朱銘君

河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院肺腫瘤外科,河南省洛陽市 471000

非小細(xì)胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)是臨床常見原發(fā)性肺癌類型,早期無特異性癥狀,難以被診斷,隨病情發(fā)展可表現(xiàn)出咳嗽、咯血、胸痛、呼吸困難等體征,雖然隨醫(yī)療技術(shù)進(jìn)步,NSCLC患者顯示近年患者生存率明顯上升,但臨床仍有2/3的患者在就診時(shí)已錯(cuò)過最佳手術(shù)時(shí)間,預(yù)后通常較差,5年生存率僅為26.4%[1]。微小RNA(MicroRNA,mi-RNA)是一類由內(nèi)源基因編碼的非編碼單鏈RNA分子,可以在翻譯水平發(fā)揮調(diào)控基因表達(dá)的功能,具有高度保守性、時(shí)序表達(dá)特異性、時(shí)序表達(dá)特異性等特征[2]。近年來研究發(fā)現(xiàn),mi-RNA與NSCLC發(fā)生、發(fā)展明顯關(guān)聯(lián),其被認(rèn)為可加強(qiáng)腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移能力及化療耐藥性[3],提醒研究mi RNA在NSCLC治療中的未來前景?；诖吮狙芯恳詍iR-92b、miR-320a表達(dá)水平與NSCLC患者臨床病理及術(shù)后3年生存率的關(guān)系展開討論,結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧我院腫瘤外科2017年10月—2019年5月收治的86例NSCLC患者資料,其中男48例,女38例;年齡<60歲27例,≥60歲59例;吸煙者35例;組織學(xué)類型:鱗癌34例,腺癌52例;腫瘤TNM分期:Ⅰ期18例,Ⅱ期31例,Ⅲ期37例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移48例。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)年齡18歲以上;(2)完善CT、MRI等檢查,經(jīng)病理學(xué)活檢確診為NSCLC;(3)兩位高年資腫瘤科醫(yī)師判定生存期在1年以上;(4)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并其他器官嚴(yán)重器質(zhì)性病變及惡性腫瘤;(2)未找到可供評(píng)價(jià)的實(shí)體瘤。所有患者及其家屬均對(duì)研究知情同意,本研究符合《世界醫(yī)學(xué)赫爾辛基宣言》。

1.2 檢測方法 取腫瘤組織及腫瘤邊緣5cm以上癌周組織,保存液氮中待檢,采用定時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測miR-92b、miR-320a表達(dá)水平。取待檢組織,研磨并以細(xì)胞裂解液裂解,用總RNA提取試劑盒提取總RNA,以分光光度計(jì)檢測結(jié)果A260/A280在1.8～2.0判定RNA純度。使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,按試劑盒說明擴(kuò)增引物,miR-92b引物參數(shù)上游: 5’-AGGGACGGGACGCGGTGCAGTG-3’,下游: 5’-GCGAGCACAGAATTAATACGAC-3’;miR-320a引物參數(shù)上游:5’-TATTCGCACTGGATACGACTCCAGC-3’,下游:5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGG-3’。RT-PCR反應(yīng)參數(shù):94℃ 2min,94℃ 30s,58℃ 30s,miR-92b循環(huán)38次,miR-320a循環(huán)40次。采用 2-ΔΔCt法計(jì)算miR-92b、miR-320a表達(dá)量。

1.3 觀察指標(biāo) (1)比較患者腫瘤組織及癌周組織的miR-92b、miR-320a表達(dá)水平。(2)比較不同miR-92b、miR-320a表達(dá)水平患者的預(yù)后(術(shù)后3年累積生存率、平均生存時(shí)間),采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線。(3)收集患者臨床資料,比較不同miR-92b、miR-320a表達(dá)水平患者的臨床資料(性別、年齡、吸煙、組織學(xué)類型、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)。(4)采用COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析分析影響NSCLC患者預(yù)后獨(dú)立影響因素。

2 結(jié)果

2.1 腫瘤組織及癌周組織的miR-92b、miR-320a表達(dá)水平 腫瘤組織miR-92b表達(dá)水平為(2.23±0.42),高于癌周組織表達(dá)水平(1.27±0.17),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=19.648,P=0.000);腫瘤組織miR-320a表達(dá)水平為(0.82±0.31),低于癌周組織表達(dá)水平(1.84±0.92),比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.743,P=0.000)。

2.2 不同miR-92b、miR-320a表達(dá)水平預(yù)后比較 以腫瘤組織中miR-92b、miR-320a表達(dá)水平P25值為分界分為低表達(dá)(22例)、高表達(dá)(64例)。miR-92b低表達(dá)患者術(shù)后3年累積生存率、平均生存時(shí)間分別為71.72%、(32.38±1.49)個(gè)月高于高表達(dá)患者的52.41%、(29.20±1.13)個(gè)月,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.147、t=10.462,P=0.008、0.000),見圖1。miR-320a低表達(dá)患者術(shù)后3年累積生存率、平均生存時(shí)間分別為39.64%、(26.04±2.26)個(gè)月,低于高表達(dá)患者的63.30%、(31.40±0.93)個(gè)月,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.267、t=15.629,P=0.022、0.000),見圖2。

圖1 不同miR-92b表達(dá)水平對(duì)NSCLC患者預(yù)后影響的生存曲線

圖2 不同miR-320a表達(dá)水平對(duì)NSCLC患者預(yù)后影響的生存曲線

2.3 不同miR-92b、miR-320a表達(dá)水平與臨床病理比較 不同miR-92b、miR-320a表達(dá)水平患者性別、年齡、吸煙、組織學(xué)類型比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);不同miR-92b、miR-320a表達(dá)水平患者腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。

表1 不同miR-92b、miR-320a表達(dá)水平與臨床病理比較(%)

2.4 NSCLC患者預(yù)后影響因素分析 腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、miR-92b、miR-320a表達(dá)水平為影響NSCLC患者預(yù)后獨(dú)

立影響因素(P<0.05),其中腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、miR-92b表達(dá)水平為獨(dú)立危險(xiǎn)因素,miR-320a為獨(dú)立保護(hù)因素,見表2。

表2 NSCLC患者預(yù)后影響因素分析

3 討論

NSCLC是以發(fā)病率高、死亡率高等為特點(diǎn)呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤,占總肺癌患者的80%以上,是我國主要疾病負(fù)擔(dān)之一,患者就診時(shí)多為中晚期,預(yù)后通常較差,目前臨床對(duì)其生存率預(yù)測的指標(biāo)均存在一定局限性,因此探索多方面預(yù)測指標(biāo)十分必要。隨基因組學(xué)研究深入,發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展與癌基因的關(guān)聯(lián),而對(duì)mi-RNA作為癌癥和其他病理學(xué)中重要調(diào)節(jié)劑的發(fā)現(xiàn),大大擴(kuò)大了肺癌管理的可能性[4]。miR-92b屬于miR-106a-363基因簇成員,劉飛等[5]研究顯示食管癌細(xì)胞中的miR-92b能通過調(diào)控組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶zeste同源物增強(qiáng)子2基因表達(dá)水平抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲及遷移能力,而王曉庚等[6]研究發(fā)現(xiàn),miR-92b在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的口腔癌患者中異常高表達(dá)且表達(dá)水平與腫瘤分期密切相關(guān)。在本研究中,腫瘤組織的miR-92b表達(dá)水平均高于癌周組織(P<0.05),說明腫瘤組織中miR-92b呈現(xiàn)異常高表達(dá),經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)不同miR-92b表達(dá)水平的NSCLC患者腫瘤分期分布及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有所差異,高表達(dá)患者通常腫瘤進(jìn)展更快,TNM分期多集中于Ⅱ～Ⅲ期且多數(shù)伴隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。此外高表達(dá)患者術(shù)后3年累積生存率、平均生存時(shí)間分別為52.41%、(29.20±1.13)個(gè)月,預(yù)后明顯較低表達(dá)患者的71.72%、(32.38±1.49)個(gè)月差,COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析顯示,miR-92b表達(dá)水平為NSCLC預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05),提醒miR-92b表達(dá)參與NSCLC疾病進(jìn)展,早期檢測其表達(dá)水平有助于預(yù)測預(yù)后,進(jìn)行針對(duì)性疾病管理。

miR-320a是miRNA中一員,在多種惡性腫瘤中異常表達(dá),研究顯示其能通過調(diào)節(jié)PI3K/AKT、Wnt、STAT3等信號(hào)通路發(fā)揮腫瘤發(fā)展調(diào)節(jié)作用。呂曉婷等[7]研究發(fā)現(xiàn)miR-320a能通過阻滯肝癌細(xì)胞增殖周期發(fā)揮抑癌作用。本研究中,腫瘤組織的miR-320a水平低于癌周組織(P<0.05),且miR-320a低表達(dá)NSCLC患者疾病更嚴(yán)重,多伴隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,有更低的生存率,低表達(dá)患者術(shù)后3年累積生存率僅為39.64%,而平均生存時(shí)間為(26.04±2.26)個(gè)月,經(jīng)COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析顯示,miR-320a表達(dá)水平為NSCLC預(yù)后不良的獨(dú)立保護(hù)因素(P<0.05),推測miR-320a參與NSCLC腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移抑制過程,對(duì)患者診斷、治療有指導(dǎo)作用。

綜上所述,miR-92b在NSCLC患者中異常高表達(dá),miR-320a異常低表達(dá),二者與患者腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)聯(lián),均有作為預(yù)后預(yù)測指標(biāo)的潛力。