朱萬芹　陳飛　馮敏　柴林山　張疏雨　韓冰　謝存一　桓明輝

摘要：珍稀藥用真菌粗毛纖孔菌野生資源十分匱乏，優(yōu)異種質(zhì)資源更為稀缺，人工栽培還處于起步階段?，F(xiàn)將采自遼寧西部百年桑樹的野生粗毛纖孔菌進行設(shè)施化栽培，從母種制備、二級種制備、養(yǎng)菌、轉(zhuǎn)色、病蟲害防治、子實體培養(yǎng)等方面總結(jié)出一套適合遼西地區(qū)的栽培技術(shù)，按此技術(shù)栽培所獲得粗毛纖孔菌品質(zhì)優(yōu)良，該技術(shù)為推廣栽培藥用菌野生資源提供了一定的技術(shù)支持。

關(guān)鍵詞：優(yōu)質(zhì)；粗毛纖孔菌；設(shè)施化；栽培技術(shù)

Facility Cultivation Technology for High-Quality Inonotus HispidusZHU Wanqin，CHEN Fei，F(xiàn)ENG Min，CHAI Linshan，ZHANG Shuyu，HAN Bing，XIE Cunyi，HUAN Minghui（Microbial Research Institute of Liaoning Province，Chaoyang 122000，Liaoning）

粗毛纖孔菌（Inonotus hispidus）又名粗毛黃褐孔菌或粗毛黃孔菌，是桑黃的一個種，從秦漢時期到清代的多部本草著作中都有記載，有久遠(yuǎn)的藥用歷史[1]。據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，粗毛纖孔菌的子實體含有豐富的多糖、黃酮、多酚、三萜類物質(zhì)等，具有抗腫瘤、抗病毒、抗炎、降血糖、降血脂、保肝、增強免疫力及抗氧化等多種功效，在食品、醫(yī)療、保健等多個領(lǐng)域都具有應(yīng)用價值和開發(fā)潛能[2]。粗毛纖孔菌寄主主要有水曲柳、榆樹、楊樹、桑樹等，在桑樹上十分罕見。野生粗毛纖孔菌子實體匱乏，對長于桑樹的粗毛纖孔菌子實體的設(shè)施化栽培的報道很少[3]；不同采集來源（樹種、地域、生長環(huán)境）可能存在不同的種質(zhì)特點，是豐富種質(zhì)資源的重要途徑，也是獲得優(yōu)異種源的重要機會。本研究粗毛纖孔菌材料采自遼西百年活體桑樹，生物學(xué)性狀獨特，功能成分如黃酮、粗多糖及多酚含量較高，品質(zhì)優(yōu)良，具有潛在的開發(fā)價值。

1 優(yōu)質(zhì)粗毛纖孔菌菌種來源

本研究材料采自遼寧西部朝陽一株百年健壯活體桑樹，采用形態(tài)學(xué)觀察及內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS，Internal transcribed spacer）序列分析方法對其進行鑒定，鑒定結(jié)果為粗毛纖孔菌（Inonotus hispidus）。先后在遼寧喀左縣和遼寧朝陽龍城區(qū)不同地域設(shè)施大棚內(nèi)進行規(guī)?；N植，對所獲子實體進一步選育，并獲得優(yōu)質(zhì)菌株。

2 粗毛纖孔菌子實體品質(zhì)特點

子實體無柄，平展至半圓形，新生子實體表面較光滑、呈棕黃色，邊緣白色，有勁道，韌性強，不易碎，可手撕成片，有明顯菇香，口感微甜；成熟子實體表面覆蓋黃褐色至暗褐色粗毛，菌蓋邊緣鈍圓變硬，干燥子實體易碾成粉；子實體菌管管口多角形，色澤略淺于菌肉；孢子近圓形，表面光滑，黃色，有明顯厚壁，個體偏小，大小為（5.5～7.5）μm×（4.0～5.5）μm，平均長6.1μm、寬5.1μm，長寬比1.2，子實體形態(tài)見圖1。粗毛纖孔菌子實體商品性狀好，平均粗多糖含量5.50%，是國內(nèi)現(xiàn)在栽培的粗毛纖孔菌的 2.04倍；平均總黃酮含量11.82%，是國內(nèi)現(xiàn)在栽培的粗毛纖孔菌的3.16 倍；平均多酚含量較高，為1.2%。

3 粗毛纖孔菌設(shè)施化栽培技術(shù)

3.1 母種制備

3.1.1 菌種母種培養(yǎng)基配方 馬鈴薯20%，葡萄糖2%，蛋白胨0.3%，KH2PO4 0.3%，MgSO4 0.15%，維生素B1 10mg/L，瓊脂粉1.5%，pH 值6.0

3.1.2 母種分離、純化、制備 帶好無菌手套，左手捏住粗毛纖孔菌菌蓋中央，右手用無菌刀片沿著子實體基部輕輕切下，采集的新鮮子實體用無菌濾紙吸干表面，輕拿輕放，盡量固定不滑動，裝入事先準(zhǔn)備的無菌取樣袋里，帶回實驗室。采用組織分離法，在超凈工作臺上用無菌鑷子小心取出粗毛纖孔菌子實體，用酒精棉球擦拭粗毛纖孔菌子實體表面，再將子實體在酒精燈的火焰上迅速通過3～4s進行表面殺菌，在無菌平皿中切下粗毛纖孔菌新鮮菌塊約1cm3，放入75%酒精中浸泡消毒30s，經(jīng)無菌水沖洗后使用無菌濾紙吸干表面水分，用無菌解剖刀切去樣材表面，用接種針勾取遠(yuǎn)離邊緣處的菌肉0.1～0.2cm3置于預(yù)先倒入母種培養(yǎng)基平皿的中間，每皿接1個點于皿中心處，置于培養(yǎng)箱內(nèi)25～26℃倒置恒溫避光培養(yǎng)。2～3d萌發(fā)出鴨毛黃菌絲后再培養(yǎng)8～10d，待菌落直徑長大至3～4cm，挑取菌落中無污染、生長整齊健壯的外圍菌絲，轉(zhuǎn)入另一新鮮的母種培養(yǎng)基平皿中，同前操作2～3次進行純化、優(yōu)選后，接入試管斜面母種培養(yǎng)基上培養(yǎng)滿管，低溫保藏備用。

3.2 二級固體菌種制備 二級固體菌種配方為硬雜木屑25%，桑木屑50%，麥麩15%，葡萄糖2%，豆粕3%，玉米粉3%，石膏1%，紅糖0.7%，KH2PO4 0.2%，MgSO4·7H2O 0.1%。將粗毛纖孔菌斜面菌種置于無菌環(huán)境中，挑取直徑約1cm2斜面上新鮮的粗毛纖孔菌菌片3～5片，接入瓶裝二級種固體培養(yǎng)基表面，輕微按壓，使其與料面充分接觸，25℃恒溫避光培養(yǎng)20～30d后白色菌絲可長至滿瓶，菌絲健壯、致密，備用。

3.3 栽培袋制備 培育粗毛纖孔菌要選擇營養(yǎng)豐富的闊葉硬雜木屑，將木屑粉碎成2～3mm的顆粒，選取較新鮮、無霉菌污染、除去雜質(zhì)的料材。栽培袋配方為硬雜木屑45%，桑木屑30%，麥麩15%，蔗糖2%，紅糖1%，豆粕3%，玉米粉3%，石膏1%，碳氮比為62～64∶1。預(yù)先將木屑、麥麩、玉米粉和豆粕干料充分混和，后用水將糖和石膏溶解，均勻噴灑在混合料上進一步攪拌均勻，根據(jù)木屑的干濕度調(diào)節(jié)加水量?；旌吓淞系暮繎?yīng)控制在62%～65%。

3.4 設(shè)施培養(yǎng)室養(yǎng)菌 養(yǎng)菌過程溫度控制最為重要。接種后將菌棒移至可控溫的發(fā)菌室，在立式架上架平、放整齊，菌袋口朝向一致，發(fā)菌時架式橫排擺放，每100m2約可擺放2500個菌袋，并保持養(yǎng)菌室的干凈、整潔，避光和通風(fēng)。培養(yǎng)室內(nèi)要控制好溫度，溫度控制采用“前高、后低”的方式，前期溫度控制在24～26℃之間，促使菌絲快速萌發(fā)，加速菌絲生長速度；待室溫降到22～24℃，適時放慢菌絲生長速度防止陡長，偏低溫度促使菌絲生長粗壯。當(dāng)菌絲長滿菌袋3/4時培養(yǎng)室內(nèi)濕度控制在60%～70%，日通風(fēng)1～2次，每次通風(fēng)時間約為20min。菌袋進入養(yǎng)菌室后，需密切關(guān)注菌袋污染狀況，培養(yǎng)3～5d后開始經(jīng)常檢查菌袋的染菌情況，有雜菌污染的菌袋要及時挑出清理，以免擴散蔓延。

3.5 設(shè)施菌棚準(zhǔn)備

3.5.1 設(shè)施化菌棚搭建要求 根據(jù)遼西地區(qū)氣候條件，粗毛纖孔菌菌棒進棚下地可從夏初的5月底至6月初開始，生長至10月底，生長期內(nèi)要經(jīng)過一個高溫的夏季，因此降低溫度，確保濕度、通風(fēng)良好是粗毛纖孔菌子實體形成的重要前提。粗毛纖孔菌菌棚應(yīng)建在地勢平坦、臨近水源、排水通暢、采光適度、便于管理的地帶。采用雙層拱形棚，棚膜外加遮蔭網(wǎng)，遮蔭度達到70%～80%，可方便調(diào)節(jié)溫度、光照。建棚規(guī)格一般長40～50m，跨度寬8～10m，棚舉架高2.5m，前后檐高1.8m，四邊底部用塑料布圍成30cm高的圍欄。當(dāng)去除棚周薄膜進行通風(fēng)時，可以避免風(fēng)直接吹向粗毛纖孔菌菌棒，促進子實體生長且降低雜菌污染率。棚外面開好排水溝；棚內(nèi)設(shè)置雙排微噴管，相鄰微噴管頭間間距1.5～2.0m，既可節(jié)約用水又可滿足菌棒的用水需求。

3.5.2 棚內(nèi)擺棒平臺的處理 首先要將設(shè)施棚地表整平，鋪5cm厚的沙土，沙土預(yù)先過篩去掉碎石雜物，在烈日下暴曬 2～3d，利于排澇和保持棚內(nèi)濕度。也可采用保濕性良好的磚鋪地面，按東西走向整理出擺棒平臺，平臺寬150～180cm，平臺過道寬40cm、深10cm，擺棒平臺長度因棚而異，一般安排3排過道，棚膜和遮蔭網(wǎng)打開暴曬2～3d，按0.05kg/m2的用量向地面傾撒石灰粉，以防地面雜菌。

3.5.3 菌袋進棚 遼西地區(qū)在5月末至6月初選擇溫度較高的晴好無風(fēng)天氣，日出后日落前將菌袋運進棚內(nèi)擺袋，搬運時禁止野蠻裝卸，動作要輕，可防止菌袋搬運時袋、料分離進入空氣而加大污染率。擺袋行間距約25cm，鄰行間菌棒交錯排列，有利于通風(fēng)和防止子實體長大觸碰、粘連，保證子實體的商品品質(zhì)。

3.6 設(shè)施棚內(nèi)管理

3.6.1 轉(zhuǎn)色管理 菌棒養(yǎng)菌滿袋后，環(huán)境的調(diào)節(jié)可使菌棒顏色發(fā)生改變，光照和溫度是轉(zhuǎn)色的重要因素。可在白天卷起棚外遮蔭網(wǎng)，通過400～500Lx的散射光光線照射，每天向地表面噴水1～2次，調(diào)整空氣相對濕度在70%～80%之間，溫度控制在22～26℃之間，棚口通風(fēng)將CO2濃度控制在低于1000mg/kg，通常10～15d轉(zhuǎn)色完畢，菌棒表面由白色轉(zhuǎn)為淡黃色或黃色，菌絲內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)積累更豐富，分解轉(zhuǎn)化碳、氮源的能力更強，進一步促進了菌絲的代謝能力，有利于提高粗毛纖孔菌的產(chǎn)量和品質(zhì)。

3.6.2 菌袋割口 菌棒移到大棚后受到棚內(nèi)較大的晝夜溫差刺激和光照刺激，菌絲體生長健壯、轉(zhuǎn)色均勻，菌袋顏色變黃或長有棕黃色突起。選擇晴好天氣，在溫差小、氣溫15～25℃時進行棚內(nèi)割袋，以保證子實體長出。割袋時戴上無菌手套或酒精棉球擦手，割袋刀片用75%酒精浸泡消毒，各在菌棒上、下1/3處割2～3個口，割口寬度約5mm，長度5～6cm。

3.7 病蟲害防治

3.7.1 病害防治 由于高溫高濕的環(huán)境，粗毛纖孔菌在栽培過程中易染雜菌，木霉菌、綠霉菌、鏈孢霉菌等較為常見。應(yīng)選擇無霉變、無污染的栽培料原料，并及時清除被雜菌污染的原料；發(fā)菌期間染雜菌的菌袋要及時檢出并從粗毛纖孔菌栽培場所清除，去除被污染的栽培料袋后，可用生石灰噴灑地面或進行短期降溫、通風(fēng)處理防治；割袋時注意人員手及刀片的消毒，最大限度降低污染率。

3.7.2 蟲害防治 粗毛纖孔菌的主要蟲害有菌蚊、菌蠅、造橋蟲、夜蛾蟲等。可在栽培棚內(nèi)張掛黃色粘蟲板防治菌蚊、菌蠅；在栽培棚內(nèi)懸掛頻振式殺蟲燈誘殺造橋蟲。蟲害防治過程中，不要使用化學(xué)殺蟲劑。同時，清除栽培棚周邊雜草，及時排水排澇、防止積水，可有效減少蟲害的發(fā)生。

3.8 子實體形成管理 在子實體形成的過程中，溫度、濕度、光照都是重要的影響因素。粗毛纖孔菌屬于喜溫、喜濕、好氣型真菌，大棚內(nèi)溫度以25～29℃為宜，32℃以上其生長將受到明顯抑制；可以通過灌溉的方法調(diào)節(jié)土壤濕度在50%～60%之間；通過微噴的方法噴水4～5次/d，可調(diào)節(jié)棚內(nèi)空氣濕度在85%～92%之間。粗毛纖孔菌子實體形成還需要一定的光照條件，可將菌棚四周棚膜打開卷起約1.5m，保持散射光強度400～500Lx。除此之外，通風(fēng)也是粗毛纖孔菌菌絲生長代謝、子實體形成的重要環(huán)節(jié)，在高溫季節(jié)，通風(fēng)可降低棚內(nèi)溫度，增大空氣流通及日夜溫差，有利于提高粗毛纖孔菌子實體表面光潔度，提高品相。通風(fēng)換氣次數(shù)為2～3次/d，每次15～25min。一般菌袋割口后5～10d可形成子實體。

3.9 采收管理 子實體從開始形成到成熟需30～40d，應(yīng)根據(jù)粗毛纖孔菌子實體的大小、質(zhì)地致密度、顏色、軟硬狀態(tài)及時采收。當(dāng)粗毛纖孔菌呈半圓形，直徑達10cm以上，質(zhì)地緊實，菌蓋邊緣從白色變?yōu)槌赛S色再變?yōu)辄S棕色，邊緣變硬時即可采收。一般8月份采收第1潮，采收前降低濕度，2～3d前停止噴水和通風(fēng)，在菌棒上套上孢子收集袋收集成熟的孢子粉。收獲粗毛纖孔菌時，用刀將子實體基部直接切除，自然干燥或50～60℃烘干至含水量為10%～12%，然后將其裝袋出售或存放在陰涼干燥處進一步精深加工。采收后參照第1潮的管理辦法，在20d后采收第2潮子實體。一般情況下，一年可收獲2～3潮。

4 結(jié)語

（1）本研究粗毛纖孔菌菌種來源于遼寧西部活體桑樹，分離獲得純化菌株，品質(zhì)優(yōu)良。其新鮮子實體有明顯菇香，有勁道，不易碎，口感微甜，可手撕成片，韌性強，干燥子實體易碾成粉，子實體所產(chǎn)孢子偏小[4]，性狀穩(wěn)定（以上均為首次報道）；子實體商品性好，功能成分如粗多糖、總黃酮及多酚含量高，是值得推廣和開發(fā)的優(yōu)良品種。（2）粗毛纖孔菌栽培原料成本與其他食用菌品種相當(dāng)，人工管理相對簡單，每根菌棒成本不足3元，每棒產(chǎn)量30g以上，以目前市場售價300元/kg計，收入可觀，不失為鄉(xiāng)村振興的好項目。（3）粗毛纖孔菌野生資源稀少，難以找到大量的子實體，且受困于季節(jié)局限性，有必要對優(yōu)質(zhì)野生粗毛纖孔菌種質(zhì)資源開展詳盡的野外調(diào)查、搜集、篩選和保藏工作，豐富種質(zhì)資源庫，篩選發(fā)掘功能成分高的優(yōu)質(zhì)菌種，并加大栽培推廣力度以滿足日益增長的藥用菌資源的市場需要。

參考文獻

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（收稿日期：2024-03-29）