閔宇航,劉斯琪,余曉琴,李澍才,張麗平
(1.四川省食品檢驗(yàn)研究院,四川成都 611731;2.國家市場監(jiān)管重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(白酒監(jiān)管技術(shù)),四川成都 611731;3.成都紡織高等??茖W(xué)校輕工與材料學(xué)院,四川成都 611731)
工業(yè)染料被廣泛應(yīng)用于毛皮制品、紡織品、陶瓷制品等工業(yè)產(chǎn)品的上色,具有色澤艷麗、價(jià)格低廉、不易褪色等優(yōu)點(diǎn)。工業(yè)染料多以苯、甲苯、萘等芳香族化合物為原料,經(jīng)過磺化、偶氮化等化學(xué)反應(yīng)而成,進(jìn)入人體后,會被腸道細(xì)菌分解成芳香胺,具有致癌和致突變性[1-2]。此外,還具有胚胎毒性,會造成發(fā)育異常[3]。酸性工業(yè)染料一般都是芳香族的磺酸鈉鹽,溶于水后電離成色素酸陰離子,能與氨基或酰胺基相結(jié)合,易上色于蛋白類產(chǎn)品[4],近年來,食品中非法添加酸性工業(yè)染料的惡性事件屢禁不止,例如灌腸類肉制品中檢出紅2G[5],鹵肉中檢出酸性橙Ⅱ[6],黃三魚中非法添加酸性橙Ⅱ[7],豆制品加工中非法添加酸性金黃G[8]等。針對風(fēng)險(xiǎn),監(jiān)管部門加大了對食品中非法添加工業(yè)染料的打擊力度,近幾年也陸續(xù)發(fā)布了食品中工業(yè)染料的補(bǔ)充檢驗(yàn)方法,但是現(xiàn)行的檢測方法存在能檢測的酸性工業(yè)染料較少,基質(zhì)覆蓋不夠,通用性不強(qiáng)的問題,造成監(jiān)管存在較大漏洞。因此,建立一種包含化合物多、通用性強(qiáng)、能覆蓋多種高風(fēng)險(xiǎn)食品基質(zhì)的酸性工業(yè)染料檢測方法非常有必要。
目前,工業(yè)染料的檢測方法有薄層色譜法[9]、酶聯(lián)免疫法[10]、電化學(xué)分析法[11]、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[12-13],高效液相色譜法[14-15]和高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[16-18]。由于食品基質(zhì)較為復(fù)雜,酶聯(lián)免疫法和高效液相色譜法容易出現(xiàn)假陽性;薄層色譜法和電化學(xué)分析法的靈敏度較低,無法滿足日常風(fēng)險(xiǎn)篩查的需求;氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法前處理較為復(fù)雜,檢測效率較低;液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法具有靈敏度高、抗干擾能力強(qiáng)以及前處理方式較為簡便的優(yōu)點(diǎn)[19],被廣泛應(yīng)用于食品非法添加的檢測中,但是在質(zhì)譜檢測中由于基質(zhì)中的磷脂、膽固醇、蛋白質(zhì)等內(nèi)源性物質(zhì)會影響目標(biāo)分析物的離子化效率,使得目標(biāo)分析物的質(zhì)譜信號增加或者減弱,產(chǎn)生基質(zhì)效應(yīng),造成定量測定結(jié)果不準(zhǔn)確的問題[20]。
本研究擬采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS/MS),結(jié)合固相萃?。⊿PE)凈化技術(shù)降低基質(zhì)效應(yīng),建立能覆蓋非法添加的高風(fēng)險(xiǎn)食品基質(zhì)包括肉制品、豆制品、水產(chǎn)品和調(diào)味品中24 種酸性工業(yè)染料的測定方法,以期為工業(yè)染料的非法添加監(jiān)管提供強(qiáng)有力的技術(shù)支撐。
橙黃Ⅳ、紅2G、甲基橙、喹啉黃、酸性橙Ⅱ、酸性橙3、酸性橙10、酸性橙12、酸性橙20、酸性紅26、酸性紅52、酸性大紅GR、酸性紅87、酸性黃17、酸性金黃G、酸性藍(lán)1、酸性藍(lán)3、酸性藍(lán)7、酸性藍(lán)83、酸性藍(lán)90、酸性藍(lán)113、酸性綠16、酸性紫43、鉻藍(lán)SE 德國Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司,純度均大于98%;Cleanert PWAX 固相萃取小柱(150 mg,6 mL)天津博納艾潔爾科技有限公司;Oasis WAX 固相萃取小柱(150 mg,6 mL)美國Waters 公司;WondaSep WAX 固相萃取小柱(150 mg,6 mL)日本島津公司;0.25 μm 聚四氟乙烯(Poly tetra fluoroethylene,PTFE)濾膜、0.25 μm 聚偏氟乙烯(Polyvinylidene fluoride,PVDF)濾膜、0.25 μm 聚丙烯濾膜(Polypropylene,PP)濾膜、0.25 μm 尼龍(Nylon,PA)濾膜 天津億鼎鑫分析儀器有限公司;乙腈、乙酸銨 色譜純,美國Thermo Fisher Scientific公司;氨水 分析純,成都科隆化學(xué)品有限公司;水產(chǎn)品、調(diào)味品、肉制品、豆制品各40 批次 購自農(nóng)貿(mào)市場。
ACQUITY UPLC?BEH C18色譜分析柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)美國WatersTM公司;AcclaimTMRSLC 120 C18色譜分析柱(2.1 mm×100 mm,2.2 μm)、Thermo Scientific Heraeus Mlutifuge X3R 高速冷凍離心機(jī) 美國Thermo Fisher Scientific 公司;ZORBAX Eclipse RRHD C18色譜分析柱(2.1 mm×50 mm,1.8 μm)、ZORBAX Eclipse RRHD C18色譜分析柱(3.0 mm×150 mm,1.8 μm)、Agilent 1290 InfinityⅡ超高效液相色譜儀、Agilent 6495C 三重四極桿質(zhì)譜儀 美國Agilent 公司;IRM IDH30 超聲儀 德國IRM Technology GmbH 公司;IKA MS3 渦旋混合器 德國IKA 公司;Biotage TurboVap 全自動氮吹儀 瑞典Biotage 公司。
1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 準(zhǔn)確稱取24 種酸性工業(yè)染料標(biāo)準(zhǔn)品各10 mg(精確至0.01 mg),用水溶解,乙腈定容至10 mL,混勻,制成1 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。再精密吸取10 μL 標(biāo)準(zhǔn)儲備液置10 mL 容量瓶中,乙腈定容至刻度,混勻,制成1 μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。
精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液適量,采用空白基質(zhì)加標(biāo)的方法制備濃度為20、50、100、150、200、250、300 ng/mL 隨行基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
1.2.2 供試品溶液的制備 稱取均質(zhì)后的樣品2 g(精確至0.001 g),置50 mL 離心管中,加入10 mL氨水乙醇溶液(氨水:無水乙醇:水=2:7:1,v/v/v),渦旋1 min,再超聲(功率500 W)10 min,以10000 r/min在4 ℃條件下離心5 min,上清液轉(zhuǎn)移至20 mL 容量瓶中,殘?jiān)偌尤? mL 氨水乙醇溶液重復(fù)提取1 次,合并上清液,用氨水乙醇溶液定容至刻度,混勻,作為提取液。精密吸取10 mL 提取液至氮吹管中,氮吹濃縮至約1 mL,加入10 mL 5%甲醇水溶液混勻,作為待凈化液。
凈化前,依次用6 mL 甲醇,6 mL 水對PWAX固相萃取小柱進(jìn)行活化。將待凈化液以1 mL/min的速度通過固相萃取小柱,依次用6 mL 水,6 mL 甲醇淋洗,再用5%氨水甲醇溶液10 mL 洗脫,收集洗脫液,40 ℃氮吹至近干,精密加入1 mL 乙酸銨乙腈溶液(10 mmol/L 乙酸銨溶液:乙腈=1:1,v/v)復(fù)溶,過PTFE 濾膜,濾液供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。
1.2.3 分析條件 液相色譜條件:色譜柱:Agilent ZORBAX Eclipse RRHD C18色譜柱(3.0 mm×150 mm,1.8 μm);柱溫:40 ℃;進(jìn)樣量:2 μL;流動相:A 相:10 mmol/L 乙酸銨溶液;B 相:乙腈;流速0.3 mL/min;流動相梯度見表1。
表1 流動相梯度洗脫程序Table 1 The gradient elution program of mobile phase
質(zhì)譜條件:離子源:電噴霧離子源(ESI);掃描方式:負(fù)離子掃描;檢測方式:多反應(yīng)檢測(MRM);毛細(xì)管電壓:3.0 kV;干燥氣溫度:250 ℃;干燥氣流量:11 L/min;霧化氣壓力:25 psi;鞘氣溫度:250 ℃;鞘氣流量:11 L/min?;衔镔|(zhì)譜參數(shù)見表2。
表2 24 種酸性工業(yè)染料的質(zhì)譜參數(shù)Table 2 Mass parameters of 24 acid industrial dyes
采用美國Agilent Technologies Inc.的MassHunter Workstation Software 11.0 軟件進(jìn)行分析處理,Microsoft Office Excel 2016 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
2.1.1 色譜柱的選擇 工業(yè)染料的測定,研究[21-22]均采用了C18色譜柱進(jìn)行液相色譜分離,為實(shí)現(xiàn)24 種酸性工業(yè)染料的快速有效分離,實(shí)驗(yàn)分別考察了Waters ACQUITY UPLC?BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)、Thermo AcclaimTMRSLC 120 C18(2.1 mm×100 mm,2.2 μm)、Agilent ZORBAX Eclipse RRHD C18(2.1 mm×50 mm,1.8 μm)、Agilent ZOR BAX Eclipse RRHD C18(3.0 mm×150 mm,1.8 μm)4 種不同品牌和參數(shù)的C18色譜柱。Waters ACQUITY UPLC?BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)、Thermo AcclaimTMRSLC 120 C18(2.1 mm×100 mm,2.2 μm)、Agilent ZORBAX Eclipse RRHD C18(2.1 mm×50 mm,1.8 μm)由于柱長較短,可以縮短分析時(shí)間,但是無法實(shí)現(xiàn)酸性橙Ⅱ與酸性12 兩個(gè)同分異構(gòu)體的基線分離,影響定性定量的準(zhǔn)確性;選擇柱長更長的Agilent ZORBAX Eclipse RRHD C18(3.0 mm×150 mm,1.8 μm)進(jìn)行考察后的結(jié)果顯示24 種目標(biāo)化合物均可以得到較好的分離。
2.1.2 流動相的優(yōu)化 液相色譜中常用乙腈和甲醇作為有機(jī)流動相,相較于甲醇,乙腈的洗脫能力更強(qiáng),可以提高分析效率[23],而在流動相水相中加入乙酸銨可以改善酸性染料的峰型,提高分離度,同時(shí)增加質(zhì)譜負(fù)模式下的離子化效率[24-25]。實(shí)驗(yàn)考察了乙腈-水和乙腈-10 mmol/L 乙酸銨溶液兩種流動相體系??疾旖Y(jié)果發(fā)現(xiàn)水相中加入乙酸銨可以得到較好的酸性工業(yè)染料色譜峰形,相比之下純水相的效果略差,喹啉黃和鉻藍(lán)SE 峰形有拖尾的情況;而對乙腈-10 mmol/L 的流動相體系進(jìn)行梯度條件的考察,結(jié)果表明在表1 的梯度條件下,可以實(shí)現(xiàn)酸性橙Ⅱ與酸性12 兩個(gè)同分異構(gòu)體的基線分離,同時(shí)24 種目標(biāo)化合物均可以達(dá)到一個(gè)較好的峰型和分離。24 種酸性工業(yè)染料的總離子流圖見圖1。
圖1 24 種酸性工業(yè)染料的總離子流圖(100 ng/mL)Fig.1 Total ion current chromatogram of the 24 acid industrial dyes (100 ng/mL)
酸性工業(yè)染料中含有磺酸基,易溶于水電離產(chǎn)生陰離子,選擇ESI-模式進(jìn)行檢測,母離子一般為[M-Na]-;含有2 個(gè)或以上Na+,且具有相同數(shù)量的磺酸基的化合物會形成[(M-xNa+yH)/(x-y)]-多離子共存的狀態(tài),單價(jià)態(tài)和更高價(jià)態(tài)的分子離子峰響應(yīng)較低,多以二價(jià)準(zhǔn)分子離子為基峰[26],例如紅2G、酸性藍(lán)113、酸性紅26、鉻藍(lán)SE。確定目標(biāo)化合物母離子后,進(jìn)行產(chǎn)物離子掃描,得到相應(yīng)的碎片離子,盡量選擇響應(yīng)最好的三對碎片離子進(jìn)行參數(shù)優(yōu)化,避免出現(xiàn)假陽性,具體質(zhì)譜參數(shù)見表2。
2.3.1 提取溶劑的選擇 實(shí)驗(yàn)測定的目標(biāo)化合物均含有苯磺酸鈉結(jié)構(gòu),屬于強(qiáng)酸性化合物,容易被堿性溶劑提取,參考文獻(xiàn)[27],考察采用空白基質(zhì)加標(biāo)實(shí)驗(yàn),添加水平為100 μg/kg,每個(gè)條件做3 個(gè)平行實(shí)驗(yàn)(n=3),以溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算目標(biāo)化合物的絕對回收率。實(shí)驗(yàn)考察了氨水-乙醇-水溶液(2:88:10,v/v/v)、氨水-乙醇-水溶液(10:80:10,v/v/v)、氨水-乙醇-水溶液(20:70:10,v/v/v)3 種提取溶劑的提取能力,以絕對回收率評價(jià)提取效果。由于目標(biāo)化合物均含有苯磺酸鈉結(jié)構(gòu),容易被堿性溶劑提取,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,隨著提取溶劑中氨水濃度的升高,目標(biāo)化合物的提取效果越好,采用氨水-乙醇-水溶液(2:88:10,v/v/v)作為提取溶劑,24 種酸性工業(yè)染料的絕對回收率在27%~79%,采用氨水-乙醇-水溶液(10:80:10,v/v/v)作為提取溶劑,24 種酸性工業(yè)染料的絕對回收率在31%~89%,采用氨水-乙醇-水溶液(20:70:10,v/v/v)作為提取溶劑,24 種酸性工業(yè)染料的絕對回收率在35%~92%;氨水-乙醇-水溶液(20:70:10,v/v/v)的提取能力優(yōu)于其余兩種考察溶劑,提取溶劑考察結(jié)果見圖2。
圖2 提取溶劑的考察(n=3)Fig.2 Investigation of extraction solvents (n=3)
2.3.2 固相萃取小柱的選擇 實(shí)驗(yàn)測定的目標(biāo)化合物均帶有磺酸根,屬于強(qiáng)酸性極性化合物,凈化時(shí)宜采用對強(qiáng)酸性化合物有很好選擇性的弱陰離子交換固相萃取小柱[28]??疾觳捎每瞻谆|(zhì)加標(biāo)實(shí)驗(yàn),添加水平為100 μg/kg,每個(gè)條件做3 個(gè)平行實(shí)驗(yàn)(n=3),以溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算目標(biāo)化合物的絕對回收率,實(shí)驗(yàn)考察了市面上常見的三種弱陰離子交換固相萃取小柱,分別為Waters Oasis WAX(150 mg,6 mL)、Agela Cleanert PWAX(150 mg,6 mL)和島津WondaSep WAX(150 mg,6 mL),以絕對回收率評價(jià)三個(gè)小柱的凈化效果。結(jié)果表明,采用島津WondaSep WAX(150 mg,6 mL)作為凈化小柱,24 種目標(biāo)化合物的絕對回收率在30%~83%,采用Waters Oasis WAX(150 mg,6 mL)作為凈化小柱,24 種目標(biāo)化合物的絕對回收率在31%~90%,采用Agela Cleanert PWAX(150 mg,6 mL)作為凈化小柱,24 種目標(biāo)化合物的絕對回收率在35%~92%,并且待凈化溶液在Agela Cleanert PWAX(150 mg,6 mL)的通過速度高于其他兩種固相萃取小柱。綜合考察結(jié)果Agela Cleanert PWAX 的凈化效果和凈化速度優(yōu)于Waters Oasis WAX 和島津WondaSep WAX,固相萃取小柱考察結(jié)果見圖3。
圖3 固相萃取小柱的考察(n=3)Fig.3 Investigation of solid phase extraction colum (n=3)
2.3.3 濾膜的選擇 常用的尼龍濾膜會對酸性染料產(chǎn)生吸附作用[29-30],實(shí)驗(yàn)室考察了聚偏氟乙烯(PVDF)濾膜、聚丙烯濾膜(PP)濾膜、聚四氟乙烯(PTFE)濾膜、尼龍(PA)濾膜??疾觳捎每瞻谆|(zhì)加標(biāo)實(shí)驗(yàn),添加水平為100 μg/kg,每個(gè)條件做3 個(gè)平行實(shí)驗(yàn)(n=3),以溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算目標(biāo)化合物的絕對回收率,結(jié)果表明,PA 濾膜對紅色染料有較為明顯的吸附作用,能在濾膜上看見紅色染料的殘留,采用PA 濾膜進(jìn)行過濾,紅2G、酸性紅26、酸性紅52 和酸性大紅GR 的絕對回收率僅為30%~65%,明顯低于其他三種濾膜;采用PVDF 濾膜,24 種酸性工業(yè)染料的絕對回收率為34%~88%,采用PP 濾膜,24 種酸性工業(yè)染料的絕對回收率為35%~92%,采用PTFE 濾膜,24 種酸性工業(yè)染料的絕對回收率為36%~95%;綜合考慮選擇PTFE 濾膜,濾膜考察結(jié)果見圖4。
圖4 濾膜的考察(n=3)Fig.4 Investigation of filter membrane (n=3)
2.4.1 基質(zhì)效應(yīng) 實(shí)驗(yàn)通過斜率法[31]來評價(jià)基質(zhì)效應(yīng)(matrix effect,ME),采用公式:進(jìn)行計(jì)算,A 表示溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率,B 表示基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率。當(dāng)ME<1,表明基質(zhì)對目標(biāo)化合物的響應(yīng)產(chǎn)生了抑制作用;ME>1,表明基質(zhì)對目標(biāo)化合物的響應(yīng)產(chǎn)生了增強(qiáng)作用;ME=1,表明沒有基質(zhì)效應(yīng)。若0.8≤ME≤1.2 時(shí),為弱基質(zhì)效應(yīng),當(dāng)0.5<ME<0.8 或1.2<ME<1.5 時(shí),為中等基質(zhì)效應(yīng);當(dāng)ME≤0.5 或ME≥1.5 時(shí),為強(qiáng)基質(zhì)相應(yīng)[32]。實(shí)驗(yàn)考察了20~300 ng/mL濃度范圍內(nèi)24 種酸性工業(yè)染料在4 種食品基質(zhì)中的基質(zhì)效應(yīng),結(jié)果表明,考察的食品基質(zhì)對24 種酸性工業(yè)染料均產(chǎn)生了抑制作用,其中酸性橙12、酸性橙20、酸性大紅GR、酸性紅87、酸性藍(lán)113、鉻藍(lán)SE 在四種食品基質(zhì)中均表現(xiàn)為強(qiáng)抑制基質(zhì)效應(yīng);酸性藍(lán)1、酸性綠16 在四種基質(zhì)中均為弱抑制基質(zhì)效應(yīng);其余16 種酸性工業(yè)染料在四種基質(zhì)中呈現(xiàn)不同強(qiáng)度的基質(zhì)抑制效應(yīng),這可能是因?yàn)樗姆N基質(zhì)中蛋白質(zhì)、脂肪組成存在差異,在同樣的前處理?xiàng)l件下,產(chǎn)生了不同的基質(zhì)效應(yīng)?;|(zhì)效應(yīng)的具體數(shù)據(jù)見表3。
表3 四種食品基質(zhì)中24 種酸性工業(yè)染料的基質(zhì)效應(yīng)Table 3 Matrix effects of 24 acid industrial dyes in four food matrices
2.4.2 基質(zhì)效應(yīng)補(bǔ)償措施 彌補(bǔ)和消除基質(zhì)效應(yīng)常用的方法主要有同位素內(nèi)標(biāo)法[33]和基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液法[34]。由于市面上沒有合適的同位素內(nèi)標(biāo),基質(zhì)效應(yīng)的補(bǔ)償措施采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液法。實(shí)驗(yàn)考察了隨行基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的補(bǔ)償效果。采用添加水平為100 μg/kg 的空白基質(zhì)加標(biāo)實(shí)驗(yàn)(n=3),分別以隨行基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液計(jì)算目標(biāo)化合物的回收率,考察結(jié)果見圖5。結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用隨行基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液計(jì)算24 種酸性工業(yè)染料的回收率為92.0%~103.2%;采用配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工業(yè)溶液計(jì)算的回收率為29.4%~88.1%,其中酸性橙12、酸性黃17、酸性藍(lán)83、酸性藍(lán)113、鉻藍(lán)SE 的回收率均低于60%,不符合GB/T 27404 的檢測方法技術(shù)要求,實(shí)驗(yàn)選擇隨行基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液作為基質(zhì)效應(yīng)的補(bǔ)償措施。
圖5 基質(zhì)效應(yīng)補(bǔ)償措施的考察(n=3)Fig.5 Research on compensation measures of matrix effects (n=3)
2.4.3 線性范圍、檢出限和定量限 按照前處理方法制備24 種酸性工業(yè)染料的隨行基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,濃度分別為20、50、100、150、200、250、300 ng/mL。以目標(biāo)化合物定量離子的峰面積為縱坐標(biāo),質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)得到線性回歸方程(表4),24 種酸性工業(yè)染料在四種食品基質(zhì)中線性范圍20~300 ng/mL 的相關(guān)系數(shù)r均大于0.999。通過空白基質(zhì)加標(biāo)實(shí)驗(yàn)測定,24 種酸性工業(yè)染料在四種基質(zhì)中10 μg/kg 的添加水平下的加標(biāo)溶液的定性離子信噪比(S/N)均大于3,表明24 種酸性工業(yè)染料的在四種基質(zhì)中的檢出限均可達(dá)到10 μg/kg;24 種酸性工業(yè)染料在四種基質(zhì)中25 μg/kg 的添加水平下加標(biāo)溶液的定性離子信噪比(S/N)大于10,且回收率為90.4%~112.7%,表明24 種酸性工業(yè)染料在四種基質(zhì)中的定量限均可達(dá)到25 μg/kg。
表4 24 種酸性工業(yè)染料在4 種食品基質(zhì)中的線性方程Table 4 Regression equation of 24 acid industrial dyes in four food matrices
2.4.4 回收率、精密度和穩(wěn)定性 在空白基質(zhì)中添加25、100、250 μg/kg 三個(gè)水平,每個(gè)水平分別做6 份平行樣,計(jì)算各水平的回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD)。豆制品、調(diào)味品、水產(chǎn)品、肉制品中24 種酸性工業(yè)染料三個(gè)加標(biāo)水平下的平均回收率為91.0%~112.7%,RSD 為0.42%~4.39%,具體見表5。樣品加標(biāo)溶液分別在0、2、4、8、16、24、48 h 進(jìn)樣,定量離子峰面積RSD 為2.69%~4.41%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示該方法在四個(gè)基質(zhì)中三個(gè)濃度水平下回收率均在GB/T 27404 給出的參考范圍內(nèi),表明該方法準(zhǔn)確且穩(wěn)定。
表5 24 種酸性工業(yè)染料在4 種食品基質(zhì)中的回收率與RSDTable 5 Spiked recoveries and RSDs of 24 acid industrial dyes in four food matrices
2.4.5 實(shí)驗(yàn)室間協(xié)作驗(yàn)證 選擇了5 家檢測機(jī)構(gòu)對本方法進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證結(jié)果顯示,24 種酸性工業(yè)染料在四種基質(zhì)的20~300 ng/mL 線性范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)r均大于0.999;四種基質(zhì)檢出限濃度下的加標(biāo)試樣溶液定性離子信噪比均大于3,滿足方法檢出限的要求;四種基質(zhì)定量限濃度下的加標(biāo)試樣溶液定性離子信噪比均大于10,且回收率為86.1%~115.3%,滿足方法定量限的要求。24 種酸性工業(yè)染料在四種食品基質(zhì),25、100、250 μg/kg 三個(gè)加標(biāo)水平下的回收 率為86.1%~116.1%,RSD 為0.86%~4.96%,滿足方法準(zhǔn)確度的要求。5 家檢測機(jī)構(gòu)的驗(yàn)證數(shù)據(jù)說明該方法在不同的實(shí)驗(yàn)室之間的耐用性良好。
采用實(shí)驗(yàn)建立的方法對實(shí)驗(yàn)室周邊農(nóng)貿(mào)市場銷售的豆制品、調(diào)味品、水產(chǎn)品、肉制品各40 批次進(jìn)行測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn),2 批次鹵肉樣品中檢出了酸性橙Ⅱ,含量分別為138±2.8 μg/kg 和179±3.7 μg/kg;2 批次香腸樣品中檢出紅2G,含量分別為320±8.6 μg/kg和230±6.2 μg/kg;其余樣品均未檢出。
本實(shí)驗(yàn)建立了食品中24 種酸性工業(yè)染料測定的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜方法。實(shí)驗(yàn)考察了提取溶劑、固相萃取小柱、濾膜選擇的前處理?xiàng)l件,優(yōu)化了色譜條件和質(zhì)譜采集參數(shù),并對方法的線性范圍、檢出限、定量限、回收率、精密度、穩(wěn)定性等技術(shù)指標(biāo)進(jìn)行了考察,最終建立了食品中24 種酸性工業(yè)染料的固相萃取小柱凈化結(jié)合超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)測定的檢測方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,24 種酸性工業(yè)染料在20~300 ng/mL 范圍內(nèi),相關(guān)系數(shù)r均大于0.999;方法檢出限為10 μg/kg,定量限為25 μg/kg;在25、100、250 μg/kg 三個(gè)不同加標(biāo)水平下的回收率為91.0%~112.7%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)為0.42%~4.39%。該方法操作簡便快速、靈敏度高、通用性強(qiáng)、結(jié)果準(zhǔn)確可靠,能一次性測定食品中24 種酸性工業(yè)染料,擴(kuò)大了酸性工業(yè)染料篩查范圍和覆蓋的食品基質(zhì),可以為監(jiān)管提供強(qiáng)有力的技術(shù)支撐。