摘要 高效、快速的藥物敏感性檢測方法可以更精準地指導(dǎo)臨床用藥和提高新型抗菌藥物的研發(fā)效率。傳統(tǒng)的抗菌藥物敏感性實驗（Antimicrobial susceptibility testing， AST）操作簡單、結(jié)果可靠、特異性強，但存在耗時長的缺點。CCK8 法是基于2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2， 4-二磺酸苯）-2H-四唑單鈉鹽可被細菌細胞的脫氫酶還原形成水溶性橙黃色甲臜，而活菌濃度與甲臜在450 nm 處的吸光度成正比的原理實現(xiàn)活菌數(shù)量的檢測。本研究以抗生素/培養(yǎng)基復(fù)合纖維膜為培養(yǎng)基質(zhì)，采用CCK8 法檢測細菌在此基質(zhì)上繁殖生長過程中活菌數(shù)量的差異，實現(xiàn)了簡單、快速、高通量的抗菌藥物敏感性檢測，總檢測時間在8 h 之內(nèi)。以創(chuàng)口模擬液中的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和人工尿液中的大腸埃希菌為模擬實際樣本，評估了本方法在臨床應(yīng)用上的可行性。結(jié)果表明，本方法對藥物敏感性的評價結(jié)果與傳統(tǒng)紙片擴散法具有良好的一致性。本方法為藥物敏感性檢測提供了新的思路，有助于指導(dǎo)臨床用藥和新型抗菌藥物的研發(fā)。

關(guān)鍵詞 抗生素復(fù)合纖維膜；比色法；抗菌藥物；敏感性檢測；快速檢測

抗生素可以通過破壞細菌細胞的完整性或抑制其生長和分裂過程（如細胞壁、蛋白質(zhì)和核酸的合成）降低細菌的活力，達到抑制細菌活性或殺死細菌的目的，從而抑制細菌感染?？股卦谌祟惣膊　游镳B(yǎng)殖和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的細菌感染控制過程中發(fā)揮了重要作用[1]。但是，抗生素的不合理使用以及過量使用將導(dǎo)致“超級細菌”[2]的出現(xiàn)，引發(fā)嚴重的公共衛(wèi)生問題[3]。據(jù)世界貿(mào)易組織（WTO）預(yù)測，到2050 年，將會有1000 萬人死于細菌抗生素耐藥性，并且會造成約100 萬億美元的損失[4]。目前，有很多抗菌方法和策略可以控制細菌的感染，包括消毒劑[5]、激光和光動力療法[6]、金屬納米材料和水凝膠抗菌表面涂層等[7-9]。體外抗菌藥物敏感性試驗簡稱藥敏試驗（Antimicrobial susceptibility testing， AST），是指在體外測定藥物抑菌或殺菌能力的試驗[10]。藥敏試驗結(jié)果對精準制定感染控制策略、防止藥物濫用以及藥物開發(fā)和研究都具有重要的意義。

傳統(tǒng)藥物敏感性檢測方法包括紙片擴散法、肉湯稀釋法和瓊脂稀釋法等[11]。這些傳統(tǒng)方法具有良好的準確性和可靠性，能夠用于確定抑制細菌繁殖的最低藥物濃度，即抗生素的最低抑菌濃度（Minimuminhibitory concentration， MIC），但是耗時較長（一般需要20～72 h）、靈敏性較低[12]。為了解決上述問題，多種新型藥物敏感性檢測方法相繼被開發(fā)出來，如聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）[13]、基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF MS）[14]、微流控技術(shù)[15]、表面增強拉曼光譜（SERS）技術(shù)[16]和環(huán)介導(dǎo)等溫擴增（LAMP）[17]等，相比之下，這些方法檢測的靈敏度和效率高，檢測時間顯著縮短，但是所需要的設(shè)備比較昂貴，需要專業(yè)技術(shù)人員操作[18-19]，并且尚未見相關(guān)方法在臨床治療應(yīng)用中的報道。因此，建立一種低成本、操作簡單、快速的藥物敏感性檢測方法至關(guān)重要。

CCK8 法檢測活菌數(shù)量是基于其中的2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2， 4-二磺酸苯）-2H-四唑單鈉鹽（WST-8）可被細菌細胞中的脫氫酶還原形成水溶性橙黃色甲臜，而活菌濃度與甲臜在450 nm 處的吸光度值成正比[20]，基于此實現(xiàn)活菌數(shù)量的檢測。CCK8 比色法在檢測材料抗菌性能和細胞活性[21-22]等方面應(yīng)用廣泛。本研究組[20]曾報道了一種CCK8 顯色檢測活菌濃度的方法，該方法具有操作簡單、顯色時間短和靈敏度高等優(yōu)點，檢出限為102 CFU/mL。

本研究基于CCK8 法比色原理，以抗生素/培養(yǎng)基復(fù)合纖維膜為培養(yǎng)基質(zhì)，通過細菌繁殖生長過程中活菌數(shù)量的差異即吸光度的差值，建立了一種檢測抗菌藥物敏感性的方法，用于快速確定細菌對抗菌藥物的敏感性。以抗生素/培養(yǎng)基復(fù)合纖維膜為培養(yǎng)基質(zhì)，滴加細菌懸浮液于培養(yǎng)基質(zhì)上，于37 ℃培養(yǎng)6 h后，加入CCK8 溶液繼續(xù)孵育2 h， 使用酶標儀測量甲臜在450 nm 處的吸光度，通過吸光度的差值檢測細菌對藥物的敏感性。本方法具有設(shè)備成本低、操作簡單、快速（細菌增殖時間6 h，顯色時間2 h，總檢測時間包含細菌增殖時間和顯色時間不超過8 h）等優(yōu)點。本方法對藥物敏感性的評價結(jié)果與傳統(tǒng)紙片擴散法結(jié)果具有良好的一致性，在指導(dǎo)臨床用藥和新型抗菌藥物研發(fā)方面具有潛在的應(yīng)用價值。