張思捷,張芯蕊,馮志強(qiáng),汪楨,王璐陽,黃繼紅,4*
(1.河南大學(xué)農(nóng)學(xué)院,省部共建作物逆境適應(yīng)與改良國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,河南開封 475004)(2.中原食品實(shí)驗(yàn)室,河南漯河 462300)(3.三全食品股份有限公司,河南鄭州 450001)(4.許昌學(xué)院食品與藥學(xué)院,河南許昌 461000)
淀粉是一種高分子聚合物,一般是由20%~25%的直鏈淀粉和75%~80%的支鏈淀粉組成。直鏈淀粉是由α-1,4-糖苷鍵連接形成的幾乎無分支的線性高分子聚合物,分子量(Molecular Weight,Mw)一般為105~106g/mol;支鏈淀粉是由α-1,4-糖苷鍵和α-1,6-糖苷鍵連接形成的高度分支化結(jié)構(gòu),Mw一般為106~109g/mol[1-3]。支鏈淀粉分子的側(cè)鏈平行排列,相鄰羥基間經(jīng)氫鍵結(jié)合成簇狀,形成雙螺旋結(jié)構(gòu),構(gòu)成淀粉的結(jié)晶區(qū)域,而未參與排列的支鏈淀粉分支點(diǎn)和無序直鏈淀粉鏈構(gòu)成淀粉的無定形區(qū)域[4]。結(jié)晶區(qū)域和無定型區(qū)域交替排列形成具有重復(fù)單元的淀粉生長環(huán)結(jié)構(gòu)(100~500 nm),生長環(huán)結(jié)構(gòu)進(jìn)一步構(gòu)成淀粉的顆粒結(jié)構(gòu)(2~40 μm)[5]。因此,Mw是構(gòu)成淀粉結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)參數(shù),不同的調(diào)控技術(shù)可以通過改變淀粉分子的結(jié)晶結(jié)構(gòu)、雙螺旋結(jié)構(gòu)、直/支鏈比例及其精細(xì)結(jié)構(gòu)等,調(diào)控淀粉Mw。
淀粉Mw是決定其性質(zhì)和改善產(chǎn)品品質(zhì)的主要依據(jù)。低分子量馬鈴薯淀粉和蠟質(zhì)玉米淀粉可以降低淀粉消化率,改善淀粉基食物的抗消化品質(zhì)[6,7];低分子量小麥淀粉具有較好的流變學(xué)特性,可以改善面條產(chǎn)品品質(zhì)[8];中分子量小麥淀粉有較高的熱力學(xué)穩(wěn)定性[9];較小分子量的玉米淀粉可以提高其乳化能力,增強(qiáng)乳液穩(wěn)定性[10]。對天然淀粉Mw進(jìn)行調(diào)控,可以使淀粉物化性質(zhì)發(fā)生改變,有助于擴(kuò)大淀粉在食品、醫(yī)藥、化學(xué)工業(yè)等方面的應(yīng)用。
基于以上情況,本文首先對多種調(diào)控淀粉Mw的技術(shù)進(jìn)行分析,然后探討不同調(diào)控技術(shù)的作用機(jī)理,最后分析了分子量變化對淀粉性能及應(yīng)用產(chǎn)生的影響。旨在為研究淀粉Mw調(diào)控及其應(yīng)用提供理論依據(jù)。
物理調(diào)控淀粉Mw主要有等離子體處理、超聲波處理、濕熱處理、線性偏振可見光處理、電子束輻射處理、高溫處理等[11,12]。具體情況如表1 所示。
利用等離子體處理改變淀粉Mw是一種常見的物理調(diào)控方法。首先,等離子體誘導(dǎo)交聯(lián)的機(jī)制是通過淀粉分子兩條聚合鏈之間的醇羥基發(fā)生裂解,脫去水分子,形成C-O-C 鍵[26]。其次,等離子處理過程中的活性物質(zhì)(如高能電子、激發(fā)態(tài)粒子和自由基等)破壞了淀粉中葡萄糖分子C-1 位置的糖苷鍵,導(dǎo)致分子鏈解聚。Zhang 等[27]通過氦輝光等離子體處理馬鈴薯淀粉后,誘導(dǎo)晶胞內(nèi)雙螺旋結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,淀粉分子發(fā)生交聯(lián)使結(jié)構(gòu)更加緊密,結(jié)晶層狀厚度增大,Mw從6.11×107g/mol增加到1.04×108g/mol,經(jīng)過該處理后,淀粉顆粒膨脹受阻,熱穩(wěn)定性增大。Shen 等[9]用介質(zhì)阻擋放電等離子體處理小麥淀粉后,顆粒表面被腐蝕,等離子體活性物質(zhì)(如高能電子、激發(fā)態(tài)粒子、自由基等)進(jìn)入顆粒內(nèi)部,導(dǎo)致α-1,6-糖苷鍵斷裂,支鏈淀粉分子側(cè)鏈解聚,支鏈淀粉Mw從1.26×107g/mol降低到1.26×106g/mol。隨著Mw降低,小麥淀粉糊化的起始溫度、峰值溫度增大,提高了淀粉的熱穩(wěn)定性以及剪切穩(wěn)定性。綜上所述,等離子體處理造成淀粉Mw的增加或減少與淀粉分子之間的交聯(lián)、接枝、直/支鏈淀粉的解聚以及新官能團(tuán)的形成有關(guān)。該方法具有工藝簡單、節(jié)能環(huán)保的優(yōu)點(diǎn)。
超聲波處理淀粉水溶液時(shí),與淀粉分子產(chǎn)生強(qiáng)烈的機(jī)械效應(yīng),形成的剪切力和高溫可以破壞其中的共價(jià)鍵且主要表現(xiàn)為α-1,6-糖苷鍵的C-O-C 鍵斷裂[28]。Chang 等[29]通過超聲處理馬鈴薯淀粉后,α-1,4-糖苷鍵和α-1,6-糖苷鍵斷裂,Mw從8.4×107g/mol 降低到2.7×106g/mol。經(jīng)過該處理后,淀粉糊粘度降低,可用于食品和藥品中乳化劑的制備。Zeng 等[30]通過超聲處理蓮子淀粉后支鏈淀粉長鏈解聚,Mw從1.31×106g/mol降低到1.60×104g/mol,短鏈淀粉比例顯著增大,更易形成雙螺旋結(jié)構(gòu),淀粉熱穩(wěn)定性增強(qiáng)。綜上所述,超聲處理過程中,剪切、高溫和沖擊震蕩的綜合效應(yīng)可使淀粉分子鏈充分伸展,顆粒結(jié)構(gòu)松散,暴露大量羥基,分子鏈斷裂,導(dǎo)致淀粉Mw降低。該方法作用迅速且副產(chǎn)物少,可在較大程度上改變淀粉Mw及其理化性質(zhì)。
濕熱處理(Heat Moisture Treatment,HMT)將淀粉在較低水分含量(10%~30%)、較高溫度(90~130 ℃)條件下處理一定時(shí)間(15 min~16 h)后,改變淀粉Mw及其性質(zhì)[31]。水的存在造成淀粉結(jié)晶結(jié)構(gòu)的破壞并促進(jìn)淀粉分子鏈的轉(zhuǎn)移;高溫導(dǎo)致淀粉分子中的α-1,4-糖苷鍵和α-1,6-糖苷鍵斷裂,使結(jié)晶區(qū)的雙螺旋結(jié)構(gòu)發(fā)生改變;處理時(shí)間會(huì)影響淀粉分子雙螺旋結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)變程度。Zhang 等[32]通過HMT 處理小麥支鏈淀粉,高溫破壞淀粉共價(jià)鍵,導(dǎo)致支鏈淀粉長鏈解聚,雙螺旋結(jié)構(gòu)解體,Mw從3.39×107g/mol 降低到1.68×107g/mol。隨著Mw的降低,淀粉凝膠彈性、流變學(xué)特性增強(qiáng)。Han等[33]用HMT 處理豌豆支鏈淀粉,高溫促進(jìn)淀粉鏈自由移動(dòng),增強(qiáng)H2O 向淀粉顆粒遷移,氫鍵被破壞,結(jié)晶區(qū)支鏈淀粉分子鏈解聚,Mw從3.74×107g/mol降低到2.10×106g/mol。經(jīng)過該處理后,淀粉糊化溫度升高,熱穩(wěn)定性增強(qiáng)。該方法具有工藝簡單、節(jié)能環(huán)保、快速安全等優(yōu)點(diǎn)。
化學(xué)調(diào)控通過各種化學(xué)試劑處理改變淀粉Mw,包括氧化、酯化、醚化和酸堿處理[34]。化學(xué)試劑根據(jù)化學(xué)組成分為單官能團(tuán)和雙官能團(tuán)試劑,單官能團(tuán)試劑提供陽離子、疏水基團(tuán)或共價(jià)反應(yīng)取代基,雙官能團(tuán)試劑可以與淀粉分子的一個(gè)以上的羥基發(fā)生交聯(lián)反應(yīng),調(diào)控淀粉Mw(表2)。
在適宜的pH 值、溫度、時(shí)間條件下,淀粉分子鏈上的羥基會(huì)與氧化劑發(fā)生反應(yīng),改變淀粉Mw。Ma 等[43]用次氯酸鈉處理玉米淀粉,C-2、C-3、C-6位置的羥基與次氯酸鈉發(fā)生反應(yīng),被氧化為羧基,淀粉分子鏈解聚,Mw從2.13×108g/mol 降低到2.02×106g/mol。隨著Mw的降低,淀粉的熱穩(wěn)定性及抗剪切力增強(qiáng),具有良好的成膜性能。Wang等[44]通過H2O2處理玉米淀粉,C-2、C-3 位置的羥基被羧基取代,淀粉鏈解聚,Mw從2.99×106g/mol 降低到5.61×103g/mol。隨著Mw降低,淀粉凝膠彈性增強(qiáng)。綜上所述,氧化反應(yīng)對淀粉Mw進(jìn)行調(diào)控的過程中,羥基被氧化成羧基,產(chǎn)生新的官能團(tuán),改變淀粉Mw。該反應(yīng)作用迅速但引入的氧化劑會(huì)污染環(huán)境。
辛烯基琥珀酸(Octenyl Succinic Anhydride,OSA)對淀粉Mw的調(diào)控是通過酯化反應(yīng)實(shí)現(xiàn)的。Miao 等[45]用OSA 處理玉米淀粉,OSA 基團(tuán)與淀粉分子鏈發(fā)生交聯(lián)反應(yīng),Mw從2.08×107g/mol 升高到2.41×107g/mol。隨著Mw的增加,淀粉的乳液穩(wěn)定性增強(qiáng)。Sun 等[46]通過OSA 處理蓮子淀粉,淀粉分子鏈間氫鍵與OSA 淀粉之間的酯鍵或OSA 淀粉疏水基團(tuán)相互作用發(fā)生締合,支鏈淀粉Mw從1.22×107g/mol 增加到1.24×107g/mol。隨著Mw的降低,淀粉溶解度增大,乳化性能增強(qiáng)。綜上所述,酯化反應(yīng)通過將淀粉葡萄糖分子上羥基轉(zhuǎn)化為酯基,誘導(dǎo)交聯(lián)反應(yīng),調(diào)控淀粉Mw。該處理可以顯著改善淀粉乳化性質(zhì),可廣泛用作穩(wěn)定劑、增稠劑和乳液穩(wěn)定劑。
淀粉分子發(fā)生醚化反應(yīng)是指其葡萄糖單元上的羥基在堿性條件下被羥丙基、羥乙基、羧甲基等基團(tuán)取代的過程。Ulbrich 等[47]通過羥丙基化處理馬鈴薯淀粉,淀粉分子鏈C-2 位置的羥基被環(huán)氧丙烷所取代,阻礙了淀粉分子間的締合,Mw從3.32×107g/mol 降低到1.47×107g/mol。該取代反應(yīng)主要發(fā)生在支鏈淀粉側(cè)鏈的糖苷鍵上,造成支鏈淀粉分子鏈解聚形成較短的線性鏈,更容易形成穩(wěn)定的雙螺旋結(jié)構(gòu),熱穩(wěn)定性增強(qiáng)。Lee 等[48]通過氯乙酸鈉處理玉米淀粉,C-2 位置羥基被羧甲基取代,分子鏈斷裂,Mw從7.2×106g/mol 降低到2.3×106g/mol。經(jīng)過該處理后,玉米淀粉溶解度增大,可用于制備肥皂,提高其懸浮力和整體洗滌效果。綜上所述,通過醚化處理調(diào)控淀粉Mw,分子鏈不同位置羥基發(fā)生取代反應(yīng),導(dǎo)致分子鏈斷裂,是造成淀粉Mw降低的主要原因。但該處理過程中引入的化學(xué)試劑可能會(huì)對人體造成傷害,使用過程中應(yīng)注意試劑的使用量。
在淀粉水溶液中,酸可以迅速解離并質(zhì)子化水分子形成H3O+,擴(kuò)散到淀粉顆粒中,親電攻擊糖苷鍵的氧原子,造成無定形區(qū)域中α-葡聚糖鏈的斷裂,當(dāng)水解繼續(xù)時(shí),結(jié)晶區(qū)也會(huì)發(fā)生α-葡聚糖鏈的斷裂。Ulbrich 等[49]用HCl 處理馬鈴薯淀粉,無定型區(qū)淀粉分子鏈解聚,α-1,6-糖苷鍵斷裂,Mw從2.58×107g/mol 降低到2.67×106g/mol。隨著Mw的降低,分子鏈崩解溫度升高,淀粉凝膠強(qiáng)度增大。另一方面,堿性條件下,淀粉分子中的一些羥基基團(tuán)發(fā)生電離,淀粉分子帶有負(fù)電荷,負(fù)電荷之間的離子排斥可以破壞無定形區(qū)域中淀粉分子間氫鍵,改變淀粉結(jié)構(gòu)并調(diào)控Mw。Israkarn 等[50]用NaOH 處理綠豆淀粉后,負(fù)電荷之間發(fā)生離子排斥,淀粉顆粒崩解,無定形區(qū)直鏈淀粉分子浸出,形成低分子量聚合物,Mw由4.50×105g/mol 降低到4.30×105g/mol。隨著Mw降低,淀粉短鏈更易形成雙螺旋結(jié)構(gòu),糊化溫度升高,顆粒膨脹受到抑制,淀粉凝膠彈性增大。綜上所述,酸堿處理對淀粉Mw進(jìn)行調(diào)控時(shí),首先降解無定形區(qū)域淀粉分子鏈,處理一段時(shí)間后,結(jié)晶區(qū)分子鏈也會(huì)解聚,從而降低淀粉Mw。通過該種類型的處理后,可以改善淀粉的凝膠強(qiáng)度、熱穩(wěn)定性、流變學(xué)特性等諸多物化性質(zhì)。
生物技術(shù)調(diào)控是指通過發(fā)酵和酶處理淀粉,破壞淀粉分子鏈的糖苷鍵,從而使淀粉Mw降低[51]。具體情況如下表3 所示。
發(fā)酵過程中,淀粉分子被微生物分泌的胞外酶(如α-淀粉酶、β-淀粉酶和葡萄糖苷酶等)水解成葡萄糖、低聚麥芽糖等,淀粉鏈結(jié)構(gòu)和聚集形態(tài)以及淀粉Mw發(fā)生不同程度的變化,最終導(dǎo)致淀粉物化性質(zhì)的改變[64]。近幾十年來,應(yīng)用發(fā)酵工藝改變淀粉的結(jié)構(gòu)、營養(yǎng)功能特性越來越受到關(guān)注。Ye 等[65]通過發(fā)酵處理甘薯淀粉,無定形區(qū)域中支鏈淀粉長鏈被發(fā)酵過程中微生物產(chǎn)生的α-淀粉酶和β-淀粉酶水解,Mw從2.37×107g/mol 降低到1.27×107g/mol。隨著Mw降低,淀粉鏈被破壞,短鏈比例增大,使其熱穩(wěn)定性及凝膠強(qiáng)度增大。Alansi 等[66]通過發(fā)酵處理大麥淀粉,發(fā)酵過程中產(chǎn)生的α-淀粉酶酶解支鏈淀粉長鏈,短支鏈淀粉比例明顯增多,Mw從2.26×108g/mol 降低到1.04×108g/mol,糊化溫度顯著升高,熱穩(wěn)定性增強(qiáng)。綜上所述,發(fā)酵技術(shù)調(diào)控淀粉Mw主要取決于微生物分泌的酶對淀粉的作用機(jī)制,是一種安全、環(huán)保、綠色的Mw調(diào)控技術(shù)。
用于調(diào)控淀粉Mw的酶主要包括β-淀粉酶、α-淀粉酶、環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶等。在調(diào)控淀粉Mw的過程中,需要根據(jù)每種酶各自的作用機(jī)制進(jìn)行選擇(圖1)。
圖1 酶處理調(diào)控淀粉Mw 的作用機(jī)制Fig.1 Mechanism of enzyme treatment regulating starch molecular weight
β-淀粉酶在處理淀粉過程中,從非還原性末端依次以麥芽糖為單位切斷α-1,4-糖苷鍵[67]。除此之外,α-淀粉酶也可作用于淀粉的α-1,4-糖苷鍵(圖1、表3)。Xie 等[68]用β-淀粉酶處理糯米淀粉,Mw從2.82×107g/mol 降低至1.58×106g/mol。隨著Mw降低,淀粉短鏈比例和結(jié)晶度增大,直鏈淀粉含量增加,抗消化特性增強(qiáng)。程雯[69]用β-淀粉酶處理小麥淀粉,α-1,4-糖苷鍵斷裂,直鏈淀粉含量增加,Mw從2.39×106g/mol 降低到1.36×106g/mol。經(jīng)過該處理后,淀粉的熱穩(wěn)定性、凝膠強(qiáng)度增大。
環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶是一種通過環(huán)化將淀粉分子鏈的α-1,4-糖苷鍵水解并生成環(huán)糊精從而降低淀粉Mw的酶類[70]。紀(jì)杭燕等[71]通過環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶處理玉米淀粉后,淀粉鏈長主要以短支鏈為主,Mw從1.58×107g/mol 降低到5.00×104g/mol。經(jīng)過該處理后,短支鏈淀粉更容易形成雙螺旋結(jié)構(gòu),淀粉的熱穩(wěn)定性及抗消化特性增強(qiáng)。Ji 等[72]通過環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶處理蠟質(zhì)玉米淀粉后,Mw從1.27×107g/mol降低到6.00×104g/mol。隨著Mw降低,短支鏈淀粉比例明顯增多,更容易形成穩(wěn)定的雙螺旋結(jié)構(gòu),淀粉消化率降低。
分支酶是淀粉體內(nèi)合成支鏈淀粉的關(guān)鍵酶,它能切開α-1,4-糖苷鍵并同時(shí)催化所切下的短鏈與受體鏈(原鏈或其他鏈)間α-1,6-糖苷鍵的形成,從而產(chǎn)生分支,其作用可由鏈內(nèi)轉(zhuǎn)移、鏈間轉(zhuǎn)移和/或鏈內(nèi)環(huán)化觸發(fā)[73,74]。而普魯蘭酶和異淀粉酶主要作用于淀粉分子的α-1,6-糖苷鍵,脫去淀粉分支結(jié)構(gòu)(圖1、表3)。Kittisuban 等[7]用分支酶處理蠟質(zhì)玉米淀粉,各支鏈淀粉簇中由α-1,4-糖苷鍵連接的片段被水解以釋放簇單元,Mw從1.78×109g/mol 降低至9.59×104g/mol。隨著Mw的降低,淀粉鏈長分布向聚合度較低的短鏈轉(zhuǎn)變,淀粉粘度、消化率降低。Xia 等[75]通過分支酶處理馬鈴薯淀粉,α-1,4-糖苷鍵斷裂,淀粉短鏈比例增多,分支度增加,Mw從1.13×106g/mol 降低到1.10×105g/mol。隨著Mw的降低,短鏈淀粉更容易形成穩(wěn)定的雙螺旋結(jié)構(gòu),淀粉熱穩(wěn)定性增強(qiáng),消化率降低。
綜上所述,酶調(diào)控淀粉Mw的過程中,水解葡萄糖特定位置的分子鏈,造成α-1,4-糖苷鍵、α-1,6-糖苷鍵的斷裂,降低淀粉Mw,一定程度上可以更好的控制反應(yīng)的發(fā)生。但是通過酶法調(diào)控淀粉Mw時(shí),由于淀粉處理工藝中溫度、處理時(shí)間等不確定因素,可能會(huì)使酶的作用功能受到限制。
多重技術(shù)調(diào)控是指通過兩種或兩種以上技術(shù)對淀粉Mw進(jìn)行處理。近年來,使用多重技術(shù)對淀粉Mw進(jìn)行調(diào)控是目前研究領(lǐng)域所關(guān)注的方向,可以優(yōu)化單一調(diào)控技術(shù)對淀粉Mw的影響,更大程度地改善淀粉的性質(zhì)和用途。Shen 等[76]用超聲波-等離子體聯(lián)合處理綠豆支鏈淀粉,淀粉顆粒表面出現(xiàn)凹槽,無定形區(qū)域被破壞,短程有序度降低,支鏈淀粉的長鏈解聚,Mw從6.5×106g/mol 降低到2.4×104g/mol。隨著淀粉Mw降低,形成的短鏈淀粉更容易形成雙螺旋結(jié)構(gòu),淀粉的溶解度、膨脹力、糊化起始溫度、峰值溫度增大,顆粒穩(wěn)定性好,凝膠能力優(yōu)異。Ge 等[77]通過等離子體-干熱聯(lián)合處理紅豆支鏈淀粉,導(dǎo)致α-1,4-糖苷鍵和α-1,6-糖苷鍵斷裂,Mw從1.45×108g/mol 降低到3.51×107g/mol。隨著Mw降低,淀粉的熱穩(wěn)定性增強(qiáng),消化率降低。通過多重技術(shù)調(diào)控,可以更大程度地改變淀粉Mw。除此以外,其他多重調(diào)控技術(shù)也會(huì)改變淀粉Mw(表4)。
綜上所述,物理、化學(xué)、生物技術(shù)調(diào)控均能使淀粉Mw發(fā)生改變。物理調(diào)控通過熱力學(xué)、光學(xué)、電學(xué)等處理改變淀粉Mw,處理過程中溫度、功率、時(shí)間的把控尤為重要,是一種較為方便、副產(chǎn)物較少、安全健康的方法?;瘜W(xué)調(diào)控淀粉Mw時(shí),引入的官能團(tuán)可以直接與淀粉分子鏈中特定位置的羥基發(fā)生反應(yīng),反應(yīng)速度快、成本低,但處理過程中酸堿、次氯酸鹽、磷酸鹽等化學(xué)試劑的使用會(huì)形成大量廢水,污染環(huán)境。生物技術(shù)調(diào)控根據(jù)各個(gè)酶的作用位點(diǎn)不同改變淀粉Mw,且調(diào)控過程中酶的專一性可以使副產(chǎn)物和副反應(yīng)最小化。相比較而言,物理和生物技術(shù)可能更有利于對淀粉Mw進(jìn)行調(diào)控。此外,由于單一的調(diào)控技術(shù)可能達(dá)不到預(yù)期效果,所以不同調(diào)控技術(shù)的結(jié)合使用是目前研究的重點(diǎn),其相應(yīng)的作用機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。因此,未來淀粉Mw的研究重心還需要從多重調(diào)控技術(shù)的作用機(jī)制、應(yīng)用范圍等方面展開:(1)研究多重調(diào)控技術(shù)不同處理工藝對淀粉Mw的影響,從加工角度精準(zhǔn)獲得不同Mw的淀粉;(2)研究多重調(diào)控技術(shù)改變淀粉Mw的機(jī)理,Mw變化與物化性質(zhì)及應(yīng)用的相互關(guān)系,通過獲得一定Mw的淀粉來改善淀粉結(jié)構(gòu)、提高淀粉性能并擴(kuò)大其應(yīng)用范圍。