張曉穎,葉珍潔,吳靈潔,原津津,俞曉玲,4

(福建醫(yī)科大學(xué)孟超肝膽醫(yī)院 1.精準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室;2.重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;3.感染科;4.藥學(xué)部,福州 350025)

據(jù)世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)估計(jì),截至2022年底,全球現(xiàn)存活獲得性人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染/艾滋病患者3 900萬(wàn)例,艾滋病相關(guān)死亡的人數(shù)達(dá)4 040萬(wàn)例,有2 980萬(wàn)例正在接受抗病毒治療(antiretroviral therapy,ART),ART全球覆蓋率達(dá)到76%[1],ART是國(guó)際上公認(rèn)的防治艾滋病最有效的方法。目前,應(yīng)用于臨床的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物分為6大類,①核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑:以拉米夫定(lamivudine,3TC)、替諾福韋(tenofovir,TDF)為代表;②非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑:如奈韋拉平、依非韋倫(efavirenz,EFV)等;③蛋白酶抑制劑:如克力芝、利托那韋等;④融合抑制劑:艾博韋泰;⑤CC趨化因子受體5拮抗劑;⑥整合酶抑制劑:以多替拉韋(dolutegravir,DTG)、拉替拉韋(raltegravir,RAL)為代表[2]。其中多替拉韋、拉替拉韋、依非韋倫、拉米夫定和替諾福韋是治療HIV的一線藥物,國(guó)內(nèi)外艾滋病診療指南均推薦拉米夫定+替諾福韋+多替拉韋/拉替拉韋/依非韋倫作為成人艾滋病初治患者的ART方案之一[3-4]。然而,大部分抗HIV藥物的血藥濃度具有顯著的個(gè)體間差異,往往因?yàn)榀熜Р蛔慊驘o(wú)法忍受的不良反應(yīng)調(diào)整劑量甚至停藥?；蚨鄳B(tài)性、肝/腎功能不全、年齡、食物和藥物相互作用均會(huì)導(dǎo)致抗病毒藥血藥濃度范圍變異性大[5]。多替拉韋、拉替拉韋、依非韋倫、拉米夫定和替諾福韋的血漿谷濃度與療效、不良反應(yīng)顯著相關(guān),谷濃度過(guò)高易發(fā)生不良反應(yīng),濃度不足則易出現(xiàn)病毒學(xué)失敗或病毒耐藥變異[6]。故指南[3]和文獻(xiàn)[6]均明確指出需對(duì)抗HIV病毒藥物開展治療藥物監(jiān)測(cè)(therapeutic drug monitoring,TDM),指導(dǎo)個(gè)體用藥劑量,從而達(dá)到增效減毒的目的。

在抗病毒藥的藥動(dòng)學(xué)或TDM研究中,超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)法因其高效、高選擇性、高靈敏度、適用范圍廣等優(yōu)點(diǎn),越來(lái)越廣泛應(yīng)用于體內(nèi)生物樣品分析領(lǐng)域。此外,MS/MS能夠?qū)崿F(xiàn)多個(gè)成分同時(shí)定性、定量分析,降低樣品用量與分析檢測(cè)時(shí)間,大大提升檢測(cè)效率,現(xiàn)已成為血藥濃度檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。目前,國(guó)內(nèi)外僅有一項(xiàng)研究采用LC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定本研究的5種抗HIV病毒藥物及其他抗病毒藥[7],但該方法分析時(shí)間較長(zhǎng)(>6 min),樣品制備過(guò)程耗時(shí)長(zhǎng)(>10 min)。鑒于此,本研究旨在建立UPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定多替拉韋、拉替拉韋、依非韋倫、替諾福韋和拉米夫定血藥濃度,并應(yīng)用于臨床樣本檢測(cè),為TDM提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料與試藥

1.1儀器 LC-30A超高效液相色譜儀(日本Shimadzu公司);AB SCIEX TRIPLE QUAD TM 5500三重四級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國(guó)AB SCIEX公司);IKA VIBRAX VXR BASIC圓周振蕩器(德國(guó)IKA公司);Eppendorf centrifuge 5810R高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司);KQ3200E超聲波清洗器(昆山市超聲儀器廠);MSE225S-CE電子分析天平(德國(guó)Sartorius公司,感量:0.01 mg)。

1.2藥品與試劑 多替拉韋對(duì)照品(含量:98%,批號(hào):1-TIM-1-1)、拉替拉韋對(duì)照品(含量:96%,批號(hào):27-MJC-148-1)、依非韋倫對(duì)照品(含量:97%,批號(hào):7-ARD-114-5)、拉米夫定(含量:98%,批號(hào):2-SEH-171-1)、替諾福韋(含量:96%,批號(hào):1-JMO-90-1)均購(gòu)自Toronto Reseach Chemicals Inc;同位素內(nèi)標(biāo):多替拉韋-D5(含量:97.5%,批號(hào):13576)、拉替拉韋-D4(含量:96.9%,批號(hào):13765)、依非韋倫-D5(含量:94.6%,批號(hào):13656)、拉米夫定-13C-15N2(含量:96.2%,批號(hào):13575)、替諾福韋-D7(含量:99.8%,批號(hào):13574)均購(gòu)自于Quality Control Solutions Inc;甲酸(AR級(jí),西隴科學(xué)股份有限公司);甲醇、乙腈(HPLC級(jí),德國(guó)Merck KGaA);去離子水由我院血透室超純水凈化儀制。

2 方法與結(jié)果

2.1LC-MS/MS分析條件

2.1.1色譜條件 色譜柱Shim-pack XR-ODS Ⅲ(2.0 mm×50 mm,1.6 μm),預(yù)柱Shim-pack GIST-HP(G)C18(2.1 mm×10 mm,2 μm) ;流動(dòng)相:A為0.1%甲酸,B為0.1%甲酸乙腈,梯度洗脫程序如下(0—0.5 min,5%B;0.5—1.0 min,5% → 90%B;1.0—4.0 min,90%B;4.0—4.01 min,90%→5%B;4.01—5.0 min,5%B);流速為0.3 mL·min-1,進(jìn)樣量為2 μL,自動(dòng)進(jìn)樣器溫度為4 ℃,柱溫箱溫度為40 ℃。

2.1.2質(zhì)譜條件 采用電噴霧離子源(electric spray ion source,ESI),正離子模式掃描,離子源電壓為5 500 V,離子源溫度為550 ℃,氣簾氣壓力、碰撞氣壓力、輔助氣1壓力和輔助氣2壓力分別設(shè)置為40、9、50、50。掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(multiple reaction monitoring mode,MRM),5個(gè)分析物及內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜參數(shù)見表1。

2.2對(duì)照品儲(chǔ)備液及工作液的配制 精密稱取2份多替拉韋、拉替拉韋、依非韋倫、拉米夫定、替諾福韋對(duì)照品適量,均加入50%甲醇溶解,轉(zhuǎn)移至10 mL棕色量瓶中,定容至刻度,并儲(chǔ)存于-30 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩６嗵胬f的校準(zhǔn)曲線和QC儲(chǔ)備液濃度分別為179.7、214 μg·mL-1、拉替拉韋儲(chǔ)備液濃度分別為375.6、151 μg·mL-1、依非韋倫儲(chǔ)備液濃度分別為252.6、114.7 μg·mL-1、拉米夫定儲(chǔ)備液濃度分別為256、343.7 μg·mL-1、替諾福韋儲(chǔ)備液濃度分別為125、117.3 μg·mL-1。

精密吸取各分析物的標(biāo)準(zhǔn)曲線儲(chǔ)備液適量,加入50%甲醇稀釋混合,制成系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液(多替拉韋:0.625、1.25、2.5、5、10、15、20、30 μg·mL-1;拉替拉韋、拉米夫定、替諾福韋:0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、2.5、3.2、5 μg·mL-1;依非韋倫:1.25、2.5、5、10、20、30、40、60 μg·mL-1)。同時(shí),精密吸取各分析物的QC儲(chǔ)備液適量,按照上述方法配制定量下限(lower limit of quantitation,LLOQ)、低(QL)、中(QM)、高(QH)四水平質(zhì)控樣品工作液,多替拉韋質(zhì)控質(zhì)量濃度分別為0.625、1.5、6、24 μg·mL-1;拉替拉韋、拉米夫定、替諾福韋:0.1、0.25、1、4 μg·mL-1;依非韋倫:1.25、3、12、48 μg·mL-1。上述工作液均儲(chǔ)存于-30 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液及工作液的配制 取內(nèi)標(biāo)多替拉韋-D5、拉替拉韋-D4、依非韋倫-D5、拉米夫定-13C-15N2、替諾福韋-D7適量溶于10 mL棕色量瓶中,加50%甲醇溶解并定容,配制成質(zhì)量濃度為均為100 μg·mL-1的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液。取上述5種內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液適量,用50%甲醇繼續(xù)稀釋,配制成含多替拉韋-D5、拉替拉韋-D4、依非韋倫-D5、拉米夫定-13C-15N2、替諾福韋-D7的質(zhì)量濃度分別為10、0.8、30、1.6、2.5 μg·mL-1的混合內(nèi)標(biāo)工作液。

2.4血漿樣品預(yù)處理 取待測(cè)血漿樣品100 μL(標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液/質(zhì)控工作液10 μL+空白血漿90 μL),加入內(nèi)標(biāo)工作液10 μL,先后加入純水100 μL和乙腈500 μL,渦旋振蕩1 min,4 ℃、12 000×g離心5 min后,取上清液300 μL,加入乙腈-水(50：50)300 μL稀釋,振動(dòng)30 s,混勻后過(guò)孔徑0.45μm微孔濾膜,取2 μL進(jìn)樣分析。

2.5方法學(xué)考察

2.5.1專屬性實(shí)驗(yàn) 取6份不同來(lái)源的空白血漿,以等體積50%甲醇替代內(nèi)標(biāo)工作液,按“2.4節(jié)”下方法操作,得到空白血漿色譜圖;另取6份空白血漿制成含分析物的標(biāo)準(zhǔn)血漿溶液,按“2.4節(jié)”下方法操作,獲得含分析物與內(nèi)標(biāo)樣品的色譜圖?？瞻籽獫{中干擾組分的響應(yīng)低于分析物定量下限響應(yīng)的20%,并低于內(nèi)標(biāo)響應(yīng)的5%[8-10]。結(jié)果見圖1所示,5個(gè)分析物及同位素內(nèi)標(biāo)的峰型良好,且空白血漿中干擾組分的響應(yīng)遠(yuǎn)低于分析物定量下限響應(yīng)的20%、內(nèi)標(biāo)響應(yīng)的5%,證實(shí)了所開發(fā)的方法對(duì)分析物和同位素內(nèi)標(biāo)具有選擇性和特異性。

圖1 空白血漿(A)、LLOQ樣品中分析物(B)和內(nèi)標(biāo)的色譜圖(C)

2.5.2標(biāo)準(zhǔn)曲線及LLOQ 取空白血漿90 μL置于1.5 mL EP 管中,加入系列含分析物的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液10 μL,配制成系列標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品和質(zhì)控樣品,按“2.4節(jié)”下方法操作。以分析物與內(nèi)標(biāo)峰面積比值(Y)為縱坐標(biāo),分析物濃度(X,ng·mL-1)為橫坐標(biāo),采用加權(quán)1/x2最小二乘法進(jìn)行線性回歸分析,獲得各分析物的線性回歸方程。結(jié)果表明,DTG、EFV、RAL、3TC和TDF血藥濃度分別在62.5～3 000、125～6 000、10～500、10～500、10～500 ng·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)(R2)在0.998～0.999。5個(gè)分析物的各濃度水平準(zhǔn)確性均為89.8%～109.9%范圍內(nèi),各分析物L(fēng)LOQ的S/N均>5,符合“生物樣品定量分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”的要求[8],色譜圖見圖1。

2.5.3準(zhǔn)確度與精密度 取空白血漿90 μL,加入質(zhì)控工作液10 μL,配制 LLOQ、QL、QM、QH 4個(gè)濃度的質(zhì)控樣品,每種濃度平行制備6份,按“2.4節(jié)”下方法操作,計(jì)算日內(nèi)準(zhǔn)確度和精密度,連續(xù)測(cè)定3 d,確定日間準(zhǔn)確度和精密度(RSD)。各質(zhì)控樣本(除LLOQ外)日內(nèi)和日間的準(zhǔn)確度、RSD一般應(yīng)在標(biāo)示值的±15%內(nèi),LLOQ的準(zhǔn)確度、RSD應(yīng)在標(biāo)示值的±20%范圍內(nèi)[8-10]。DTG、RAL、EFV、3TC和TDF的日內(nèi)、日間準(zhǔn)確度和精密度結(jié)果見表2,5個(gè)分析物各濃度水平的日內(nèi)及日間精密度RSD值均<7%,日內(nèi)和日間各濃度水平的準(zhǔn)確度為94.0%～109.3%,符合“生物樣品定量分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”的要求[8]。

表2 5個(gè)分析物在血漿中的日內(nèi)、日間精密度和準(zhǔn)確度

2.5.4提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)試驗(yàn) 按照“2.4節(jié)”下方法分別制備高、中、低濃度QC樣品進(jìn)樣分析,以對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)峰面積比值作為A1;取6批不同來(lái)源的空白血漿,按照“2.4節(jié)”方法進(jìn)行血漿樣品前處理,取全部上清液分別加入高、低濃度質(zhì)控工作液和內(nèi)標(biāo)工作液各10 μL,再按“2.4節(jié)”下方法稀釋進(jìn)樣分析,以對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)峰面積的比值作為A2;以純水代替空白血漿,按“2.4節(jié)”操作配制成高、低QC水平進(jìn)樣分析,以對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)峰面積的比值作為A3。A1/A2 為提取回收率(extraction recovery,ER),A2/A3 為基質(zhì)效應(yīng)(matrix effect,ME)。同時(shí),采用同樣的方法分析溶血及高脂血漿的基質(zhì)效應(yīng)。分別計(jì)算5個(gè)分析物及其同位素內(nèi)標(biāo)的基質(zhì)效應(yīng),進(jìn)而計(jì)算內(nèi)標(biāo)校正的基質(zhì)效應(yīng),6批基質(zhì)內(nèi)標(biāo)校正的基質(zhì)效應(yīng)變異系數(shù)≤15%[8-10]。結(jié)果見表3,5個(gè)分析物及其內(nèi)標(biāo)的提取回收率為98.7%～104.5%,RSD均<5%;6批不同來(lái)源正常血漿的基質(zhì)效應(yīng)為98.1%～106.0%,RSD均<6%;溶血及高脂血漿的基質(zhì)效應(yīng)為95.7%～105.8%,RSD均<5%。因此,空白、溶血及高脂血漿基質(zhì)效應(yīng)不影響各分析物的定量。

表3 5個(gè)分析物在血漿中的基質(zhì)效應(yīng)和提取回收率

2.5.5殘留試驗(yàn) 在進(jìn)樣高濃度樣品(ULOQ)后,通過(guò)分析空白血漿樣本來(lái)估計(jì)殘留。根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版規(guī)定,分析高濃度樣品之后,空白樣品中的殘留應(yīng)不超過(guò)LLOQ的20%,且不超過(guò)內(nèi)標(biāo)的5%[8-10]。研究結(jié)果顯示,LLOQ中DTG、LMV、TNF的殘留<10%,RAL、EFV并無(wú)殘留;所有同位素內(nèi)標(biāo)的殘留均<1.3%,故各分析物的殘留不影響檢測(cè)的準(zhǔn)確度和精密度。

2.5.6稀釋效應(yīng) 配制高于定量上限濃度的血漿樣本(多替拉韋、拉替拉韋、依非韋倫、拉米夫定及替諾福韋質(zhì)量濃度分別為80、8、120、8、8 μg·mL-1),并用空白血漿稀釋該樣品,稀釋倍數(shù)分別為4、10、40倍(每個(gè)稀釋因子平行制備6份)。樣品稀釋不應(yīng)影響準(zhǔn)確度和精密度,稀釋后樣本的準(zhǔn)確度和精密度應(yīng)在±15%之內(nèi)[8-10]。結(jié)果顯示,稀釋4、10、40倍后,樣本的準(zhǔn)確度為93.8%～113.3%,精密度為2.4%～5.7%。因此,濃度超過(guò)定量上限的血漿樣本可以在樣本前處理和分析前稀釋。

2.5.7穩(wěn)定性試驗(yàn) 平行配制QC樣品(QL、QH)各6份,考察多替拉韋、拉替拉韋、依非韋倫、拉米夫定和替諾福韋在不同儲(chǔ)存或工藝條件下的血漿樣品穩(wěn)定性。

所有的穩(wěn)定性結(jié)果均是通過(guò)與0時(shí)刻比較而獲得,每個(gè)水平的QC濃度均值與標(biāo)示濃度的偏差應(yīng)在±15%范圍內(nèi)[8-10]。各分析物的穩(wěn)定性結(jié)果見表4,5個(gè)分析物的血漿樣品在室溫下可穩(wěn)定放置12 h、4 ℃可放置2 d、-30 ℃可放置20 d、可反復(fù)凍融3次、自動(dòng)進(jìn)樣室(4 ℃)中可持續(xù)放置12 h、重復(fù)進(jìn)樣3次依舊保持穩(wěn)定,各質(zhì)控樣品在上述條件下的RSD值均<10%。

表4 5個(gè)分析物在血漿中的穩(wěn)定性

2.6臨床應(yīng)用 該研究已通過(guò)福建醫(yī)科大學(xué)孟超肝膽醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(倫理號(hào):科審2023_005_01)。通過(guò)監(jiān)測(cè)服用多替拉韋、拉替拉韋、依非韋倫、拉米夫定或替諾福韋的HIV患者穩(wěn)態(tài)血漿谷濃度,檢驗(yàn)本方法的適用性。多替拉韋、拉替拉韋、依非韋倫、拉米夫定和替諾福韋的消除半衰期分別為14、9、52～76、5～7、17 h,以上抗病毒藥在4～5個(gè)半衰期后達(dá)到穩(wěn)態(tài)血藥濃度。考慮到個(gè)體間的藥動(dòng)學(xué)差異,測(cè)定服用多替拉韋、拉替拉韋、拉米夫定或替諾福韋至少1周后的穩(wěn)態(tài)血漿谷濃度及依非韋倫至少16 d后的穩(wěn)態(tài)血漿谷濃度?；颊哐帩舛冗_(dá)穩(wěn)態(tài)后,在下一次給藥前30 min抽取靜脈血2 mL于EDTA2K采血管中,3 000×g離心5 min,將上清液轉(zhuǎn)移至1.5 mL EP管中,于-30 ℃下保存至分析檢測(cè)。本研究共檢測(cè)樣本29例,其血藥濃度結(jié)果見表5。本方法的定量濃度范圍可基本覆蓋多替拉韋、拉米夫定、替諾福韋的臨床樣本檢測(cè)需求。后續(xù)會(huì)繼續(xù)收集更多的臨床樣本進(jìn)行檢測(cè),為HIV患者制定個(gè)體化治療提供參考。

表5 HIV患者穩(wěn)態(tài)血藥谷濃度

3 討論

國(guó)內(nèi)外已有文獻(xiàn)報(bào)道關(guān)于5個(gè)分析物單獨(dú)或與其他藥物同時(shí)測(cè)定檢測(cè)方法,如高效液相色譜-紫外檢測(cè)法(HPLC-UV)、毛細(xì)管電泳法和UPLC-MS/MS等[11]。但毛細(xì)管電泳-UV法[12-13]和HPLC-UV法[14-15]檢測(cè)靈敏度均較低,易受基質(zhì)中雜質(zhì)干擾、分析時(shí)間較長(zhǎng)(>20 min),樣品前處理復(fù)雜,二者均不適用于HIV患者多種抗病毒藥物的高通量分析。UPLC-MS/MS結(jié)合色譜的高分離效率、質(zhì)譜的高選擇性、高靈敏度等優(yōu)點(diǎn),成為臨床上血藥濃度檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。SINGH等[16]采用LC-MS/MS法測(cè)定人血漿中阿巴卡韋/多替拉韋/拉米夫定的血藥濃度,但該方法使用緩沖鹽作為流動(dòng)相,配制繁瑣、費(fèi)時(shí)且易加速消耗色譜柱的使用壽命;PENCHALA等[17]采用液液萃取法、固相萃取法進(jìn)行前處理,但操作復(fù)雜,耗時(shí)較長(zhǎng)且浪費(fèi)有機(jī)溶劑。僅國(guó)外一項(xiàng)研究同時(shí)檢測(cè)5種分析物及其他抗病毒藥[7],但該方法分析時(shí)間較長(zhǎng)(>6 min),樣品制備過(guò)程耗時(shí)長(zhǎng)(>10 min),且國(guó)內(nèi)尚無(wú)5種分析物同時(shí)測(cè)定的報(bào)告。基于此,結(jié)合已有的文獻(xiàn)方法,本研究從色譜、質(zhì)譜條件及血樣前處理方法進(jìn)行優(yōu)化。

本研究考察不同流動(dòng)相及梯度洗脫程序,將純水、0.1%甲酸、2 mmol·L-1乙酸銨水溶液作為水相分別與甲醇、乙腈、0.1%甲酸甲醇、0.1%甲酸乙腈等有機(jī)相進(jìn)行配比,結(jié)果顯示甲醇中替諾福韋峰形拖尾,拉米夫定、替諾福韋在不加酸的流動(dòng)相中不出峰,而拉替拉韋、依非韋倫在加入乙酸銨的流動(dòng)相中后響應(yīng)變低,后基線變高,故最終采用0.1%甲酸-0.1%甲酸乙腈作為流動(dòng)相,確保各分析物峰型良好、響應(yīng)高及保留時(shí)間短。拉米夫定和替諾福韋的極性強(qiáng),而多替拉韋、拉替拉韋和依非韋倫的極性較弱,故初始流動(dòng)相水相比例升高有助于增加拉米夫定和替諾福韋保留時(shí)間,增大二者響應(yīng)。在樣本的前處理上,本方法選擇蛋白沉淀法,對(duì)比甲醇,乙腈作為沉淀劑,5個(gè)分析物的響應(yīng)更高。但5個(gè)分析物的極性差異較大,前處理單純采用乙腈沉淀,拉米夫定和替諾福韋難以達(dá)到理想的提取效果,故在乙腈沉淀前加適量純水,增大拉米夫定和替諾福韋的溶解度,可大大提高二者的質(zhì)譜響應(yīng)。同時(shí),采用同位素內(nèi)標(biāo)來(lái)降低血漿中內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)響應(yīng)造成的直接或間接的影響。相較于其他方法,本方法運(yùn)行時(shí)間短(5 min),以0.1%甲酸-0.1%甲酸乙腈作為流動(dòng)相,不影響色譜柱的壽命,血漿樣本前處理簡(jiǎn)單、低成本,滿足臨床高通量檢測(cè)需求。

本研究建立的人血漿中多替拉韋、拉替拉韋、依非韋倫、拉米夫定和替諾福韋同時(shí)測(cè)定方法簡(jiǎn)便、快速、高效、準(zhǔn)確度高、線性范圍廣,適用于HIV患者的多替拉韋、拉替拉韋、依非韋倫、拉米夫定和替諾福韋的治療性藥物監(jiān)測(cè)研究,為HIV患者制定個(gè)體化的用藥方案提供依據(jù)。