傅建　趙燕云　劉艷飛　李美位　張前飛

【摘 要】目的：為進(jìn)一步提升貴州南瓜蒂藥材及飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：根據(jù)《中國(guó)藥典》2020版第四部通用的測(cè)定方法進(jìn)行試驗(yàn)，運(yùn)用通則0832水分測(cè)定的方法測(cè)定南瓜蒂飲片，運(yùn)用通則2303灰分測(cè)定法對(duì)南瓜蒂飲片的總灰分與酸不溶性灰分進(jìn)行測(cè)定，運(yùn)用通則0502薄層色譜法定性分析南瓜蒂中豆甾醇，運(yùn)用通則0512高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法（HPLC-ELSD）測(cè)定南瓜蒂中豆甾醇的含量。結(jié)果：貴州幾個(gè)不同地區(qū)南瓜蒂水分含量為7.401%～11.541%，測(cè)得其總灰分含量為3.142%～4.277%，酸不溶性灰分含量為0.7298%～1.141%，南瓜蒂中豆甾醇的含量為0.0361～0.1677 μg/g。結(jié)論：通過測(cè)定貴州不同地區(qū)南瓜蒂水分、總灰分、酸不溶性灰分、豆甾醇的含量，為南瓜蒂的藥材質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】南瓜蒂；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；化學(xué)成分；含量測(cè)定

【中圖分類號(hào)】

R284.2 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2024）06-0053-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.06.zgmzmjyyzz202406012

Study on Improving the Quality Standard of Guizhou Cucurbita moschata

FU Jian¹ZHAO Yanyun¹LIU Yanfei²LI Meiwei²ZHANG Qianfei^2*

1.School of Pharmacy，Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550025，China；

2.Guiyang Food and Drug Inspection and Testing Center，Guiyang 550081，China

Abstract：Objective To further improve the quality standard of Guizhou Cucurbita moschata.Methods The moisture，total ash content and acid insoluble ash content of Guizhou Cucurbita moschata were determined according to the 2020 edition of Chinese pharmacopoeia.The effective components in the samples was identified by TLC.The stigmasterol in the samples was determined by high performance liquid chromatography （HPLC-ELSD）.Results The moisture content of Guizhou Cucurbita moschata ranged from 7.401% to 11.541%，the total ash content ranged from 3.142% to 4.277%，and the acid insoluble ash content ranged from 0.716% to 1.141%.The stigmasterol was detected by TLC.The HPLC-ELSD was employed to determine the content of stigmasterol in Cucurbita moschata for the first time.The results showed that the content ranged from 0.0361-0.1677 g/g.Conclusion The moisture，total ash，acid insoluble ash and the content of stigmasterol can provide reference for quality control of Cucurbita moschata.

Key words：Cucurbita Moschata；Quality Standard；Chemical Constituents；Content Determination

南瓜蒂（Cucurbita moschata Duchesne ex Poir）始載于《本草綱目拾遺》^［1］，書中言“凡瓜熟皆蒂落，惟南瓜其蒂堅(jiān)牢不可脫”。南瓜蒂味苦，微甘，性平，歸肺、肝經(jīng)。有解毒消腫、利水、清熱安胎等功效，主要用于治療癰瘍，疔瘡，燙傷，也可用于瘡潰不斂，水腫腹水，保胎等證^［2］?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究^［3-5］表明南瓜蒂中的葫蘆素B和E具有廣泛的生物活性，如抗腫瘤、抗肝癌、抗胃癌、保肝及提高機(jī)體免疫力等。南瓜蒂收載于《上海市中藥材標(biāo)準(zhǔn)》 （1994年版）^［6］和《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》 （2003年版）^［7］。由于制定年代較早、基礎(chǔ)研究較為薄弱，只記載了其性狀、顯微鑒別等少數(shù)質(zhì)量檢查項(xiàng)，已無法滿足當(dāng)前的臨床用藥。為深入了解貴州南瓜蒂的物質(zhì)基礎(chǔ)，提升其藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，筆者對(duì)南瓜蒂水分、總灰分、酸不溶性灰分和豆甾醇進(jìn)行定性和定量研究，為提升貴州南瓜蒂的地方標(biāo)準(zhǔn)，提高用藥安全奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 儀器 高效液相色譜系統(tǒng)（美國(guó)安捷倫，Agilent Technologies 1260 InfintyⅡ）；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（美國(guó)格雷斯奧泰，Alltech 3300 ELSD）；超聲波清洗儀（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司，型號(hào)：sk8200H）；紫外儀（上海金達(dá)生化儀器有限公司）；電子天平（十萬分之一，島津，型號(hào)：AUW120D；萬分之一，上海菁海儀器有限公司，型號(hào)：FA2204N）。

1.2 材料 甲醇（色譜純，安徽天地高純?nèi)軇┯邢薰荆?；無水乙醇（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；硅膠板GF254（青島海洋化工）；鹽酸（優(yōu)級(jí)純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；乙酸乙酯、二氯甲烷（分析純，上海申博化工有限公司）；石油醚（分析純，重慶川東化工集團(tuán)有限公司）；磷鉬酸（分析純，科密歐化學(xué)試劑有限公司）；豆甾醇（上海詩(shī)丹德標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司，大于等于98%）；12批南瓜蒂藥材均采自貴州省不同區(qū)域，開陽(yáng)、德江、江口、綏陽(yáng)、扎佐、貴陽(yáng)，由貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室孫慶文教授鑒定為葫蘆科植物南瓜（Cucurbita moschata Duchesne ex Poir）的瓜蒂。1～12批次分別用S1～S12表示，藥材信息見表1。12批南瓜蒂批號(hào)為：20170901、20170902、20170903、20170904、20170905、20170906、20170907、20170908、20170909、20170910、20170911、20170912。

2 方法與結(jié)果

本文分別對(duì)上述12批次的南瓜蒂進(jìn)行水分、總灰分、酸不溶性灰分、薄層色譜定性鑒別和HPLC-ELSD定量研究。

2.1 水分含量測(cè)定 按照2020版《中國(guó)藥典》四部（通則0832）的水分測(cè)定法第二法（烘干法）^［8］。取供試品約2 g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過5 mm，精密稱定，開啟瓶蓋在 105 ℃ 干燥5 h，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，放冷30 min，精密稱定，再在上述溫度干燥1 h，放冷，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5 mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算供試品中含水量（%）。結(jié)果見表2。

2.2 總灰分和酸不溶性灰分 按《中國(guó)藥典》2020版第四部（通則2302）的灰分測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定，對(duì)總灰分、酸不溶性灰分進(jìn)行考察。測(cè)定用的南瓜蒂粉碎，通過二號(hào)篩，混合均勻后，取供試品約3.0 g，置熾灼恒重的坩堝中，稱定重量（精確至0.01 g），緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時(shí)，逐漸升高溫度至550 ℃，使完全灰化并至恒重，根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算供試品總灰分含量（%）。取上述灰分置于坩堝中，緩慢加入稀鹽酸約10 mL，用表面皿覆蓋坩堝，置水域上加熱10 min，表面皿用熱水5 mL沖洗，洗液放入坩堝中，用無灰濾紙濾過，坩堝內(nèi)的殘?jiān)盟从跒V紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止。濾渣連同濾紙移置同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓浚?jì)算供試品中算不溶性灰分的含量（%）。結(jié)果見表2。

2.3 豆甾醇定性分析（薄層色譜法）

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取10 mg豆甾醇對(duì)照品，加甲醇溶解并定容至10 mL，搖勻，制成1 mg/mL的豆甾醇溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備 取不同批號(hào)的南瓜蒂打粉后，過三號(hào)篩，分別精密稱取1.000 g置于具塞三角瓶中，分別加入20 mL甲醇，超聲1 h，補(bǔ)足減失的重量。精密量取續(xù)濾液25 μL，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，定容?0 mL，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3 定性分析 取上述制備好的對(duì)照品溶液與供試品溶液，分別點(diǎn)于硅膠GF254薄層板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯（20∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外儀下觀察后，噴以5%磷鉬酸試劑，用熱風(fēng)槍加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。觀察供試品與對(duì)照品斑點(diǎn)的位置。結(jié)果圖1所示，豆甾醇與南瓜蒂藥材在相同的Rf值處顯示對(duì)應(yīng)的斑點(diǎn)。初步確定南瓜蒂藥材及飲片中含有豆甾醇，為了進(jìn)一步證實(shí)，接下來將采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法進(jìn)行驗(yàn)證。

1.豆甾醇對(duì)照品；2.貴州扎佐；3.貴州綏陽(yáng)；4.貴州江口；

5.貴州貴陽(yáng)；6.貴州貴陽(yáng)；7.貴州貴陽(yáng)；8.貴州開陽(yáng)；

9.貴州開陽(yáng)；10.貴州開陽(yáng)；11.貴州德江；

12貴州德江；13.貴州德江

2.4 豆甾醇含量測(cè)定（高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法）

2.4.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱定，豆甾醇對(duì)照品2.58 mg，加甲醇溶解并定容至10 mL，即得。

2.4.2 供試品溶液的制備 按照“2.3.2 供試品溶液的制備”項(xiàng)下制備供試品。

2.4.3 色譜條件 InertustainC₁₈色譜柱（4.6 nm×250 nm，5 μm），檢測(cè)器為ELSD，流動(dòng)相為甲醇-水（90∶10），流速1.0 mL·min^-1，柱溫30 ℃，漂移管溫度80 ℃，氣體體積流量1.5 mL·min^-1，進(jìn)樣量20 μL。色譜圖如圖2所示。

2.4.4 線性關(guān)系考察 精密吸取不同體積的對(duì)照品2 μL、5 μL、10 μL、12 μL、15 μL、18 μL、20 μL，按照“2.4.3”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為Y=2.0×10⁷X-855.48 （r=0.9994）。結(jié)果表明進(jìn)樣量在0.050×10^-3～0.500×10^-3mg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。如圖3所示。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液20 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定其峰面積。結(jié)果：對(duì)照品峰面積的RSD為1.6％（n=6），說明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱定樣品6份，每份5.0 g，分別按照“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述“2.4.3”項(xiàng)色譜條件測(cè)定其峰面積。結(jié)果6份供試液含量的RSD為1.67%（n=6），含量平均值為0.0444 μg/g，說明樣品重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性 按照“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h進(jìn)行測(cè)定其峰面積。結(jié)果表明供試品的峰面積的RSD為1.22%，說明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱定已測(cè)得含量的樣品6份，每份2.5 g，分別精密加入一定體積的對(duì)照品溶液，再根據(jù)供試品制備的方法制備，按“2.4.3”項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明6份的平均回收率為98.95%，RSD為2.29%，回收率良好。結(jié)果見表3。

2.9 樣品含量測(cè)定 按照上述“2.3.2”供試品制備方法和“2.4.3”色譜條件下測(cè)定貴州不同地區(qū)南瓜蒂的含量。結(jié)果見表4。

采用HPLC-ELSD法測(cè)定了來自于貴州省12批南瓜蒂藥材中豆甾醇的含量。結(jié)果顯示貴州南瓜蒂中均含有豆甾醇，但是含量差別較大。

3 討論

3.1 指標(biāo)性成分的選擇 文獻(xiàn)報(bào)道南瓜蒂中安胎的主要成分是葫蘆素B^［9］，所以本文首先對(duì)貴州不同地區(qū)南瓜蒂的葫蘆素B進(jìn)行研究，但是通過TLC和HPLC檢測(cè)，并未從貴州南瓜蒂中檢測(cè)到葫蘆素B。與此同時(shí)，報(bào)道南瓜蒂中也含有β-谷甾醇^［10］，同樣通過TLC和HPLC-ELSD測(cè)定，也未從上述12批次貴州南瓜蒂中檢測(cè)到β-谷甾醇。因此最終選擇豆甾醇作為檢測(cè)對(duì)象。

3.2 薄層色譜法 分別考察了豆甾醇不同的展開劑系統(tǒng)，如氯仿-甲醇、石油醚-乙酸乙酯、二氯甲烷-乙酸乙酯，最后確定二氯甲烷-乙酸乙酯為最佳展開系統(tǒng)，并對(duì)不同的比例（4∶1，8∶1，20∶1）進(jìn)行了篩選，結(jié)果表明比例在20∶1時(shí)，Rf值適中。

3.3 高效液相色譜法 豆甾醇結(jié)構(gòu)中不含共軛系統(tǒng)，在紫外下不顯示熒光，故在TLC檢測(cè)時(shí)采用5%磷鉬酸顯色。ELSD是萜類、皂苷類等化合物較為適宜的檢測(cè)器^［11］，因此本試驗(yàn)選用ELSD器對(duì)其進(jìn)行測(cè)定，方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠、重復(fù)性好，可作為本品質(zhì)量控制方法之一。

綜上，本研究增加南瓜蒂藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中水分、灰分檢查，采用TLC定性分析豆甾醇，并首次采用HPLC-ELSD法測(cè)定貴州南瓜蒂中豆甾醇含量，完善南瓜蒂藥材質(zhì)量控標(biāo)準(zhǔn)，所建立的檢查限度合理，含量測(cè)定方法專屬性較強(qiáng)，精密度較高，重復(fù)性較好，為提升南瓜蒂藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

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（收稿日期：2023-07-10 編輯：陶希睿）