王麗，邱心悅，孟春，劉光輝

糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy，DR）是糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）常見的微血管并發(fā)癥，我國作為全球DM 患者人數(shù)最多的國家，DR 患病率逐年增加，致盲率也在逐年升高，給社會(huì)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[1]。DR 根據(jù)病程分為非增殖期和增殖期，增殖性DR 是患者出現(xiàn)視力損害和失明的主要原因。DR 一旦進(jìn)入增殖期則不可逆轉(zhuǎn)，因此，對(duì)DR 進(jìn)行積極有效的早期干預(yù)是防治DR 的重要策略。中醫(yī)藥在DR 的早期防治中扮演了重要的角色[2]。本團(tuán)隊(duì)的前期臨床研究[3-5]發(fā)現(xiàn)，益景湯治療早期DR 具有較好的療效，能夠在一定程度上改善患者視網(wǎng)膜微循環(huán)、減輕黃斑水腫、調(diào)控血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的水平，基礎(chǔ)研究[6-8]發(fā)現(xiàn)，益景湯能夠抑制DM 大鼠視網(wǎng)膜周細(xì)胞的凋亡，緩解視網(wǎng)膜毛細(xì)血管床的減少，改善視網(wǎng)膜血供，減輕視網(wǎng)膜滲漏。近年來，多項(xiàng)研究[9-12]表明，微小RNA（micro RNA，miRNA）在DR 發(fā)生發(fā)展及治療方面發(fā)揮重要作用。為進(jìn)一步探討益景湯干預(yù)早期DR 的分子機(jī)制，本研究擬通過小RNA 測序篩選出可能參與益景湯干預(yù)早期DR 發(fā)生發(fā)展的miRNA，為中醫(yī)藥防治早期DR提供新的方法和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

30 只SPF 級(jí)健康雄性SD 大鼠，2 月齡，體質(zhì)量（200±20）g，購買自福州諾頓斯生物科技有限公司，許可證號(hào)為SYXK（閩）2020-0002，飼養(yǎng)于福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，自由進(jìn)食，室溫20～22 ℃，晝夜循環(huán)照明。本研究實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)所用條件符合國家科學(xué)技術(shù)委員會(huì)的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》相關(guān)規(guī)定。

1.2 藥品、試劑與儀器

鏈脲佐菌素（美國Sigma 公司，V900890-100MG），TruSeq 小RNA 樣本制備試劑盒（美國Illumina公司，RS-200-0012），mirVana?miRNA 分離試劑盒（美國Ambion 公司，AM1561），SuperScript Ⅱ逆轉(zhuǎn)錄酶、Qubit RNA 定量檢測試劑盒（美國Invitrogen 公司，18064-014、Q10211），RNA 分析試劑盒、高靈敏度DNA 芯片（美國Agilent 公司，5067-1511、5067-4626），Qubit DNA 高靈敏度熒光定量試劑盒（美國Invitrogen 公司，Q32854），通用型SYBR快速定量試劑盒、DNA 文庫定量試劑盒（美國KAPA Biosystem 公司，KK4602、KK4808）。2100 生物分析儀（美國Agilent 公司，J06-02），Qubit 2.0 熒光計(jì)（美國Invitrogen公司，Q32871），紫外透色儀（美國Clare Chemical Research 公司，D195M），聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）熱循環(huán)儀（美國MJ公司，B01-01）。

益景湯由生黃芪、山藥、茯苓、生地黃、玄參各15 g，赤芍10 g，蒼術(shù)、當(dāng)歸各9 g，川芎6 g，桃仁、紅花各5 g 組成，中藥材由福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院提供。每次取益景湯1 劑，用10 倍體積純凈水浸泡30 min 后煮1.5 h，靜置冷卻過濾，加入圓底燒瓶，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，制成1 g/mL 益景湯藥液，滅菌玻璃瓶灌裝，密封避光4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 DM模型的建立

20 只動(dòng)物禁食12 h 后，將鏈脲佐菌素使用0.1 mmol/L、pH 為4.5 的無菌檸檬酸緩沖液溶解，配置成1%溶液后，以70 mg/kg 劑量進(jìn)行一次性腹腔注射。72 h 后大鼠尾靜脈取血檢測血糖水平，血糖濃度≥16.7 mol/L即視為DM模型制備成功。

1.4 分組與給藥

將造模成功的20 只大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組（model group，MG）和益景湯組（YijingDecoction group，YJG），另將常規(guī)喂養(yǎng)的大鼠設(shè)為對(duì)照組（control group，CG），每組10 只。根據(jù)人與大鼠的臨床等效劑量，YJG 組大鼠每日灌胃益景湯12.50 g/kg，并于取材前1 h給藥1次；CG組、MG組大鼠灌胃等體積0.9%氯化鈉注射液，處死前1 h 灌胃1次，3組均干預(yù)16周。

1.5 取材

3 組大鼠干預(yù)16 周后，記錄體重，麻醉處死，立即摘除雙側(cè)眼球，在冰水中剝離視網(wǎng)膜后，置于-80 ℃冰箱中保存，以備小RNA及PCR檢測使用。

1.6 總RNA提取與小RNA通用制備

視網(wǎng)膜組織研磨并分離核酸蛋白后提取RNA，采用紫外分光光度計(jì)測定RNA 純度，通過瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA 的質(zhì)量，生物分析儀檢測RNA 完整值（RNA integrity number，RIN）。確定總RNA 合格后，對(duì)其進(jìn)行定量，利用6%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離并回收純化22～30 nt范圍內(nèi)的小RNA。

1.7 小RNA文庫構(gòu)建和測序

構(gòu)建小RNA 文庫，具體過程是分別在小RNA加上3'接頭和5'接頭，利用與3'接頭反向互補(bǔ)的引物反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增出cDNA，最后進(jìn)行15 個(gè)循環(huán)的PCR擴(kuò)增獲得小RNA 文庫，采用6%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離并回收純化。然后采用高靈敏度DNA 片段生物分析儀對(duì)文庫進(jìn)行質(zhì)控，以保證PCR 切膠產(chǎn)物片段大小符合后續(xù)測序要求。最后采用高通量測序技術(shù)對(duì)該文庫進(jìn)行測序。

1.8 miRNA分析及靶基因預(yù)測

將測序獲得的序列與miRBase v22 數(shù)據(jù)庫中大鼠已知的miRNA 進(jìn)行對(duì)比，采用分析軟件Bowtie 1.1.1、miRDeep2、R 語言對(duì)已知miRNA 及預(yù)測miRNA 進(jìn)行表達(dá)量標(biāo)準(zhǔn)化及相關(guān)性分析，采用R 包（EdgeR、Limma）對(duì)各組樣本進(jìn)行miRNA 差異表達(dá)分析。然后利用Ensemble 數(shù)據(jù)庫、miRanda 靶基因預(yù)測軟件對(duì)差異miRNA 進(jìn)行靶基因預(yù)測，并對(duì)靶基因進(jìn)行基因本體論（gene ontology，GO）、Pathway 分析，以判定差異miRNA 主要影響的生物學(xué)功能和通路。

1.9 PCR法檢測差異miRNA的表達(dá)

根據(jù)小RNA 測序初篩結(jié)果，進(jìn)一步選擇差異倍數(shù)較大的miRNA 進(jìn)行PCR驗(yàn)證，所有引物序列如表所示（表1）。取適量RNA 在逆轉(zhuǎn)錄體系中合成cDNA，以此為模板加入靶基因上下游引物，進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。使用Sequence Detector System 軟件進(jìn)行分析擴(kuò)增反應(yīng)所得的數(shù)據(jù)，以U6 為內(nèi)參基因，釆用Ct法確定各miRNA的相對(duì)表達(dá)量。

表1 PCR實(shí)驗(yàn)相關(guān)引物信息

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用HiSeq 2000 測序統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，篩選樣本間差異表達(dá)的miRNA，采用顯著性P值和差異倍數(shù)（fold-change，F(xiàn)C）作為差異表達(dá)的判斷標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)P＜0.05，且FC≥Log2FC≥1，判斷為上調(diào)miRNA；當(dāng)P＜0.05，且FC≤Log0.5FC≤-1，判斷為下調(diào)miRNA。FC 值差異倍數(shù)越大，說明miRNA 在2 個(gè)分組樣本中的表達(dá)差異越大。PCR 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中符合正態(tài)分布且方差齊的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用方差分析（ANOVA）進(jìn)行多組變量間的相互比較，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。當(dāng)P＜0.05時(shí)，認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 樣本質(zhì)控

視網(wǎng)膜總RNA 在260 nm/280 nm 處吸光度在1.9～2.1 A 之間；瓊脂糖凝膠電泳檢測28 S 和18 S 處條帶明亮、清晰、銳利，28 S 和18 S 處的RNA 比值≥1.5∶1；Qubit核酸分析試劑盒定量總RNA＞2 μg。

2.2 3組miRNA片段長度分析

樣本測序得到的原始圖像經(jīng)過轉(zhuǎn)化得到數(shù)據(jù)，去除測序質(zhì)量較低、有5'接頭污染、沒有3'接頭序列、包括poly A 和小于18 nt 的小片段等，得到干凈序列統(tǒng)計(jì)小RNA 片段的長度分布圖（圖1）。3 組大部分的小RNA長度集中在21～24 nt，峰值出現(xiàn)在22 nt，符合miRNA的長度特征。

圖1 3組小RNA片段長度分布

2.3 3組已知miRNA差異表達(dá)分析

篩選出644 個(gè)已知miRNA，其中差異miRNA 共59 個(gè)。干預(yù)16 周后，與CG 組比較，MG 組35 個(gè)miRNA 上調(diào)、6 個(gè)miRNA 下調(diào)，YJG 組20 個(gè)miRNA上調(diào)、4 個(gè)miRNA 下調(diào)；與MG 組比較，YJG 組6 個(gè)miRNA 上調(diào)、13 個(gè)miRNA 下調(diào)；其中，1 個(gè)上調(diào)miRNA（miR-673-3p），11 個(gè)下調(diào)miRNA（miR-1-3p、miR-130a-5p、miR-133a-3p、miR-133b-3p、miR-1b、miR-206-3p、miR-214-3p、miR-23b-5p、miR-31a-3p、miR-451-5p、miR-466b-3p）為益景湯干預(yù)DM 大鼠后，發(fā)生相反變化趨勢的差異性miRNA，即3 組共同差異性表達(dá)miRNA（圖2、表2-表4），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

表2 YJG組和CG組差異表達(dá)miRNA

表3 YJG組和MG組差異表達(dá)miRNA

表4 3組共同差異性表達(dá)miRNA

2.4 3組新發(fā)現(xiàn)miRNA差異表達(dá)分析

3 組篩選出242 個(gè)新發(fā)現(xiàn)的miRNA，其中差異miRNA 共105 個(gè)（圖3）。與CG 組比較，MG 組50 個(gè)miRNA 上調(diào)，15 個(gè)miRNA 下調(diào)；與CG 組比較，YJG組55 個(gè)miRNA 上調(diào)，20 個(gè)miRNA 下調(diào)；與MG 組比較，YJG 組16個(gè)miRNA 上調(diào)，6個(gè)miRNA 下調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

圖3 3組新發(fā)現(xiàn)miRNA差異表達(dá)散點(diǎn)圖

2.5 差異表達(dá)miRNA的靶基因

采用miRanda 預(yù)測軟件比對(duì)Ensemble 數(shù)據(jù)庫，結(jié)合位點(diǎn)自由能閾值≥140，結(jié)合位點(diǎn)分值閾值≤-20 kcal/mol，取預(yù)測結(jié)果前10 名作為靶基因預(yù)測結(jié)果（表5）。

表5 益景湯干預(yù)DM大鼠前后差異表達(dá)miRNA相關(guān)靶基因

2.6 靶基因的GO分析結(jié)果

差異基因主要涉及生物學(xué)過程方面的多種蛋白的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)，其次是分子功能方面核苷酸三磷酸酶、GTP 酶等活性調(diào)節(jié)，還與多種細(xì)胞成分有關(guān)（圖4）。

圖4 靶基因的GO分析

2.7 靶基因的Pathway分析結(jié)果

利用KEEG 數(shù)據(jù)庫對(duì)靶基因進(jìn)行Pathway分析，發(fā)現(xiàn)靶基因關(guān)聯(lián)的通路主要是腫瘤相關(guān)的信號(hào)通路和糖脂代謝相關(guān)通路（圖5）。

圖5 靶基因的Pathway分析

2.8 PCR驗(yàn)證

3 組間大鼠視網(wǎng)膜12 個(gè)差異性miRNA 的表達(dá)比較（表6、表7），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（FmiR-673-3p=22.938，P=0.002；FmiR-1-3p=42.288，P=0.000；FmiR-130a-5p=9.088，P=0.015；FmiR-133a-3p=15.912，P=0.004；FmiR-133b-3p=14.296，P=0.005；FmiR-1b=62.253，P=0.000；FmiR-206-3p=8.999，P=0.016；FmiR-214-3p=10.757，P=0.010；FmiR-23b-5p=112.387，P=0.000；FmiR-31a-3p=16.475，P=0.004；FmiR-451-5p=5.817，P=0.039；FmiR-466b-3p=122.070，P=0.000）。

表6 益景湯對(duì)DM大鼠視網(wǎng)膜部分miRNA表達(dá)的影響（±s，n=3）

表6 益景湯對(duì)DM大鼠視網(wǎng)膜部分miRNA表達(dá)的影響（±s，n=3）

注：* 與CG組比較，P＜0.05；# 與MG組比較，P＜0.05；DM 糖尿??；CG 對(duì)照組；MG 模型組；YJG 益景湯組。

組別CG組MG組YJG組F值P值miR-673-3p 1.33±0.35 0.21±0.05*0.90±0.03#22.938 0.002 miR-1-3p 1.33±0.09 4.89±1.04*0.62±0.16#42.288 0.000 miR-130a-5p 0.08±0.02 3.54±1.92*0.29±0.24#9.088 0.015 miR-133a-3p 1.00±1.31 7.82±2.13*3.48±0.71#15.912 0.004 miR-133b-3p 0.33±0.08 2.79±1.02*0.65±0.31#14.296 0.005 miR-1b 0.54±0.11 4.57±0.65*1.54±0.42#62.253 0.000

表7 益景湯對(duì)DM大鼠視網(wǎng)膜部分miRNA表達(dá)的影響（±s，n=3）

表7 益景湯對(duì)DM大鼠視網(wǎng)膜部分miRNA表達(dá)的影響（±s，n=3）

注：* 與CG組比較，P＜0.05；# 與MG組比較，P＜0.05；DM 糖尿?。籆G 對(duì)照組；MG 模型組；YJG 益景湯組。

組別CG組MG組YJG組F值P值miR-206-3p 1.00±0.26 2.63±0.58*1.24±0.61#8.999 0.016 miR-214-3p 1.00±0.08 5.81±2.35*1.31±0.72#10.757 0.010 miR-23b-5p 0.69±0.19 3.70±0.56*5.75±0.41#112.387 0.000 miR-31a-3p 1.19±0.64 7.98±1.71*3.21±1.82#16.475 0.004 miR-451-5p 1.00±0.97 3.21±0.78*1.36±0.80#5.817 0.039 miR-466b-3p 0.53±0.20 4.43±0.58*0.50±0.06#122.070 0.000

兩兩比較，MG 組大鼠視網(wǎng)膜miR-673-3p 表達(dá)低于CG 組（t=6.708，P=0.001），余11 個(gè)miRNA 表達(dá)均高于CG 組（tmiR-1-3p=7.162，P=0.000；tmiR-130a-5p=3.804，P=0.009；tmiR-133a-3p=5.573，P=0.001；tmiR-133b-3p=4.910，P=0.003；tmiR-1b=10.818，P=0.000；tmiR-206-3p=3.929，P=0.008；tmiR-214-3p=4.143，P=0.006；tmiR-23b-5p=8.867，P=0.000；tmiR-31a-3p=5.590，P=0.001；tmiR-451-5p=3.175，P=0.019；tmiR-466b-3p=13.476，P=0.000），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。YJG 組大鼠視網(wǎng)膜miR-673-3p、miR-23b-5p 表達(dá)高于MG 組（tmiR-673-3p=4.164，P=0.006；tmiR-23b-5p=6.036，P=0.001），余10 個(gè)miRNA 表達(dá)均低于MG 組（tmiR-1-3p=8.607，P=0.000；tmiR-130a-5p=3.569，P=0.012；tmiR-133a-3p=3.545，P=0.012；tmiR-133b-3p=4.288，P=0.005；tmiR-1b=7.285，P=0.001；tmiR-206-3p=3.350，P=0.015；tmiR-214-3p=3.878，P=0.008；tmiR-31a-3p=3.924，P=0.008；tmiR-451-5p=2.667，P=0.037；tmiR-466b-3p=13.586，P=0.000），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。除miR-23b-5p 外，其余11 個(gè)miRNA 與上述RNA 檢測結(jié)果一致。

3 討論

miRNA 在蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)上具有重要作用，通過與靶基因的mRNA 3'非編碼區(qū)的相互作用，抑制mRNA 翻譯或誘導(dǎo)其降解，從轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，從而參與細(xì)胞的發(fā)育、增殖、分化、死亡以及糖脂代謝等重要進(jìn)程[13]。研究[14-17]表明，miRNA通過各種不同的機(jī)制，參與DR 的發(fā)生、發(fā)展，在DR的早期診斷和后續(xù)治療中具有潛在價(jià)值。

DR早期病理改變?cè)缭诖笫驞M造模后3個(gè)月即可出現(xiàn)[18-20]，此階段視網(wǎng)膜組織中被發(fā)現(xiàn)80 種miRNA 表達(dá)顯著升高，6種表達(dá)顯著下降；視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞中有11 種miRNA 表達(dá)升高，104 種表達(dá)降低[21]。其中miR-21、miR-146、miR-155 和miR-132被揭示與DM 大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞中核因子κB（nuclear factor κB，NF-κB）炎癥通路相關(guān)；miR-17-5p、miR-18a、miR-20a，miR-21、miR-31 和miR-155則被發(fā)現(xiàn)和VEGF相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，DM 大鼠成模16 周后，視網(wǎng)膜組織中35 種miRNA 上調(diào)，6 種miRNA 下調(diào)，其中miR-31、miR-199a、miR-200a、miR-200b、miR-205、miR-223 上調(diào)以及miR-20b 下調(diào)趨勢與上述研究一致。

在增殖性DR 中，miR-200a、miR-200b 表達(dá)降低，與細(xì)胞的增殖、凋亡和調(diào)控VEGF 表達(dá)水平相關(guān)[17,20-21]。本研究發(fā)現(xiàn)，在早期DR 大鼠視網(wǎng)膜組織中miR-200a、miR-200b 表達(dá)水平升高，提示DR 早期和中晚期的miRNA 表達(dá)情況有所不同，可能與視網(wǎng)膜缺血、缺氧程度及病理改變程度相關(guān)。

miR-1 和miR-133 在DM 患者血清水平明顯升高，胰島素樣生長因子1（insulin-like growth factor 1，IGF-1）是miR-1 和miR-133 的有效靶點(diǎn)之一，2 種miRNA 負(fù)調(diào)控其表達(dá)，而IGF-1 水平與胰島素抵抗及糖尿病進(jìn)展呈負(fù)相關(guān)[22]。miR-133b 可下調(diào)Rho相關(guān)蛋白激酶信號(hào)通路來抑制視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增殖，并促進(jìn)其凋亡[23]；miR-23b 在高糖培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞模型中顯著升高，抑制沉默信息調(diào)節(jié)因子1 轉(zhuǎn)錄，使NF-κB 活化增加，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，干擾miR-23b 表達(dá)后，NF-κB 乙?；@著降低，細(xì)胞凋亡明顯減少[24]。本研究亦發(fā)現(xiàn)，miR-133b、miR-23b 在DM 大鼠視網(wǎng)膜中明顯升高，益景湯干預(yù)后其表達(dá)降低，提示miR-133b、miR-23b 可能是益景湯保護(hù)視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞，干預(yù)早期DR 的治療靶點(diǎn)。前期細(xì)胞實(shí)驗(yàn)[6]發(fā)現(xiàn)，益景湯能減少高糖環(huán)境中大鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞凋亡、人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡[25]對(duì)此亦有所提示。

miR-214、miR-451 在缺血狀態(tài)下的視網(wǎng)膜細(xì)胞中顯著升高，miR-31 水平下降，眼內(nèi)注射miR-31能夠減少視網(wǎng)膜新生血管形成[26-27]。但KAUR P等[28]的研究表明，miR-31 在DM 患者視網(wǎng)膜細(xì)胞中表達(dá)水平上調(diào)，通過介導(dǎo)VEGF在DR中發(fā)揮不良作用；同時(shí)miR-31 水平與白細(xì)胞滾動(dòng)速度呈正相關(guān)，與促炎因子和黏附分子誘導(dǎo)的白細(xì)胞向血管壁聚集有關(guān)[29]。CAO Q 等[30]發(fā)現(xiàn)，miR-673 靶向抑制非受體型酪氨酸蛋白激酶2（Janus kinase 2，JAK2）表達(dá)調(diào)節(jié)輔助性T 細(xì)胞（T helper cell 17，Th17）分化，誘導(dǎo)胎盤生長因子分泌，促進(jìn)新生血管形成，上調(diào)miR-673可抑制新生血管形成。本研究發(fā)現(xiàn)，DM大鼠視網(wǎng)膜組織中miR-31a 表達(dá)升高，miR-673 表達(dá)降低，益景湯干預(yù)后miR-31a表達(dá)降低，miR-673表達(dá)升高，和上述研究結(jié)果一致。團(tuán)隊(duì)前期臨床研究和動(dòng)物研究[3-4]都發(fā)現(xiàn)益景湯能改善DR 患者視網(wǎng)膜微循環(huán)，調(diào)控VEGF 的水平；緩解DR 大鼠視網(wǎng)膜毛細(xì)血管床的減少，改善視網(wǎng)膜血供，減輕視網(wǎng)膜滲漏[7,31-32]。因此，通過調(diào)節(jié)miR-31a、miR-673 表達(dá)，改善視網(wǎng)膜微循環(huán)，抑制新生血管形成，可能是益景湯干預(yù)早期DR微血管損害的分子機(jī)制之一。

綜上所述，益景湯干預(yù)大鼠早期DR 微血管損害，miR-673、miR-1、miR-133、miR-214、miR-23b、miR-31a、miR-451 等可能是其作用靶點(diǎn)，其機(jī)制與緩解視網(wǎng)膜組織缺血，調(diào)節(jié)視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞異常增殖和凋亡，抑制視網(wǎng)膜新生血管形成以及抗炎等過程有關(guān)，但更深入機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。