摘要：[目的】克隆色瓦綿羊乳腺組織糖基化磷脂酰肌醇錨定高密度脂蛋白結(jié)合蛋白1基因（GPIHBP1），明確其生物信息學(xué)特性及組織表達(dá)分布特征，為揭示GPIHBP1基因影響綿羊產(chǎn)奶性狀的作用機(jī)制提供參考依據(jù)?！痉椒ā靠寺∩呔d羊GPIHBP1基因編碼區(qū)（CDS）序列，通過(guò)ProtPara、ProtScale、SOPMA、SWISS-MODEL、TMHMM-2.0等在線軟件進(jìn)行生物信息學(xué)分析，并以實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)該基因在色瓦綿羊乳腺、肌肉、心臟、腎臟、肝臟、小腸、瘤胃和卵巢等8個(gè)組織中的表達(dá)情況?！窘Y(jié)果]色瓦綿羊GPIHBP1基因CDS序列長(zhǎng)519bp，共編碼172個(gè)氨基酸殘基，與山羊GPIHBP1氨基酸序列（XM_018058666.1）比對(duì)，有4處氨基酸發(fā)生突變（2A→P、2V→A、130S→N和17M→V）;色瓦綿羊GPIHBP1蛋白分子量為18063.87Da，理論等電點(diǎn)（pl）為4.29，不存在跨膜螺旋結(jié)構(gòu)，但存在信號(hào)肽（位于第20～21位氨基酸處），是一種細(xì)胞外的酸性親水性蛋白。色瓦綿羊GPIHBP1蛋白存在12個(gè)磷酸化位點(diǎn)（6個(gè)絲氨酸磷酸化位點(diǎn)，5個(gè)蘇氨酸磷酸化位點(diǎn)，1個(gè)酪氨酸磷酸化位點(diǎn)），其二級(jí)結(jié)構(gòu)以無(wú)規(guī)則卷曲狀態(tài)（占55.07%）為主，其次是α-螺旋（占35.47%），延伸鏈、β-轉(zhuǎn)角分別占5.81%和4.65%。GPIHBP7基因在色瓦綿羊乳腺、肌肉、心臟、腎臟、肝臟、小腸、瘤胃和卵巢等8個(gè)組織中均有表達(dá)，以乳腺中的相對(duì)表達(dá)量最高，其次是心臟和肝臟，均極顯著高于肌肉中的相對(duì)表達(dá)量（Plt;0.01）?！窘Y(jié)論】GPIHBP1基因在色瓦綿羊不同組織中均有表達(dá)，且以乳腺中的相對(duì)表達(dá)量最高，可能與乳脂相關(guān)基因表達(dá)的增減有關(guān)，其中，GPIHBP1基因與LPL基因共同作用而參與綿羊泌乳調(diào)控。

關(guān)鍵詞：色瓦綿羊；GPIHBP1基因；乳腺；產(chǎn)奶性狀；泌乳調(diào)控

中圖分類號(hào)：S826.89文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：2095-1191（2024）01-0235-08

Cloning and tissue expression characteristics analysis of GPIHBP1gene in Sewa sheep

PAN Jun-ru1，LI Rui1，ZHANG Xin'，Ren-qing-cuo-mu2，SUN Yu2.3，YANG Jing-quan?

ZHANG Zhen-zhen'，CHEN Hua-li1，ZHAO Wang-sheng?，SONG Tian-zeng2

（'School of Life Science and Engineering，Southwest University of Science and Technology，Mianyang，Sichuan 621010，China;2Institute ofAnimal Science，XizangAcademy of Agricultural and Animal Husbandry Science，Lhasa， Xizang850009，China;3College of Animal Science and Technology，Henan Agricultural University，Zhengzhou Henan450002，China;?Animal Husbandry and Veterinary Institute，Xinjiang Academy of Agricultural and Reclamation Science，Shihezi，Xinjiang832000，China）

Abstract：[Objective]The glycosylated phosphatidylinositol anchored HDL-binding protein Igene（GPIHBP1）in the mammary gland tissue of Sewa sheep was cloned to clarify its bioinformatics characteristics and tissue expression dis-tribution characteristics，which provided areference for revealing the mechanismof GPIHBP1 genes affecting milk pro-duction traits in sheep.【Method]The sequence of coding region（CDS）of GPIHBP1gene of Sewa sheep was cloned， and bioinformaticsanalysiswas carried outby online softwares such as ProtPara，ProtScale，SOPMA，SWISS-MODEL，and TMHMM-2.0，and real-time fluorescence quantitative PCR was used to detect the expression of this gene in mam-mary gland，muscle，heart，kidney，liver，small intestine，rumen and ovary in sewa sheep.[Result]The CDS sequence of Sewa sheep GPIHBP1gene was519bp long，encoding atotal of172amino acid residues，and compared with the amino acid sequence of goat GPIHBP1（XM_018058666.1），there were four amino acid changes（A→P，“V→A，130s→N and'70M→V）;the molecular weight of Sewa sheep GPIHBPl protein was18063.87Da，and the theoretical isoelectric point（pI）was4.29.There was no transmembrane helical structure，but there was asignal peptide（located at amino acids20-21），which was an extracellular acidic hydrophilic protein.There were12phosphorylation sites（6serine phosphoryla-tion sites，5threonine phosphorylation sites，I tyrosine phosphorylation site）existed in the Sewa sheep GPIHBP1pro-tein，and its secondary structure was in the state of iregularly curls（55.07%），followed by α-helix（35.47%），and the extended strand andβ-turns accounted for5.81%and4.65%，respectively.GPIHBP1gene was expressed in eight tssues including mammary gland，muscle，heart，kidney，liver，small intestine，rumen and ovary of Sewa sheep，and the highest relative expression was found in the mammary gland，followed by the heart and liver，which were both extremely signifi-cant higher than that in the muscle（Plt;0.01）.【Conclusion]GPIHBP1 gene is expressed in different tissues of Sewa sheep，and the relative expression in mammary gland is the highest，which might be related to the increase or decrease in theexpressionof milk fat-related genes，among which，GPIHBP1 gene actstogether with LPL gene and participate in the regulation of lactation in sheep

Key words：Sewa sheep;GPIHBP1 gene;mammary gland;milk production traits;lactation regulation

Foundation items：National Natural Science Foundation of China（32260824）;Central Government Guiding Local Science andTechnology Development Fund Prject（XZ202201YD0007C）

0引言

【研究意義】色瓦綿羊是在我國(guó)西藏地區(qū)特有的草原綿羊類群，棲息于海拔超過(guò)4800m的高原地區(qū)，具有繁殖速度快、體質(zhì)強(qiáng)健有力、產(chǎn)奶量和屠宰率高、耐力強(qiáng)等特點(diǎn)，因其特殊的生理結(jié)構(gòu)、優(yōu)良的生產(chǎn)性能及優(yōu)秀的肉質(zhì)性狀，已被列為我國(guó)重要的地方畜禽品種之一（王耀梅等，2021;邵會(huì)等，2022;符漢宇等，2023）。近年來(lái)，隨著我國(guó)養(yǎng)羊業(yè)的快速發(fā)展，色瓦綿羊逐漸得到廣大消費(fèi)者青睞，其生產(chǎn)性能已被世界上許多國(guó)家和地區(qū)認(rèn)可。色瓦綿羊體高較普通綿羊高出12～15cm，體重較普通綿羊約重10kg，產(chǎn)奶量較普通綿羊提高25%;且色瓦綿羊肉質(zhì)中的蛋白和微量元素含量高，脂肪含量低，其蛋白含量為20.5g/100g、脂肪含量為1.5g/100g、膽固醇含量為35.4mg/100g、不飽和脂肪酸含量為51.3%、氨基酸含量為16.2g/100g（扎西次仁等，2020）。色瓦綿羊作為國(guó)家級(jí)遺傳資源，其發(fā)展及品牌建設(shè)對(duì)推動(dòng)西藏色瓦綿羊畜禽遺傳資源的可持續(xù)開發(fā)和利用具有重要意義。【前人研究進(jìn)展】糖基化磷脂酰肌醇錨定高密度脂蛋白結(jié)合蛋白1（Glycosylated phosphatidylinositol-anchored HDL-binding proteins1，GPIHBP1）是在中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞上鑒定獲得的一種可錨定高密度脂蛋白的小分子細(xì)胞表面蛋白，是淋巴細(xì)胞抗原6蛋白家族成員之一（Ioka et al.，2003）。牛GPIHBP1基因存在可變剪切體，具備2種翻譯蛋白，分別由171和142個(gè)氨基酸組成（李永青和操禮軍，2022）。典型的GPIHBP1具有4個(gè)重要結(jié)構(gòu)域（Beigneux et al.，2007），分別是信號(hào)肽結(jié)構(gòu)域、氨基末端富集帶負(fù)電的氨基酸酸性結(jié)構(gòu)域、Ly6結(jié)構(gòu)域及梭基末端的糖基化磷脂酰肌醇（GPI）錨定結(jié)構(gòu)域，其中Ly6結(jié)構(gòu)域包含1個(gè)N-糖基化位點(diǎn)，且該位點(diǎn)的糖基化對(duì)于GPIHBP1從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞非常重要（Beigneux et al.，2009b）。GPIHBP1蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)后，其信號(hào)肽序列被切除，同時(shí)羧基末端的疏水序列被錨定結(jié)構(gòu)所替代（Beigneux et al.，2009a），因此Ly6保守域及酸性區(qū)域?qū)Τ墒斓腉PIHBP1蛋白具有重要意義。Ly6保守域及其酸性區(qū)域在GPIHBP1與脂蛋白脂肪酶（Lipoprotein lipase，LPL）和乳糜微粒結(jié)合時(shí)發(fā)揮重要作用（Gin et al.，2008;Weinstein et al.，2008），將Ly6結(jié)構(gòu)域中的半胱氨酸替換為丙氨酸后，突變的GPIHBP1可到達(dá)細(xì)胞表面，但無(wú)法與LPL結(jié)合（Beigneux et al.，2009a，2009b），進(jìn)而引起患者出現(xiàn)嚴(yán)重的高甘油三酯血癥或乳糜微粒血癥（Wang and Hegele，2007）。此外，Jiang等（2010）通過(guò)中國(guó)荷斯坦奶牛群體產(chǎn)奶性狀的全基因組關(guān)聯(lián)研究，證實(shí)GPIHBP1基因是一個(gè)新的乳脂含量性狀候選基因；侯飛（2011）基于DNA混合池測(cè)序?qū)ふ尹S牛GPIHBP1基因的SNPs，結(jié)果在南陽(yáng)牛、郟縣紅牛、魯西牛、秦川牛和中國(guó)荷斯坦牛的GPIHBP1基因編碼區(qū)均發(fā)現(xiàn)存在3個(gè)SNPs，為改良地方黃牛品種提供了理論依據(jù)；邢淑華（2013）基于豬GPIHBP1基因的作用機(jī)理研究發(fā)現(xiàn)，GPIHBP1基因與LPL基因在mRNA水平上的組織表達(dá)模式相似，但存在性別差異；楊潔（2014）通過(guò)分析GPIHBP1基因啟動(dòng)子多態(tài)性與泌乳性狀（產(chǎn)奶量、乳脂量、乳蛋白量、乳脂率及乳蛋白率）的關(guān)聯(lián)程度，發(fā)現(xiàn)野生型的育種值極顯著低于突變型；Yang等（2014）研究表明，GPIHBP1基因可能是影響奶牛乳脂含量的功能基因，且該基因啟動(dòng)子區(qū)的G/A突變與奶牛產(chǎn)奶量、乳蛋白量及乳脂率等呈極顯著相關(guān)。綜上所述，GPIHBP1基因可作為調(diào)控哺乳動(dòng)物泌乳性狀的候選基因?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前，GPIHBP1基因在人類及小鼠和牛上的研究較多（Ioka et al.，2003;Wang and Hegele，2007;Jiang et al.，2010;邢淑華，2013;李永青和操禮軍，2022），但在綿羊上尚無(wú)任何文獻(xiàn)報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】克隆色瓦綿羊乳腺組織GPIHBP1基因，并在生物信息學(xué)分析的基礎(chǔ)上比較該基因在色瓦綿羊不同組織

中的表達(dá)差異，為揭示GPIHBP1基因影響綿羊產(chǎn)奶性狀的作用機(jī)制提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

在西藏班戈縣挑選3頭體格相近、健康的色瓦綿羊，屠宰后采集乳腺、肌肉、心臟、腎臟、肝臟、小腸、瘤胃和卵巢等組織樣品；以Hank's液將各組織樣品清洗3次，去除結(jié)締組織和脂肪組織，分別剪取適量組織并編號(hào)放入冷凍管中，液氮凍存?zhèn)溆谩?dòng)物試驗(yàn)由西南科技大學(xué)生物與健康倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，批準(zhǔn)號(hào)L2022014。Hank's液購(gòu)自福州飛凈生物科技有限公司；TRIzol試劑購(gòu)自廣州濟(jì)恒醫(yī)藥科技有限公司；Taq DNA聚合酶和SuperReal熒光定量預(yù)混試劑增強(qiáng)版購(gòu)自天根生化科技（北京）有限公司；RNase-Free ddH?O購(gòu)自北京蘭杰柯科技有限公司。主要儀器設(shè)備：電泳儀（南京普陽(yáng)科學(xué)儀器研究所）、SpectraMax QuickDrop超微量分光光度計(jì)（濟(jì)南來(lái)寶醫(yī)療器械有限公司）、高速離心機(jī)[阿法拉伐（上海）技術(shù)有限公司]、生化培養(yǎng)箱（寧波江南儀器廠）及超凈工作臺(tái)（濟(jì)南童鑫生物科技有限公司）。

1.2總RNA提取及cDNA合成

按照TRIzol試劑說(shuō)明分別提取色瓦綿羊乳腺、肌肉、心臟、腎臟、肝臟、小腸、瘤胃和卵巢等組織總RNA，以0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA完整性，采用SpectraMax QuickDrop超微量分光光度計(jì)檢測(cè)其質(zhì)量和濃度。以提取的總RNA為模板，按照ReverAid First Strand cDNA Synthesis Kit反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明合成cDNA，反轉(zhuǎn)錄合成程序：42℃15min，85℃5s，冰上孵育2min。合成的cDNA置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3GPIHBP1基因引物設(shè)計(jì)與合成

根據(jù)NCBI已公布的綿羊GPIHBP1基因（XM_012183471）序列，利用Primer Premier5.0設(shè)計(jì)GPIHBP1基因特異性引物及實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增引物（表1），以GAPDH基因（NM_001190390.1）為內(nèi)參基因，委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

1.4色瓦綿羊GPIHBP1基因克隆及測(cè)序

以色瓦綿羊各組織反轉(zhuǎn)錄合成的cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系20.0μL：cDNA模板1.0μL，Taq DNA聚合酶10.0μL，上、下游引物各1.0μL，ddH?O7.0μL。擴(kuò)增程序：94℃預(yù)變性2min;95℃30s，62℃30s，72℃33s，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)；72℃延伸30s。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)合格后，切膠回收目的片段并連接至pMD18-T載體上，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，擴(kuò)大培養(yǎng)后進(jìn)行菌液PCR鑒定，陽(yáng)性質(zhì)粒送至成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司測(cè)序。

1.5生物信息學(xué)分析

通過(guò)BioXM2.6獲得色瓦綿羊GPIHBP1基因推導(dǎo)氨基酸序列排列圖，并利用ProtPara、ProtScale、SOPMA、SWISS-MODEL、TMHMM-2.0等在線軟件對(duì)GPIHBP1蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析。相關(guān)生物信息學(xué)分析軟件及其功能見(jiàn)表2。

1.6實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR按照SuperReal PreMix Plus（SYBR Green）試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作，反應(yīng)體系20.0pμL：2×SG Fast qPCR Master Mix10.0μL，色瓦綿羊各組織cDNA模板1.0μL，上、下游引物各1.0μL，PCR-grade Water7.0μL。擴(kuò)增程序：94℃預(yù)變性2min;95℃30s，60℃30s，72℃8s，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。每個(gè)組織樣品設(shè)3個(gè)重復(fù)。

1.7統(tǒng)計(jì)分析

將GPIHBP1基因在色瓦綿羊肌肉組織中的表達(dá)量設(shè)為1，通過(guò)2-法換算GPIHBP1基因在色瓦綿羊其他組織中的相對(duì)表達(dá)量，利用GraphPad Prism9.0繪制表達(dá)量差異圖，并以SPASS29.0進(jìn)行單因素方差分析（One-wayANOVA）。

2結(jié)果與分析

2.1色瓦綿羊GPIHBP1基因克隆及測(cè)序結(jié)構(gòu)

以乳腺組織cDNA為模板，PCR擴(kuò)增色瓦綿羊GPIHBP1基因編碼區(qū)（CDS）序列，經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)獲得與預(yù)期結(jié)果相符的目的基因片段，表明成功擴(kuò)增出色瓦綿羊GPIHBP1基因。經(jīng)測(cè)序分析得知，色瓦綿羊GPIHBP1基因CDS序列長(zhǎng)519bp，共編碼172個(gè)氨基酸殘基。將色瓦綿羊GPIHBP1氨基酸序列與山羊GPIHBP1氨基酸序列（XM_018058666.1）進(jìn)行比對(duì)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有4處氨基酸發(fā)生改變（圖1），分別是：第32位的丙氨酸突變?yōu)楦彼幔?2A→P），第52位的纈氨酸突變?yōu)楸彼幔?V→A），第130位的絲氨酸突變?yōu)樘於０罚?30S→N），第170位的蛋氨酸突變?yōu)槔i氨酸（170M→V）。

2.2色瓦綿羊GPIHBP1基因生物信息學(xué)分析結(jié)果

2.2.1理化性質(zhì)分析結(jié)果EXPASY預(yù)測(cè)結(jié)果顯示，色瓦綿羊GPIHBP1蛋白包含172個(gè)氨基酸（表3）。其中，甘氨酸（Gly）含量最高，占11.0%;其次是丙氨酸（Ala，占10.5%）和亮氨酸（Leu，占8.7%）;組氨酸（His）和甲硫氨酸（Met）含量最低，各占0.6%。色瓦綿羊GPIHBP1蛋白分子量為18063.87Da，理論等電點(diǎn)（pI）為4.29，分子式為CsH116N222O?67S12。色瓦綿羊GPIHBP1蛋白序列中帶負(fù)電荷氨基酸（Asp+Glu）為24個(gè)，帶正電荷氨基酸（Arg+Lys）為11個(gè)，屬于酸性蛋白。

2.2.2親/疏水性預(yù)測(cè)結(jié)果采用ProtScale預(yù)測(cè)色瓦綿羊GPIHBP1蛋白親/疏水性，結(jié)果（圖2）顯示，處于負(fù)值區(qū)域的氨基酸數(shù)量明顯多于處于正值區(qū)域的氨基酸，高峰值（正值）區(qū)域表示疏水區(qū)域，最高點(diǎn)為3.178，位于第8位氨基酸位點(diǎn)上；低谷區(qū)（負(fù)值）區(qū)域?yàn)橛H水區(qū)域，最低值為-3.500，位于第42和43位氨基酸位點(diǎn)上，即色瓦綿羊GPIHBP1蛋白屬于親水性蛋白。

2.2.3信號(hào)肽及磷酸化位點(diǎn)預(yù)測(cè)結(jié)果使用Sig-nalP4.1預(yù)測(cè)結(jié)果（圖3）顯示，色瓦綿羊GPIHBP1蛋白存在信號(hào)肽，且信號(hào)肽剪切位點(diǎn)位于第20～21位氨基酸處。NetPhos3.1預(yù)測(cè)結(jié)果（圖4）顯示，色瓦綿羊GPIHBP1蛋白存在12個(gè)磷酸化位點(diǎn)，其中，絲氨酸磷酸化位點(diǎn)有6個(gè)，蘇氨酸磷酸化位點(diǎn)有5個(gè)，酪氨酸磷酸化位點(diǎn)有1個(gè)。

2.2.4亞細(xì)胞定位及跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果通過(guò)PSORTⅡ預(yù)測(cè)色瓦綿羊GPIHBP1蛋白亞細(xì)胞定位情況，結(jié)果表明，44.4%定位于細(xì)胞外，33.3%定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，22.3%定位于高爾基體。TMHMM-2.0預(yù)測(cè)GPIHBP1蛋白跨膜結(jié)構(gòu)，結(jié)果（圖5）顯示色瓦綿羊GPIHBP1蛋白不包含跨膜螺旋結(jié)構(gòu)。

2.2.5蛋白二、三級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定結(jié)果SOPMA預(yù)測(cè)結(jié)果（圖6）顯示，色瓦綿羊GPIHBP1蛋白由172個(gè)氨基酸組成。其中，有61個(gè)氨基酸組成α-螺旋，占35.47%;有10個(gè)氨基酸組成延伸鏈，占5.81%;有8個(gè)氨基酸組成β-轉(zhuǎn)角，占4.65%;有93個(gè)氨基酸處于無(wú)規(guī)則狀態(tài)，占55.07%。采用TMHMM-2.0預(yù)測(cè)色瓦綿羊GPIHBP1蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)存在2種三級(jí)結(jié)構(gòu)模型，如圖7所示。

2.3色瓦綿羊各組織中GPIHBP1基因的表達(dá)特征

通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)GPIHBP1基因在色瓦綿羊乳腺、肌肉、心臟、腎臟、肝臟、小腸、瘤胃和卵巢等組織中的表達(dá)情況，結(jié)果表明GPIHBP1基因在8個(gè)組織中均有表達(dá)（圖8），以乳腺中的相對(duì)表達(dá)量最高，其次是心臟和肝臟，均極顯著高于在肌肉中的相對(duì)表達(dá)量（Plt;0.01）。

3討論

目前，有關(guān)GPIHBP1基因的研究主要集中于疾病治療（李藍(lán)江等，2015;柳鑫等，2020），在豬和牛等家畜上的研究主要用于繁殖調(diào)控（侯飛，2011;邢淑華，2013;楊潔，2014;陳建寧，2015）。乳腺是具有泌乳功能的特殊腺體，在哺乳動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中經(jīng)歷多次生長(zhǎng)、分化和退化階段，其泌乳性能影響后代的存活率和生長(zhǎng)速度；而哺乳動(dòng)物的泌乳規(guī)律性變化（泌乳量、乳成分等）取決于乳腺組織中相關(guān)基因的表達(dá)差異（郝志云，2018）。本研究結(jié)果顯示，色瓦綿羊GPIHBP1基因CDS序列長(zhǎng)519bp，共編碼172個(gè)氨基酸殘基；色瓦綿羊GPIHBP1氨基酸序列與山羊GPIHBP1氨基酸序列相比，共有4處氨基酸發(fā)生突變，分別是32A→P、?2V→A、30S→N和170M→V。

色瓦綿羊GPIHBP1蛋白分子量為18063.87Da，pl為4.29，是一種細(xì)胞外的酸性親水性蛋白，在乳腺組織中的相對(duì)表達(dá)量最高。

LPL是血漿脂蛋白代謝中最重要的生物酶之一，可為橫紋肌提供能量物質(zhì)，或在脂肪組織中以甘油三酯的形式儲(chǔ)存，其正常調(diào)控對(duì)于機(jī)體向組織提供脂質(zhì)營(yíng)養(yǎng)至關(guān)重要（Merkel et al.，2002;Wang and Eckel，2009）。Merkel等（2002）通過(guò)探討牛GPIHBP1基因?qū)θ榈鞍兹橹嚓P(guān)基因的調(diào)控作用，結(jié)果表明，當(dāng)GPIHBP1基因高表達(dá)時(shí)，LPL和CD36基因表達(dá)水平呈明顯上升趨勢(shì)，即GPIHBP1基因表達(dá)量升高后所結(jié)合的LPL表達(dá)量也增加，從而有效促進(jìn)乳脂分解。Yang等（2014）通過(guò)研究過(guò)表達(dá)和沉默GPIHBP1基因?qū)θ橹嚓P(guān)基因表達(dá)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)GPIHBP1基因啟動(dòng)子區(qū)SNP位點(diǎn)（chr14：2553525）與乳脂含量間存在強(qiáng)烈的關(guān)聯(lián)性，當(dāng)GPIHBP1基因表達(dá)降低時(shí)，LPL與GPIHBP1的結(jié)合隨之減少，致使甘油三酯的脂解過(guò)程在乳腺上皮細(xì)胞中被抑制，進(jìn)而導(dǎo)致甘油三酯積累及乳脂含量增加。本研究結(jié)果表明，GPIHBP1基因在色瓦綿羊乳腺組織中高表達(dá)，可能是GPIHBP1與LPL共同作用的結(jié)果。

Ly6保守域及酸性區(qū)域?qū)τ贕PIHBP1與LPL和乳糜微粒相結(jié)合具有重要作用（Gin et al.，2008）。GPIHBP1在體內(nèi)代表著LPL的重要結(jié)合位點(diǎn)，對(duì)LPL的運(yùn)輸和定位起關(guān)鍵作用，還可作為內(nèi)皮細(xì)胞的脂解平臺(tái)（Young et al.，2007;Dallinga-Thie et al.，2010;Beigneux et al.，2011;Davies et al.，2012）。有關(guān)山羊的研究發(fā)現(xiàn)，不同泌乳階段乳腺組織中的LPL基因表達(dá)水平存在差異，泌乳初期LPL基因表達(dá)量最高，而泌乳中期和干奶期的表達(dá)水平明顯下降，LPL基因在乳腺中合成并介導(dǎo)乳腺內(nèi)的脂肪分解過(guò)程，對(duì)提供脂肪營(yíng)養(yǎng)以生產(chǎn)乳脂具有重要意義（Olivecrona et al.，2010）。LPL基因在山羊泌乳初期高表達(dá)，與其在泌乳初期脂肪組織動(dòng)員體脂用于乳脂合成的情況相符（韓雪峰，2007）。鑒于GPIHBP1與LPL的關(guān)聯(lián)性，故推測(cè)GPIHBP1也參與乳脂合成，與GPIHBP1基因在色瓦綿羊乳腺組織中高表達(dá)的結(jié)論相符。陳建寧（2015）研究表明，GPIHBP1基因主要在豬的心臟、骨骼肌、脂肪和肺臟等4個(gè)組織中高表達(dá)；但在人類疾病和小鼠中的研究顯示，GPIHBP1基因在肌肉組織中的表達(dá)量相對(duì)較低（姜延志等，2013;李藍(lán)江等，2015;柳鑫等，2020）。本研究結(jié)果顯示，GPIHBP1基因在色瓦綿羊乳腺、肌肉、心臟、腎臟、肝臟、小腸、瘤胃和卵巢等8個(gè)組織中均有表達(dá)，以乳腺中的相對(duì)表達(dá)量最高，其次是心臟和肝臟，在肌肉中的表達(dá)量最低。

綜上所述，GPIHBP1基因在哺乳動(dòng)物泌乳過(guò)程中發(fā)揮重要作用，且與LPL緊密相連，共同發(fā)揮作用，故推測(cè)GPIHBP1通過(guò)調(diào)節(jié)乳腺組織內(nèi)脂蛋白代謝而影響乳脂的再合成，從而影響綿羊泌乳量（楊潔，2014）。本研究結(jié)論進(jìn)一步證實(shí)，在色瓦綿羊的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，GPIHBP1基因與LPL基因共同作用而參與其泌乳調(diào)控作用，但今后還需深入研究GPIHBP1基因在乳腺組織中的生物學(xué)功能和調(diào)控機(jī)制，以揭示GPIHBP1與LPL共同作用乳脂脂解的具體作用機(jī)理。

4結(jié)論

GPIHBP1基因在色瓦綿羊不同組織中均有表達(dá)，且以乳腺中的相對(duì)表達(dá)量最高，可能與乳脂相關(guān)基因表達(dá)的增減有關(guān)，其中，GPIHBP1基因與LPL基因共同作用而參與綿羊泌乳調(diào)控。

參考文獻(xiàn)：

陳建寧.2015.豬GPIHBP1基因啟動(dòng)子功能研究[D].雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué).[Chen JN.2015.Analysis of pig GPIHBP gene promoterfunction[D].Ya'an：Sichuan Agricultura University.]

符漢宇，石華輝，張路清，譚占坤，劉鎖珠，徐業(yè)芬.2023.電刺激器法在西藏色瓦綿羊人工采精中的應(yīng)用試驗(yàn)[J].高原農(nóng)業(yè)，6（1）：24-30.[Fu HY，Shi HH，Zhang LQ，Tan ZK，Liu SZ，XuYF.2023.Experimental application of the electric stimulator method in the artificial semen collection of Tibetan Seva sheep[J].Journal of Plateau Agriculture，6（1）：24-30.]doi：10.19707j.cnki.jpa.2023.01.004.

韓雪峰.2007.西農(nóng)薩能奶山羊乳腺cDNA文庫(kù)構(gòu)建和LPL基因的克隆與序列分析[D].楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué).[Han XF.2007.Construction of cDNA library of Xinong Saaned dairy goat mammary glamd and cloning and sequence analysis of LPL gene[D].Yangling：Northwest Aamp;FUniversity.]

郝志云.2018.綿羊乳腺組織RNA-Seq及STAT5a基因遺傳特征分析[D].蘭州：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué).[Hao ZY.2018.Sheep mammary gland RNA-Seq and genetic characteristics of STAT5a genes[D].Lanzhou：Gansu Agricultural Univer-sity.]

侯飛.2011.黃牛ANGPTL4、GPIHBP1基因SNPs檢測(cè)及其與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)分析[D].楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)[Hou F.2011.The analysis ANGPTL4，GPIHBP1 SNP of"bovine and association with growth traits[D].Yangling：Northwest Aamp;FUniversity.]

姜延志，岑王敏，邢淑華，陳建寧，李學(xué)偉.2013.GPIHBP1分子與血漿中甘油三酯脂蛋白脂解代謝研究進(jìn)展[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，44（5）：665-672.[Jiang YZ，Cen WM，Xing SH，Chen JN，LiXW.2013.Newinsights in GPIHBP1and the intravascular processing of triglyceride-rich lipopro-teins[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica，44（5）：665-672.]doi：10.11843/j.issn.0366-6964.2013.05.001.

李藍(lán)江，李賀，黃穎，楊瑞，廖澤容，張鴻明，許冰瑩.2015.GPIHBP1基因rs142861814位點(diǎn)多態(tài)性與高甘油三酯血癥的相關(guān)性[J].昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，36（7）：50-53.[Li LJ，Li H，Huang Y，Yang R，Liao ZR，Zhang HM，Xu BY.2015.The correlation between GPIHBP1 gene rs142861814loci polymorphism and hypertriglyceridemia[J].Journal of Kunming Medical University，36（7）：50-53.]doi：10.3969/j.issn.1003-4706.2015.07.011.

李永青，操禮軍.2022.荷斯坦奶牛泌乳相關(guān)基因研究進(jìn)展[J].草食家畜，（3）：1-5.[LiYQ，Cao LJ.2022.Research progress on lactation related genes in Holstein dairy cows[J].Grass-feeding Livestock，（3）：1-5.]doi：10.16863/j.cnki.1003-6377.2022.03.001.

柳鑫，徐有青，崔純瑩，趙志剛.2020.GPIHBP1基因敲除小鼠在嚴(yán)重高三酰甘油血癥急性胰腺炎導(dǎo)致肺損傷研究中的應(yīng)用[J].首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，41（4）：564-569.[Liu X，Xu YQ，Cui CY，Zhao ZG.2020.Application of GPIHBP1 gene knockout mice in the study of lung injury induced by acute pancreatitis with severehypertriglyceride-mia[J].Journal of Capital Medical University，41（4）：564-569.]doi：10.3969/j.issn.1006-7795.2020.04.012.

邵會(huì)，程志鵬，孫家樂(lè)，任子利.2022.日糧中添加不同濃度牛至油對(duì)色瓦綿羊血液生理生化指標(biāo)的影響[J].高原農(nóng)業(yè)，6（4）：356-361.[Shao H，Cheng ZP，Sun JL，Ren ZL.2022.Effects of different concentrations of oregano essen-tial oil on blood physiological and biochemical indexes of Sewa sheep[J].Journalof Plateau Agriculture，6（4）：356-361.]doi：10.19707j.cnki.jpa.2022.04.006.

王耀梅，田孟芳，孫家樂(lè)，任子利，趙彥玲.2021.不同蛋白質(zhì)水平精料對(duì)色瓦綿羊生產(chǎn)性能及生長(zhǎng)速度、肉品質(zhì)相關(guān)基因表達(dá)的影響[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，（16）：92-98.[Wang YM，Tian MF，Sun JL，Ren ZL，Zhao YL.2021.Effects of different protein concentrate level on production performance，growth speed and meat quality related gene expression in Sewa sheep[J].Heilongjiang Animal Scien ce and Veterinary Medicine，（16）：92-98.]doi：10.13881j.cnki.hljxmsy.2021.03.0400.

邢淑華.2013.豬GPIHBPl和ApoCI基因分子作用機(jī)理的初步研究[D].雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué).[Xing SH.2013.Primary study on molecular mechanism of the porcine GPIHBP1 and ApoCIl genes[D].Ya'an：Sichuan Agricul-tural University.]

楊潔.2014.奶牛產(chǎn)奶性狀候選基因GPIHBP1功能驗(yàn)證及基于RNA-seq候選基因挖掘[D].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)[Yang J.2014.Functional verification of GPIHBP1 for milk production traits and detection of candidate genes based onRNA-sequencing[D].Beijing：China Agricultural University.]

扎西次仁，扎西旺杰，次仁桑珠，鮑興旺，尼瑪拉姆，白久扎西，宋天增.2020.色瓦綿羊肉營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)特性研究[J].當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè)，（11）：8-10.[Tashitsering，Tashiwangjie，Tseringsangzhu，Bao XW，Nimalam，Baijiutashi，Song TZ.2020.Study on nutritional quality characteristics of Sewa sheep[J].Modern Animal Husbandry，（11）：8-10.]doi：10.14070/j.cnki.15-1150.2020.11.002.

Beigneux AP，Davies BS J，Tat S，Chen J，Gin P，Voss CV，Weinstein MM，Bensadoun A，Pullinger CR，F(xiàn)ong LG，Young SG.2011.Assesing the role of the glycosylphosp-hatidylinositol-anchored high density lipoprotein-binding protein1（GPIHBP1）three-finger domain in binding lipo-protein lipase[J].Journal of Biological Chemistry，286（22）：19735-19743.doi：10.1074/jbc.M111.242024.

Beigneux AP，Weinstein MM，Davies BS J，Gin P，Bensa-doun A，F(xiàn)ong LG，Young SG.2009a.GPIHBP1and"lipolysis：An update[J].CurrentOpinion in Lipidology，20（3）：211-216.doi：10.1097/mol.0b013e32832ac026.

Beigneux AP，Davies BS J，Gin P，Weinstein MM，F(xiàn)arber E，Qiao X，Peale F，Bunting S，WalzemR L，Wong JS，Blaner WS，Ding ZM，Melford K，WongsirirojN，Shu X，de Sauvage F，Ryan RO，F(xiàn)ong LG，Bensadoun A，Young SG.2007.Glycosylphosphatidylinositol-anchored high-density lipoprotein-binding protein Iplays acritical rolein the lipolytic processing of chylomicrons[J].Cell Meta-bolism，5（4）：279-291.doi：10.1016/j.cmet.2007.02.002.

Beigneux AP，Gin P，Davies BSJ，Weinstein MM，Bensa-doun A，F(xiàn)ong LG，Young SG.2009b.Highly conserved cysteines within the Ly6domain of GPIHBP1 are crucial for the binding of lipoprotein lipase[J].Journal of Biologi-cal Chemistry，284（44）：30240-30247.doi：10.1074/jbc M109.046391.

Dallinga-Thie GM，F(xiàn)ranssen R，MooijHL，VisserM E，Carli-jne Hassing H，Peelman F，KasteleinJ JP，Péterfy M，Nieuwdorp M.2010.The metabolism of triglyceride-rich lipoproteins revisited：New players，new insight[J].Athe-rosclerosis，211（1）：1-8.doi：10.1016/j.atherosclerosis.2009.12.027.

Davies BSJ，Goulbourne CN，Barnes RH，Turlo KA，Gin P，Vaughan S，Vaux DJ，Bensadoun A，Beigneux AP，F(xiàn)ong LG，Young SG.2012.Assessing mechanisms of GPIHBP1and lipoprotein lipase movement across endo-thelial cells[J].Journal of Lipid Research，53（12）：2690-2697.doi：10.1194/jlr.m031559.

Gin P，Yin LY，Davies BSJ，Weinstein MM，Ryan RO，Ben-sadounA，F(xiàn)ong LG，Young SG，Beigneux AP.2008.The acidic domain of GPIHBP1is important for thebinding of lipoprotein lipase and chylomicrons[J].Journalof Biologi-cal Chemistry，283（43）：29554-29562.doi：10.1074/jbc.M802579200.

Ioka RX，Kang MJ，Kamiyama S，Kim DH，Magoori K，KamatakiA，Ito Y，TakeiYA，Sasaki M，SuzukiT，Sasano H，Sakai J，F(xiàn)ujino T，Yamamoto TT.2003.Expression cloning and characterization of anovel glycosylphospha-tidylinositol-anchored high density lipoprotein-binding protein，GPI-HBP1[J].Journal ofBiological Chemistry，278（9）：7344-7349.doi：10.1074/jbc.M211932200.

Jang L，Liu JF，Sun DX，Ma PP，Ding XD，Yu Y，Zhang Q.2010.Genome wide association studies for milk produc-tion traits in Chinese Holstein population[J].PLoS One，5（10）：el3661.doi：10.1371/journal.pone.0013661.

Merkel M，Eckel RH，Goldberg IJ.2002.Lipoprotein lipase[J].Journal of Lipid Research，43（12）：1997-2006.doi：10.1194/jlr.R200015-JLR200.

Olivecrona G，Ehrenborg E，Semb H，Makoveichuk E，Lind-berg A，Hayden MR，Gin P，Davies BS J，Weinstein MM，F(xiàn)ong LG，Beigneux AP，Young SG，Olivecrona T，Hernell O.2010.Mutation of conserved cysteines in the Ly6domain of GPIHBP1in familial chylomicronemia[J].Journal of Lipid Research，51（6）：1535-1545.doi：10.1194/jlr.M002717.

Wang H，Eckel RH.2009.Lipoprotein lipase：From gene to obesity[J].American Journal of Physiology，297（2）：E271-E288.doi：10.1152/ajpendo.90920.2008.

Wang J，Hegele RA.2007.Homozygous missense mutation（G56R）in glycosylphosphatidylinositol-anchored high-density lipoprotein-binding protein1（GPI-HBP1）in two siblings withfasting chylomicronemia（MIM144650）[J].Lipids in Health and Disease，6：23.doi：10.1186/1476-511X-6-23.

Weinstein MM，Yin LY，Beigneux AP，Davies BS J，Gin PEstrada K，Melford K，Bishop JR，Esko JD，Dallinga-Thie GM，F(xiàn)ong LG.2008.Abnormal patterns of lipopro-tein lipase release into the plasma in GPIHBP1-deficient mice[J].Journal ofBiological Chemistry，283（50）：34511-34518.doi：10.1074/jbc.m806067200.

Yang J，Liu X，Zhang Q，Jiang L.2014.Identification and quan-titative mRNA analysis of anovel splice variant of GPIHBPl in dairy cattle[J].Journal of Animal Science and"Biotechnology，5（1）：50.doi：10.1186/2049-1891-5-50.

Young SG，Davies BSJ，F(xiàn)ong LG，Gin P，Weinstein MM，Bensadoun A，BeigneuxAP.2007.GPIHBP1：An endothe-lial cell molecule important for the lipolytic processing of chylomicrons[J].Current Opinion in Lipidology，18（4）：389-396.doi：10.1097/MOL.0b013e3281527914.

（責(zé)任編輯 蘭宗寶）