田啟會(huì),張 亮,龍亞麗

(甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院,武威 733006)

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是一類具有自我更新能力和多向分化潛能的工程細(xì)胞[1-2]。在治療過程中,需要依靠其不斷的自我更新和增殖能力維持發(fā)揮其長期治療或者輔助治療作用,例如受損組織器官的再生與修復(fù)[1-4]。但是,異常微環(huán)境通常會(huì)引起B(yǎng)MSCs增殖能力的下降,限制其發(fā)揮長期的治療作用,其中缺氧微環(huán)境是引起干細(xì)胞治療過程效果不佳的主要的因素之一[5]。文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn),缺氧環(huán)境可以導(dǎo)致BMSCs增殖、分化等生物學(xué)特性發(fā)生改變,這為干細(xì)胞的臨床應(yīng)用提出挑戰(zhàn)[6]。BMSCs增殖活性是受損的組織器官再生和修復(fù)的基礎(chǔ),因此,如何防護(hù)缺氧所引起的BMSCs的增殖活性的異常改變已成為BMSCs應(yīng)用前必需解決的關(guān)鍵問題。

BMSCs大量存在于脊髓中,黃芪作為補(bǔ)氣類中藥,具有健脾補(bǔ)中,升陽舉陷,益衛(wèi)固表的功效。前期已有文獻(xiàn)證實(shí)黃芪成分(如黃芪多糖)能夠維護(hù)MSCs的生物學(xué)穩(wěn)定性[6-7]?；谝陨戏治?推測(cè)黃芪可能對(duì)BMSCs的增殖活性具有調(diào)節(jié)作用、是維持缺氧環(huán)境中BMSCs增殖活性的潛在藥物。本研究擬通過建立缺氧微環(huán)境,探究黃芪對(duì)缺氧環(huán)境中BMSCs增殖活性的影響,并初步探討黃芪的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)細(xì)胞株,購自美國 ScienCell 公司(編號(hào):7500)。

1.2 主要試劑與儀器

黃芪購自甘肅省中醫(yī)院;間充質(zhì)干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基、胎牛血清(ScienCell,22846);兔抗人p-PI3K(Immunoway,YP0765)、p-AKT(Immunoway,YP0006)多克隆抗體;山羊抗兔多克隆抗體二抗(Immunoway,RS0002);RT-PCR轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRa公司,批號(hào):AKG1212A),RT-PCR熒光定量試劑盒(TaKaRa公司,批號(hào):AL12412A);山羊抗兔多克隆抗體二抗(Alexa Fluor ? 594)(Abcam公司,GR596447);JC-10細(xì)胞線粒體膜電位(MMP)活細(xì)胞熒光染料(美國AAT公司,批號(hào):2191362)。

CO2細(xì)胞低氧培養(yǎng)箱(Thermo,SKYJH);酶標(biāo)儀(BIO-RAD,IMARK);激光共聚焦顯微鏡FV10-ASW 2.1 Viewer(Olympus,IX80),高內(nèi)涵成像系統(tǒng)(PerkinElmer,Operetta CLS)。

1.3 試驗(yàn)分組

試驗(yàn)以BMSCs為研究對(duì)象,分為空白對(duì)照組(Ctrl)、低氧模型組(M)、黃芪凍干粉低劑量組(HQ-D)、黃芪凍干粉中劑量組(HQ-Z)、黃芪凍干粉高劑量組(HQ-G),細(xì)胞培養(yǎng)氧濃度為10%,黃芪凍干粉溶液低、中、高組濃度分別為100、200、400 μg·mL-1。

1.4 黃芪凍干粉溶液制備

將100 g黃芪用0.5 L蒸餾水煮沸1 h,提取水煎液,然后用濾紙過濾,將濾液放入冷凍干燥機(jī)內(nèi)凍干。黃芪凍干提取物的提取率約為30%。凍干粉在使用前溶于蒸餾水,然后用0.22 μm注射器過濾器過濾。

1.5 細(xì)胞培養(yǎng)

取第 3 代的狀態(tài)良好的 BMSCs 細(xì)胞,使用 MSCM 完全培養(yǎng)基調(diào)整成細(xì)胞濃度為 1×104·mL-1的單細(xì)胞懸液,每孔4 mL接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi),每組設(shè)3個(gè)平行重復(fù)。將細(xì)胞置于常氧環(huán)境培養(yǎng)箱中培養(yǎng),當(dāng)細(xì)胞匯合達(dá)到60%時(shí)棄去瓶內(nèi)培養(yǎng)基,加入新鮮完全培養(yǎng)基開始干預(yù)。黃芪凍干粉溶液組分別加入含有100、200、400 μg·mL-1的黃芪凍干粉完全培養(yǎng)基,低氧組和黃芪凍干粉溶液組置于10%的氧濃度環(huán)境中培養(yǎng)24 h。

1.6 細(xì)胞增殖檢測(cè)

將干預(yù)后的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至96孔板中,每組3個(gè)復(fù)孔。貼壁后將細(xì)胞培養(yǎng)板放置到高內(nèi)涵成像系統(tǒng)內(nèi),設(shè)置24 h無標(biāo)記成像,記錄細(xì)胞增殖、分化過程。

1.7 細(xì)胞運(yùn)動(dòng)檢測(cè)

細(xì)胞前處理同上,利用高內(nèi)涵成像系統(tǒng)實(shí)時(shí)無標(biāo)記示蹤程序,對(duì)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)軌跡進(jìn)行示蹤并標(biāo)記。根據(jù)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)軌跡分析細(xì)胞運(yùn)動(dòng)速度、位移距離和路程。

1.8 細(xì)胞線粒體膜電位檢測(cè)

干預(yù)完成后,用PBS對(duì)細(xì)胞清洗1遍后,加入新鮮培養(yǎng)基,將JC-10熒光探針工作液加入培養(yǎng)基中,37 ℃條件下避光孵育20 min后,在激光共聚焦顯微鏡下進(jìn)行觀察。當(dāng)膜電位水平低時(shí),激發(fā)波長527 nm,通過AF 488熒光通道觀察拍照;當(dāng)膜電位水平高時(shí),激發(fā)波長590 nm,通過AF 594熒光通道觀察,每組細(xì)胞進(jìn)行3次重復(fù)。

1.9 激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)p-PI3K和p-AKT蛋白熒光表達(dá)

將蓋玻片平鋪入24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,將干預(yù)后的細(xì)胞消化、吹散并接種于6孔板中,匯合度控制在20%左右,進(jìn)行培養(yǎng)。待細(xì)胞匯合度達(dá)到60%～70%時(shí),每個(gè)孔中加1 mL 4%多聚甲醛,室溫固定20 min,棄多聚甲醛,再加入1 mL甲醇繼續(xù)固定5 min。棄甲醇,加入1 mL免疫熒光用Blocking buffer,室溫封閉10 min。棄封閉液,加入含兔抗p-PI3K抗體(1∶500)和p-AKT抗體(1∶500)的Blocking buffer,慢搖過夜。PBS液,洗3遍后,加入1 mL含Alexa Fluor? 594 (ab)羊抗兔熒光二抗(500∶1)的Blocking buffer,避光慢搖1 h。PBS液潤洗細(xì)胞5遍,每遍5 min。載玻片上滴加含DAPI染料的封片液,將蓋玻片取出并倒扣在封片液上,于激光共聚焦顯微鏡下觀察,每組細(xì)胞隨機(jī)挑選3個(gè)視野,每個(gè)視野隨機(jī)選擇10個(gè)細(xì)胞進(jìn)行熒光定量,熒光表達(dá)水平通過FV10-ASW 2.1 Viewer軟件進(jìn)行分析。

1.10 RT-PCR檢測(cè)成骨分化關(guān)鍵基因表達(dá)水平

干預(yù)完成后,提取各組細(xì)胞中RNA并進(jìn)行濃度測(cè)定。以20 μL的體系反轉(zhuǎn)錄合成cDNA,并進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè),反應(yīng)條件:95 ℃變性1 min,[95 ℃ 10 s,57 ℃ 20 s,72 ℃ 20 s收集熒光]40個(gè)循環(huán),熔解曲線制備65～95 ℃,0.5 ℃·s-1。

表1 RT-PCR檢測(cè)成骨分化關(guān)鍵基因的引物序列Table 1 Primer sequences for detecting key genes for osteogenic differentiation by RT-PCR

1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 黃芪對(duì)低氧環(huán)境中BMSCs增殖的影響

本研究首先觀察不同濃度的黃芪凍干粉溶液對(duì)缺氧環(huán)境中BMSCs增殖的影響。通過高內(nèi)涵成像系統(tǒng)24 h無標(biāo)記動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè),與Ctrl組細(xì)胞相比,M組細(xì)胞在各時(shí)間點(diǎn)數(shù)量明顯減少(圖1 A和B),細(xì)胞分化代數(shù)明顯減少(圖1C),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與M組相比,HQ-Z和HQ-G組細(xì)胞數(shù)量增多(圖1、2),HQ-G組細(xì)胞分化代數(shù)增高(圖1C),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或0.01)。上述結(jié)果提示,黃芪凍干粉溶液具有逆轉(zhuǎn)缺氧環(huán)境導(dǎo)致的BMSCs增殖能力下降的作用。

A. 不同干預(yù)條件下細(xì)胞實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)增殖情況監(jiān)測(cè)(24 h細(xì)胞無標(biāo)記動(dòng)態(tài)增殖情況,每3 h同視野成像記錄,10×);B. 不同干預(yù)條件下細(xì)胞實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)增殖情況統(tǒng)計(jì);C. 24 h不同干預(yù)條件下細(xì)胞分化代數(shù);n=3,*.P<0.05,**.P<0.01 A. Real time dynamic cell proliferation monitoring in different intervention conditions (24 hours of unmarked dynamic cell proliferation, recorded every 3 hours with the same field imaging, 10×); B. Real time dynamic cell proliferation statistics in different intervention conditions; C. Cell differentiation generation in different intervention conditions within 24 hours; n=3,*.P<0.05,**.P<0.01圖1 黃芪對(duì)缺氧環(huán)境中BMSCs增殖的影響Fig.1 Effects of Astragalus membranaceus on the proliferation of BMSCs in hypoxic environments

2.2 黃芪對(duì)低氧環(huán)境中BMSCs運(yùn)動(dòng)能力學(xué)影響

細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力是反映細(xì)胞活力的重要標(biāo)志,本研究進(jìn)一步對(duì)各干預(yù)條件下的細(xì)胞進(jìn)行運(yùn)動(dòng)軌跡的示蹤,并分析細(xì)胞在不同干預(yù)條件下的運(yùn)動(dòng)速度、位移距離和運(yùn)動(dòng)路程。與Ctrl組細(xì)胞相比,M組細(xì)胞運(yùn)動(dòng)速度、位移距離和總運(yùn)動(dòng)路程均明顯減少(圖2),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與M組相比,HQ-Z和HQ-G組細(xì)胞運(yùn)動(dòng)速度、位移距離和總運(yùn)動(dòng)路程均有所增加(圖2),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或0.01)。以上結(jié)果提示,缺氧環(huán)境導(dǎo)致BMSCs運(yùn)動(dòng)活力下降,而黃芪中、高劑量的黃芪凍干粉對(duì)缺氧環(huán)境中BMSCs的運(yùn)動(dòng)活力具有一定的保護(hù)作用。

A. 24 h不同干預(yù)條件下細(xì)胞運(yùn)動(dòng)軌跡示蹤(細(xì)胞運(yùn)動(dòng)軌跡由計(jì)算機(jī)進(jìn)行動(dòng)態(tài)模擬,為區(qū)分單個(gè)細(xì)胞由不同顏色進(jìn)行標(biāo)記,40×);B. 24 h不同干預(yù)條件下細(xì)胞平均運(yùn)動(dòng)速度;C. 24 h不同干預(yù)條件下細(xì)胞位移距離;D. 24 h不同干預(yù)條件下細(xì)胞運(yùn)動(dòng)路程;n=3,*.P<0.05,**.P<0.01 A. Tracing of cell movement trajectory in 24 hour continuous intervention conditions (The trajectory of cell movement is dynamically simulated by computer, and different colors are used to distinguish individual cells, 40×); B. 24 h Mean motion speed of cells in different intervention conditions; C. Cell displacement distance in different intervention conditions within 24 hours; D. Cell movement distance in different intervention conditions within 24 hours; n=3,*.P<0.05,**.P<0.01圖2 黃芪對(duì)低氧環(huán)境中BMSCs運(yùn)動(dòng)能力學(xué)影響Fig.2 Effects of Astragalus membranaceus on the movement ability of BMSCs in hypoxic environments

2.3 黃芪對(duì)低氧環(huán)境中BMSCs線粒體膜電位的影響

線粒體是為細(xì)胞提供能量的關(guān)鍵細(xì)胞器,缺氧易導(dǎo)致線粒體受損,并引起細(xì)胞的活力減弱,因此本研究通過JC-10熒光探針對(duì)線粒體膜電位的標(biāo)記,來評(píng)價(jià)不同干預(yù)條件下線粒體的活性。當(dāng)線粒體膜電位較高時(shí),JC-10聚集在線粒體的基質(zhì)中,形成聚合物,為橘紅色熒光(594 nm);當(dāng)線粒體膜電位降低時(shí),JC-10不能聚集在線粒體基質(zhì)中,此時(shí)JC-10為單體,主要為綠色熒光(488 nm)。Ctrl組細(xì)胞胞質(zhì)中有大量橘紅色JC-10聚合物,綠色JC-10單體較少;與Ctrl組細(xì)胞相比,M組細(xì)胞線粒體膜電位降低明顯,細(xì)胞胞質(zhì)中橘紅色JC-10聚合物減少,綠色JC-10單體明顯增多;與M組相比,HQ各劑量組細(xì)胞線粒體膜電位均有所升高,細(xì)胞胞質(zhì)中橘紅色JC-10聚合物增多,綠色JC-10單體減少(圖3)。提示缺氧可能通過影響線粒體活性導(dǎo)致BMSCs增殖和運(yùn)動(dòng)狀態(tài)異常,而黃芪凍干粉能夠一定程度上維持缺氧環(huán)境中BMSCs線粒體活性。

2.4 黃芪對(duì)低氧環(huán)境中BMSCs p-PI3K和p-AKT蛋白熒光表達(dá)的影響

為了證實(shí)黃芪凍干粉溶液對(duì)BMSCs的調(diào)節(jié)作用是否與PI3K-AKT信號(hào)通路相關(guān),本研究通過免疫熒光檢測(cè)了通路中關(guān)鍵蛋白p-PI3K和p-AKT的熒光表達(dá)情況。與Ctrl組細(xì)胞相比,M組細(xì)胞對(duì)p-PI3K和p-AKT蛋白的熒光表達(dá)降低(圖4、5);與M組相比,HQ各劑量組細(xì)胞p-PI3K和p-AKT蛋白的熒光表達(dá)升高,其中HQ-Z和HQ-G組升高更明顯(P<0.05或0.01)(圖4、5)。以上結(jié)果提示,缺氧條件抑制了PI3K-AKT信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白PI3K和AKT蛋白的磷酸化,而黃芪凍干粉溶液具有一定的逆轉(zhuǎn)作用,因此,黃芪可能通過恢復(fù)PI3K-AKT信號(hào)通路的活化發(fā)揮對(duì)BMSCs的調(diào)節(jié)作用。但蛋白的磷酸化修飾不能完全代表信號(hào)通路的活化,仍然需要進(jìn)一步檢測(cè)。

JC-10聚合物發(fā)橘紅色熒光(594 nm),JC-10單體發(fā)綠色熒光(488 nm) JC-10 polymer emits orange red fluorescence (594 nm), while JC-10 monomer emits green fluorescence (488 nm)圖3 不同干預(yù)條件下細(xì)胞線粒體膜電位情況(60×)Fig.3 Membrane potential of cell mitochondria under different intervention conditions (60×)

A. 不同干預(yù)條件下細(xì)胞p-PI3K蛋白熒光表達(dá)情況,細(xì)胞核用藍(lán)色DAPI標(biāo)記(405 nm),p-PI3K蛋白用AF 647標(biāo)記(647 nm);B. 不同干預(yù)條件下細(xì)胞p-PI3K蛋白熒光表達(dá)值(n=3),*.P<0.05,**.P<0.01 A. Fluorescence expression of p-PI3K protein in cells under different intervention conditions, the nucleus was labeled with blue DAPI (405 nm), the p-PI3K protein was labeled with AF 647 (647 nm); B. Fluorescence expression values of p-PI3K protein in cells under different intervention conditions (n=3),*.P<0.05,**.P<0.01圖4 黃芪對(duì)低氧環(huán)境中BMSCs p-PI3K蛋白熒光表達(dá)的影響Fig.4 The effect of Astragalus membranaceus on the fluorescence expression of p-PI3K protein in BMSCs in hypoxic environments

2.5 黃芪對(duì)低氧環(huán)境中BMSCs PI3K和AKT mRNA表達(dá)水平的影響

上述試驗(yàn)證實(shí)了黃芪凍干粉能夠促進(jìn)PI3K和AKT的磷酸化,提示黃芪凍干粉可能具有激活PI3K-AKT信號(hào)通路作用,為進(jìn)一步驗(yàn)證,本研究進(jìn)檢測(cè)了黃芪凍干粉溶液對(duì)PI3K和AKT在轉(zhuǎn)錄水平的變化情況。與Ctrl組細(xì)胞相比,M組細(xì)胞PI3K和AKT mRNA水平降低(圖6、7);但與M組相比,HQ各組細(xì)胞PI3K和AKT mRNA水升高(P<0.05或0.01)。以上結(jié)果提示,黃芪當(dāng)干粉不僅能夠促進(jìn)PI3K和AKT的mRNA水平,還能促進(jìn)其發(fā)生磷酸化,證明了黃芪凍干粉對(duì)PI3K-AKT信號(hào)通路的調(diào)節(jié)作用。

A. 不同干預(yù)條件下細(xì)胞p-AKT蛋白熒光表達(dá)情況;細(xì)胞核用藍(lán)色DAPI標(biāo)記(405 nm),p-AKT蛋白用AF 647標(biāo)記(647 nm);B. 不同干預(yù)條件下細(xì)胞p-AKT蛋白熒光值(n=3),*.P<0.05,**.P<0.01 A. Fluorescence expression of p-AKT protein in cells in different intervention conditions, The nucleus was labeled with blue DAPI (405 nm); The p-AKT protein was labeled with AF 647 (647 nm); B. Fluorescence values of p-AKT protein in cells under different intervention conditions (n=3),*.P<0.05,**.P<0.01圖5 黃芪對(duì)低氧環(huán)境中BMSCs p-AKT蛋白熒光表達(dá)的影響Fig.5 The effect of Astragalus membranaceus on the fluorescence expression of p-AKT protein in BMSCs in hypoxic environments

n=3,*.P<0.05,**.P<0.01圖6 不同干預(yù)條件下細(xì)胞PI3K mRNA表達(dá)情況Fig.6 Expression of PI3K mRNA in cells under different intervention conditions

n=3,*.P<0.05,**.P<0.01圖7 不同干預(yù)條件下細(xì)胞AKT mRNA表達(dá)情況Fig.7 Expression of AKT mRNA in cells under different intervention conditions

3 討 論

課題組在前期研究中已經(jīng)證實(shí),缺氧會(huì)導(dǎo)致BMSCs的自我更新和多向分化的能力降低,本研究希望基于線粒體途徑探討黃芪在維護(hù)缺氧條件下的BMSCs增殖活性的作用。

黃芪作為補(bǔ)氣類中藥,具有健脾補(bǔ)中,升陽舉陷,益衛(wèi)固表的功效,對(duì)脾氣虧虛等疾病具有很好的調(diào)節(jié)作用?，F(xiàn)代研究也發(fā)現(xiàn),黃芪及其有效成分針對(duì)缺氧所介導(dǎo)的相關(guān)疾病具有很好的防治作用。趙芳等[8]發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷能通過calpain-1/NO信號(hào)通路改善慢性間歇性缺氧誘導(dǎo)血管內(nèi)皮功能障礙;謝耀錕等[9]發(fā)現(xiàn)黃芪注射液可有效通過提升Bcl-2/Bax比值來抑制缺氧的神經(jīng)細(xì)胞凋亡;黃芪多糖能夠通過抑制KLF5/HIF-1α信號(hào)通路保護(hù)低氧誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓小鼠肺血管重構(gòu)[10]。為了進(jìn)一步探討具有補(bǔ)氣作用的黃芪是否對(duì)缺氧環(huán)境中的BMSCs的增殖活性具有保護(hù)作用,作者對(duì)BMSCs的增殖和運(yùn)動(dòng)情況進(jìn)行了24 h的無標(biāo)記動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè),發(fā)現(xiàn)黃芪凍干粉溶液能夠維持缺氧環(huán)境中BMSCs的增殖和運(yùn)動(dòng)的活性。

線粒體是細(xì)胞進(jìn)行氧化代謝的主要細(xì)胞器,也是能量物質(zhì)氧化釋放能量的場(chǎng)所。線粒體負(fù)責(zé)的最終氧化的共同途徑是三羧酸循環(huán)與氧化磷酸化,利用這些物質(zhì)還原氧氣釋放能量合成ATP[11-12]。線粒體是產(chǎn)生能量維持細(xì)胞增殖的關(guān)鍵場(chǎng)所[13]。盡管前期已有研究發(fā)現(xiàn)黃芪注射液能夠促進(jìn)體外培養(yǎng)的hMSCs的增殖[14],但未對(duì)其調(diào)節(jié)機(jī)制有詳細(xì)的闡明。本研究推測(cè)黃芪可能通過調(diào)節(jié)線粒體活性進(jìn)而影響B(tài)MSCs的增殖和運(yùn)動(dòng)。通過線粒體膜電位檢測(cè)發(fā)現(xiàn),黃芪干預(yù)后線粒體活性明顯增強(qiáng),基本證實(shí)了作者的推測(cè)。

PI3K/AKT信號(hào)通路在缺氧引起的線粒體損傷過程中扮演者重要的角色[15-17]。有研究報(bào)道,血小板生成素通過活化PI3K/AKT通路穩(wěn)定線粒體膜電位防止化學(xué)性缺氧所致的細(xì)胞凋亡作用[18];白扁豆多糖可通過PI3K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路穩(wěn)定線粒體膜電位、抑制神經(jīng)細(xì)胞的缺氧性凋亡[19]。本研究也發(fā)現(xiàn),黃芪凍干粉溶液能夠激活缺氧環(huán)境中的PI3K/AKT信號(hào)通路,因此,PI3K/AKT信號(hào)通路可能是黃芪穩(wěn)定缺氧環(huán)境中BMSCs線粒體活性,維持其增殖穩(wěn)定的主要機(jī)制。

盡管本研究證實(shí)了黃芪可以激活PI3K-AKT信號(hào)通路,同時(shí)維持缺氧環(huán)境中BMSCs增殖活性穩(wěn)定,但是,PI3K-AKT信號(hào)通路是否是黃芪防護(hù)缺氧環(huán)境中BMSCs增殖活性的關(guān)鍵通路仍然需要通過敲減或過表達(dá)試驗(yàn)去進(jìn)一步證實(shí),但黃芪仍然值得被作為維護(hù)缺氧條件下干細(xì)胞生物穩(wěn)定性的天然化合物進(jìn)行深入的研究。

4 結(jié) 論

缺氧環(huán)境會(huì)導(dǎo)致BMSCs增殖和運(yùn)動(dòng)能力降低,而黃芪可能通過激活PI3K-AKT信號(hào)通路維持缺氧環(huán)境中BMSCs增殖活性穩(wěn)定。