周佩林，李麗，葉仕根，張靜，崔艷紅，單云盟，張濤，張勁松*

1.大連海洋大學(xué)水生動物醫(yī)院，遼寧大連 116023；

2.葫蘆島市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，遼寧葫蘆島 125000；

3.北京誠致中和生物科技有限責(zé)任公司，北京 100010

大菱鲆（Scophthalmus maximus），屬 蝶形目（Pleuronectiformes）、鲆科（Bothidae），是1 種冷水性深海底層魚類[1]，于1992 年引入我國，是中國比較重要的經(jīng)濟(jì)魚類養(yǎng)殖品種之一，現(xiàn)已成為我國北方工廠化養(yǎng)殖的重要經(jīng)濟(jì)海水魚類[2]。據(jù)2023 年漁業(yè)統(tǒng)計年鑒統(tǒng)計，我國大菱鲆產(chǎn)量為100 694 t，給養(yǎng)殖戶帶來巨大的經(jīng)濟(jì)收益。但隨著養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大、集約化程度不斷提高，大菱鲆養(yǎng)殖環(huán)境逐漸惡化、病害頻發(fā)，給大菱鲆養(yǎng)殖業(yè)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[3]。主要病毒性疾病有呼腸弧病毒病、虹彩病毒病[4]，細(xì)菌性疾病有弧菌病、癤瘡病[5]。抗生素類藥物的使用有效解決了養(yǎng)殖過程中的病害問題，但長期使用會導(dǎo)致病原菌耐藥性、藥物殘留以及水環(huán)境污染等問題，嚴(yán)重制約了大菱鲆養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展[6]。腸道是魚類非常重要的物理屏障，可以抵抗病原微生物對魚的影響[7]。因此，如何從改善腸道組織結(jié)構(gòu)來提高魚體快速健康生長，對水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展具有重要意義。

艾可特腸佳是西班牙百衛(wèi)公司研發(fā)的功能性植物源性添加劑，其主要成分包括鞣花酸、菊粉、大蒜素等，是1種很好的腸道絨毛促進(jìn)劑，可促進(jìn)腸道絨毛更新再生，修復(fù)由霉菌毒素、抗生素等引起的腸黏膜損傷，提高腸道對飼料的消化能力和對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力，維持腸道菌群平衡，減少致病菌營養(yǎng)競爭，降低發(fā)病率等特點(diǎn)[8]。本試驗以大菱鲆為研究對象，探討大菱鲆商業(yè)飼料中添加劑量為0.1%的艾可特腸佳粉劑對其生長性能及腸道健康的影響，為艾可特腸佳粉劑在大菱鲆和其他魚類養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗動物

試驗所用大菱鲆均為1個月前從山東威海購買的小苗，分別在葫蘆島A、B 2個養(yǎng)殖場開展21周的養(yǎng)殖試驗。A 養(yǎng)殖場所用魚苗平均初始體長為（10±1）cm，體質(zhì)量為（11±0.5）g；B養(yǎng)殖場所用魚苗初始體長為（12±1）cm，體質(zhì)量為（40±5）g。

1.2 試驗飼料

飼料為從山東正合飼料有限公司購置的商業(yè)飼料，試驗組飼料添加艾可特腸佳粉劑為0.1%，對照組添加量為0，添加完成后混勻并充分?jǐn)嚢?。飼料主要成分見?。

表1 飼料組成和營養(yǎng)成分含量

1.3 養(yǎng)殖管理

試驗采用自然光照，養(yǎng)殖用水體積為21 m3的水池，養(yǎng)殖用水為深井水，流水養(yǎng)殖，試驗中養(yǎng)殖水溫為15～18 ℃，鹽度25‰～30‰，溶解氧為7.5 mg/L。生長試驗開始時，停食24 h，選擇大小均勻、體格健壯且體表無病的大菱鲆幼魚，稱質(zhì)量后隨機(jī)分配在6 個水池內(nèi)（1 個試驗組，1 個對照組，每組3 個重復(fù)），每池（500±50）尾魚，每天的飼料投喂量按照大菱鲆體質(zhì)量的2.5%～3.0%投喂，投喂2 次（08:30、17:30），養(yǎng)殖周期為21 周。

1.4 生長指標(biāo)的測定

試驗結(jié)束前，對禁食24 h 后的大菱鲆進(jìn)行稱質(zhì)量，計算其平均體質(zhì)量及平均體長。主要檢測特定生長率(SGR，%)、增重率(WG，%)、肥滿度（CF，g/cm3），計算公式如下[9]：

式中：Wt為平均末質(zhì)量（g），W0為平均初質(zhì)量（g），t為試驗時間（d），W為體質(zhì)量，L為體長。

1.5 樣品收集及腸道組織切片測定

試驗結(jié)束后停食24 h，每組隨機(jī)取5 尾魚進(jìn)行解剖，分離出的后腸段用無菌生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干表面水分后置于甲醛固定液中固定24 h，室溫保存。固定好的腸道組織經(jīng)修剪、脫水、包埋、切片、染色、中性樹脂封片，最后制成鏡檢合格的樣片[10]，顯微鏡下觀察腸道組織結(jié)構(gòu)，結(jié)果以“腸道絨毛長度:肌層厚度”表示。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

圖像用ImageJ軟件進(jìn)行測量（測量腸道后腸的絨毛長度、肌層厚度），試驗數(shù)據(jù)用Excel 整理后采用Graphpad Prism 9.5 進(jìn)行t檢驗和顯著性分析，數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，以P＜0.05 為差異性顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 艾可特腸佳粉劑對大菱鲆生長性能的影響

由表2 可知，與對照組相比，在大菱鲆飼料中添加0.1%艾可特腸佳粉劑對大菱鲆的試驗?zāi)┵|(zhì)量、體長、特定生長率、增重率、肥滿度并無顯著影響。

表2 飼料中添加艾可特腸佳粉劑對大菱鲆生長性能的影響

2.2 艾可特腸佳粉劑對大菱鲆腸道組織的影響

由圖1 可知，與對照組相比，試驗組大菱鲆腸道絨毛間排列整齊，絨毛分枝增多。由圖2 可知，與對照組相比，添加0.1%艾可特腸佳粉劑的試驗組大菱鲆腸道絨毛長度極顯著增加65.8%，肌層厚度顯著增加44.7%，絨毛長度與肌層厚度比值顯著增加38.9%。

圖2 飼料中添加艾可特腸佳粉劑對大菱鲆腸道組織的影響

3 討論

3.1 艾可特腸佳粉劑對大菱鲆生長性能的影響

目前，大菱鲆養(yǎng)殖是我國主要魚類產(chǎn)業(yè)之一。集約化及工業(yè)化的養(yǎng)殖會污染水體，造成菌毒侵害魚體，魚類生活環(huán)境復(fù)雜，對大菱鲆生長性能造成不良影響，降低經(jīng)濟(jì)效益[11]?？股刈鳛榇偕L添加劑，具有促進(jìn)動物生長及增強(qiáng)抗病力的功能，但耐藥性以及殘留對人體有一定的危害。艾可特腸佳粉劑是1 種天然的植物生長促進(jìn)劑，被視為具有健康、綠色且安全的抗生素替代潛力產(chǎn)品。羅興等[12]研究結(jié)果表明，高脂飼料中添加含硫氨基酸對大菱鲆脂肪代謝具有調(diào)節(jié)作用，但在生長方面并無顯著影響；劉芳等[13]研究結(jié)果顯示，餌料中添加扇貝蒸煮液酶解產(chǎn)物對大菱鲆幼魚的肥滿度無顯著影響；馬季等[14]研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，植物原料替代飼料中魚粉及魚油對大菱鲆的增重率、特定生長率均無顯著性差異，這與本研究結(jié)果一致。本研究中，與對照組相比，試驗組大菱鲆的試驗?zāi)┵|(zhì)量和增重率均未達(dá)到顯著性水平，這可能主要與本試驗設(shè)計的目的側(cè)重評估艾可特腸佳粉劑對大菱鲆腸道絨毛長度與肌層厚度的影響有關(guān)，因此試驗設(shè)計中使用的粉劑并無額外過量添加，這與研究粉劑需求量的梯度試驗不同。對生長無影響很可能是因為基礎(chǔ)配方中的營養(yǎng)物質(zhì)含量已經(jīng)滿足了大菱鲆的需求，且餌料利用效率高低與艾可特腸佳粉劑添加量有關(guān)。另外，受魚的養(yǎng)殖密度與尾數(shù)的影響，前期試驗組與對照組放置的大菱鲆尾數(shù)不同，密度過大是導(dǎo)致各組生長性能差異不顯著的主要因素之一；加上后期進(jìn)行分苗，導(dǎo)致差距更小。

3.2 艾可特腸佳粉劑對大菱鲆腸道組織的影響

魚類腸道是營養(yǎng)物質(zhì)消化和吸收的主要場所，是從外界獲取物質(zhì)、能量的媒介，起著抵御病原菌的重要作用[15]。本試驗結(jié)果表明，添加0.1%腸佳粉劑對大菱鲆腸道絨毛及其腸壁厚度有明顯的保護(hù)作用。魚類腸道由黏膜層、黏膜下層、肌層和漿膜層4 個部分構(gòu)成[16]，黏膜層是腸道進(jìn)行營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收和腸道菌群黏附的主要場所[17]，腸道肌層可為腸道蠕動提供充足的動力，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收[18]，因此，通過觀察黏膜層和肌層的結(jié)構(gòu)變化可直觀地了解腸佳粉劑在腸道中發(fā)揮的作用。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼料中添加0.1%艾可特腸佳粉劑的腸道黏膜褶皺高度、肌層厚度顯著高于對照組。郝甜甜等[19]研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼料中添加糖萜素對大菱鲆幼魚的腸道絨毛長度、黏膜厚度有顯著的影響；崔廣鑫等[7]研究結(jié)果表明，在飼料中添加蠟樣芽孢桿菌可以增加大菱鲆幼魚腸黏膜皺襞高度、肌層厚度，顯著改善幼魚腸道組織結(jié)構(gòu)，這與本研究結(jié)果一致。添加不同劑量的艾可特腸佳粉劑對大菱鲆是否有影響，還需要進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

飼料中添加0.1%艾可特腸佳粉劑，可以顯著提高大菱鲆腸道黏膜褶皺高度、肌層厚度、腸壁完整程度，提高腸道健康水平。