王俊 李亮 李建剛

收稿日期：2023-05-06；修回日期：2023-06-27。

基金項(xiàng)目：新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2021D01C377）。

作者簡(jiǎn)介：王俊，主治醫(yī)師，主要從事胃腸道腫瘤方面的研究工作。

* 通信作者：李建剛，主治醫(yī)師，主要從事胃腸道腫瘤方面的研究工作。E-mail： lijiangang810311@163.com。

摘 要：大多數(shù)結(jié)直腸癌患者治療失敗的原因是對(duì)放射治療的抵抗。本研究采用生物信息學(xué)方法，篩選放療處理后癌組織中的差異基因（DEGs），尋找與放射敏感性相關(guān)的治療靶點(diǎn)。通過(guò)細(xì)胞周期調(diào)節(jié)基因核糖核苷酸還原酶調(diào)節(jié)亞基M2（RRM2）的表達(dá)篩選后，分別采用Lipofectamine 2000和3 Gy放射劑量對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染及放療處理，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)RRM2蛋白在結(jié)直腸癌中的表達(dá)，采用噻唑蘭（MTT）方法測(cè)量細(xì)胞活力，用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡。本研究共鑒定出4 269個(gè)DEGs，其中RRM2基因差異最顯著。與腸上皮細(xì)胞FHC比較，RRM2在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)顯著升高（P<0.05）。與對(duì)照（NC）組比較，過(guò)表達(dá)RRM2可促進(jìn)細(xì)胞活力。與3 Gy組比較，過(guò)表達(dá)RRM2能夠延緩放療對(duì)細(xì)胞的殺傷作用。與NC組比較，過(guò)表達(dá)RRM2會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡率降低，而抑制RRM2表達(dá)則導(dǎo)致細(xì)胞凋亡率升高。與單獨(dú)使用si-RRM2或輻照相比，si-RRM2和輻照的組合顯示出了更好的效果。在細(xì)胞周期的分析中，RRM2的過(guò)表達(dá)導(dǎo)致S期細(xì)胞聚集，而RRM2的敲低導(dǎo)致G1期細(xì)胞聚集。此外，輻照可導(dǎo)致顯著的G1相停滯，而RRM2的敲低與輻照一起可導(dǎo)致更顯著的G1相停滯。這表明，RRM2介導(dǎo)了結(jié)直腸癌細(xì)胞的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)，并通過(guò)細(xì)胞周期影響結(jié)直腸癌的放射敏感性。本研究為結(jié)直腸癌聯(lián)合療法的開(kāi)展提供了重要的數(shù)據(jù)支持。

關(guān)鍵詞：RRM2；結(jié)直腸癌；細(xì)胞周期；放射敏感性；治療靶點(diǎn)

中圖分類(lèi)號(hào)：R735.3? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOI：10.3969/j.issn.1007-7146.2024.01.008

Mechanism of RRM2 in Radiosensitization of Colorectal Cancer

WANG Jun， LI Liang， LI Jiangang*

（Department of General Surgery， the Second Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University， Urumqi 830063， China）

Abstract： Resistance to radiotherapy is the reason for treatment failure in most patients with colorectal cancer. In this study， bioinformatics methods were used to screen differential genes （DEGs） in cancer tissues after radiotherapy， and to find therapeutic targets related to radiosensitivity. After screening the cells by cell cycle mediator ribonucleotide reductase regulatory subunit M2 （RRM2） expression， the cells were transfected with lipofectamine 2000 and irradiated with 3 Gy. Real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot were used to detect the expression of RRM2 in colorectal cancer. Cell viability was measured by MTT assay. Flow cytometry was used to determine cell cycle and apoptosis. A total of 4 269 DEGs were identified， and RRM2 was found to be the most significant difference. Compared with intestinal epithelial FHC cells， RRM2 expression level significantly increased in tumor cells （P<0.05）. Compared with NC group， RRM2 overexpression promoted cell viability. Compared with the 3 Gy group， RRM2 overexpression could delay the killing effect of radiotherapy on the cells. Compared with NC group， overexpression of RRM2 reduced the apoptosis rate， while inhibition of RRM2 increased the apoptosis rate. The combination of si-RRM2 and irradiation showed better results compared to that with si-RRM2 or irradiation alone. Overexpression of RRM2 caused cell aggregation in S phase， while knockdown of RRM2 caused cell aggregation in G1 phase. In addition， irradiation caused a significant G1 phase arrest， while RRM2 knockdown together with irradiation caused a more significant G1 phase arrest. This suggests that RRM2 mediates cell cycle of CRC cells and affects the radiosensitivity of CRC through cell cycle. This study provides important data support for the development of combined therapy for colorectal cancer.

Key words： RRM2; colorectal cancer; cell cycle; radiosensitivity; therapeutic target

（Acta Laser Biology Sinica， 2024， 33（1）： 065-072）

結(jié)直腸癌是最常見(jiàn)的癌癥之一。目前的研究顯示，結(jié)直腸癌是癌癥死亡的第三大病因［1］，其5年和10年的相對(duì)生存率分別為65%和58%［2］。結(jié)直腸癌最有效的治療方法是早期直腸結(jié)腸切除術(shù)，可聯(lián)合放射治療、化學(xué)治療和免疫治療［2-3］。應(yīng)用放射治療可能會(huì)在手術(shù)前縮小腫瘤的體積，并在手術(shù)后殺死剩余的腫瘤細(xì)胞。然而，放射治療耐受是影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的主要因素之一，因此，迫切需要探索新的治療方法來(lái)提高結(jié)直腸癌的放射敏感性［4］。目前研究發(fā)現(xiàn)，紫杉醇、曲妥珠單抗、西妥昔單抗等靶向治療聯(lián)合放射治療可提高抗腫瘤的療效［5-6］，且介導(dǎo)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（fibroblast growth factor，F(xiàn)GF）抑制劑（JNJ-42756493）［7］、X-射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白2 （X-ray repair cross complementing protein 2，XRCC2）［4，8］有效地增強(qiáng)結(jié)直腸腫瘤細(xì)胞的敏感性，因此，探討更多的治療靶點(diǎn)對(duì)結(jié)直腸癌的放射增敏具有重要的價(jià)值。本研究旨在篩選能夠應(yīng)用到聯(lián)合治療結(jié)直腸癌的潛在靶點(diǎn)。

核糖核苷酸還原酶（ribonucleotide reductase，RNR）是DNA復(fù)制和增強(qiáng)細(xì)胞活力必不可少的酶，可催化從核苷二磷酸（nucleoside diphosphate，NDP）（RNA構(gòu)件）到脫氧核糖核苷二磷酸（deoxy-nucleoside diphosphate，dNDP）（DNA構(gòu)件）的轉(zhuǎn)化。核糖核苷酸還原酶（ribonucleotide reductase，RR）包含兩個(gè)大亞基細(xì)胞周期調(diào)節(jié)基因核糖核苷酸還原酶調(diào)節(jié)亞基 M1（ribonucleotide reductase regulatory subunit M1，RRM1）和兩個(gè)小亞基細(xì)胞周期調(diào)節(jié)基因核糖核苷酸還原酶調(diào)節(jié)亞基 M2（ribonucleotide reductase regulatory subunit M2，RRM2）［7］。目前研究發(fā)現(xiàn)，RRM1的水平在整個(gè)細(xì)胞周期中是穩(wěn)定表達(dá)的，而RRM2的水平在細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)中扮演了重要的角色［8-9］。據(jù)報(bào)道，RRM2能夠促進(jìn)腫瘤進(jìn)展［10］，且有研究將其作為預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌存活率的預(yù)后生物標(biāo)志物［11］。然而，目前尚不清楚RRM2是否介導(dǎo)結(jié)直腸癌的放射敏感性。因此，本研究旨在通過(guò)生物信息學(xué)的方法，探討影響結(jié)直腸癌的放射敏感性的靶點(diǎn)及機(jī)制，為結(jié)直腸癌治療及靶向藥的開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 臨床材料

GSE15781數(shù)據(jù)從GEO數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/）中下載。10例可切除的直腸腺癌患者均接受了術(shù)前放射治療，該GSE15781樣本的基因組用于微陣列分析。

1.1.2 試驗(yàn)細(xì)胞

正常人結(jié)腸直腸黏膜FHC細(xì)胞系、人結(jié)腸直腸癌細(xì)胞系HT-29、T84、SW480和Caco2均購(gòu)自BeNa Culture Collection（中國(guó)北京）。

1.1.3 主要試劑與儀器

試劑：RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基、胎牛血清（fatal bovine serun，F(xiàn)BS）（Gibco，美國(guó)）；Trizol 試劑（Invitrogen，美國(guó)）；Revert Aid First Strand cDNA合成試劑盒（Thermo Fisher Scientific，美國(guó)）；SYBR-Green聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）Master Mix試劑盒（Takara，日本）；抗RRM2（ab57653）（Abcam，USA）；pcDNA 3.0載體（Realgene，中國(guó)上海）；Lipofectamine 2000（Invitrogen，美國(guó)）；Annexin V/PI凋亡檢測(cè)試劑盒（Sigma，St. Louis，MO，USA）。

儀器：直線加速器（NMSR600，東軟醫(yī)療）；FACScan儀器（Becton Dickinson，Mountain View，CA）；細(xì)胞培養(yǎng)箱（GNP1473，上海一恒）；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（7500 Fast，ABI，美國(guó)）。

1.2 方法

1.2.1 生物信息學(xué)分析

收集放射治療前后的腫瘤組織用于基因組微陣列。使用“l(fā)imma”R軟件包分析差異表達(dá)基因（differential expressed genes，DEGs）。通過(guò)StarBase平臺(tái)（http：//starbase.sysu.edu.cn/index.php）比較RRM2在結(jié)直腸癌樣本與正常樣本中的差異表達(dá)。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)

所有細(xì)胞培養(yǎng)在90% RPMI-1640 + 10% FBS的培養(yǎng)液中，置于37℃、5% CO2的潮濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

根據(jù)制造商的方案，使用TRIzol試劑提取培養(yǎng)細(xì)胞的所有RNA。利用Revert Aid First Strand cDNA合成試劑，通過(guò)隨機(jī)引物逆轉(zhuǎn)錄1 μg總RNA。使用 SYBR-Green PCR Master Mix試劑盒檢測(cè)RRM2 mRNA的水平。

試驗(yàn)使用的引物為：5'-AACAGCCTCAAGATCATCAGC-3'（GAPDH的上游引物），5'-GGATGATGTTCTGGAGAGCC-3'（GAPDH的下游引物），5'-GCAGCAAGCG ATGGCATAGT-3'（RRM2的上游引物），5'-GGGCTTCTGTAATCTGAACTTC-3'（RRM2的下游引物）。采用2-ΔΔCT方法測(cè)量mRNA的相對(duì)水平。

1.2.4 蛋白質(zhì)印跡

細(xì)胞總蛋白在放射免疫沉淀法（radio immunoprecipitation assay，RIPA）緩沖液中裂解，用8%～12%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）分離后轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上。轉(zhuǎn)移后，膜在室溫下用磷酸鹽吐溫緩沖液（phosphate buffer solution tween，PBST）中的2%牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）封閉1 h。然后，將膜與一抗放置在含有1% BSA的PBST中，在4℃下孵育過(guò)夜。最后，將膜與辣根過(guò)氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）二抗孵育1 h后，使用增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光（enhanced chemiluminescence，ECL）蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)試劑觀察條帶。

1.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染

將細(xì)胞（每孔5×103個(gè)）接種到96孔板上。為了過(guò)表達(dá)RRM2，本研究先將含有RRM2

（ATGGCTTCGGCAGCAGTNTCTCTTGGGGCTAGGCTAATTGGACAGAACGTGCCGAAGTNGCTGTGCGCGGAGTCGTGA，ATGGCTCGTNGAGACTGGCACAAGACGAAGGAAATCATTCTA AAAGGATCTGATTGGATTCTCGGAGAACTCAAAACTTCTGGTCTCCGTGGAAGA和ATGGCGACCATACAAATTGGTGAAGATACGATCACTGTCCTTCAAATTTCCGAACGATGTCTTCTCTTGTTTCACTTGAGCGTTCGCATTCTGGGCTGA）開(kāi)放閱讀框（open reading frame，ORF）序列的質(zhì)?？寺〉降膒cDNA 3.0載體（Realgene）上，再按照制造商的方法指導(dǎo)進(jìn)行下一步操作。RRM2的siRNA和scramble陰性對(duì)照獲自Invitrogen，根據(jù)制造商的要求，通過(guò)Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。

siRNA的靶序列為：5'-AAACCCGAGGAGAGAUAUUTT-3'，5'-GGAGCGAUUUAG CCAAGAATT-3'和5'-GCACUCUAAUGAAGCAAUATT-3'。陰性對(duì)照的siRNA為5'-UUCUCCGAACGUUGACACGUTT-3'。本研究共設(shè)置了3個(gè)處理組，分別為轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照質(zhì)粒的對(duì)照（normal control，NC）組、RRM2組及si-RRM2組。

1.2.6 細(xì)胞放射治療的處理方法

當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到80%時(shí)，在直線加速器上以2 Gy/min的劑量率在35 cm × 35 cm的視野中進(jìn)行6 MV X射線照射。不同放射治療劑量（0、2、4、6、8、10 Gy）處理后，采用相關(guān)方法對(duì)細(xì)胞的活力、凋亡及周期進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)設(shè)置不同的放療劑量，篩選出半數(shù)抑制濃度（inhibitory concentration 50，IC50）用于后面的放療處理。之后，本研究設(shè)置了6個(gè)組別，分別為NC組、si-RRM2組、RRM2組、正常對(duì)照3 Gy照射組（3 Gy組）、si-RRM2和3 Gy照射組（si-RRM2+3 Gy組）、RRM2和3 Gy照射組（RRM2+3 Gy組），用于驗(yàn)證RRM2對(duì)細(xì)胞及放療處理后的作用

1.2.7 噻唑蘭（MTT）法

將細(xì)胞以每孔5 × 103個(gè)的量在96孔板中培養(yǎng)24 h，轉(zhuǎn)染構(gòu)建好的載體，然后在正常培養(yǎng)液中培養(yǎng)。接下來(lái)，將細(xì)胞暴露于0、2、5、10 Gy的不同劑量的電離輻射中。板中的每個(gè)孔都補(bǔ)充有噻唑蘭（thiazolyl bue，MTT）溶液（5 mg/mL，20 μL）。4 h后，移去培養(yǎng)液，每孔加入100 μL二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）。最后，在490 nm處檢測(cè)細(xì)胞吸光度。所有試驗(yàn)至少進(jìn)行3次重復(fù)。

1.2.8 細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期分析

轉(zhuǎn)染后收集轉(zhuǎn)染細(xì)胞，并將它們接種到6孔板上。用冰冷的磷酸鹽緩沖溶液（phosphate buffer solution，PBS）洗滌細(xì)胞，然后用70%乙醇溶液在4℃下固定過(guò)夜。將固定的細(xì)胞在PBS中洗滌10 min，在RNase A（1 mg/mL）中于37℃下培養(yǎng)30 min，然后進(jìn)行PI/RNase染色。在FACScan儀器（Becton Dickinson，Mountain View）下分析細(xì)胞的凋亡和周期分布。使用流式細(xì)胞術(shù)和Annexin V/PI凋亡檢測(cè)試劑盒檢測(cè)凋亡細(xì)胞的存在。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPPS軟件對(duì)本研究的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有計(jì)量數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較兩組差異的顯著性。采用單因素方差分析檢測(cè)兩組以上的組間差異性，進(jìn)一步采用Tukey法進(jìn)行兩兩比較。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 生物信息學(xué)篩選基因結(jié)果

首先，通過(guò)GEO數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)，RRM2在放射治療后的患者組織中顯著升高，且排在首位（圖1a）。進(jìn)一步通過(guò)StarBase平臺(tái)分析發(fā)現(xiàn)，RRM2表達(dá)在結(jié)腸癌樣本中升高（圖1b）。預(yù)后結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌患者的RRM2高表達(dá)也與結(jié)直腸癌患者的不良預(yù)后有關(guān)（圖1c）。因此，本研究選擇RRM2進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

2.2 RRM2調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞活力的情況

RRM2蛋白在結(jié)直腸癌細(xì)胞系（T84、SW480、HT-29和Caco2）中的表達(dá)顯著高于正常腸上皮細(xì)胞系FHC，在T84和HT-29細(xì)胞中的表達(dá)比其他兩個(gè)結(jié)直腸癌細(xì)胞系更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F =4.57，P<0.05）（圖2）。這說(shuō)明，RRM2的過(guò)表達(dá)會(huì)導(dǎo)致HT-29和T84細(xì)胞系中RRM2的顯著上調(diào)。在處理后的第4天時(shí)，3組細(xì)胞中RRM2過(guò)表達(dá)組的細(xì)胞活力（3.87±0.25）顯著高于NC組（2.45±0.18）（F=5.74，P<0.05），而si-RRM2組的細(xì)胞活力（1.97±0.15）顯著低于NC組（2.45±0.18）（F=5.74，P<0.05），且隨著處理時(shí)間驗(yàn)證，這種趨勢(shì)并未改變。因此，以下研究應(yīng)用了T84和HT-29細(xì)胞系。

2.3 不同放射劑量對(duì)細(xì)胞活力的影響

在不同劑量照射下，HT-29細(xì)胞和T84細(xì)胞的存活率顯著下降。在兩種細(xì)胞系中，經(jīng)計(jì)算，輻射的IC50約為3 Gy。試驗(yàn)使用3 Gy劑量來(lái)照射細(xì)胞，分組為NC組、si-RRM2組、RRM2組、3 Gy組、si-RRM2+3 Gy組及RRM2+3 Gy組。3 Gy劑量照射HT-29和T84細(xì)胞后，RRM2的表達(dá)顯著下調(diào)（P<0.05）。用MTT法測(cè)定細(xì)胞活性，結(jié)果如圖3所示，與NC組比較，過(guò)表達(dá)RRM2可顯著促進(jìn)細(xì)胞活力，而抑制RRM2后，細(xì)胞活力被抑制。隨后，在放療處理的同時(shí)施加RRM2干擾，發(fā)現(xiàn)與3 Gy組比較，過(guò)表達(dá)RRM2能夠延緩放療對(duì)細(xì)胞的殺傷作用，而抑制RRM2后這種殺傷作用被顯著促進(jìn)。這些結(jié)果說(shuō)明，抑制RRM2的表達(dá)與3 Gy輻射后效果相同，都顯著抑制了細(xì)胞活力，而與NC 組相比，RRM2的過(guò)表達(dá)和輻照后的細(xì)胞活力沒(méi)有顯著差異

（表1、2）。

2.4 細(xì)胞的放射敏感性變化

與NC組的細(xì)胞凋亡率［（8.53±1.04）%和（8.73±0.95）%］相比，過(guò)表達(dá)RRM2的腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞凋亡率降低［（5.54±0.87）%和（5.80±0.47）%］，而抑制RRM2的表達(dá)則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡率［（17.58±3.48）和16.70±2.13）%］升高。與單獨(dú)使用si-RRM2或單獨(dú)輻照相比，si-RRM2和輻照的組合顯示出了更好的效果。在細(xì)胞周期分析中，RRM2的過(guò)表達(dá)會(huì)導(dǎo)致S期細(xì)胞聚集，而RRM2的敲低會(huì)導(dǎo)致G1期細(xì)胞聚集［（47.30±6.27）%和46.70±5.14）%］。此外，輻照可導(dǎo)致顯著的G1相停滯［（46.48±6.17）%和47.95±7.15）%］，而RRM2的敲低與輻照一起可導(dǎo)致更顯著的G1相停滯［（71.05±6.04）%和70.98±5.08）%］（圖4，表3、4）。

3 討論

放射抗性是接受根治性放射治療的結(jié)直腸癌患者治療失敗和死亡的主要原因。然而，目前對(duì)放射治療耐受的機(jī)制尚不明確。本研究應(yīng)用生物信息學(xué)的方式尋找可能在介導(dǎo)結(jié)直腸癌放射敏感性中起重要作用的樞紐基因。選擇放射治療前后收集結(jié)直腸腫瘤組織的GEO基因組微陣列，鑒定出4 269個(gè)DEGs。通過(guò)差異倍數(shù)及統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的聚類(lèi)分析后發(fā)現(xiàn)，RRM2排在差異首位，可能介導(dǎo)結(jié)直腸癌的放射敏感性。

目前研究發(fā)現(xiàn)，RRM2是一種預(yù)后生物標(biāo)志物，可促進(jìn)結(jié)直腸癌的侵襲性，并預(yù)測(cè)較差的存活率［12-13］。本研究發(fā)現(xiàn)，與正常結(jié)腸直腸細(xì)胞系相比，RRM2在結(jié)腸直腸癌細(xì)胞系中具有顯著的高表達(dá)。通過(guò)對(duì)4種結(jié)直腸癌細(xì)胞的RRM2的表達(dá)進(jìn)行分析，并篩選RRM2高表達(dá)的細(xì)胞系，進(jìn)行后續(xù)功能學(xué)驗(yàn)證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：RRM2的過(guò)表達(dá)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞活力增強(qiáng)，并導(dǎo)致細(xì)胞在S期積累；相反，RRM2的敲低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞活力降低，并導(dǎo)致癌細(xì)胞停留在G1期。本研究數(shù)據(jù)證實(shí)，抑制RRM2的表達(dá)能夠抑制結(jié)直腸癌的進(jìn)展，這一作用可能是由RRM2靶向細(xì)胞周期進(jìn)程所參與調(diào)控的。目前已研究了多種調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的策略來(lái)提高癌細(xì)胞的放射敏感性。據(jù)報(bào)道，金雀異黃素［2］、miR-15家族［14］均能通過(guò)靶向細(xì)胞周期來(lái)提高腫瘤的放射敏感性。本文對(duì)輻射與RRM2的調(diào)節(jié)相結(jié)合進(jìn)行了研究，以了解潛在的聯(lián)合治療機(jī)制。與僅抑制RRM2或單獨(dú)放射治療輻照處理相比，通過(guò)輻射抑制RRM2可對(duì)G1期細(xì)胞活力和細(xì)胞周期聚集的抑制產(chǎn)生更顯著的影響。由于細(xì)胞在G2/M期對(duì)輻射最敏感，且G1期比S期更敏感［15-19］，可以推斷，RRM2對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞的放射增敏作用是由于細(xì)胞停留在G1期而不是S期引起的，RRM2可能是結(jié)直腸癌放射增敏的潛在治療靶點(diǎn)。此外，本研究發(fā)現(xiàn)，抑制RRM2和輻照聯(lián)合處理能夠顯著增強(qiáng)這一作用。這一結(jié)果說(shuō)明，RRM2可能是其發(fā)揮作用的核心分子，這也進(jìn)一步驗(yàn)證了我們的猜想。然而，雖然本研究在體外試驗(yàn)中驗(yàn)證了RRM2的作用，但仍缺少必要的體內(nèi)及臨床樣本數(shù)據(jù)，這將是未來(lái)深入研究的主要方向之一。

本研究證實(shí)了RRM2在結(jié)直腸癌細(xì)胞中的高表達(dá)并參與了癌細(xì)胞對(duì)輻射的反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)RRM2介導(dǎo)了結(jié)直腸癌細(xì)胞的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)，結(jié)合放射可產(chǎn)生更顯著的作用?？傊?，該研究發(fā)現(xiàn)了一種用于結(jié)直腸癌放射治療的新型潛在靶標(biāo)RRM2，并鼓勵(lì)進(jìn)一步研究以了解其調(diào)控機(jī)制。

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