陶 冶， 崔一博， 甄 艷， 張 鑫， 萬(wàn) 達(dá)，周 帥， 栗文鈺， 郭耀棋 ， 鄭 鑫

（1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130118；2.禾豐食品股份有限公司，遼寧 沈陽(yáng) 110866）

雞蛋在蛋雞體內(nèi)的形成要經(jīng)過(guò)小白卵泡、大白卵泡、小黃卵泡、大黃卵泡以及等級(jí)卵泡等發(fā)育階段。 卵泡中的脂質(zhì)主要來(lái)自于肝臟中合成的微粒體極低密度脂蛋白，然后，微粒體極低密度脂蛋白作為一種卵黃前體物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)至卵母細(xì)胞中（Griffin 等，1985）。 微粒體極低密度脂蛋白的合成需要配體載脂蛋白B、甘油三酯、膽固醇酯和磷脂的參與，這一過(guò)程的主要原料就是甘油三酯（Vézina 等，2003）。 而飼料中添加的油脂可以供肝臟利用直接轉(zhuǎn)化成甘油三酯， 滿足蛋雞產(chǎn)蛋過(guò)程中對(duì)甘油三酯的需要， 同時(shí)其能為機(jī)體提供必需脂肪酸，保證蛋雞的生長(zhǎng)發(fā)育、產(chǎn)蛋需求等（Alves-Bezerra 等，2017；王道坤，2016）。 因此，提高食物中的油脂含量或許可以提高產(chǎn)蛋率和蛋重。

劉立文等（2014）研究表明，在雞的飼料配方標(biāo)準(zhǔn)上， 分別提高和降低5%的飼料能量飼喂雌性育成柴雞（能量控制是通過(guò)調(diào)整粗脂肪含量以及鈣含量來(lái)實(shí)現(xiàn)的），提取卵巢組織中的RNA 并進(jìn)行促卵泡激素受體（FSHR）和促黃體生成素受體（LHR）的相對(duì)表達(dá)量測(cè)定， 得到高能量組的FSHR 和LHR表達(dá)量均顯著增高，這表明飼料中的粗脂肪含量以及能量對(duì)卵泡接收促卵泡激素（FSH）和促黃體生成素（LH）的能力有顯著影響。 而卵泡接收FSH 和LH 的能力提升就意味著有更多的卵泡被選擇并提高產(chǎn)蛋率（李琴，2018；劉立文等，2014）。不僅如此，高能量的飼料會(huì)促進(jìn)蛋雞在進(jìn)食后血液胰島素含量的增加，而胰高血糖素與胰島素比值升高會(huì)促進(jìn)肝臟卵泡抑素的分泌，卵泡抑素會(huì)結(jié)合垂體中的激活素從而抑制FSH 的分泌， 所以高能量的飲食有可能會(huì)促進(jìn)FSH 的分泌， 從而導(dǎo)致蛋雞產(chǎn)蛋率的升高 （Hansen 等，2016；Meriggiola 等，1994；Nakamura 等，1990；Lorenzen 等，1978）。 然而，飼料能量水平和油脂添加量對(duì)產(chǎn)蛋中后期海蘭褐蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響效果還不確定，過(guò)多的油脂和能量對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的提高終歸有限，還有可能對(duì)蛋雞的健康造成影響。所以，本試驗(yàn)通過(guò)產(chǎn)蛋率、蛋品質(zhì)和血清生化指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)飼料能量水平與油脂含量的改變對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能和長(zhǎng)期生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)效益的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及分組 試驗(yàn)地點(diǎn)在吉林省長(zhǎng)春市共好合作社養(yǎng)殖場(chǎng)。選取體重接近（初始體重保證體重在平均值±10%以內(nèi)），健康狀態(tài)良好的30周齡海蘭褐蛋雞1080 只，隨機(jī)分成4 組，每組6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)45 只。 限飼飼喂每天130 g/只飼料。A 組（對(duì)照組）：基礎(chǔ)飼料（代謝能11.10 MJ/kg，油脂1%）；B 組：代謝能11.10 MJ/kg，油脂水平提高至2.5%；C 組： 飼料水平提高代謝能至11.30 MJ/kg，油脂1%；D 組： 飼料水平提高代謝能至11.30 MJ/kg，油脂水平提高至2.5%；參考海蘭褐飼養(yǎng)手冊(cè)進(jìn)行飼喂， 飼料參照海蘭褐蛋雞產(chǎn)蛋期營(yíng)養(yǎng)需要配制成顆粒飼料，試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.2 主要試劑及儀器 主要試劑：FSH、VTG、LH、LZM、雞β-防御素酶聯(lián)免疫分析試劑盒（南京建成生物工程研究所）；T-CHO、TG、LDL-C 生化試劑盒（南京建成生物工程研究所）；BCA 蛋白定量試劑盒（增強(qiáng)型）（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）。

主要儀器：分析天平（FA-C 型，上海添時(shí)科學(xué)儀器有限公司）、游標(biāo)卡尺（上海添時(shí)科學(xué)儀器有限公司）、酶標(biāo)儀（Multiskan FC 型，美國(guó)Thermo Fisher 科技公司）。 高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)Sigma-Aldrich 公司）、蛋殼強(qiáng)度計(jì)（FESTV2.0，日本富士平工業(yè)株式會(huì)）、多功能蛋品分析儀（EMT-7300，日本Robotmation 公司）。

1.3 飼養(yǎng)管理 雞群采用三層階梯式籠養(yǎng)，每籠3 只雞，每天上午9：00 ～10：30 收集雞蛋，自由飲水，試驗(yàn)前8 d 為預(yù)飼期。日常管理按照雞場(chǎng)常規(guī)操作進(jìn)行， 試驗(yàn)期間由實(shí)驗(yàn)員負(fù)責(zé)試驗(yàn)雞只的飼養(yǎng)管理。

1.4 樣品采集 飼養(yǎng)至53 周齡時(shí)， 每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取15 枚雞蛋，進(jìn)行蛋品質(zhì)檢測(cè)。 每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取3 枚雞蛋進(jìn)行脂質(zhì)代謝和免疫性能指標(biāo)檢測(cè)；每個(gè)重復(fù)中選取兩只體重處于平均體重±10%以內(nèi)的蛋雞，每組12 只蛋雞進(jìn)行屠宰。 屠宰前進(jìn)行翅下采血，常溫靜置10 min 后3000 r/min 離心3 min 取血清，-80 ℃凍存。 蛋雞卵巢在分離出2 mm以上的卵泡后， 將其余卵巢組織放入凍存管里-80 ℃凍存。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.5.1 產(chǎn)蛋性能 記錄50 ～53 周齡的產(chǎn)蛋個(gè)數(shù)、雞只數(shù)，以重復(fù)為單位稱量雞蛋重量，統(tǒng)計(jì)料蛋比。

1.5.2 蛋品質(zhì)指標(biāo) 采用分析天平稱量每個(gè)雞蛋的蛋重，用游標(biāo)卡尺測(cè)量蛋的最大縱徑（cm）和最大橫徑（cm），并計(jì)算蛋表面積和蛋形指數(shù)，蛋表面積=3.279×最大橫徑×[（最大橫徑+最大縱徑）/2]，蛋形指數(shù)=最大縱徑/最大橫徑。 蛋殼強(qiáng)度計(jì)檢測(cè)蛋殼強(qiáng)度， 蛋品分析儀檢測(cè)哈夫單位、 蛋白高度、蛋黃顏色后分離蛋黃并稱重，待蛋殼自然風(fēng)干后剝除蛋殼膜稱重，蛋殼比例=蛋殼重/蛋重×100。

1.5.3 蛋脂質(zhì)代謝功能指標(biāo) 總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）、蛋白濃度采用試劑盒進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定方法依照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。簡(jiǎn)而言之，將血清加入96 孔板中的樣品孔，為保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，每個(gè)樣品測(cè)兩次，并且所有樣品均在同一96 孔板上完成。在兩個(gè)空白孔中加入蒸餾水，在兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)孔中加入校準(zhǔn)樣品，再加入工作液。 利用酶標(biāo)儀在510 nm 的波長(zhǎng)下進(jìn)行吸光度檢測(cè)， 按照說(shuō)明書(shū)給定的公式計(jì)算樣品中的各指標(biāo)含量。

1.5.4 蛋非特異性免疫性能指標(biāo)溶菌酶（LZM）、β-防御素（β-DF）采用試劑盒進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定方法依照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。簡(jiǎn)而言之，按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)在一個(gè)96 孔板上設(shè)定空白孔、標(biāo)準(zhǔn)樣品孔和樣品孔。為保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，每個(gè)樣品測(cè)兩次，并且所有樣品均在同一96 孔板上完成。 其余試劑均按照說(shuō)明書(shū)規(guī)定的劑量添加。 酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm 處吸光度并按照說(shuō)明書(shū)的介紹計(jì)算血清樣本中各指標(biāo)的含量。每個(gè)處理9 個(gè)樣本，每個(gè)樣本2 個(gè)重復(fù)。

1.5.5 蛋雞卵泡發(fā)育性能指標(biāo) 測(cè)定血清中卵黃蛋白原、 促卵泡生成素 （FSH）、 促黃體生成素（LH）、孕酮（Prog）的含量。 血清在37 ℃溫箱中孵育10 min，再按照檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)添加空白孔，校準(zhǔn)空以及樣品孔，再添加其他試劑進(jìn)行測(cè)定。酶標(biāo)儀調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450 nm 測(cè)定吸光度， 計(jì)算血清內(nèi)的孕酮含量。每個(gè)處理9 個(gè)樣本，每個(gè)樣本2 個(gè)重復(fù)。所有樣本包含在同一個(gè)分析酶標(biāo)板，以避免分析之間的差異。

1.6 統(tǒng)計(jì)與分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2020 進(jìn)行初步處理后，用SPSS 23.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），各組間差異用Duncan‘s法進(jìn)行多重比較分析，P＜0.01 被認(rèn)為差異極顯著，P＜0.05 被認(rèn)為差異顯著，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差”（SEM） 表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料能量與油脂水平對(duì)產(chǎn)蛋性能的影響由表2 可知，C 組的產(chǎn)蛋率、產(chǎn)蛋量分別顯著高于A 組2.08%和2.59%（P＜0.05）；D 組的產(chǎn)蛋率、產(chǎn)蛋量分別顯著高于B 組2.50%和2.71%（P＜0.05）。 A 組和B 組之間以及C 組和D 組之間差異不顯著（P＞0.05）。 各組的平均蛋重與料蛋比差異不顯著（P＞0.05）。

表2 飼料能量與油脂水平對(duì)產(chǎn)蛋性能的影響

2.2 飼料能量與油脂水平對(duì)蛋品質(zhì)的影響 由表3 可知，各組之間蛋黃比值、蛋表面積和蛋形指數(shù)差異不顯著（P＞0.05）。D 組蛋黃顏色分別顯著低于B 組和C 組10.32%和14.86%（P＜0.05），B組顯著低于A 組9.94%（P＜0.05）。C 組的蛋白高度、 哈夫單位分別顯著低于A 組8.11%和4.84%（P＜0.05），D 組的蛋白高度、 哈夫單位分別顯著低于B 組13.73%和7.26%（P＜0.05）。

表3 飼料能量與油脂水平對(duì)蛋品質(zhì)的影響

2.3 飼料能量與油脂水平對(duì)蛋脂質(zhì)代謝功能的影響 由表4 可知，B 組的TC 含量顯著低于A組25.00%，而B(niǎo) 組的TG 顯著高于A 組81.40%（P＜0.05），D 組的TC 含量顯著高于B 組50.00%（P＜0.05）。D 組的LDL-C 含量顯著高于B 組133.33%（P＜0.05）。 各組之間蛋白濃度差異不顯著。

表4 飼料能量與油脂水平對(duì)蛋脂質(zhì)代謝功能的影響

2.4 飼料能量與油脂水平對(duì)蛋非特異性免疫性能的影響 由表5 可知，C 組LZM 含量顯著低于A 組27.25%（P＜0.05）；D 組LZM 含量顯著低于B 組33.72%（P＜0.05）。 A 組和B 組之間以及C組和D 組之間β-DF 含量差異不顯著 （P＞0.05），A 組和C 組之間以及B 組和D 組之間β-DF 含量差異不顯著（P＞0.05）。

2.5 飼料能量與油脂水平對(duì)卵泡發(fā)育的影響由表6 可知，C 組的蛋雞血清中LH 的含量顯著高于A 組114.38%（P＜0.05）。 B 組VTG 含量顯著低于A 組30.18%（P＜0.05）。 C 組Prog 含量極顯著高于A 組69.42%（P＜0.01）。

表6 飼料能量與油脂水平對(duì)卵泡發(fā)育的影響

3 討論

3.1 不同能量水平與油脂水平對(duì)生產(chǎn)性能的影響 產(chǎn)蛋率以及產(chǎn)蛋量直接關(guān)系到養(yǎng)殖企業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，隨著飼料能量水平和油脂含量的提升，蛋雞的產(chǎn)蛋量、產(chǎn)蛋率以及平均蛋重呈上升趨勢(shì)。 在同等油脂水平下， 飼料能量水平從11.10 MJ/kg 提升至11.30 MJ/kg，可以顯著提升產(chǎn)蛋中后期蛋雞的產(chǎn)蛋率；在同等能量水平下，油脂水平從1%提升至2.5%對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋率和平均蛋重的影響卻并不顯著。 辛倩等（2021）論述中同樣提到了這一研究結(jié)果。 但是無(wú)論是飼料能量水平以及油脂含量的改變必須在一定范圍內(nèi)進(jìn)行， 有研究發(fā)現(xiàn)大量添加油脂會(huì)引起畜禽腹瀉， 如果大量的添加棉籽油會(huì)顯著降低蛋雞的生產(chǎn)性能并影響其健康（Gao 等，2022）。當(dāng)然，也有研究表明，飼料能量的增加有可能導(dǎo)致產(chǎn)蛋率降低， 這可能與飼料中的蛋白質(zhì)含量改變有一定關(guān)系 （李達(dá)武，1982）。

3.2 不同能量與油脂對(duì)蛋品質(zhì)的影響 蛋黃重、蛋黃比例、 哈夫單位以及蛋白高度通常被用來(lái)評(píng)價(jià)蛋的新鮮程度（常棖等，2022）。 試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中能量與油脂水平的改變對(duì)蛋黃重與蛋黃比例的影響不顯著。 哈夫單位和蛋白高度是反映禽蛋蛋白品質(zhì)和新鮮度的重要指標(biāo)（王云浩，2022）。哈夫單位值越高，蛋越新鮮，蛋白的黏稠度越好。蛋白高度與日糧營(yíng)養(yǎng)水平、 環(huán)境因素和儲(chǔ)存時(shí)間等多種因素密切相關(guān)， 該值越大表示雞蛋新鮮度越好。 本試驗(yàn)中，在油脂含量不變的前提下，增加飼料能量可能會(huì)導(dǎo)致蛋雞蛋白高度和哈夫單位值下降， 這意味著較高的飼料能量可能會(huì)導(dǎo)致其雞蛋的蛋品質(zhì)降低。 蛋黃的顏色主要由類胡蘿卜素提供，蛋雞雞體自身不能合成類胡蘿卜素，所以必須從日糧中攝?。ㄐ扉L(zhǎng)軍等，2020）。蛋黃中類胡蘿卜素含量增加可能會(huì)提高人體免疫相關(guān)功能以及抗氧化功能（惠俊楠等，2020）。 本試驗(yàn)中，飼料能量和油脂增加后，蛋黃顏色顯著降低，這表明蛋黃中的類胡蘿卜素含量降低，蛋品質(zhì)受到影響?？傮w來(lái)說(shuō)，飼料中的能量和油脂增加后，可能會(huì)影響產(chǎn)蛋中后期海蘭褐蛋雞的蛋品質(zhì)。

3.3 不同能量與油脂對(duì)蛋脂質(zhì)的影響 研究表明，相比于反芻動(dòng)物，雞更加依賴必需脂肪酸的攝?。ü闳A等，2019）。 然而，食用過(guò)多飽和脂肪酸和總膽固醇含量過(guò)多可能會(huì)引發(fā)炎癥反應(yīng)和胰島素抵抗（馬巍等，2021）。而甘油三酯由脂肪酸和甘油組成。所以，雞蛋中過(guò)多的甘油三酯和總膽固醇對(duì)食用者的健康可能有不良影響。 本試驗(yàn)結(jié)果表明，在飼料能量11.10 MJ/kg 的水平下，飼料中油脂含量從1%增加到2.5%會(huì)導(dǎo)致蛋黃中TC 含量顯著降低而TG 含量顯著增加， 但在飼料能量11.30 MJ/kg 的水平下，增加油脂含量造成的影響卻并不顯著卻反而增加了血清中LDL-C 的含量。由此分析得出， 油脂對(duì)蛋黃中各種脂質(zhì)含量的作用效果受到飼糧能量的影響。Wallace 等（1985）研究表明， 飼料中油脂和能量的增加可能會(huì)影響蛋雞的脂質(zhì)代謝。同期研究表明，隨著飼料中油脂的增加， 本次試驗(yàn)蛋雞體內(nèi)的血清甘油三酯與總膽固醇逐步升高。 說(shuō)明蛋黃中的總膽固醇和甘油三酯是隨著蛋雞體內(nèi)的升高而升高。有研究表明，低密度脂蛋白是一種運(yùn)載膽固醇進(jìn)入外周組織細(xì)胞的脂蛋白顆粒， 所以低密度脂蛋白含量與雞蛋中總膽固醇和甘油三酯含量密切相關(guān) （賀瓊玉等，2019）。本試驗(yàn)中，在油脂含量保持不變的前提下，提高飼料中能量水平可以顯著提高蛋黃中TC 和TG 的含量，在飼料中油脂含量為2.5%時(shí)，提高飼料中的能量水平還會(huì)顯著增加蛋黃中LDL-C 的含量。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，蛋雞體內(nèi)與蛋黃中的低密度脂蛋白都隨著油脂和能量的增加而升高， 這也印證了低密度脂蛋白升高會(huì)影響甘油三酯的代謝情況。

3.4 不同能量與油脂對(duì)蛋雞卵泡發(fā)育的影響LH 與FSH 是由垂體分泌的促性腺激素， 受到促性腺激素釋放激素的調(diào)節(jié)。 FSH 會(huì)促進(jìn)卵巢卵泡的發(fā)育、生長(zhǎng)和成熟。 另外，F(xiàn)SH 是卵泡選擇的必要激素，F(xiàn)SH 的含量是影響卵泡閉鎖率的主要因素之一（賀瓊玉等，2019）。 LH 對(duì)卵巢的血液循環(huán)具有促進(jìn)作用，還能夠促使被FSH 預(yù)處理過(guò)的卵泡成熟并且誘發(fā)排卵（Hsueh 等，2000）。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在飼料油脂含量1%的前提下，飼料中能量水平的增加會(huì)顯著增加血清LH 的含量。 FSH和LH 作用于卵巢， 卵泡中的顆粒細(xì)胞和膜細(xì)胞在促性腺激素的控制下合作， 通過(guò)刺激類固醇生成酶信使RNA 的合成來(lái)產(chǎn)生雌激素（Shoham 等，1996）。 分泌到血清中的雌激素作用于肝臟，引起肝臟合成卵黃前體物質(zhì)， 即VTG （Vézina 等，2003）。 血清中VTG 含量的變化會(huì)影響到各等級(jí)卵泡的重量，最終會(huì)影響蛋重（Robker 等，2018）。所以， 油脂含量的增加可能不利于卵黃蛋白原的合成釋放。孕酮作為一種孕激素，其主要作用是促進(jìn)卵泡的成熟和排卵（張宇瞳，2020）。 本試驗(yàn)中，飼料能量的增加可以極顯著地促進(jìn)蛋雞血清中的孕酮含量增加而飼料油脂對(duì)蛋雞血清孕酮含量沒(méi)有太大影響。與前面產(chǎn)蛋率的結(jié)果來(lái)看，飼料中增加的能量可能是促進(jìn)了血清孕酮含量增加， 進(jìn)而促進(jìn)了蛋雞產(chǎn)蛋率上升。

3.5 不同能量與油脂對(duì)蛋免疫性能的影響 蛋清中含有極高的蛋溶菌酶， 其是一種具有抗菌消炎作用的蛋白酶，約占蛋清的3.4%。 在蛋中可以破壞細(xì)菌細(xì)胞壁來(lái)使細(xì)胞溶解， 從而達(dá)到抗菌效果（汪吳晶等，2020；沙其拉等，2018）。 因此，雞蛋中的溶菌酶含量增加可能在一定程度上提高雞蛋的保存時(shí)間。本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著飼料能量的增加，蛋清中的溶菌酶含量顯著降低，隨著飼料油脂含量的增加，蛋清中的溶菌酶含量有降低趨勢(shì)。蛋雞的血清溶菌酶也出現(xiàn)同樣的情況， 試驗(yàn)各組均明顯低于對(duì)照組，整體呈下降趨勢(shì)。可能的原因是飼料中用來(lái)調(diào)整代謝能的玉米或豆粕影響了血清中的溶菌酶含量。禽β-防御素僅存在于禽類動(dòng)物中，是非特異性免疫的重要組成部分，在蛋雞的生殖系統(tǒng)和雞蛋的蛋黃中有大量表達(dá) （李巖等，2014）。 蛋雞由于油脂和能量的增加表明，在高脂高能量環(huán)境下， 溶菌酶的下降導(dǎo)致了機(jī)體和蛋重非特異性免疫力的降低。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，能量水平由11.10 MJ/kg 提高到11.30 MJ/kg、油脂水平由1%提高到2.5%以后的飼料能夠提高蛋的總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白含量，增加產(chǎn)蛋的數(shù)量，提高蛋雞的產(chǎn)蛋性能，促進(jìn)卵泡發(fā)育，調(diào)控蛋的內(nèi)在指標(biāo)，同時(shí)促使產(chǎn)蛋量變化。 但蛋品質(zhì)方面的溶菌酶、哈夫單位、蛋白濃度、蛋白高度下降，影響蛋品質(zhì)， 使雞蛋內(nèi)在抗菌保鮮能力和蛋的新鮮程度降低。