魏文艷

(天水市動物衛(wèi)生技術(shù)工作站,甘肅 天水 741020)

虎紅平板凝集試驗是一種經(jīng)典的血清凝集試驗,靈敏度高、價格便宜、操作方便的優(yōu)點。常用于布病的檢測。虎紅平板凝集試驗的意義是輔助診斷布魯菌病,當(dāng)布魯菌感染動物之后,如果急性感染,虎紅平板凝集試驗可能出現(xiàn)陽性的表現(xiàn),陽性率可以達到80%～90%。如果是慢性感染,只有30%～60%會出現(xiàn)陽性,所以比較大的意義是篩查。

1 虎紅平板實驗檢測布病存在的問題

1.1 實驗結(jié)果受實驗操作者的主觀影響較大

虎紅平板雖然實驗步驟相比較于動物的其它實驗步驟是相對簡單的一個實驗,但對實驗者的操作的手法和主觀的判斷的能力要求比直觀能看出結(jié)果的實驗要高的多,如果操作者受經(jīng)驗的影響,對出現(xiàn)的假陽性和弱陽性不能夠準(zhǔn)確的作出判斷,那么可能會出現(xiàn)較大程度的誤判。同時這個實驗由于很大程度依賴于實驗者,那么由于主觀上對出現(xiàn)的某種結(jié)果有偏好或者偏見的,對同一份檢測血清兩個檢測者可能會出現(xiàn)完全不同的兩種結(jié)果也就不足為怪了。這樣虎紅平板實驗快速檢測的目的達到了,但結(jié)果的準(zhǔn)確性不能夠保證,這樣對大面積篩查布病帶來不利的影響。

1.2 實驗者存在感染的風(fēng)險

在傳統(tǒng)的虎紅平板實驗中,實驗用的板子是玻璃的,用玻璃的板子一來是可能重復(fù)的使用,節(jié)約實驗成本,二來是玻璃的板子便于實驗者觀察實驗的結(jié)果,受光線,溫度,濕度的影響較小,是理想的實驗器材。但是玻璃板子邊緣較鋒利,不注意會割破手套把手劃傷,布病實驗中有傷口感染的風(fēng)險是呈幾何數(shù)量增加的。還有在洗玻璃板子的過程中,由于玻璃上感染了陽性的血清,并且作過的板子必須清洗干凈,清洗不干凈會對下一板子的血清造成不必要的干擾,影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此在清洗的過程中沖洗的水流稍不注意會濺到清洗者的面部或者其它部位增加了實驗者的感染的風(fēng)險,一旦感染布病對人體的傷害是極大的。

1.3 實驗過程中不設(shè)立對照組

虎紅平板有有些操作者對陽性的判斷標(biāo)準(zhǔn)認為只有出現(xiàn)雪花狀的就是布病的陽性,其它的都可以判定為陰性。但是由于血清和試劑批次的不同,檢測結(jié)果存在微小的差異,不設(shè)立對照組憑經(jīng)驗來判斷,可能出現(xiàn)較多的假陽性,同時對弱陽性由于沒有對照主觀上判斷為正常,直接會影響整體篩查的結(jié)果。

2 改進的措施

2.1 提高實驗者的技能水平

虎紅平板實驗雖然過程比較簡單,但是操作過程中一些事項要注意才能更好的對陽性的篩選工作。其中注意的地方有必須將抗原和血清平衡至室溫,否則會降低實驗的敏感性、輕柔振搖虎紅抗原試劑瓶,使其均質(zhì),吸取等體積的抗原加至靠近血清樣品的白色背景的反應(yīng)板上、血清和抗原的混合直徑為2 cm的圓形或者橢圓形狀為好、一次混合的樣品數(shù)不能太多,導(dǎo)致前面的結(jié)果沒有觀察,樣品已經(jīng)干了。觀察時在自然光下觀察,排隊其它燈光對實驗結(jié)果的干擾。在平時的實驗中對一份血清做兩次,并對結(jié)果進行比對,只有不斷的學(xué)習(xí)中,才能最大可能的排除實驗者主觀原因?qū)Y(jié)果的影響。

2.2 對實驗器材進行升級

在以前做虎紅平板實驗中,由于受單位經(jīng)費的影響和沒有可以代替玻璃板的器材,所以一直用玻璃板做實驗。但是隨著單位對實驗室重視,逐年對實驗室的投入增加,經(jīng)費比較充裕,同時現(xiàn)在也出現(xiàn)了可以替代玻璃板的一次的玻璃紙,價格便宜的優(yōu)點,最主要的是不需要重復(fù)使用,這樣實驗者不再清洗有布病陽性血清的玻璃板,最大限度的保證了實驗者的身體健康。如果玻璃板清洗不干凈也會對實驗結(jié)果造成不必要的干擾,而一次性的玻璃紙避免了上述情況的出現(xiàn)。

2.3 在實驗的過程中設(shè)立陰陽性的對照組

在做實驗的時候,不管實驗結(jié)果在不做對照的情況下多么明顯的可以判斷出,但是如果實驗操作規(guī)程中要求設(shè)立實驗對照組,那么必須嚴(yán)格按照要求設(shè)立對照組。在虎紅平板的實驗中只有布病是強陽性的情況下結(jié)果很明顯的可以看出,可是由于血清和試劑的不同,實驗結(jié)果會表現(xiàn)出差異,只有設(shè)立陰陽性對照組,才能對實驗中出現(xiàn)的假陽性和弱陽性作出準(zhǔn)確的判斷。這樣才能夠在大范圍的篩選中保證篩查出陽性病例。3虎紅平板和試管凝集實驗兩者互用使檢測高效準(zhǔn)確虎紅平板在大規(guī)模的篩杳陽性病例中的不二選擇,在工作中改進出現(xiàn)的問題,那么在陽性可以快速的發(fā)現(xiàn)并且處置,對虎紅平板實驗中出現(xiàn)的假陽性和判斷不準(zhǔn)的樣品,可以用更加精細的試管凝集實驗再次檢測,虎紅平板和試管凝集實驗兩者相互使用,那么實驗的準(zhǔn)確性將大大的提高。讓布病的凈化工作快速、準(zhǔn)確。