王欣　董自亮　李紅亮　吳瑞軍　覃瑤　彭濤　秦少容　羅維早

【摘 要】目的：建立經(jīng)典名方金水六君煎物質(zhì)基準(zhǔn)中半夏和陳皮的薄層鑒別方法。方法：以半夏對(duì)照藥材為對(duì)照，對(duì)金水六君煎中半夏進(jìn)行薄層鑒別研究，以橙皮苷和陳皮對(duì)照藥材為對(duì)照，對(duì)金水六君煎中陳皮進(jìn)行薄層鑒別研究，并對(duì)其進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果：建立的薄層色譜法能鑒別出半夏和陳皮，斑點(diǎn)對(duì)應(yīng)較好，陰性無(wú)干擾，方法學(xué)考察結(jié)果顯示，方法適應(yīng)性良好。結(jié)論：本法簡(jiǎn)單可行、結(jié)果可靠、重復(fù)性好，可作為金水六君煎物質(zhì)基準(zhǔn)的質(zhì)量控制方法。

【關(guān)鍵詞】金水六君煎；半夏；陳皮；橙皮苷；薄層色譜

【中圖分類號(hào)】

R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2024）06-0047-06

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.06.zgmzmjyyzz202406011

Study on the Thin Layer Identification of Pinelliae Rhizoma and Citri Reticulatae

Pericarpium in the Material Reference of Jinshui Liujun Decoction

WANG Xin^1，2DONG Ziliang^1，3LI Hongliang³WU Ruijun²QIN Yao²PENG Tao³QIN Shaorong²LUO Weizao^1，2*

1.Chongqing Institute of Chinese Materia Medica，Chongqing 400065，China;

2.Taiji Group Co.，Ltd.，Chongqing 401147，China;

3.Taiji Group Chongqingfulin Pharmaceutical Co.，LTD.，Chongqing 400800，China

Abstract：Objective Establishing the TLC identification methods of Pinelliae Rhizoma and Citri Reticulatae Pericarpium in the material reference of classical Jinshui Liujun Decoction （JLD）.Methods The TLC method for the identification of Pinelliae Rhizoma in JLD was established by using Pinelliae Rhizoma as the reference drug;A TLC method was established for the identification of Citri Reticulatae Pericarpium in JLD with hesperidin and Citri Reticulatae Pericarpium as the control，the methods were verified.Results The established thin-layer chromatography method can identify Pinelliae Rhizoma and Citri Reticulatae Pericarpium，and have the advantages of better spots on TLC with the same color，no interference in negative control.The results of the methodological investigation showed that the method had good adaptability.Conclusion The methods are simple and feasible，with high reproducibility，can be used as a quality control method of the material reference of JLD.

Key words：Jinshui Liujun Decoction（JLD）;Pinelliae Rhizoma;Citri Reticulatae Pericarpium;Hesperidin;Thin-layer Chromatography （TLC）

金水六君煎出自明代張景岳的《景岳全書》，為“新方八陣·和陣”首劑。全方由當(dāng)歸、熟地、陳皮、半夏、茯苓、炙甘草和生姜七味藥組成，具有潤(rùn)枯燥濕、益陰化痰的功效，主治肺腎虛寒、水泛為痰、或年邁陰虛、血?dú)獠蛔?、外受風(fēng)寒、咳嗽嘔惡、喘逆多痰^［1-2］。

經(jīng)典名方物質(zhì)基準(zhǔn)，是指以古代醫(yī)籍中記載的經(jīng)典名方制備方法為依據(jù)制備中藥藥用物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)，除成型工藝外，其余制備方法應(yīng)與古代醫(yī)籍記載基本一致^［3-4］。經(jīng)典名方物質(zhì)基準(zhǔn)是連接經(jīng)典名方傳統(tǒng)制法與現(xiàn)代生產(chǎn)工藝的中間過(guò)渡對(duì)照物^［5］。建立和完善金水六君煎物質(zhì)基準(zhǔn)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可為金水六君煎復(fù)方制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供技術(shù)支撐。

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)金水六君煎的化學(xué)成分、藥理活性和臨床應(yīng)用研究廣泛，但對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的報(bào)道較少。目前，有文獻(xiàn)報(bào)道了金水六君煎及其物質(zhì)基準(zhǔn)中熟地、炙甘草和生姜的薄層鑒別方法學(xué)^［6-7］，尚未見(jiàn)金水六君煎物質(zhì)基準(zhǔn)中半夏和陳皮的系統(tǒng)薄層鑒別方法學(xué)研究。現(xiàn)有關(guān)于金水六君煎中半夏和陳皮的薄層鑒別方法，存在薄層樣品中干擾雜質(zhì)多、展開(kāi)劑有劇毒物質(zhì)苯、薄層展開(kāi)效果欠佳等問(wèn)題。

為此，文章建立金水六君煎物質(zhì)基準(zhǔn)中半夏和陳皮的薄層鑒別方法，

以期為金水六君煎的開(kāi)發(fā)和質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 AE240萬(wàn)分之一電子天平；XSE205十萬(wàn)分之一電子天平；KQ-500DE數(shù)控超聲波清洗器；CAMAG薄層色譜掃描儀。

1.2 試劑 石油醚（60～90 ℃）（20190301）、環(huán)己烷（20190601）、甲苯（20200301）、三氯甲烷（20180501）、乙酸乙酯（20190901、20191001）、丙酮（20150820）、無(wú)水乙醇（20200101）、甲醇（20200101）、甲酸（201801101），由重慶川東化工（集團(tuán)）有限公司提供，均為分析純；水為重蒸水。

1.3 耗材 金水六君煎物質(zhì)基準(zhǔn)樣品（批號(hào)：JS001～JS020）、缺半夏陰性物質(zhì)基準(zhǔn)樣品、缺陳皮陰性物質(zhì)基準(zhǔn)樣品，均由太極集團(tuán)涪陵制藥廠提供。半夏對(duì)照藥材（121272-201806）、陳皮對(duì)照藥材（120969-201510）、橙皮苷（110721-201617）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。硅膠薄層板購(gòu)自青島譜科分離材料有限公司和海浪硅膠干燥劑有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 金水六君煎物質(zhì)基準(zhǔn)的制備 根據(jù)國(guó)家中醫(yī)藥管理局聯(lián)合國(guó)家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《古代經(jīng)典名方關(guān)鍵信息表（25首方劑）》，取熟地黃14.92 g、陳皮5.60 g、炒甘草3.73 g、當(dāng)歸、茯苓、清半夏各7.46 g、生姜5.00 g，加水400 mL，煎煮至140～160 mL。結(jié)合課題組前期預(yù)試驗(yàn)，按處方量稱取藥材，置于陶瓷鍋中，加水400 mL，浸泡30 min，武火加熱至沸騰，文火繼續(xù)加熱約60 min，趁熱濾過(guò)，濾液放涼，冷凍干燥，得物質(zhì)基準(zhǔn)凍干粉。

2.2 半夏的薄層鑒別

2.2.1 溶液的制備 供試品溶液：取金水六君煎物質(zhì)基準(zhǔn)粉末10.0 g（批號(hào)：JS001），加乙酸乙酯超聲提取2次（50 mL、25 mL），每次超聲時(shí)間 30 min，濾過(guò)，合并乙酸乙酯液，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解。

半夏對(duì)照藥材溶液：取半夏對(duì)照藥材1.0 g，加乙酸乙酯25 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解。

陰性溶液：按照金水六君煎配方稱取除半夏外的其他藥材，按照“2.1”項(xiàng)下金水六君煎物質(zhì)基準(zhǔn)制備方法，制成缺半夏陰性物質(zhì)基準(zhǔn)。取缺半夏陰性物質(zhì)基準(zhǔn)適量，按“2.2.1”項(xiàng)供試品溶液制備方法，制成缺半夏陰性溶液。

2.2.2 薄層色譜條件 照薄層色譜法^［8］試驗(yàn)，吸取“2.2.1”項(xiàng)下供試品溶液和缺半夏陰性溶液各10 μL，半夏對(duì)照藥材溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯-丙酮-甲酸（30∶6∶4∶0.5）為展開(kāi)劑，預(yù)飽和20 min，展開(kāi)，取出，晾干，噴以香草醛硫酸試液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；陰性對(duì)照溶液在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，無(wú)相同顏色的斑點(diǎn)（圖1）。

1.半夏供試品溶液；2.半夏對(duì)照藥

材溶液；3.缺半夏陰性溶液

2.2.3 薄層板的考察 取硅膠G薄層板，分別按“2.2.2 薄層色譜條件”試驗(yàn)，兩種薄層板的薄層色譜信息基本一致（圖2），選定青島譜科的硅膠G薄層板。

2.2.4 供試品溶液點(diǎn)樣量考察 供試品溶液的點(diǎn)樣量分別為2 μL、6 μL、10 μL、14 μL，按“2.2.2 薄層色譜條件”試驗(yàn)（圖3）。綜合考慮，供試品溶液點(diǎn)樣量為10 μL。

2.2.5 展開(kāi)環(huán)境的耐用性考察 不同溫度的比較：分別在4 ℃、25 ℃和40 ℃，預(yù)飽和20 min，展開(kāi)，其余條件同“2.2.2 薄層色譜條件”。結(jié)果表明，溫度在4～40 ℃范圍內(nèi)，對(duì)薄層鑒別無(wú)明顯影響（圖4）。

不同濕度的比較：在室溫25 ℃，分別在相對(duì)濕度75.3%、43.2%和18.0%預(yù)飽和20 min，展開(kāi)，其余條件同“2.2.2 薄層色譜條件”。結(jié)果表明，相對(duì)濕度在18.0%～75.3%范圍內(nèi)，對(duì)薄層鑒別無(wú)明顯影響（圖5）。

薄層鑒別方法學(xué)試驗(yàn)的結(jié)果表明，金水六君煎物質(zhì)基準(zhǔn)中半夏的薄層鑒別方法重現(xiàn)性良好，分離效果較好，斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.2.6 20批樣品的薄層鑒別 按“2.2.2 薄層色譜條件”試驗(yàn)，對(duì)20批金水六君煎物質(zhì)基準(zhǔn)進(jìn)行薄層鑒別，20批供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖6、圖7）。

2.3 陳皮的薄層鑒別

2.3.1 溶液的配制 供試品溶液：取金水六君煎物質(zhì)基準(zhǔn)粉末10.0 g（批號(hào)：JS001），加三氯甲烷50 mL，超聲30 min，濾過(guò)，棄去三氯甲烷液，殘?jiān)鼡]盡三氯甲烷，加無(wú)水乙醇超聲提取2次（50 mL，25 mL），每次30 min，濾過(guò)，合并無(wú)水乙醇液，濾液揮干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1 mL使溶解。

陳皮對(duì)照藥材溶液：另取陳皮對(duì)照藥材0.50 g，加三氯甲烷50 mL，超聲30 min，濾過(guò)，棄去三氯甲烷液，殘?jiān)鼡]盡三氯甲烷，加無(wú)水乙醇25 mL，超聲30 min，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1 mL使溶解。

對(duì)照品溶液：另取橙皮苷對(duì)照品，加甲醇制成飽和溶液。

陰性溶液：按金水六君煎配方稱取除陳皮外的其他藥材，按“2.1”項(xiàng)下金水六君煎物質(zhì)基準(zhǔn)制備方法，制成缺陳皮陰性物質(zhì)基準(zhǔn)。取缺陳皮陰性物質(zhì)基準(zhǔn)適量，按“2.3.1”項(xiàng)供試品溶液制備方法，制成缺陳皮陰性溶液。

2.3.2 薄層色譜條件 照薄層色譜法^［8］試驗(yàn)，吸取“2.3.1”項(xiàng)下供試品溶液和缺陳皮陰性溶液各10 μL、對(duì)照藥材溶液2 μL和對(duì)照品溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13）為展開(kāi)劑，預(yù)飽和20 min，展至約3 cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶1）的上層溶液為展開(kāi)劑，預(yù)飽和20 min，展至約8 cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜和對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)（圖8）。

2.3.3 不同薄層板考察 取0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板，按“2.3.2 薄層色譜條件”試驗(yàn)，種薄層板的薄層色譜信息基本一致，不影響該方法檢視結(jié)果，選定青島譜科0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板（圖9）。

2.3.4 供試品溶液點(diǎn)樣量考察 供試品溶液點(diǎn)樣量分別為2 μL、6 μL、10 μL、14 μL，按“2.3.2 薄層色譜條件”試驗(yàn)（圖10）。綜合考慮，供試品溶液點(diǎn)樣量為10 μL。

2.3.5 展開(kāi)環(huán)境的耐用性考察 不同溫度的比較：分別在4 ℃、25 ℃和40 ℃，預(yù)飽和20 min，展開(kāi)，其余條件同“2.3.2 薄層色譜條件”試驗(yàn)。結(jié)果表明，溫度在4～40 ℃范圍內(nèi)，對(duì)薄層鑒別無(wú)明顯影響（圖11）。

不同濕度的比較：在室溫25 ℃下，分別在相對(duì)濕度75.3%、43.2%和18.0%預(yù)飽和20 min，展開(kāi)，其余條件同“2.3.2 薄層色譜條件”試驗(yàn)。結(jié)果表明，相對(duì)濕度在18.0%～75.3%范圍內(nèi)，對(duì)薄層鑒別無(wú)明顯影響（圖12）。

薄層鑒別方法學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明，金水六君煎物質(zhì)基準(zhǔn)中陳皮的薄層鑒別方法重現(xiàn)性良好，分離效果好，斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.3.6 20批樣品的薄層鑒別 按“2.3.2 薄層色譜條件”試驗(yàn)，對(duì)20批金水六君煎物質(zhì)基準(zhǔn)進(jìn)行薄層鑒別，20批供試品色譜中，在與橙皮苷色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)（圖13）。

3 討論

金水六君煎處方中，半夏為佐藥，辛溫，具有燥濕化痰的功效^［9］?；亓鞣ㄖ苽浒胂谋訕悠?，操作繁瑣，提取溶媒三氯甲烷和展開(kāi)劑苯均毒性較大^［6］，不利于環(huán)保。該研究采用超聲法提取樣品，提取溶媒和展開(kāi)劑均換成低毒性溶劑，方法簡(jiǎn)便可行，所得供試品溶液重現(xiàn)性較好。結(jié)果顯示，半夏的薄層分離效果較好，主斑點(diǎn)清晰、Rf值適中。

陳皮為佐藥，苦辛溫散，具有消水化痰的功效^［9］。橙皮苷為陳皮的質(zhì)量標(biāo)志物之一^［10］，具有抗氧化、抗炎、促胃動(dòng)力作用等藥理活性^［11-14］，橙皮苷是陳皮藥材薄層鑒別的特征性成分。本實(shí)驗(yàn)先用三氯甲烷超聲提取雜質(zhì)，再用無(wú)水乙醇超聲提取橙皮苷，供試品溶液重現(xiàn)性好。陳皮薄層鑒別經(jīng)二次展開(kāi)，各斑點(diǎn)分離良好，主斑點(diǎn)清晰。

藁本內(nèi)酯和阿魏酸為當(dāng)歸的化學(xué)成分。藁本內(nèi)酯具有揮發(fā)性，穩(wěn)定性較差，在金水六君煎物質(zhì)基準(zhǔn)樣品和后期復(fù)方制劑制備、儲(chǔ)存時(shí)，易丟失，金水六君煎物質(zhì)基準(zhǔn)的薄層鑒別未檢測(cè)出藁本內(nèi)酯；阿魏酸是當(dāng)歸藥材薄層鑒別的特征性成分和含量測(cè)定的指標(biāo)成分，但金水六君煎中當(dāng)歸和陳皮藥材均含有阿魏酸，上述兩種成分均不能作為當(dāng)歸藥材的薄層鑒別成分。在2020年版《中國(guó)藥典》（一部）茯苓、含茯苓藥材的成方制劑中，茯苓藥材的薄層鑒別均以茯苓為對(duì)照藥材，乙醚為提取溶媒，提取脂溶性成分。金水六君煎為水煎液，茯苓中脂溶性成分在其水煎液中含量極低，薄層試驗(yàn)未檢測(cè)出。后期，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注金水六君煎及其藥材（當(dāng)歸、茯苓）的化學(xué)成分研究進(jìn)展，開(kāi)展薄層鑒別試驗(yàn)，力爭(zhēng)找到金水六君煎中當(dāng)歸和茯苓的薄層鑒別特征性成分。

4 結(jié)論

本文建立的金水六君煎中半夏和陳皮的薄層鑒別方法，藥材特征斑點(diǎn)清晰，陰性無(wú)干擾。此方法簡(jiǎn)單可行，重復(fù)性良好，為金水六君煎的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)完善和提升提供參考。

參考文獻(xiàn)

［1］張景岳.景岳全書［M］.5版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1984：986.

［2］董自亮，李紅亮，羅維早，等.經(jīng)典名方金水六君煎的古代文獻(xiàn)分析［J］.中國(guó)中藥雜志，2020，45（23）：5639-5644.

［3］國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.關(guān)于發(fā)布古代經(jīng)典名方中藥復(fù)方制劑簡(jiǎn)化注冊(cè)審批管理的規(guī)定的公告［EB/OL］.http：//www.nmpa.gov.cn/WS04/CL2093/228247.html，2018-05-29.

［4］國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.公開(kāi)征求古代經(jīng)典名方中藥復(fù)方制劑及其物質(zhì)基準(zhǔn)申報(bào)資料要求（ 征求意見(jiàn)稿）意見(jiàn)［EB/OL］.http：//www.nmpa.gov.cn/WS04/CL2101/335926.html，2019-03-22.

［5］代云桃，勒如娜，吳治麗，等.基于標(biāo)準(zhǔn)湯劑（物質(zhì)基準(zhǔn)）的經(jīng)典名方制備工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2020，26（2）：164-174.

［6］胡小剛.金水六君煎質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［D］.廣州：暨南大學(xué)，2001.

［7］王欣，董自亮，禹奇男，等.經(jīng)典名方金水六君煎物質(zhì)基準(zhǔn)的薄層鑒別方法學(xué)研究［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2022，18（12）：58-67.

［8］國(guó)家藥典委員會(huì)編.2020年版中華人民共和國(guó)藥典（四部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2020：59-60.

［9］馬向梅，丁元慶.張介賓金水六君煎釋義［J］.山東中醫(yī)雜志，2013，32（6）：436.

［10］許姍姍，許浚，張笑敏，等.常用中藥陳皮、枳實(shí)和枳殼的研究進(jìn)展及質(zhì)量標(biāo)志物的預(yù)測(cè)分析［J］.中草藥，2018，49（1）：35-44.

［11］HUANG Y S，HO S C.Polymethoxy flavones are responsible for the anti-inflammatory activity of citrus fruit peel ［J］.Food Chem，2010，119（3）：868-873.

［12］YI Z B，YU Y，LIANG Y Z，et al.In vitro antioxidant and antimicrobial activities of the extract of Pericarpium Citri Reticulatae of a new citrus cultivar and its main flavonoids ［J］.LWT-Food Sci Technol，2008，41（4）：597-603.

［13］李慶耀，梁生林，褚洪標(biāo)，等.陳皮促胃腸動(dòng)力有效部位的篩選研究［J］.中成藥，2012，34（5）：941-943.

［14］DU Q，CHEN H.The methoxyflavones in Citrus reticulata Blanco cv.Ponkan and their antiproliferative activity against cancer cells ［J］.Food Chem，2010，119（2）：567-572.

（收稿日期：2023-07-03 編輯：陶希睿）