郭寶鳳 高寒 塔娜 賈靜濤

【摘 要】

目的：建立測(cè)定清腦降壓片中黃芩苷、阿魏酸和藁本內(nèi)酯含量的反相高效液相色譜法。方法：色譜柱采用ODS-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-0.5%磷酸水梯度洗脫；黃芩苷、阿魏酸、藁本內(nèi)酯檢測(cè)波長(zhǎng)為326 nm；流速為1.0 mL·min-1；柱溫35℃。結(jié)果：黃芩苷在221.62～3324.30 ng范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（Y=0.0654X-0.0021，γ=1.0000）。平均加樣回收率為98.6%，RSD為1.42%（n=6），阿魏酸在20.07～401.40 ng范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（Y=1.0469X-0.9536，γ=1.0000）。平均加樣回收率為97.8%，RSD為1.05%（n=6）。藁本內(nèi)酯在20.13～402.60 ng范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（Y=0.6333X-0.6877，γ=1.0000）。平均加樣回收率為98.2%，RSD為1.42%（n=6）。結(jié)論：本方法可行、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為清腦降壓片中黃芩苷、阿魏酸和藁本內(nèi)酯的質(zhì)量控制方法。

【關(guān)鍵詞】

清腦降壓片；反相高效液相色譜法；黃芩苷；阿魏酸；藁本內(nèi)酯

【中圖分類號(hào)】R917?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2024）09-0046-05

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.09.zgmzmjyyzz202409011

Simultaneous Determination of Baicalin， Ferulic acid and Ligustilide in Qingnao Jiangya Tablet

by Reversed-phase High-performance Liquid Chromatography

GUO Baofeng1 GAO Han1 TA Na1 JIA Jingtao2*

1. Inner Mongolia Autonomous Region Drug Inspection and Research Institute/Inner Mongolia Autonomous

Region China-Mongolia Medicine Standard Research Key Laboratory， Hohhot 010010，China;

2. Inner Mongolia Autonomous Region Medical Device Inspection and Testing Research Institute， Hohhot 010041，China

Abstract：

Objective To establish a method for determination of ferulic acid and ligustilide in Qingnao Jiangya tablets.Method Use high performance liquid chromatography（HPLC），the column is C18 column，the mobile phase was eluted with acetonitrile -0.5% phosphoric acid gradient. Baicalin、Ferulic acid and ligustilide were detected at a wavelength of 326 nm. The flow rate was 1.0 mL/min and the column temperature was 35℃. Results Baicalin had a good linear relationship with peak area in the range of 221.62～3324.30ng （Y=0.0654X -0.0021， γ=1.0000）. The average sample recovery was 98.6%， and the RSD was 1.42% （n=6）.There was a good linear relationship between the concentration of ferulic acid and the peak area in the range of 20.07-401.40ng （Y=1.0469X-0.9536，γ=1.0000）. The average recovery was 97.8% and the RSD was 1.05% （n=6）. and there was a good linear relationship between the concentration of ligustilide and the peak area in the range of 20.13 -402.60 ng.（Y=0.6333X-0.6877，γ=1.0000）， The average recovery was 98.2% and the RSD was 1.42% （n=6）. Conclusion The method is accurate， accurate and reproducible， and it can be used as a method for the determination of Baicalin 、Ferulic acid and Ligustilide in Qingnao Jiangya tablets.

Keywords：

Qingnao Jiangya tablets ; HPLC ;Baicalin; Ferulic acid ; Ligustilide

清腦降壓片收載在《中國(guó)藥典》2020年版一部［1］，由黃芩、當(dāng)歸、決明子等13味藥材組成，具有平肝潛陽(yáng)的功效，用于肝陽(yáng)上亢所致的眩暈、頭暈、頭痛、項(xiàng)痛、血壓偏高等［2-3］。在臨床上具有廣泛的應(yīng)用?！吨袊?guó)藥典》2020年版一部中建立了以黃芩苷為指標(biāo)的含量測(cè)定項(xiàng)，目前文獻(xiàn)報(bào)道有以橙黃決明素和大黃酚酚為指標(biāo)的含量測(cè)定方法［4］。現(xiàn)有清腦降壓片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有對(duì)當(dāng)歸藥材進(jìn)行含量測(cè)定［4-6］，當(dāng)歸具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛的功效，可用于眩暈心悸。本研究采用RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定了黃芩中黃芩苷、當(dāng)歸中阿魏酸和藁本內(nèi)酯的含量。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 高效液相色譜儀： Dionex U3000 ；檢測(cè)器：DAD檢測(cè)器。電子天平：METTLERAE240型（梅特勒-托利多有限公司）、SARTORIUS MSE6.6S-000-DU型（賽托利斯公司）；KQ-500型超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑與試藥 黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)：110715-202122，純度：94.2%），阿魏酸對(duì)照品（批號(hào)：110773-201915，純度：99.4%），藁本內(nèi)酯對(duì)照品（批號(hào)：111737-201910，純度：/），來(lái)源均為中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙腈為色譜純；水為超純水，磷酸、甲醇為分析純?cè)噭?/p>

2 溶液的制備

2.1. 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷、阿魏酸、藁本內(nèi)酯對(duì)照品適量，置量瓶中，加80%甲醇制成每1mL各含120μg、20μg、20μg的溶液，即為對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備 取供試品20片，除去包衣，研細(xì)，精密稱取本品粉末約2 g，置具塞錐形瓶中，加80%甲醇50mL，稱定重量，超聲40 min，放冷，用80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 依處方組成及制備工藝，制備缺黃芩的陰性樣品及缺當(dāng)歸的陰性樣品。精密稱取陰性樣品適量，按“供試品溶液的制備”方法制成陰性樣品溶液。

3 方法學(xué)考察

3.1 色譜條件 Agilent C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以乙腈為流動(dòng)相A，以0.5%磷酸水溶液為流動(dòng)相B，按表1進(jìn)行梯度洗脫。體積流量為1.0mL/min，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為326 nm；進(jìn)樣量20 μL。在上述色譜條件下，按阿魏酸的吸收峰計(jì)算對(duì)應(yīng)理論板數(shù)應(yīng)不低于3000，分離度大于1.5。

3.2 專屬性試驗(yàn) 按上述色譜條件分別測(cè)定黃芩苷、阿魏酸和藁本內(nèi)酯對(duì)照品溶液、供試品溶液和缺黃芩陰性、缺當(dāng)歸陰性溶液各20 μL，色譜圖見(jiàn)圖1。結(jié)果顯示，缺黃芩陰性對(duì)照溶液黃芩苷色譜峰處沒(méi)有色譜峰，說(shuō)明共存的其他藥味對(duì)測(cè)定沒(méi)有干擾；缺當(dāng)歸陰性對(duì)照溶液藁本內(nèi)酯色譜峰處沒(méi)有色譜峰，說(shuō)明共存的其他藥味對(duì)測(cè)定沒(méi)有干擾；阿魏酸色譜峰處有色譜峰，但色譜峰只占樣品峰峰面積的0.2%，說(shuō)明共存的其他藥味對(duì)測(cè)定有干擾，但干擾可以忽略。本方法專屬性好。

3.3 線性關(guān)系考察 分別精密稱取黃芩苷對(duì)照品11.763 mg，阿魏酸對(duì)照品2.079 mg，藁本內(nèi)酯對(duì)照品2.013 mg，置100mL量瓶中，加80%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得黃芩苷對(duì)照品（濃度為110.81μg/mL）、阿魏酸對(duì)照品溶液（濃度為20.67μg/mL）和藁本內(nèi)酯對(duì)照品溶液（濃度為20.13μg/mL）。黃芩苷進(jìn)樣2 μL、5 μL、10 μL、20 μL、30 μL，阿魏酸和藁本內(nèi)酯進(jìn)樣1 μL、2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL，以峰面積值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析。黃芩苷在221.62～3324.3 ng范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（Y=0.0654X-0.0021，γ=1.0000），阿魏酸在20.67～413.40 ng范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=1.0469X-0.9536（γ=1.0000），藁本內(nèi)酯在20.13～402.6 ng范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=0.6333X-0.6877（γ=1.0000）。

3.4 精密度試驗(yàn) 分別精密吸取黃芩苷、阿魏酸、藁本內(nèi)酯對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果測(cè)得黃芩苷、阿魏酸和藁本內(nèi)酯峰面積的RSD分別為1.12%、0.78%和0.68%。表明儀器精密度好。

3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液，在第0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h測(cè)定，結(jié)果表明黃芩苷、阿魏酸及藁本內(nèi)酯的峰面積的RSD分別為1.37%、1.65%、1.82%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)測(cè)定黃芩苷、阿魏酸及藁本內(nèi)酯穩(wěn)定。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取供試品（批號(hào)為20180105）6份，按2.2供試品溶液的制備方法制備溶液，測(cè)定。結(jié)果顯示，黃芩苷平均含量為8.072 mg/g，RSD為1.72%，阿魏酸平均含量為0.102 mg/g，RSD為1.33%，藁本內(nèi)酯平均含量為0.126 mg/g，RSD為1.15%，表明方法重復(fù)性好。

3.7 加樣回收試驗(yàn) 取已知含量的供試品（黃芩苷含量為8.072 mg/g、阿魏酸含量為0.102 mg/g、藁本內(nèi)酯平均含量為0.126 mg/g）粉末約1.0 g，精密稱定，共6份。分別加入黃芩苷對(duì)照品8.124 mg、阿魏酸對(duì)照品0.104 mg、藁本內(nèi)酯對(duì)照品0.132 mg。按2.2供試品溶液的制備方法操作，制備溶液，按3.1色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算回收率。黃芩苷、阿魏酸和藁本內(nèi)酯平均回收率分別為98.55%，97.83%、98.19%，RSD為1.403%、1.045%、1.423%（見(jiàn)表2）。本方法的準(zhǔn)確度好。

3.8 供試品測(cè)定 取清腦降壓片供試品2.0 g，分別按2.2供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，按3.1色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表3的結(jié)果表明，清腦降壓片中黃芩苷、阿魏酸和藁本內(nèi)酯的含量分別在2.3759～11.7842 mg/g、0.0321～0.1342 mg/g、0.0613～0.1558 mg/g之間，不同批次間黃芩苷和阿魏酸含量差異較大，藁本內(nèi)酯含量也具有差異。以黃芩中黃芩苷和當(dāng)歸中阿魏酸、藁本內(nèi)酯為指標(biāo)，對(duì)質(zhì)量進(jìn)行控制具有意義。

4 討論

4.1 色譜條件的優(yōu)化 分別考察不同比例乙腈-0.5%磷酸溶液、乙腈-1%乙酸溶液及甲醇-0.1%甲酸溶液［9-12］對(duì)阿魏酸和藁本內(nèi)酯色譜分離的影響。本實(shí)驗(yàn)采用乙腈-0.5%磷酸溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，在此條件下，所測(cè)定各成分色譜峰與相鄰色譜峰均基線分離，且各色譜峰的峰形好。

4.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 RP-HPLC法測(cè)阿魏酸和藁本內(nèi)酯的含量，檢測(cè)波長(zhǎng)為313 nm［7-11］，。本實(shí)驗(yàn)對(duì)黃芩苷、阿魏酸及藁本內(nèi)酯對(duì)照品溶液進(jìn)行光譜掃描，黃芩苷光譜在277.2、316.1處有2個(gè)吸收峰，阿魏酸光譜在235、277和322處有3個(gè)吸收峰；藁本內(nèi)酯光譜圖中有3個(gè)吸收峰，波長(zhǎng)分別為206 nm、282 nm和326 nm?？紤]在282 nm測(cè)定時(shí)，對(duì)阿魏酸峰測(cè)定干擾較多，故選用326 nm處同時(shí)測(cè)定清腦降壓片中黃芩苷、阿魏酸和藁本內(nèi)酯的含量。

4.3 測(cè)定結(jié)果分析 本方法同時(shí)測(cè)定的清腦降壓片中黃芩苷、阿魏酸和藁本內(nèi)酯的含量，同時(shí)控制其中的黃芩和當(dāng)歸兩味主藥藥味，對(duì)質(zhì)量控制具有更大意義。

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（收稿日期：2023-08-04 編輯：陶希睿）

基金項(xiàng)目：

作者簡(jiǎn)介：

郭寶鳳（1985—），女，蒙古族，副主任藥師，研究方向?yàn)橹忻伤帢?biāo)準(zhǔn)及質(zhì)量研究。E-mail： guobaofengzf@163.com

通信作者：

賈靜濤（1974—），男，漢族，研究生學(xué)歷，研究方向?yàn)樗幤芳搬t(yī)療器械檢驗(yàn)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理及標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail：chaoyue13033@163.com