宋冬雪，李 璐，盧文珺，王雪艷

1.山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，山東 煙臺 264100；2.山東省高等學(xué)校中藥生產(chǎn)與質(zhì)量控制新技術(shù)研發(fā)中心，山東 煙臺 264100；3.黃河流域道地藥材產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展協(xié)同創(chuàng)新中心，山東 煙臺 264100；4.山東省糧油檢測中心，山東 濟南 250012

微生物發(fā)酵作為中藥加工的重要方法之一，在中國已有數(shù)千年的歷史。傳統(tǒng)的發(fā)酵工藝應(yīng)用廣泛但也有很多局限性。一是傳統(tǒng)發(fā)酵很難保證微生物適宜的生長繁殖條件，可能造成藥材發(fā)酵不徹底，甚至導(dǎo)致真菌死亡[1]；二是傳統(tǒng)發(fā)酵過程往往憑經(jīng)驗來判斷，導(dǎo)致發(fā)酵質(zhì)量穩(wěn)定性差、重復(fù)性差[2]；三是傳統(tǒng)的發(fā)酵工藝復(fù)雜繁瑣、周期長，不利于工業(yè)化生產(chǎn)。另外，在傳統(tǒng)發(fā)酵中也會因雜菌傳入，造成黃曲霉素等有毒物質(zhì)的產(chǎn)生，對神曲安全性產(chǎn)生影響[3]。針對以上問題，本文將對六神曲發(fā)酵工藝、化學(xué)成分、酶活力、微生物群落及藥理研究的現(xiàn)代化發(fā)展等進(jìn)行總結(jié)和分析，以期為提高曲類中藥質(zhì)量總結(jié)一些研究思路，促進(jìn)曲類中藥整體高質(zhì)量發(fā)展。

1 六神曲發(fā)酵工藝研究

為了優(yōu)化神曲發(fā)酵工藝，確保其安全性和有效性，眾多研究者進(jìn)行了深入的探索。周晨一[4]改良六神曲發(fā)酵方式，確定六神曲發(fā)酵的最佳條件是溫度30 ℃，濕度80%，料水比為1.5∶1，曲塊體積為7×7×2（cm×cm×cm），發(fā)酵3 d。陳瑾[5]確定枯草芽孢桿菌和扣囊復(fù)膜酵母菌按4∶1 的比例接種，總接種量40%，發(fā)酵5 d，蛋白酶活力可大大提高。王舒玉等[6]以米根霉、扣囊復(fù)膜孢酵母2 種優(yōu)勢菌協(xié)同發(fā)酵六神曲，優(yōu)化出兩菌按1∶2 和15%的總量接種在六神曲基質(zhì)上，32.5 ℃發(fā)酵6 d 制得六神曲，與同廠9批商品的六神曲相對照，自制六神曲批次間酶活力較為平緩。

綜合上述研究，優(yōu)化神曲的發(fā)酵工藝不僅可以縮短發(fā)酵時間，還能增強批次間的穩(wěn)定性，并提高酶的活力。這些成果為六神曲的藥效和安全性提供了有力支持。

2 六神曲中化學(xué)成分研究

神曲為發(fā)酵制劑，由許多藥物組方而成，化學(xué)成分比較復(fù)雜，目前，對于六神曲化學(xué)成分的研究主要集中在黃酮類、揮發(fā)油類、有機酸類等方面。周晨一[4]采用HPLC 法測定了最佳發(fā)酵條件下六神曲樣品中槲皮苷、槲皮素和木犀草素的含量，分別為15.4 μg/mL、5.2 μg/mL 和8.6 μg/mL。李虹霞等[7]從六神曲中分離得到21 個化合物，總酚含量約為1.68 mg/g，表明六神曲總酚抗氧化活性較好。針對發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行研究，可以用NMR 法進(jìn)行分析和鑒別，曹美嬌等[8]用神曲鑒別琥珀酸、乳酸和甘油酸等組分；吳丹等[9]用空氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)鑒定神曲中的七種短鏈脂肪酸。肖瑜等[10]從陜西省六神曲主要生產(chǎn)廠家收集了24 批各月生產(chǎn)的樣品，采用電位滴定法建立了六神曲總有機酸測定方法。

3 六神曲中酶活力研究

六神曲發(fā)酵時產(chǎn)生的酶很多，對神曲健脾消食功效有重要影響[11]。為了找出神曲發(fā)酵的最佳時期，徐云等[12]用5 種消化酶研究神曲發(fā)酵規(guī)律，表明發(fā)酵3 d 糖化酶活力達(dá)峰值，淀粉酶、纖維素酶與脂肪酶活力均于發(fā)酵4 d 達(dá)峰值，確定神曲最佳發(fā)酵時間為4～6 d。王郡瑤等[13]建立了柱前衍生化高效液相色譜法，對六神曲中葡萄糖的含量進(jìn)行測定，并由葡萄糖含量推算糖化酶活力，對市售六神曲的品質(zhì)進(jìn)行了評定。結(jié)果顯示，不同生產(chǎn)廠家的六神曲糖化酶活力差異較大。王麗芳等[14]以發(fā)酵過程中脂肪酶為原料，選擇淀粉酶動態(tài)變化為研究對象，確定發(fā)酵溫度33 ℃，藥材鮮品炒汁入藥，發(fā)酵時間3～5 d；馬維維等[15]用蛋白酶及淀粉酶作為指標(biāo)，證明固態(tài)協(xié)同發(fā)酵工藝可行。這些研究結(jié)果表明，通過研究六神曲中酶的活力變化，可以更好地了解其藥效機制和發(fā)酵過程。因此，開展六神曲酶活力研究對于優(yōu)化其發(fā)酵工藝和提高產(chǎn)品質(zhì)量具有重要意義。

4 六神曲發(fā)酵中微生物群落變化研究

在六神曲發(fā)酵過程中，微生物群落的變化對其藥效和安全性產(chǎn)生重要影響。陳彥琳等[16]對發(fā)酵過程中的微生物群落變化進(jìn)行探究，結(jié)果表明曲霉在發(fā)酵初期屬于優(yōu)勢菌群，后期扣襄復(fù)膜酵母和米根霉逐漸成為優(yōu)勢物種；發(fā)酵初始，細(xì)菌的優(yōu)勢菌屬為腸桿菌屬，在發(fā)酵后期，陰溝腸桿菌、戊糖片球菌、阪崎腸桿菌等優(yōu)勢菌群數(shù)量快速增長，物種多樣性降低。趙爽等[17]確定細(xì)菌類是發(fā)酵過程的主導(dǎo)菌群，從真菌群落結(jié)構(gòu)來看，子囊菌門是優(yōu)勢菌門，而曲霉屬于優(yōu)勢菌屬。周晨一[4]通過16S rRNA 對六神曲成品中微生物群落中的細(xì)菌進(jìn)行分析和鑒定，在發(fā)酵前期，腸桿菌較為活躍，占比高達(dá)90%。這些研究為我們揭示了六神曲發(fā)酵過程中微生物群落變化的規(guī)律，從而了解不同微生物對六神曲藥效的作用機制，進(jìn)一步優(yōu)化六神曲的發(fā)酵工藝和質(zhì)量控制方法，提高六神曲的藥效和安全性，為其臨床應(yīng)用和產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供更為科學(xué)和可靠的依據(jù)。

5 六神曲藥理作用研究

近年來，對六神曲的藥理作用研究取得了許多進(jìn)展。高啟霞等[18]發(fā)現(xiàn)六神曲可提高食積小鼠的胃排空率，與模型組比較，六神曲可增加雙歧桿菌的數(shù)量、乳酸桿菌數(shù)量，降低大腸桿菌產(chǎn)量、糞腸球菌數(shù)量。王長福等[19]用溶劑萃取法提取六神曲中11 個化合物，有3 種生物堿類化合物、2 種含氮類化合物、1種苯丙素類化合物、2 種芳香族化合物，一些分離所得化合物表現(xiàn)出明顯的抗菌或者抗病毒感染活性。通過進(jìn)一步的藥理作用研究，可以更好地了解六神曲的藥效機制。

6 結(jié)語

神曲作為傳統(tǒng)的中藥發(fā)酵制劑，其在臨床上的應(yīng)用價值不容忽視。然而，由于缺乏科學(xué)規(guī)范的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，神曲的質(zhì)量和安全性難以得到保障。為了更好地發(fā)揮神曲的藥效，提高其安全性和臨床應(yīng)用效果，我們應(yīng)當(dāng)對神曲發(fā)酵工藝、化學(xué)成分、酶活力、微生物群落變化等方面進(jìn)行深入研究，并建立科學(xué)合理的質(zhì)量控制方法。同時，加強神曲發(fā)酵的基礎(chǔ)研究，明確發(fā)酵過程中的關(guān)鍵因素，如濕度、溫度、原料配比等，對于提高神曲的質(zhì)量和安全性至關(guān)重要。此外，深入研究神曲的藥理作用和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，有助于深入了解其治療機制和臨床應(yīng)用前景。通過這些研究，我們可以為神曲的現(xiàn)代化生產(chǎn)和臨床應(yīng)用的可持續(xù)發(fā)展提供有力支持。