高，免疫合格率在95%以上，說明疫苗免疫效果優(yōu)秀。

2.3 豬場(chǎng)偽狂犬病的感染評(píng)估與凈化維持

2021年5-12月，對(duì)豬場(chǎng)開展1 個(gè)豬生長(zhǎng)周期的抽樣日常檢測(cè)，從而來評(píng)估豬場(chǎng)PRV 的感染情況。針對(duì)種公豬分別于5、7、9、11月份每月抽檢2 次，每次抽檢比例25%；種母豬群6、8、10、12月份每月抽檢8次，每次抽檢比例6.25%；哺乳仔豬、保育豬、生長(zhǎng)豬每間隔1 個(gè)月抽檢1 次，后備種豬群每月分4 次抽檢，每次抽檢比例6.25%。監(jiān)測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抽檢全部豬群中PRV-gE 抗體陽性率均為0，整體豬群無野毒感染。PRV-gB 抗體陽性率也維持在95%以上，豬場(chǎng)免疫效果維持優(yōu)秀。表明該豬場(chǎng)PRV 凈化有效可行，達(dá)到預(yù)期效果。

2022年2月至2023年1月，對(duì)達(dá)到PRV 凈化標(biāo)準(zhǔn)的豬群持續(xù)進(jìn)行抽樣監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)各豬只沒有PRV 野毒感染。表明豬場(chǎng)PRV 已經(jīng)清除干凈，凈化成功。

3 小結(jié)

2011年以來，豬偽狂犬病的流行在全國(guó)范圍內(nèi)呈上升趨勢(shì)，目前已成為嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的疫病之一[5,6]。2018年非洲豬瘟在我國(guó)發(fā)生以來，豬場(chǎng)都增強(qiáng)了生物安全防控措施，也配備了檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，這為豬偽狂犬病、豬藍(lán)耳病等的凈化提供了條件[7-9]。龐超等[10]、呂素芳等[11]研究發(fā)現(xiàn)豬偽狂犬的毒力因子是gE 基因，我國(guó)實(shí)際生豬養(yǎng)殖過程中多采用PRV-gE 基因缺失疫苗預(yù)防豬偽狂犬病。本次豬場(chǎng)均采用PRV-gE 基因缺失疫苗，正常免疫豬體內(nèi)不會(huì)出現(xiàn)gE 抗體，只有感染偽狂犬野毒的才會(huì)出現(xiàn)gE 抗體，因此，gB 抗體檢測(cè)試劑盒聯(lián)合gE 抗體檢測(cè)試劑盒，能夠區(qū)分疫苗免疫抗體和野毒抗體[12,13]。此外，張志梅[14]、方偉等[15]研究表明，即使豬場(chǎng)免疫了PRV-gE 缺失疫苗，不同場(chǎng)的PRV 感染情況也有極大的差異，這與免疫疫苗是否高效，以及免疫是否科學(xué)合理有一定關(guān)系，所以在此次豬場(chǎng)豬偽狂犬病的凈化過程中，根據(jù)第1 次調(diào)查結(jié)果果斷修改了PRV 的免疫程序。在此次凈化案例中可以得出，PRV 感染陽性場(chǎng)，在有效使用PRV-gE 缺失疫苗的情況下，持續(xù)通過免疫-檢測(cè)-淘汰-監(jiān)測(cè)，仍然可以有效凈化PRV。