劉風(fēng)波 馮曉東 連亮亮
摘? 要:文章對(duì)鵪鶉疑似大腸桿菌病進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室確診,通過藥敏試驗(yàn)篩選敏感藥物,并結(jié)合綜合防制措施以預(yù)防鵪鶉大腸桿菌病。
關(guān)鍵詞:鵪鶉大腸桿菌??;實(shí)驗(yàn)室確診;藥敏試驗(yàn)
中圖分類號(hào):S854.5+3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A 文章編號(hào):1001-0769(2024)02-0068-03
鵪鶉大腸桿菌病是由埃希大腸桿菌(Escherichi coli)感染鵪鶉引起的一種常見病。該病一年四季均可發(fā)生,可感染各年齡段鵪鶉,一般6月齡后的鵪鶉發(fā)病率較高,雖不會(huì)引起大群暴發(fā)性死亡,但對(duì)產(chǎn)蛋率及蛋品質(zhì)影響很大,加之反復(fù)發(fā)作,往往會(huì)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失[1]。大腸桿菌廣泛分布于自然界中,畜禽都易感染。該病主要通過消化道感染鵪鶉,發(fā)生的主要原因是飼養(yǎng)密度過大,籠舍消毒不徹底,衛(wèi)生條件差。飼養(yǎng)管理不善,飼養(yǎng)環(huán)境長(zhǎng)期潮濕不潔,氣溫突變,過度炎熱及疫苗接種造成的應(yīng)激反應(yīng),都能誘發(fā)該病和加重病情;某些疾病,如新城疫、呼吸道病,常并發(fā)或繼發(fā)感染。
1? 材料和方法
1.1 病例來源
本地養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的2月齡鵪鶉發(fā)病,送檢時(shí)已死亡。問診得知鵪鶉?yán)咨〖S,產(chǎn)蛋率下降,產(chǎn)軟殼蛋、破殼蛋增多,戶主曾滴鼻點(diǎn)眼接種新城疫疫苗,并在飲水中添加環(huán)丙沙星進(jìn)行控制,不見好轉(zhuǎn)。
臨床上,發(fā)病鵪鶉消瘦,上下眼瞼腫脹,兩腿前后伸張,肛門周圍絨毛污穢不堪。剖檢發(fā)現(xiàn),尸體眼前房積膿;肝腫脹,呈暗紅色;肝臟、心臟表面均有一層灰白色纖維素性薄膜覆蓋;膽囊腫大,膽汁充盈;小腸脹氣,黏膜增厚;肺腸充血出血;輸卵管腫脹;卵巢變形。
1.2 主要試劑
麥康凱瓊脂,普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂,伊紅美藍(lán)瓊脂,三糖鐵瓊脂,甲基紅試劑,葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基,營(yíng)養(yǎng)肉湯,革蘭染液。藥敏片包括阿莫西林(amoxicillin,AMX)、氨芐西林(ampicillin,SU)、頭孢噻肟(ceftizoxime,CTX)、頭孢他啶(ceftazidime,CED)、頭孢曲松鈉(ceftriaxone sodium,CFX)、卡那霉素(kanamycin,K)、慶大霉素(gentamicin,GM)、氟苯尼考(florfenicol,F(xiàn)F)、泰樂菌素(tylosin,TL)、硫酸紅霉素(erythromycin sulfate,E)、利福平(rifampicin,RA)、氧氟沙星(ofloxacin,OFL)、諾氟沙星(norfloxacin,NOR)、環(huán)丙沙星(ciprofloxacin,CIP)、恩諾沙星(enophthalmin,ENR),均為自制[1],密封低溫保存?zhèn)溆谩?/p>
1.3 細(xì)菌的分離培養(yǎng)
無菌條件下,取發(fā)病鵪鶉的肝、心臟切片樣本,分別劃線接種于普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、伊紅美藍(lán)瓊脂平板及營(yíng)養(yǎng)肉湯,于37 ℃培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果。
1.4 涂片染色鏡檢
挑取普通瓊脂平板上可疑菌落涂布于載玻片上,革蘭染色,在油鏡下觀察菌落形態(tài)。
1.5 生化試驗(yàn)[2]
1.5.1 糖類分解試驗(yàn)
挑取普通瓊脂平板上可疑菌落,隨后接種于各種糖培養(yǎng)基上,在37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)24 h,觀察結(jié)果。
1.5.2 硫化氫試驗(yàn)
挑取普通瓊脂平板上可疑菌落,接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯中,置于37 ℃恒溫箱培養(yǎng)6~8 h。用無菌接種針蘸取純培養(yǎng)物,沿管壁作穿刺三糖鐵培養(yǎng)基,37 ℃下培養(yǎng)24 h,隨后觀察培養(yǎng)基顏色變化。
1.5.3 甲基紅試驗(yàn)
取1.5.2培養(yǎng)的肉湯培養(yǎng)物,接種于葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中,在37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)24 h,取出后加甲基紅試劑3滴,觀察培養(yǎng)基顏色變化。
1.5.4 運(yùn)動(dòng)力檢查
滅菌接種針蘸取1.5.2培養(yǎng)的肉湯培養(yǎng)物,垂直刺進(jìn)半固體培養(yǎng)基的瓊脂柱中間直至管底,置37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)18 h,而后取出檢查。
1.6 動(dòng)物試驗(yàn)
選取體重18~20 g小白鼠4只做動(dòng)物試驗(yàn)。挑取普通瓊脂平板上的單個(gè)菌落接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯中,置于37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)6~8 h,取1 mL菌液,用生理鹽水10倍稀釋,每只小鼠腹腔接種0.2 mL稀釋的菌液,飼養(yǎng)觀察結(jié)果。
1.7 藥敏試驗(yàn)
采用紙片瓊脂擴(kuò)散法(Baner-Kirby建立的K-B法)[3]進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。
2? 試驗(yàn)結(jié)果
2.1 細(xì)菌培養(yǎng)特性
普通瓊脂平板上長(zhǎng)出形態(tài)凸起、光滑濕潤(rùn)、灰白色、半透明、邊緣整齊、有特殊的糞便樣臭味的大菌落。麥康凱瓊脂平板上長(zhǎng)出粉紅色大菌落,稍凸起,表面光滑濕潤(rùn),菌落邊緣波狀。伊紅美藍(lán)瓊脂平板上為圓形藍(lán)紫色菌落,中心為紫黑色帶金屬光澤。肉湯呈均勻渾濁,管底有黏液樣沉淀物。
2.2 染色鏡檢結(jié)果
油鏡下觀察到單個(gè)散在的兩端鈍圓的革蘭陰性短桿菌。
2.3 生化培養(yǎng)
2.3.1 分離菌發(fā)酵特點(diǎn)
分離菌能發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、乳糖、木糖、甘露醇,產(chǎn)酸產(chǎn)氣,產(chǎn)生靛基質(zhì),不發(fā)酵蔗糖。
2.3.2 培養(yǎng)基變化
培養(yǎng)基顏色無變化,未產(chǎn)生硫化氫。
2.3.3 培養(yǎng)液變化
培養(yǎng)液為黃色,甲基紅試驗(yàn)為陰性。
2.3.4 運(yùn)動(dòng)力觀察
檢查見由穿刺線向四周擴(kuò)散生長(zhǎng),周圍的培養(yǎng)基變渾濁,該菌具有運(yùn)動(dòng)力。
2.4 動(dòng)物試驗(yàn)
小鼠接種菌液后,在18 h內(nèi)全部死亡。取死亡小鼠心臟和肝臟切片樣本、腹水樣本,制成抹片,革蘭染色鏡檢,并將樣本劃線接種于麥康凱瓊脂平板上,置于37 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果。鏡檢結(jié)果為兩端鈍圓的革蘭陰性短小桿菌,麥康凱瓊脂培養(yǎng)基表面有粉紅色、稍凸起、表面光滑濕潤(rùn)、菌落邊緣波狀的大菌落。與從原發(fā)病鵪鶉的樣本中分離出的菌株形態(tài)一致。綜上試驗(yàn)結(jié)果可判斷,從原發(fā)病鵪鶉中分離出的細(xì)菌為致病性大腸桿菌[4]。
2.5 藥敏試驗(yàn)結(jié)果
藥敏試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。按以下標(biāo)準(zhǔn)判定[5]:抑菌圈直徑大于20 mm為極度敏感;抑菌圈直徑大于15 mm且不超過20 mm為高度敏感;抑菌圈直徑大于10 mm且不超過15 mm為中度敏感;抑菌圈直徑大于0且不超過10 mm為耐藥。
3? 分析與討論
3.1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析
本研究表明,引起本地養(yǎng)殖戶2月齡鵪鶉發(fā)病的致病性大腸桿菌對(duì)頭孢噻肟(CTX)、頭孢曲松鈉(CFX)、慶大霉素(GM)和頭孢他啶(CED)極度敏感,對(duì)氟苯尼考(FF)高度敏感,對(duì)阿莫西林(AMX)、氨芐西林(SU)、卡那霉素(K)、泰樂菌素(TL)、硫酸紅霉素(E)、利福平(RA)、氧氟沙星(OFL)、諾氟沙星(NOR)、環(huán)丙沙星(CIP)和恩諾沙星(ENR)耐藥。因此,頭孢菌素類抗生素、胺基糖苷類抗生素、氯霉素類抗生素可作為治療藥物。
3.2 大腸桿菌病發(fā)病原因分析
3.2.1 環(huán)境因素
飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生條件差、管理不當(dāng)與大腸桿菌病有著密切的關(guān)系。當(dāng)舍內(nèi)空氣不好,陰暗潮濕,塵埃過重,飼料飲水等被大腸桿菌污染時(shí),易使大腸桿菌通過呼吸道和消化道感染鵪鶉,從而引起發(fā)病。部分養(yǎng)殖戶未對(duì)設(shè)施進(jìn)行消毒,或者對(duì)消毒工作不重視,大量重復(fù)地濫用藥物,致耐藥菌株產(chǎn)生。大多數(shù)養(yǎng)殖戶在鵪鶉群發(fā)病時(shí),便“病急亂投醫(yī)”,也不考慮藥物是否有效,或者一旦有效,便長(zhǎng)時(shí)間大量使用同一種抗菌藥,結(jié)果導(dǎo)致大腸桿菌耐藥性增加,鵪鶉的免疫力急劇下降,最后不但不能治療疾病,反而造成耐藥菌株種類超標(biāo)[6],造成大腸桿菌的發(fā)生與流行。
3.2.2 應(yīng)激因素
在正常情況下鵪鶉的腸道內(nèi)存在大量的大腸桿菌,舍內(nèi)也廣泛存在大腸桿菌,當(dāng)飼養(yǎng)管理、環(huán)境衛(wèi)生條件變差,特別是鵪鶉群受到環(huán)境因素的影響,如高溫,轉(zhuǎn)群,驚嚇,飼養(yǎng)密度過大,突然更換飼料,機(jī)體內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變而使抵抗力下降,導(dǎo)致大腸桿菌病發(fā)生。
參考文獻(xiàn)
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