李健婷

（廣西梧州制藥（集團(tuán)）股份有限公司，廣西 梧州 530011）

高效液相色譜法是一種新型分離技術(shù)，其英文縮寫是HPLC，它的特點(diǎn)是分離速度較快，并且敏感程度較高。目前高效液相色譜技術(shù)在藥品檢驗(yàn)中發(fā)揮的作用是不容小覷的，它支持著現(xiàn)代醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)的不斷發(fā)展，對藥品質(zhì)量安全的保障起到了重要的作用和價(jià)值。

高效液相色譜法從20 世紀(jì)開始誕生，之后經(jīng)過長時間的臨床實(shí)踐取得了不錯的運(yùn)用效果，目前在醫(yī)藥檢測、生命科學(xué)領(lǐng)域等諸多行業(yè)已經(jīng)得到了廣泛的使用。藥品檢驗(yàn)是高效液相色譜技術(shù)大顯身手的區(qū)域，這種方法的運(yùn)用較為專業(yè)，也較為科學(xué)，通過研究比對結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，和普通的藥品檢測技術(shù)相比，高效液相色譜法的檢測準(zhǔn)確性更高，因此具有細(xì)節(jié)化研究的意義和必要性，尤其是該項(xiàng)技術(shù)在色譜峰容量方面靈敏度較高，占據(jù)極大的優(yōu)勢，改變了傳統(tǒng)的檢測程序和檢測手段，可以使檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性得到保障。因此秉承著科學(xué)技術(shù)是第一生產(chǎn)力的原則，在藥品檢測過程中要加快對高效液相色譜法的推廣和使用，滿足制藥行業(yè)客觀發(fā)展的實(shí)際需求。

1 高效液相色譜法

1.1 發(fā)展與優(yōu)勢

高效液相色譜法于20 世紀(jì)70 年代左右誕生，它最早作為一種新型分離分析技術(shù)而存在，經(jīng)過長時間的實(shí)踐和優(yōu)化已經(jīng)在多個領(lǐng)域得到了使用，它的運(yùn)用基礎(chǔ)是經(jīng)典液相色譜，加入了氣相色譜理論的加持，常用的檢測工具是靈敏度較高的檢測器和高壓液泵。目前隨著自動化技術(shù)的加入，高效液相色譜法也可以實(shí)現(xiàn)全自動操作，這項(xiàng)技術(shù)的流動相是液體，可以傳輸?shù)綑z測對象，觀察其區(qū)域反應(yīng)，產(chǎn)生某些特定顏色的物質(zhì)，它的原理和傳統(tǒng)的液相色譜技術(shù)幾乎相同，但是由于技術(shù)的更新?lián)Q代和設(shè)備的優(yōu)化，使操作過程更加方便易懂，也能夠提高物質(zhì)的反應(yīng)效率。高效液相色譜技術(shù)在具體使用過程中需要加入液體試劑或藥物，被儀器分離出來，由于不同的物理特性，色譜的分離位置也是不同的，之后輸送到對應(yīng)的處理儀器之中展開物質(zhì)檢測，能精確地分離物質(zhì)中的雜質(zhì)，篩選出廢棄物質(zhì)。因此，在藥品質(zhì)量檢測技術(shù)中運(yùn)用高效液相色譜法具有較高的價(jià)值，和傳統(tǒng)氣相色譜法技術(shù)相比，高效液相色譜法自動化程度和靈敏化程度顯著提升。傳統(tǒng)的方式采用了重力加料的形式，使流出速度減慢，而更新后的技術(shù)采用的是高壓輸液設(shè)備，其傳輸速率已經(jīng)達(dá)到了傳統(tǒng)方法的100 倍左右[1]。此外，高效液相色譜法相對于傳統(tǒng)的液相色譜技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)低化合物的有機(jī)分離，它還可以把不同極性的液體設(shè)置為流動相，因此具有更大的選擇空間，不同的組分之間會產(chǎn)生交叉作用和影響力，由此可見，這項(xiàng)技術(shù)在分離過程中的表現(xiàn)更加出色。

1.2 原理及使用特色

高壓輸液系統(tǒng)是高效液相色譜法最為重要的使用設(shè)備，它的主要特色是流動相為液體，這一方法可以利用高壓輸液泵的勢能混合極性不同的溶劑，接下來再注入實(shí)驗(yàn)色譜柱之中，利用進(jìn)氣閥注入樣品讓流動相在柱體之內(nèi)互相流通，對柱內(nèi)液體慢慢分離和滲透并展開監(jiān)測，從而完成整個化學(xué)分析過程[2]。高效液相色譜法能夠正常使用需要依靠高效微粒固定相和高靈敏度的檢測器，目前常用的高效液相色譜法還采用了小口徑柱、高效色譜填料，這些物質(zhì)在高壓輸液泵的影響之下能夠更快地推動容器流通通過色譜柱的檢測，有了這些精密工具和儀器的配合，高效液相色譜法運(yùn)用的效率大大提高，使分離效果和檢測速度變得更加顯著，和傳統(tǒng)的經(jīng)典注色譜檢測方法相比，它能夠更快地完成檢測樣本和物質(zhì)的分離。由此可見，高效液相色譜法的使用特色是高效性、靈敏性和快速性。

2 高效液相色譜法在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用

2.1 檢測藥品含量

高效液相色譜技術(shù)具有較高的分辨率，并且在檢測過程中的分析速度較快，可以多次重復(fù)分析，在藥品檢測時不需要過多的樣品作為支撐就可以達(dá)到檢測的效果，因此適合用來檢測藥品的含量，特別是用來檢測樣品不足時的藥品含量。藥物是否合格其判斷依據(jù)要參考藥品中各類物質(zhì)的治療作用，同時還要參考藥品的物質(zhì)成分含量，如果含量過?？赡軙θ梭w其他功能造成損害[3]。使用高效液相色譜法可以分離藥品中的規(guī)定成分和有效成分，并分離出無效成分，將其傳輸?shù)綑z測儀器之中，對樣品成分展開分類精準(zhǔn)檢測，確保有效成分能夠?qū)嶋H滿足臨床需求。目前藥品中的含量測定方式主要包含離子交換色譜法和吸附色譜法，也包括反向色譜應(yīng)用技術(shù)。比如，在檢測馬來酸曲美布丁原料的時候，采用高效液相色譜法的輔助可以簡化操作流程，提高數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，還可以同時對各組試劑的組分含量展開檢測。有些抗炎藥物的檢測使用高效液相色譜法也可以取得不錯的效果，常用的抗炎藥物其功能應(yīng)當(dāng)是鎮(zhèn)痛消炎，但有些有效成分屬于水溶性，化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，甚至無法生成溶液，而采用高效液相色譜法技術(shù)能夠提高藥物有機(jī)成分的溶解穩(wěn)定性，也有利于對某些特殊藥品的含量準(zhǔn)確檢測。由此可見，高效液相色譜法操作起來相對便捷，準(zhǔn)確率較高，經(jīng)過長時間的使用，已經(jīng)把這項(xiàng)技術(shù)列為某些藥物的法定分析方式，我國使用高效液相色譜法也有諸多成功的先例，這也意味著這項(xiàng)技術(shù)在各類化學(xué)藥品中的使用范圍在不斷拓寬。

2.2 檢測藥品有效成分，做好藥物鑒別

采用高效液相色譜法其中最關(guān)鍵的檢測內(nèi)容和對象就是藥品中的有效成分含量，藥品有效成分的含量會直接影響到藥物的合格性和質(zhì)量安全性。藥品在進(jìn)入市場銷售之前都需要經(jīng)過嚴(yán)格的測驗(yàn)，才能確保有效成分含量達(dá)標(biāo)，屬性合格，相關(guān)參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)都符合之后才可以上市銷售[4]。使用高效液相色譜法就可以快速得到精準(zhǔn)的檢驗(yàn)成果，有效分析藥品中的有效成分，針對目標(biāo)展開精準(zhǔn)檢驗(yàn)，防止藥物的附加試劑可能會帶來的人體副作用。比如采用該方法檢測黃芩片的時候，其有效成分是公認(rèn)的黃酮，無論是傳統(tǒng)的檢測方法還是高效液相色譜法都可以得到不錯的結(jié)果，但是后者操作過程更加簡便快捷，并且對有效成分的測定更加精準(zhǔn)，使藥品出口質(zhì)量得到保障。利用該方法檢測藥品質(zhì)量還可以篩選出最優(yōu)質(zhì)量的片段，除了檢測有效成分之外，對藥物的鑒別也離不開高效液相色譜法，藥物的藥用價(jià)值是存在差異的，其適應(yīng)癥也不同。因此，有一些功能相似的藥物在具體使用方法和使用范圍中也存在一定的差別，一定要仔細(xì)鑒別藥物成分才能充分發(fā)揮臨床作用，利用高效液相色譜法展開藥物鑒別可以明確而細(xì)致地得出藥品的組分結(jié)構(gòu)和性質(zhì)參數(shù)，這些參數(shù)都要做好保存，加以記錄，為藥物定性。例如南五味子和北五味子是兩種不同的中藥，雖然名號相似，但由于產(chǎn)地和制法不同，適應(yīng)癥完全不同，利用高效液相色譜法可以鑒定南北五味子中的有效成分，組分含量利用C18 柱，將甲醇和水以65∶35 的比例混合在一起，流速控制在每分鐘1mL 左右，檢測波長在250nm 以下，以上參數(shù)設(shè)置好之后，利用高效液相色譜法就可以快速地區(qū)分南五味子和北五味子。從這個角度來觀察，高效液相色譜法能夠?yàn)樗幤菲焚|(zhì)的檢驗(yàn)和品種的鑒別提供全新的思路。

2.3 檢測抗生素和中藥成分

高效液相色譜法可以運(yùn)用在臨床中檢測抗生素的使用效果，有一些患者存在過敏現(xiàn)象，在使用抗生素類藥物時容易出現(xiàn)機(jī)體不良反應(yīng)，其主要原因在于藥物中的中間體和降解產(chǎn)物發(fā)生了機(jī)體副作用，利用高效液相色譜法能夠明確抗生素中的雜質(zhì)極限，從而對臨床用藥起到科學(xué)的指導(dǎo)參照。比如在檢測氨芐西林膠囊的時候就可以利用高效液相色譜技術(shù)分析藥品主成分和其衍生降解產(chǎn)物，將降解物質(zhì)和藥物組成部分分離，控制制劑限度[5]。目前，我國在使用抗生素等抗菌類藥物的時候，強(qiáng)制規(guī)定要展開抗生素含量的測試，除了抗菌藥物之外還包括動物源性食品，其檢測的目的是防止抗生素在人體內(nèi)不合規(guī)殘留，引發(fā)身體不適或影響肝臟功能。除了對抗生素進(jìn)行檢測外，高效液相色譜檢測技術(shù)還可以用來檢測中藥的質(zhì)量和成分，中藥的質(zhì)地大多數(shù)屬于植物成分，較為復(fù)雜，所以質(zhì)量檢測存在一定的誤差，較為困難。常規(guī)的檢測方法不統(tǒng)一且較為繁雜，不能保證結(jié)果準(zhǔn)確性，并且常用的中藥成分較多，有效成分提取和分離困難，如果沒有高效液相色譜法技術(shù)的幫助，在測定有效成分時將會變得非常笨拙，使用了該項(xiàng)技術(shù)之后就可以將待測中藥樣本的雜質(zhì)和有效組分進(jìn)行分離，用最快的速度在短時間內(nèi)完成二者的分組提取，接下來再進(jìn)行中藥的鑒別和篩查，對有效物質(zhì)的含量展開測試。例如檢測復(fù)方丹參滴丸的時候，這一款中藥有效成分是丹參素和兒茶葵，在高效液相色譜技術(shù)的幫助下，檢測效果較好，分離度較高，并且可以精準(zhǔn)定量定性。由此可見，這項(xiàng)技術(shù)在中藥質(zhì)量檢測中的運(yùn)用得到了廣泛的青睞和支持，它的分離度較好，靈敏度較高，并且操作步驟精簡快捷，能實(shí)現(xiàn)中藥有效成分的劃分，從而達(dá)到專業(yè)檢測的效果。

2.4 檢測手性藥物和非添加化學(xué)成分

高效液相色譜法在藥品檢測中的運(yùn)用遠(yuǎn)不止上述幾種，在手性藥物檢測的過程中也能發(fā)揮不錯的作用。手性藥物的檢測難度較大，其難點(diǎn)在于手性化合物存在不對稱合成的情況，運(yùn)用高效液相色譜法可以提取外消旋體拆分和天然物質(zhì)，展開生物合成，在化學(xué)性質(zhì)和物理性質(zhì)上，手性藥物和對映異構(gòu)體可以互相借鑒，有相似之處，在分離與鑒別過程中傳統(tǒng)方式操作過于困難，高效液相色譜法靈敏性較高，可以脫離衍生物的束縛，展開手性藥物的檢測。色譜分離法包括臨界流體色譜、高效毛細(xì)管電泳色譜等不同的技術(shù)，可以高效快捷地對手性藥物展開拆分并檢測。工作人員先對手性藥物做好衍生物的處理，計(jì)算非對稱異構(gòu)分子，接下來再展開分離檢測，無論是在手性藥物的研制還是在手性藥物的代謝過程中，使用高效液相色譜法都具有不錯的價(jià)值。與此同時，檢測非添加化學(xué)成分時使用高效液相色譜法也取得了成功實(shí)踐，非添加化學(xué)成分檢測針對的是達(dá)不到常規(guī)藥物治療作用的假藥或保健品，雖然市場上藥品和保健品層出不窮，琳瑯滿目，但是不合規(guī)的藥物和保健品其共同點(diǎn)都是違規(guī)添加了化學(xué)藥劑。利用高效液相色譜法就可以將非法成分檢測出來，和傳統(tǒng)的薄層色譜方式比較，高效液相色譜法在檢測技術(shù)上更加便捷，具有較高的專屬性，分析能力和分離效果都較強(qiáng)，可以快速對非添加化學(xué)物質(zhì)展開定性定量檢測，防止假藥流入市場。除此之外，對藥品有關(guān)物質(zhì)的檢測可以分為有機(jī)雜質(zhì)、無機(jī)雜質(zhì)和殘留溶液，檢查的項(xiàng)目也包括異構(gòu)體副產(chǎn)物和降解產(chǎn)物。比如在檢測甲硝唑藥片的時候，除了要檢測有效物質(zhì)和有關(guān)物質(zhì)之外，還存在部分難以定性的疑難雜物，借助高效液相色譜法展開技術(shù)檢測能夠規(guī)避雜質(zhì)的干擾和影響，也能夠排除紫外線的作用，提高準(zhǔn)確程度，利用反向高效液相色譜法可以檢測甲硝唑藥片的成分含量，其具體參數(shù)設(shè)計(jì)應(yīng)當(dāng)是流動項(xiàng)設(shè)置為甲醇和水的溶液，比例是20∶80，流速設(shè)置是每分鐘1mL，檢測波長設(shè)置為325nm。根據(jù)檢測結(jié)果可以得出甲硝唑原材料的含量和雜質(zhì)含量相等，在藥品制藥過程中沒有發(fā)生明顯的變性，該項(xiàng)藥物符合質(zhì)量要求。如果采用傳統(tǒng)的薄層色譜法，不僅在操作上過于重復(fù)，時間太慢并且準(zhǔn)確度不高，高效液相色譜法在很大程度上彌補(bǔ)了傳統(tǒng)薄層色譜檢測技術(shù)的缺陷。

3 高效液相色譜技術(shù)的新發(fā)展

當(dāng)前高效液相色譜技術(shù)正在高速發(fā)展過程中，大致可以分為三種類型，例如蒸發(fā)光散射檢測技術(shù)、質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)和快速高效液相色譜技術(shù)。蒸發(fā)光散射檢測技術(shù)可以把傳統(tǒng)的蒸發(fā)光檢測技術(shù)結(jié)合高效液相色譜技術(shù)互相汲取優(yōu)勢，傳統(tǒng)的發(fā)色團(tuán)化合物檢測范圍是受到極大限制的，使用了新技術(shù)之后這項(xiàng)限制被突破，在技術(shù)問題上得到了有效的升級和解決，從而擴(kuò)大了高效液相色譜技術(shù)的運(yùn)用范圍。質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)指的是在傳統(tǒng)的液相色譜基礎(chǔ)上結(jié)合質(zhì)譜儀，分析有機(jī)化合物的有效成分，在有機(jī)分離之后使用這項(xiàng)技術(shù)提高了質(zhì)譜儀較為強(qiáng)大的檢測能力，稱之為組分鑒定能力。而快速高效液相色譜技術(shù)進(jìn)一步優(yōu)化了色譜參數(shù)，相對于傳統(tǒng)的高效液相色譜技術(shù)使柱子得到了升級和改造，柱子能夠承受更高的壓力，提高效果，也縮短了高效液相色譜技術(shù)的檢測時間。在未來，高效液相色譜技術(shù)的發(fā)展將會走出全新的天地，比如在檢測復(fù)方氨基酸注射液的時候，測定其中含有的焦谷氨酸含量，就可以采用高效液相色譜技術(shù)。在具體測定時，有關(guān)工作人員需要持續(xù)優(yōu)化色譜條件以及測定方法，把柱溫控制在合適的范圍值之內(nèi)，設(shè)定酸堿度值。

4 結(jié)語

在藥品檢驗(yàn)過程中使用高效液相色譜法能有效提高藥品檢測的質(zhì)量和效率。有關(guān)工作人員需要了解高效液相色譜法的使用優(yōu)勢和使用原理，在檢測藥品含量、藥品有效成分的時候讓其發(fā)揮作用，還可以用該方法來檢測抗生素和中藥，確保用藥健康。