孫 璇，李 萍，孫 靜，鄭嘉妮，余丹陽(yáng)，張艷美，陳 朋,

（1.仙樂(lè)健康科技股份有限公司，廣東汕頭 515000；2.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理教研室，廣東汕頭 515041）

隨著生活水平的提升，人們對(duì)皮膚健康和管理的關(guān)注度與日俱增。紫外線輻射作為主要的外源性老化因素對(duì)皮膚的傷害長(zhǎng)期存在，與人體皮膚的生理病理狀態(tài)關(guān)系最為密切。維生素C（Vitamin C，VC），又稱為抗壞血酸，是人體健康必需的微量營(yíng)養(yǎng)素，天然VC主要來(lái)源于柑橘類水果和蔬菜[1]，有提高免疫力、預(yù)防細(xì)菌和病毒感染等作用。作為人體內(nèi)最重要的水溶性維生素之一，VC具有抗氧化、減輕炎性反應(yīng)、光保護(hù)、抗衰老和抗色素沉著的作用，在皮膚健康方向也起著重要作用[2]?；保⊿ophora japonicaL.）是一種高大的多年生喬木，因其具有觀賞、藥用和食用價(jià)值而受到關(guān)注[3]?；?花芽具有外觀美觀、氣味芳香、口感獨(dú)特、保健功能優(yōu)良等優(yōu)點(diǎn)，在改善氧化應(yīng)激，調(diào)節(jié)黑色素沉淀，修復(fù)紫外線輻射損傷等方向具有顯著作用[4-6]。近年來(lái)的研究表明，槐米中提取的多糖具有保護(hù)HaCaT 細(xì)胞免受UVB 照射誘導(dǎo)的損傷[5]?；被ㄖ械闹饕煞痔J丁被認(rèn)為可以降低順鉑導(dǎo)致的HMCs 細(xì)胞的氧化損傷[7]。因此，VC和槐提取物有抗氧化功效，具有對(duì)皮膚的光保護(hù)作用。

此外，有研究表明蘆丁和VC聯(lián)用對(duì)超氧陰離子自由基的清除或?qū)χ|(zhì)過(guò)氧化的抑制呈濃度依賴性，且蘆丁與VC組合可以產(chǎn)生超加性效應(yīng)[8]。蘆丁和VC組合物在紫外輻照的人類皮膚成纖維細(xì)胞中也表現(xiàn)出保護(hù)作用，二者聯(lián)用對(duì)促炎信號(hào)蛋白的過(guò)度表達(dá)和DNA 重組/表達(dá)有抑制作用[9]。Zhang 等[10]的研究表明槐花和VC組合物顯著提高運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練小鼠血清中SOD 活性，且其抗氧化能力較單一物料處理組具有更好的效果。可見(jiàn)，槐提取物與維生素C 組合物有一定的協(xié)同抗氧化作用，可能對(duì)紫外線照射造成的皮膚光氧化損傷有效。

本實(shí)驗(yàn)室之前的實(shí)驗(yàn)研究表明，槐提取物和VC組合物可以促進(jìn)紫外照射后皮膚成纖維細(xì)胞彈性蛋白的生成，且槐提取物和VC組合物的質(zhì)量比為1:1 時(shí)有協(xié)同增效的作用。為進(jìn)一步探究槐提取物和VC特定比例組合物對(duì)人體皮膚細(xì)胞的影響，本研究以槐提取物和VC為實(shí)驗(yàn)材料，以HaCaT 細(xì)胞為研究對(duì)象，通過(guò)檢測(cè)槐提取物、VC及其組合物對(duì)UV 導(dǎo)致的光損傷的抗氧化保護(hù)與抗炎的初步探究，為槐提取物和維生素C 組合物的開(kāi)發(fā)和利用提供實(shí)驗(yàn)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

槐提取物 河南中大恒源生物科技股份有限公司（10%蘆丁，水提、包埋、干燥等工藝制備）；維生素C（合成）帝斯曼江山制藥（江蘇）有限公司；胎牛血清（FBS）、0.25%胰蛋白酶/EDTA、青霉素/鏈霉素、DMEM 培養(yǎng)基 Gibco 公司；磷酸鹽緩沖液（PBS）普諾賽生命科技有限公司；6-羧基-2',7'-二氯二氫熒光素二乙酸酯（H2DCF-DA）Thermo Fisher Scientific 公司；人白介素-6（IL-6）Elisa 試劑盒 RD systems 公司；MitoSOX? Red Invitrogen 公司；鼠源Anti-Thymine Dimer 抗體 Abcam 公司；Alexa Fluor 488 標(biāo)記山羊抗小鼠IgG（H+L）、抗熒光淬滅封片液（含DAPI）Beyotime Biotechnology 公司；即用型正常山羊血清 武漢博士德生物工程有限公司；永生化人角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT）普諾賽生命科技有限公司。

Axio Vert.A1 倒置熒光顯微鏡、LSM 880 激光共聚焦顯微鏡 ZEISS 公司；Spark?多模式微孔板酶標(biāo)儀 TECAN 公司；CL-3000L 紫外交聯(lián)儀Analytik Jena 公司；Forma 3111 二氧化碳培養(yǎng)箱Thermo Fisher Scientific 公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 槐提取物及維生素C 組合物對(duì)UV 誘導(dǎo)的HaCaT 細(xì)胞ROS 的影響

1.2.1.1 細(xì)胞內(nèi)總ROS 水平的測(cè)定（酶標(biāo)儀檢測(cè)）取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期生長(zhǎng)到80%的HaCaT 細(xì)胞，以1.5×104個(gè)/孔接種于黑壁透明板底的96 孔板。5% CO2的37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組（UVA 組）及槐提取物處理組（槐提取物組）、維生素C 處理組（VC組）、槐提取物和VC組合物處理組（槐提取物+VC組，質(zhì)量比為1:1）。棄去上清液，10 mmol/L PBS 洗滌1 次，模型組及不同實(shí)驗(yàn)組加入適量PBS 覆蓋細(xì)胞，模型組和各實(shí)驗(yàn)組置于10 J/cm2UVA（波長(zhǎng)為365 nm）照射[11]，UVA 照射結(jié)束后30 min，未接受輻照的對(duì)照組和UVA 照射的模型組加入100 μL DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組加入100 μL DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制的125 μg/mL 槐提取物溶液、125 μg/mL VC溶液、總濃度為125 μg/mL 槐提取物和VC組合物溶液，對(duì)照組加入DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)組的處理濃度按照實(shí)驗(yàn)室之前的研究得出。所有組別繼續(xù)培養(yǎng)30 min。棄去上清，加入50 μL 含5 μmol/L 的H2DCFDA 的DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基，37 ℃避光孵育30 min。多模式微孔板酶標(biāo)儀（激發(fā)光波長(zhǎng)Ex/發(fā)射光波長(zhǎng)Em=488/530）測(cè)定各孔熒光值，并按照下式計(jì)算細(xì)胞內(nèi)ROS 抑制率[12]：

式中：T-受試樣品熒光強(qiáng)度；C-模型組熒光強(qiáng)度；C0-對(duì)照組熒光強(qiáng)度。

1.2.1.2 細(xì)胞內(nèi)總ROS 水平的測(cè)定（熒光顯微鏡觀察）取對(duì)數(shù)期HaCaT 細(xì)胞，以6×105個(gè)/孔接種于35 mm 培養(yǎng)皿，后續(xù)操作與上述類似，H2DCF-DA 探針處理后，PBS 洗滌2 次，熒光顯微鏡下拍照[13]。

1.2.2 線粒體ROS（Mitochondrial DNA，mtROS）水平的測(cè)定 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期生長(zhǎng)到80%的HaCaT 細(xì)胞，以1.5×104個(gè)/孔接種于共聚焦培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)24 h。細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組及實(shí)驗(yàn)組。模型組和實(shí)驗(yàn)組經(jīng)10 J/cm2UVA 照射。模型組加入1 mL 基礎(chǔ)培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)組加入1 mL DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制的125 μg/mL 槐提取物溶液、125 μg/mL VC溶液、總濃度為125 μg/mL 槐提取物和VC組合物溶液（質(zhì)量比為槐提取物:VC=1:1）培養(yǎng)箱中孵育30 min。吸去培養(yǎng)基，PBS 緩沖溶液洗3 次；加入500 μL 含MitoSOX? Red 終濃度為10 μmol/L 的DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基，37 ℃孵育30 min。30 min 后，吸去上清，用37 ℃預(yù)熱PBS 漂洗3 次，加入1 mL PBS。激光共聚焦顯微鏡觀察并拍照[14]，Image-J 軟件分析各組的平均熒光強(qiáng)度（Mean fluorescence intensity，MFI），并計(jì)算mtROS 抑制率，計(jì)算公式如實(shí)驗(yàn)方法1.2.1。

1.2.3 環(huán)丁烷嘧啶二聚體（Cyclobutane pyrimidine dimers，CPDs）含量的測(cè)定 24 孔板加入細(xì)胞爬片，HaCaT 細(xì)胞以1.5×105個(gè)/孔的密度種于孔板，培養(yǎng)24 h。細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組及實(shí)驗(yàn)組。模型組和實(shí)驗(yàn)組經(jīng)30 mJ/cm2UVB（波長(zhǎng)為302 nm）照射[15-16]。實(shí)驗(yàn)組加入DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制的125 μg/mL槐提取物溶液、125 μg/mL VC溶 液、125 μg/mL 槐提取物和VC組合物溶液培養(yǎng)箱中孵育30 min。PBS 洗滌3 次。每孔加入1 mL 預(yù)冷4%多聚甲醛，室溫固定20 min；吸棄多聚甲醛，PBS 漂洗3 次，5 min/次。加入1 mL 0.1% PBST，室溫放置15 min；PBS 漂洗3 次，5 min/次。每孔加入1 mL 2 mol/L 鹽酸（現(xiàn)配現(xiàn)用），室溫放置10 min；吸棄鹽酸，PBS 漂洗3 次，5 min/次。加入50 μL 山羊血清封閉，覆蓋蓋玻片，室溫封閉1 h。吸棄封閉液，加入5%牛血清蛋白（BSA）稀釋的鼠源CPD 抗體，覆蓋蓋玻片，置于抗體孵育濕盒中，4 ℃過(guò)夜。PBS 漂洗3 次，5 min/次。加入5% BSA 稀釋的熒光二抗（Alexa Fluor488 標(biāo)記的山羊抗鼠IgG），室溫避光孵育1 h；吸棄二抗，PBS 漂洗3 次，5 min/次。用含DAPI 的抗熒光淬滅劑封片。觀察并拍照，Image-J 軟件分析各組的MFI。

1.2.4 細(xì)胞因子IL-6 分泌水平的測(cè)定 HaCaT 細(xì)胞按照5×106濃度接種于10 cm 細(xì)胞培養(yǎng)皿中。10 J/cm2UVA 照射結(jié)束后DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制的125 μg/mL 槐提取物溶液、125 μg/mL VC溶 液、125 μg/mL 槐提取物和VC組合物溶液，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)6 h[17]。按照IL-6 Elisa 檢測(cè)試劑盒檢測(cè)IL-6 的含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)至少3 次重復(fù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果用Graphpad 8.0.0 統(tǒng)計(jì)軟件分析并繪圖，結(jié)果以mean±SD 表示，統(tǒng)計(jì)方法為單因素方差分析（One-way，ANOVA）。*P＜0.05、**P＜0.01、#P＜0.05、##P＜0.01。

2 結(jié)果與分析

2.1 槐提取物和維生素C 組合物對(duì)HaCaT 細(xì)胞ROS 的影響

具有細(xì)胞膜滲透性的ROS 熒光檢測(cè)探針H2DCFDA 進(jìn)入細(xì)胞后，被水解生成DCFH 而無(wú)法穿過(guò)細(xì)胞膜，從而被裝載到細(xì)胞內(nèi)，ROS 可將DCFH 氧化成在激發(fā)時(shí)發(fā)出綠色熒光產(chǎn)物DCF，因此DCF 的熒光強(qiáng)度可反映細(xì)胞內(nèi)ROS 水平[18]。如圖1a 所示，對(duì)照組幾乎無(wú)熒光，UVA 處理后綠色熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，說(shuō)明細(xì)胞內(nèi)ROS 含量明顯增加，UVA 誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)ROS 含量增加。與UVA 組相比，槐提取物、VC及組合物處理組熒光明顯減弱，其中槐提取物和VC組合物組熒光最弱。結(jié)果表明，UVA 照射增加細(xì)胞內(nèi)ROS 的含量，槐提取物、VC及組合物均可降低細(xì)胞中ROS 含量，且組合物的ROS 清除效果最好。如圖1b 所示，UVA 處理后，槐提取物的ROS 抑制率為38.23%±9.23%；VC的ROS抑制率為27.20%±6.87%；組合物的ROS 抑制率為64.13%±4.08%，槐提取物、VC及其組合物顯著降低UVA 導(dǎo)致的ROS 生成（對(duì)照組vs.槐提取物，P＜0.01；對(duì)照組vs.VC，P＜0.01；對(duì)照組vs.組合物，P＜0.01）。結(jié)果表明，UVA 照射后，組合物組ROS 清除率極顯著高于單一組分處理組（組合物vs.槐提取物，P＜0.01；組合物vs.VC，P＜0.01）。熒光顯微法與酶標(biāo)儀檢測(cè)均顯示槐提取物和VC組合物對(duì)于ROS 的清除效果最好。多酚（包括蘆?。┖蚔C可顯著降低抗氧化蛋白（如硫氧還蛋白和戊二醛）在細(xì)胞中的表達(dá)，硫氧還蛋白還原酶是一種在氧化應(yīng)激下恢復(fù)細(xì)胞中還原硫氧還蛋白水平的酶[9]。因此，槐提取物和VC可支持抗氧化系統(tǒng)?；被?槐米中含有豐富的蘆丁，蘆丁作為一類黃酮類物質(zhì)，通過(guò)增加抗氧化（如SOD、TrxR 和Prx1/2）和炎癥反應(yīng)（如IL-17F、PAK2和YWHAZ）相關(guān)蛋白總表達(dá)的增加發(fā)揮保護(hù)作用[19]。此外，蘆丁通過(guò)恢復(fù)照射后增加的p53、細(xì)胞色素c、細(xì)胞周期和凋亡調(diào)節(jié)蛋白2 的生理水平，部分防止紫外線誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[19]。VC可以抑制紫外輻照誘導(dǎo)的表皮角質(zhì)形成細(xì)胞中SOD、CAT、GST 和GSH-Px活性的降低，從而維持細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)[20-21]。一項(xiàng)關(guān)于蘆丁和VC聯(lián)用對(duì)紫外誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的HaCaT 細(xì)胞保護(hù)作用的研究表明蘆丁與VC組合物導(dǎo)致UVB 照射的HaCaT 細(xì)胞中超氧陰離子的生成減少約60%，優(yōu)于蘆丁和VC的單獨(dú)作用[22]。本研究表明，槐提取物和VC對(duì)UVA 紫外輻射導(dǎo)致的細(xì)胞氧化損傷也具有保護(hù)作用，二者單獨(dú)使用可減少細(xì)胞ROS 及mtROS 的生成，對(duì)紫外輻照導(dǎo)致的氧化損傷起到保護(hù)作用。此外，本研究將槐提取物與VC進(jìn)行特定比例配比，探究出一種對(duì)于對(duì)紫外線輻射導(dǎo)致的細(xì)胞氧化損傷具有更強(qiáng)保護(hù)作用的復(fù)合物。

圖1 槐提取物、維生素C 及其組合物對(duì)UVA 照射HaCaT 細(xì)胞ROS 含量的影響（n=4）Fig.1 Effects of Sophora japonica L.,vitamin C and combination on ROS generation in UVA irradiated HaCaT cells (n=4)

2.2 槐提取物和維生素C 組合物對(duì)HaCaT 細(xì)胞mtROS 的影響

如圖2 所示，紅色熒光表示線粒體內(nèi)超氧陰離子含量，對(duì)照組幾乎無(wú)熒光，UVA 組的熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，槐提取物、VC及組合物處理后熒光強(qiáng)度顯著減弱，其中槐提取物和VC組合物處理組的熒光強(qiáng)度弱于單一物料處理組。UVA 照射后，HaCaT 細(xì)胞mtROS 含量增加，分別給予槐提取物、VC及其組合物處理后mtROS 抑制率分別為50.29%±4.92%、38.81%±8.66%、84.74%±3.68%，均可一定程度上減少線粒體ROS 的生成，其中槐提取物和VC組合物處理組效果最佳（槐提取物+VCvs.槐提取物，P＜0.01；槐提取物+VCvs.VC，P＜0.01）。線粒體膜是細(xì)胞內(nèi)ROS 的重要來(lái)源[23]。研究表明，VC對(duì)線粒體具有多種有益作用，包括直接清除ROS 以及基于分散在基質(zhì)和膜中的其他線粒體抗氧化劑的再循環(huán)的關(guān)鍵作用[23]。VC對(duì)線粒體的復(fù)雜調(diào)節(jié)可能有助于多功能的抗氧化反應(yīng)，從而為維生素提供核心作用，以充分控制與線粒體ROS 產(chǎn)生增加相關(guān)的線粒體功能障礙[24]。本研究也表明，槐提取物、VC及其組合物可抑制mtROS 的生成，且組合物具有一定的加成效果。

圖2 槐提取物、維生素C 及其組合物對(duì)UVA 照射HaCaT 細(xì)胞線粒體ROS 含量的影響（n=3）Fig.2 Effects of Sophora japonica L.,vitamin C and combination on mitochondrial ROS generation in UVA-irradiated HaCaT cells (n=3)

2.3 槐提取物和維生素C 組合物對(duì)HaCaT 細(xì)胞內(nèi)CPDs 水平的影響

如圖3a 所示，UVB 照射后細(xì)胞中熒光強(qiáng)度明顯增加，說(shuō)明UVB 導(dǎo)致細(xì)胞中的CPDs 水平上升。與UVB 照射組相比，槐提取物、VC及其組合物處理后CPDs 的水平顯著降低。對(duì)照組、模型組（UVB照射組）、槐提取物組、VC組及組合組的CPDs 的熒光強(qiáng)度分別為：6.95±0.80、23.22±1.23、13.10±1.21、15.75±0.44、9.17±0.47。與對(duì)照組比較，UVB 組細(xì)胞中CPDs 含量顯著升高（P＜0.01），說(shuō)明UVB 損傷模型造模成功；與模型組比較槐提取物組、VC組和組合組CPDs 含量均極顯著下降（P＜0.01）；其中，槐提取物和維生素C 組合組效果顯著優(yōu)于單一組分處理組（P＜0.05）。以上結(jié)果表明，槐提取物、VC及其組合組均可降低UVB 照射導(dǎo)致的細(xì)胞中高水平的CPDs，其中組合物對(duì)DNA 損傷的保護(hù)作用最強(qiáng)。

圖3 槐提取物、VC 及組合物對(duì)UVB 照射HaCaT 細(xì)胞CPDs 含量的影響（n=3）Fig.3 Effects of Sophora japonica L.,vitamin C and combination on CPDs content in UVB-irradiated HaCaT cells (n=3)

皮膚UVR 暴露導(dǎo)致DNA 損傷。CPDs 是UVR誘導(dǎo)DNA 損傷的代表產(chǎn)物，被認(rèn)為是啟動(dòng)光致癌的分子觸發(fā)器CPDs 的生成主要與UVB 有關(guān)，且主要生成于表皮層的細(xì)胞中[25-26]。核酸切除修復(fù)（NER）是紫外線誘導(dǎo)的DNA 損傷的主要修復(fù)途徑，細(xì)胞著色性干皮病蛋白A（XPA）在NER 中其中不可或缺的作用[27-28]。研究表明VC可以上調(diào)細(xì)胞中sirtuin1（SirT1）蛋白的表達(dá)，而SirT1 通過(guò)與XPA 結(jié)合，將XPA 維持在低乙?；癄顟B(tài)，下調(diào)細(xì)胞中紫外線誘導(dǎo)的CPDs 的表達(dá)，在紫外線的NER 途徑中起到積極作用[29]。蘋(píng)果提取物顯著降低導(dǎo)致紫外線照射體外皮膚外植體和3D 組織工程皮膚細(xì)胞中CPDs 的形成，這種保護(hù)作用可能與蘋(píng)果提取物中的蘆丁相關(guān)[30]。研究表明蘆丁和VC聯(lián)用有增強(qiáng)皮膚細(xì)胞的抗UVB 損傷的作用[9]。因此，兩者聯(lián)用對(duì)UVB 導(dǎo)致的DNA 損傷可能也有一定的加成效果。本研究也發(fā)現(xiàn)，UVB 照射則使細(xì)胞中的CPDs 含量顯著增加。UVB 照射后給予槐提取物、VC及其組合物，可減少HaCaT 細(xì)胞中CPDs 的生成，說(shuō)明槐提取物、維生素C 及其組合物可促進(jìn)UVB 誘導(dǎo)的DNA 損傷修復(fù)，且組合物具有加成作用。

2.4 槐提取物和維生素C 組合物對(duì)HaCaT 細(xì)胞內(nèi)IL-6 水平的影響

UV 作用于HaCaT 細(xì)胞，可激活轉(zhuǎn)錄因子NF-κB，促進(jìn)多種炎癥因子如IL-1、IL-6、IL-8 等的表達(dá)[31]。其中IL-6 是炎癥反應(yīng)過(guò)程中的促發(fā)劑，可促進(jìn)T 細(xì)胞增殖與分化，刺激B 細(xì)胞分化產(chǎn)生抗體，參與機(jī)體的免疫應(yīng)答[32]。如圖4 所示，與對(duì)照組比較，UVA照射組細(xì)胞內(nèi)IL-6 含量極顯著升高（P＜0.01）；與UVA組比較，槐提取物處理組及組合物處理組細(xì)胞內(nèi)IL-6 含量顯著下降（P＜0.05），槐提取物處理組IL-6 水平下降最低（P＜0.01），其次組合物處理組（P＜0.05）。因此，組合物處理組在UVA 誘導(dǎo)的角質(zhì)形成氧化應(yīng)激模型中雖具有抗炎作用，但效果并不優(yōu)于單用槐提取物處理組抗炎作用。

圖4 槐提取物、維生素C 及其組合物對(duì)UVA 照射HaCaT 細(xì)胞IL-6 水平的影響（n=3）Fig.4 Effects of Sophora japonica L.,vitamin C and combination on IL-6 expression in UVA-irradiated HaCaT cells (n=3)

在生物相關(guān)的相互作用機(jī)制中，植物提取物聯(lián)合使用可通過(guò)多靶點(diǎn)效應(yīng)發(fā)揮互補(bǔ)增效的作用，包括介導(dǎo)不同信號(hào)通路或同一通路的不同下游環(huán)節(jié)。本研究發(fā)現(xiàn)本研究發(fā)現(xiàn)槐提取物和VC均具有抗氧化活性和抗炎作用，VC對(duì)抑制ROS、mtROS 的生成方面有優(yōu)于槐提取物的趨勢(shì)，其抗氧化活性更強(qiáng)，而槐提取物的抗炎作用強(qiáng)于VC。氧化應(yīng)激與炎癥反應(yīng)間存在的錯(cuò)綜復(fù)雜的調(diào)控通路，二者往往相互影響形成正反饋循環(huán)[33-34]。本文的研究結(jié)果表明，VC和槐提取物組合物抗氧化活性有明顯提高，推測(cè)槐提取物和VC分別主要通過(guò)拮抗氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)發(fā)揮互補(bǔ)增效作用。然而，在抗炎方面本研究表明，VC有抗炎趨勢(shì)，槐提取物有較好抗炎效果，VC和槐提取物聯(lián)用后雖仍具有較好的抗炎作用，但與槐提取物相比，效果不突出。關(guān)于VC和槐提取物聯(lián)用后抗氧化效果增強(qiáng)的機(jī)制需要進(jìn)一步進(jìn)行驗(yàn)證。

3 結(jié)論

本文通過(guò)分析槐提取物、VC及其組合物對(duì)紫外照射處理的HaCaT 細(xì)胞的抗氧化和細(xì)胞炎癥因子分泌的影響。結(jié)果表明，槐提取物、VC及其組合物具有抑制由UVA 誘導(dǎo)產(chǎn)生的ROS 生成的作用，對(duì)細(xì)胞ROS 抑制率分別為38.23%±9.23%、27.20%±6.87%及64.13%±4.08%，對(duì)mtROS 抑制率分別為50.29%±4.92%、38.81%±8.66%及84.74%±3.68%。組合物對(duì)于ROS 的抑制作用優(yōu)于單一物料處理?；碧崛∥铩C及其組合物顯著降低由UVB 誘導(dǎo)產(chǎn)生的CPDs 的含量，其中組合物效果最佳。此外，槐提取物及槐提取物和VC組合物顯著減低炎癥因子IL-6 的分泌。該研究可為槐提取物及VC組合物的營(yíng)養(yǎng)健康產(chǎn)品開(kāi)發(fā)和應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)支持。而未來(lái)的研究將聚焦在槐提取物和VC聯(lián)用后抗氧化效果增強(qiáng)的機(jī)制進(jìn)行深入研究與探討。